一种放射治疗靶向增敏剂及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种放射治疗靶向增敏剂，所述增敏剂由下列7种miRNAs构成：hsa-miR-138-2-3p模拟物；hsa-miR-208b-3p模拟物；hsa-miR-197-3p抑制物；hsa-miR-20b-3p抑制物；hsa-let-7a-5p抑制物；hsa-miR-16-1-3p抑制物；hsa-miR-21-5p抑制物；本发明提供了一种增加放疗敏感性且毒副作用较轻的新型放疗靶向增敏剂，特别应用于各期喉癌患者，具有重大的应用前景；本发明所提供的新型放射治疗靶向增敏剂，预期在提高放疗敏感性并进一步增加其疗效方面，发挥较大的优势，产生良好的经济和社会效益。
【专利说明】一种放射治疗靶向增敏剂及其应用 (一）
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种放射治疗靶向增敏剂，特别涉及一种具有针对放射治疗靶向增敏 作用的miRNAs组合物及其应用。 (二）
【背景技术】
[0002] 肿瘤干细胞是肿瘤中少数具有自我更新、无限增殖及多向分化潜能的细胞，且固 有放射抵抗能力，一般认为肿瘤干细胞是肿瘤发生发展和放射抵抗的根源。近年来，人们已 经成功分离鉴定近十种肿瘤干细胞；较为认可的"标志"细胞是流式细胞仪检测的侧群细胞 (肿瘤干细胞样细胞）和CD133+CD44+肿瘤细胞。
[0003] 目前有些研究已经深入到肿瘤干细胞的关键基因的调控。其中最为引人瞩目的 是肿瘤干细胞的微小RNA(microRNA，miRNAs)的研究。研究发现，miRNAs是肿瘤细胞内的 最重要的基因调控分子之一，而肿瘤干细胞的miRNA特异性改变，可以从其对肿瘤干细胞 靶基因的调控作用上体现出来。特异性miRNAs在肿瘤干细胞的特性方面起独特而重要的 调控作用，包括对生物学特性方面，如对放射抵抗基因的调控作用。可以推断，放射特异的 miRNAs在肿瘤干细胞放射抵抗中起到调控作用。miRNA已成为近年肿瘤学的研究热点。
[0004] 喉癌是喉部最常见的恶性肿瘤，也是呼吸道仅次于肺癌的第二位高发癌，多见于 中老年男性。近年来，我国喉癌发病率呈上升趋势。喉癌的治疗以手术和放疗为主，放疗适 用于有手术禁忌症的患者、广泛病变的术前控制、手术切缘不充分的补充治疗等。对部分早 期喉癌及低分化、未分化癌可作为首选治疗措施。目前，对于肿瘤细胞放疗增敏制剂已有一 定的研究和临床应用，如使用靶向药物、化疗药物、中药联合放疗，具有一定的增敏作用。但 是，肿瘤细胞的放疗抵抗仍然是严重困扰其放疗效果的难题。目前，喉癌细胞尤其是喉癌干 细胞中放疗抵抗相关miRNAs调控的研究，国内外均未见报道。基于喉癌干细胞来源的具有 高效增强喉癌放疗敏感性的miRNAs组合制剂的开发研究具有前沿性和创新性。 (三）
【发明内容】
[0005] 本发明目的是提供一种在放射治疗中具有明显增强放疗敏感性和提高疗效的 miRNAs组合物（即放射治疗靶向增敏剂，特别是针对喉癌放射治疗靶向增敏剂）及其应用， 较目前其他放疗增敏制剂，其特异性和靶向性更强，作用机制更为广泛，制剂的毒副作用更 小。
[0006] 本发明采用的技术方案是：
[0007] 本发明提供一种放射治疗靶向增敏剂，特别是针对喉癌放射治疗靶向增敏剂，所 述增敏剂由下列7种miRNAs构成：
[0008] (l)hsa-miR-138-2-3p mimic :5, -GCUAUUUCACGACACCAGGGUU-3，、
[0009] (2)hsa-miR-208b-3p mimic :5, -AUAAGACGAACAAAAGGUUUGU-3，、
[0010] (3)hsa-miR-197-3p inhibitor :5, -GCUGGGUGGAGAAGGUGGUGAA-3，、
[0011] (4)hsa-miR-20b-3p inhibitor :5, -CUGGAAGUGCCCAUACUACAGU-3，、
[0012] (5)hsa-let-7a-5p inhibitor :5, -AACUAUACAACCUACUACCUCA-3，、
