肠道靶向造影剂的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种肠道靶向造影剂的制备方法，包括功能性高分子修饰的四氧化三铁纳米颗粒的合成和抗体修饰。该肠道靶向造影剂的优点在于以纳米四氧化三铁颗粒为介质，连接特定抗体形成具有肠道靶向性的造影剂，可以避免常用造影剂的靶向性差的问题。所用原料生物安全性高，部分已为商用产品。本发明制备的造影剂具有良好的物理化学稳定性、生物相容性和磁共振成像性能。本发明中的制备方法工艺简单，可操作性强，能进一步满足生产和应用要求。
【专利说明】肠道靶向造影剂的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种肠道靶向磁共振造影剂的制备方法，具体是以超顺磁性氧化铁为介质，同时连接炎症性肠病中巨噬细胞细胞膜表面抗体的造影剂制备技术。本发明属于纳米生物医药材料领域。
【背景技术】
[0002]炎症性肠病(IBD)是一类病因和发病机制尚不十分清楚的肠道炎症性疾病。核磁共振(MRI)结肠镜可应用于检查和定量溃疡性结肠炎，反映结肠病变和活动程度。MRI增强检查时，肠壁的强化程度与炎症活动度相关。磁共振成像在影像的采集过程中可以自由选择，具有提供空间三维分辨影像的优势。目前，MRI在炎症性肠病中是最具潜力的诊断方式。
[0003]临床应用的造影剂大部分为非特异性细胞外液间隙造影剂，无靶向性。为此，研究人员尝试研制具有高弛豫效率的靶向MRI造影剂。如一种适配体修饰的磁光双功能造影剂及其制备方法和应用，一种肿瘤靶向诊断核磁共振造影剂及其制备方法。本发明在于合成一种肠道靶向性核磁共振造影剂，应用MR巨噬细胞成像来提高IBD的诊断效率。
【发明内容】
[0004]针对 现有技术的不足，本发明提供一种肠道靶向磁共振造影剂的制备方法。
[0005]一种肠道靶向造影剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:
(O功能性高分子修饰的四氧化三铁纳米颗粒的合成:
将6mmol三价铁盐，24mmol长链表面活性剂和12mmol功能性高分子溶于200毫升有机溶剂中，将该溶液在400转每分钟，通入氮气的情况下搅拌2小时以除去氧气；80摄氏度温育4小时，然后迅速将该溶液煮沸并持续30分钟以上；待溶液冷却后，用乙醚，乙醇分别洗涤3次；后加入磷酸缓冲液中分散均匀待用；
(2)抗体修饰:
将上述四氧化三铁颗粒2毫克溶于0.01 M的磷酸缓冲溶液中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺，15分钟后,加入抗体0.001mg/ml ；4摄氏度反应10小时以上，然后离心机12000转离心除去未反应的抗体，并在磷酸缓冲溶液中再次分散均匀，既得到肠道靶向造影剂。
[0006]所述功能性高分子为聚丙烯酸、聚乙二醇、双羧基聚乙二醇、为氨基羧基聚乙二醇中的一种。
[0007]所述抗体修饰为TLR4。
[0008]所述三价铁盐为氯化高铁，或三乙酰丙酮铁；所述长链表面活性剂为油酸，油胺的一种；所述有机溶剂为二苯醚，或氯仿，或乙二醇。
[0009]步骤(2)所述加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺后的浓度为2.5mM,加入N-羟基丁二酰亚胺后的浓度为6.25禮。
[0010]该造影剂具有粒径小、性能稳定、生物相容性好、靶向效应明显的特点。所得的产物能满足临床应用的需求。
[0011]本发明的优点在于:
(I)本发明以纳米四氧化三铁颗粒为介质，连接特定抗体形成具有肠道靶向性的造影剂，可以避免常用造影剂的靶向性差的问题。所用原料生物安全性高，部分已为商用产品。
[0012](2)本发明制备的造影剂具有良好的物理化学稳定性、生物相容性和磁共振成像性能。
[0013](3)本发明中的制备方法工艺简单，可操作性强，能进一步满足生产和应用。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1为实施例1所制备的靶向造影剂的透射电子显微镜图。
[0015]图2为实施例2所制备的靶向造影剂的透射电子显微镜图。
【具体实施方式】
[0016]以下通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步描述。以下的实施例是对本发明的进一步说明，而不限制本发明的范围。
[0017]实施例1:
