靶向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，具体是设及一种祀向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂及其制备 方法。
【背景技术】
[0002] 大部分肿瘤内部血管生长迅速、不规则，内部淋己系统清除慢，存在肿瘤渗透增 强因子，使大分子和纳米颗粒易滞留在肿瘤内部，称为"增强渗透和滞留效应"巧nhanced 化rme油ilityandRetention，EPR)。纳米给药系统由于EPR效应可被动祀向到肿瘤，在肿 瘤祀向治疗应用过程中越来受到重视。普通的纳米剂型，如脂质体、纳米粒等在血浆中，会 被人体网状内皮系统识别，使纳米制剂的血浆清除加快，降低了其治疗效果。因此表面被修 饰的纳米制剂引起了人们的广泛研究与关注。
[0003] 白蛋白是一类在血浆中大量存在的蛋白。药物载体研究中常见的白蛋白包括人血 清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清白蛋白。白蛋白分子中存在多种药物结合位点，对不同种类 的药物均能有效负载；同时其具有水溶性高、稳定性好、可降解等特点，其生物相容性高，已 被美国食品药品监督管理局（抑A)批准用于人体，因此白蛋白是药物输送的理想载体。同 时，白蛋白上存在的氨基、琉基等，可W进一步修饰主动祀向基团W提高祀向性。现有注射 用紫杉醇（白蛋白结合型）注射剂（Abraxane)的上市引起了市场的广泛关注。
[0004] 专利CN201210142991通过制备透明质酸和人血白蛋白的共辆物作为载体，然后 将其与植物类抗癌药物及纳米粒子稳定剂在高速均质、高压均质或超声处理条件下制得植 物类抗癌祀向纳米制剂。该纳米制剂具有肿瘤细胞表面的受体如CD44的生物祀向作用，静 脉注射进入体内后依靠肿瘤的Era效应和HA的CD44高度结合性，使药物在肿瘤部位蓄积， 并且延长纳米载药系统在体内的循环时间。
[0005] 在生物医学应用中，纳米粒子药物的粒径比较重要，不同的粒径代谢路径也不一 样，小粒径通过肾代谢，大粒径通过肝代谢。其中，20-200nm的粒子对肿瘤有被动祀向作用， 在此粒径范围内的纳米粒子药物可W消除在药物本身的尺寸大小引起的一些生物医学效 应，从而可W提高疗效。
[0006] 注射剂是无菌制剂的一种，注射剂的无菌是通过良好控制且经过验证的灭菌/ 除菌生产工艺、生产过程中严格执行药品生产质量管理规范（GMP，GoodManufac化ring Practice化r地armaceuticalpro化cts)实现的。含有大量蛋白质（如白蛋白）的制剂 均不能用常规的方法（如高溫）进行灭菌，因为高溫会使蛋白变性。过滤灭菌法是监管部口 认可的针对产品具有不稳定性而不能采用包括热灭菌在内的情况的最终灭菌方法，因此， 通过0. 22μm滤器过滤除菌是制备注射型纳米制剂的优选方案。
[0007] 但是CN201210142991的纳米制剂颗粒，粒径分布系数较大，粒径分布较广，而且 冻干复溶后，由于修饰人血白蛋白的透明质酸分子链之间缠绕，导致粒子之间互相聚集、附 着，导致冻干品复溶后粒子粒径增加，因此进行微孔滤器过滤化22μm)时容易出现滤器 滤膜孔道堵塞的情况，使滤液中的粒子浓度降低，从而导致滤液中药物含量的降低，从而影 响药效及降低产品收率。
【发明内容】
[0008] 基于此，本发明的目的之一在于提供一种祀向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂，该 纳米制剂粒径分布较均匀，分散性好，稳定不团聚，冻干复溶后粒径基本不变，微孔滤器 (0. 22μm)过滤后滤液中的药物浓度基本不变。
[0009] 实现上述目的的具体技术方案如下：