[0013] (6) hsa-miR-16-l-3p inhibitor5,-UCAGCAGCACAGUUAAUACUGG-3'
[0014] (7)hsa-miR-21-5p inhibitor :5, -UCAACAUCAGUCUGAUAAGCUA-3'（mimic 指模拟 物，inhibitor指抑制物）。
[0015] 进一步，本发明所述增敏剂由hsa-miR-138-2_3p模拟物、hsa-miR-208b_3p 模拟物、hsa-miR-197_3p 抑制物、hsa-miR-20b_3p 抑制物、hsa-let_7a_5p 抑制物、 hsa-miR-16-l_3p抑制物和hsa-miR-21_5p抑制物以质量比1:1:1:1:1:1:1混合制成。
[0016] 本发明还涉及一种所述放射治疗靶向增敏剂在制备增癌放射治疗敏感性药物中 的应用。
[0017] 本发明所述放射治疗靶向增敏剂通常以转染入目标细胞发挥作用，具体在 体外将放射治疗靶向增敏剂转染入喉癌细胞，培养喉癌细胞放疗增敏作用的方法为： 人工合成 hsa-miR-138-2_3p 模拟物、hsa-miR-208b_3p 模拟物、hsa-miR-197_3p 抑 制物、hsa-miR-20b_3p 抑制物、hsa-let_7a_5p 抑制物、hsa-miR-16-l_3p 抑制物和 hsa-miR-21-5p抑制物，以24孔细胞培养板为例，（1)将上述人工合成的寡核苷酸以质量 比 1:1:1:1:1:1:1 混合后，总质量为 0· 33μ g、0. 67μ g、ly g，用 DEPC 水 2· 1μ 1、4· 2μ 1、 6. 3 μ 1溶解，分别加入22. 9 μ 1、20. 8 μ 1、18. 7 μ 1的RPMI1640培养液，制成总体积为 25 μ 1的RNA稀释液；（2)将2 μ 1的Entranstr-R与23 μ 1的RPMI1640培养液混合，制成 总体积为25 μ 1的Entranstr-R稀释液；将（1)、（2)制备的液体混合，制成50 μ 1转染复合 物，加入含有5 Χ105个喉癌细胞的450 μ 1含有体积比为10%胎牛血清的RPMI1640培养基 中；即制备成含放射治疗靶向增敏剂总物质的量的浓度为50ηΜ、100ηΜ、150ηΜ的转染体系， 优选所述转染体系中增敏剂总物质的量的浓度ΙΟΟηΜ。
[0018] 本发明所述喉癌放射治疗靶向增敏剂在不同容器中培养的用量：
[0019]
【权利要求】
1. 一种放射治疗靶向增敏剂，其特征在于所述增敏剂由下列7种miRNAs构成： (1) hsa-miR-138-2-3p 模拟物：5' -GCUAUUUCACGACACCAGGGUU-3'、 (2) hsa-miR-208b-3p 模拟物：5' -AUAAGACGAACAAAAGGUUUGU-3'、 (3) hsa-miR-197-3p 抑制物：5' -GCUGGGUGGAGAAGGUGGUGAA-3'、 (4) hsa-miR-20b-3p 抑制物：5' -CUGGAAGUGCCCAUACUACAGU-3'、 (5) hsa-let-7a-5p 抑制物：5' -AACUAUACAACCUACUACCUCA-3'、 (6) hsa-miR-16-l-3p 抑制物：5' -UCAGCAGCACAGUUAAUACUGG-3' (7) hsa-miR-21-5p 抑制物：5' -UCAACAUCAGUCUGAUAAGCUA-3'。
2. 如权利要求1所述放射治疗靶向增敏剂，其特征在于所述增敏剂由 hsa-miR-138-2-3p 模拟物、hsa-miR-208b-3p 模拟物、hsa-miR-197-3p 抑制物、 hsa-miR-20b_3p 抑制物、hsa-let_7a_5p 抑制物、hsa-miR-16-l_3p 抑制物和 hsa-miR-21_5p抑制物以质量比1:1:1:1:1:1:1混合制成。
3. -种权利要求1所述放射治疗靶向增敏剂在制备增强放射治疗敏感性药物中的应 用。
【文档编号】A61P35/00GK104140968SQ201410282934
【公开日】2014年11月12日 申请日期:2014年6月23日 优先权日:2014年6月23日
【发明者】黄常新, 朱影 申请人:杭州师范大学