1.双羧基聚乙二醇修饰的四氧化三铁纳米颗粒的合成:
将 2.1g Fe (acac) 3，7.9ml 油胺和 24g 双羧基聚乙二醇 H00C-PEG-C00H (分子量 2000)溶于200ml 二苯醚中。将该溶液在400转每分钟，通入氮气的情况下搅拌2小时以除去氧气。80摄氏度温育4小时，然后迅速将该溶液煮沸并持续30分钟以上。待溶液冷却后，用乙醚，乙醇分别洗涤3次。后加入PBS缓冲液中分散均匀待用。
[0018]2.抗体修饰:
将上述四氧化三铁颗粒2毫克溶于0.01 M的PBS缓冲溶液中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC，2.5mM)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS，6.25 mM)，约15分钟后，加入TLR4抗体IOmL (0.lmg/ml)。4摄氏度反应10小时以上，然后离心机12000转离心除去未反应的抗体，并在PBS缓冲溶液中再次分散均匀。
[0019]实施例2:
1.羧基氨基聚乙二醇修饰的四氧化三铁纳米颗粒的合成:
将1.6g FeCl3.6H20, 8.5ml油酸和24g羧基氨基聚乙二醇NH2-PEG-C00H(分子量2000)溶于200ml 二苯醚中。将该溶液在400转每分钟，通入氮气的情况下搅拌2小时以除去氧气。80摄氏度温育4小时，然后迅速将该溶液煮沸并持续30分钟以上。待溶液冷却后，用乙醚，乙醇分别洗涤3次。后加入PBS缓冲液中分散均匀待用。
[0020]2.抗体修饰:
将上述四氧化三铁颗粒2毫克溶于0.01 M的PBS缓冲溶液中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC，2.5mM)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS，6.25 mM)，约15分钟后，加入TLR4抗体IOmL (0.lmg/ml)。4摄氏度反应10小时以上，然后离心机12000转离心除去未反应的抗体，并在PBS缓冲溶液中再次分散均匀。
[0021]通过控制上述溶液的配比和温育时间可以改变合成的四氧化三铁颗粒的大小，第二步抗体的修饰方法则相同。
【权利要求】
1.一种肠道靶向造影剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (O功能性高分子修饰的四氧化三铁纳米颗粒的合成: 将6mmol三价铁盐，24mmol长链表面活性剂和12mmol功能性高分子溶于200毫升有机溶剂中，将该溶液在400转每分钟，通入氮气的情况下搅拌2小时以除去氧气；80摄氏度温育4小时，然后迅速将该溶液煮沸并持续30分钟以上；待溶液冷却后，用乙醚，乙醇分别洗涤3次；后加入磷酸缓冲液中分散均匀待用； (2)抗体修饰: 将上述四氧化三铁颗粒2毫克溶于0.01 M的磷酸缓冲溶液中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺，15分钟后,加入抗体0.001mg/ml ；4摄氏度反应10小时以上，然后离心机12000转离心除去未反应的抗体，并在磷酸缓冲溶液中再次分散均匀，既得到肠道靶向造影剂。
2.根据权利要求1所述肠道靶向造影剂，其特征在于，所述功能性高分子为聚丙烯酸、聚乙二醇、双羧基聚乙二醇、为氨基羧基聚乙二醇中的一种。
3.根据权利要求1所述肠道靶向造影剂，其特征在于，所述抗体修饰为TLR4。
4.根据权利要求1所述肠道靶向造影剂，其特征在于，所述三价铁盐为氯化高铁，或三乙酰丙酮铁；所述长链表面活性剂为油酸，油胺的一种；所述有机溶剂为二苯醚，或氯仿，或乙二醇。
5.根据权利要求1所 述肠道靶向造影剂，其特征在于，步骤(2)所述加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺后的浓度为2.5mM，加入N-羟基丁二酰亚胺后的浓度为6.25禮。
【文档编号】A61K49/18GK104013979SQ201410229654
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2014年5月28日 优先权日:2014年5月28日
【发明者】何丹农, 王萍, 朱君, 颜娟, 夏智伟 申请人:上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司