[0010] 一种祀向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂，包括质量比为1 :4-32. 5的疏水性抗肿瘤 药物和载体，所述载体由37. 5-95. 3wt%的白蛋白和4. 7-62. 5wt%的透明质酸-白蛋白共 辆物组成，所述透明质酸-白蛋白共辆物由摩尔比为1 :1-20的白蛋白与透明质酸制备而 成。
[0011] 在其中一些实施例中，所述祀向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂包括质量比为1 : 4. 8-19的疏水性抗肿瘤药物和载体，所述载体由50. 0-95.Owt%的白蛋白和5. 0-50.Owt% 的透明质酸-白蛋白共辆物组成，所述透明质酸-白蛋白共辆物由摩尔比为1 :2-20的白蛋 白与透明质酸制备而成。
[0012] 在其中一些实施例中，所述透明质酸的分子量为2-60kDa。
[0013] 在其中一些实施例中，所述白蛋白为人血白蛋白、牛血清白蛋白、卵清白蛋白W及 重组人血白蛋白。
[0014] 在其中一些实施例中，所述疏水性抗肿瘤药物选自紫杉醇、多西紫杉醇、阿齐他 赛、阿霉素、喜树碱、环抱菌素、雷帕霉素、万古霉素、塞替派或它们的衍生物。
[0015] 在其中一些实施例中，所述祀向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂还包括纳米粒子稳定 剂，所述纳米粒子稳定剂选自聚氧乙締-聚氧丙締-聚氧乙締扶段聚合物，d-a生育酪班 巧酸聚乙二醇醋、聚维酬，所述纳米粒子稳定剂为疏水性抗肿瘤药物的质量的1. 0-10. 0%。
[0016] 本发明的另一目的在于提供上述祀向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂的制备方法。
[0017] 具体技术方案如下：
[0018] 一种上述祀向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂的制备方法，包括W下步骤：
[0019] (1)制备透明质酸-白蛋白共辆物：
[0020] 将透明质酸和白蛋白加入到水性介质中溶解，调节溶液抑为5. 0-6. 0,然后将 1-乙基-3-(3-二甲胺丙基）碳二亚胺盐酸盐和N-径基硫代班巧酷亚胺钢盐加入到上述溶 液中反应15-60min，调节溶液抑为7. 0-7. 5,在室溫下继续揽拌反应3-2地，反应完毕后，透 析除去未键合的透明质酸、未反应的1-乙基-3-(3-二甲胺丙基）碳二亚胺盐酸盐和N-径 基硫代班巧酷亚胺钢盐和其它副产物，冷冻干燥后得透明质酸-白蛋白共辆物；或
[0021] 将透明质酸溶于水性介质中，调节溶液抑为5. 0-6. 0,然后加入1-乙基-3-(3-二 甲胺丙基）碳二亚胺盐酸盐和N-径基硫代班巧酷亚胺钢盐，室溫下揽拌反应15-60min，得 到透明质酸班巧酷亚胺活性脂；再将透明质酸班巧酷亚胺活性脂逐滴加入到白蛋白的水性 介质溶液中或将白蛋白的水性介质溶液逐滴加入到透明质酸班巧酷亚胺活性脂中，调节溶 液抑为7. 0-7. 5,在室溫下揽拌反应3-2地，反应完毕后，透析除去未键合的透明质酸、未反 应的1-乙基-3-(3-二甲胺丙基）碳二亚胺盐酸盐和N-径基硫代班巧酷亚胺钢盐和其它 副产物，冷冻干燥后得透明质酸-白蛋白共辆物；
[0022] (2)配制载体溶液：
[002引将白蛋白和步骤（1)制备的透明质酸-白蛋白共辆物溶于水性介质中，得到载体 溶液；
[0024] (3)配制药物溶液：
[0025] 将疏水性抗肿瘤癌药物或疏水性抗肿瘤癌药物和纳米粒子稳定剂溶于有机溶剂 中，得到药物溶液；
[0026] (4)制备纳米制剂：
[0027] 均质条件下，将上述步骤（3)配制的药物溶液加入到步骤似配制的载体溶液中 获得初乳，再于高压均质下获得复乳，然后除去有机溶剂，过滤，冷冻干燥得到祀向疏水性 抗肿瘤药物纳米制剂。
[0028] 在其中一些实施例中，步骤（2)所述的载体溶液中载体的浓度为4. 0-50.Omg/mL， 步骤（3)所述的药物溶液中疏水性抗肿瘤药物的浓度为16. 0-345.Omg/mL。
[0029] 在其中一些实施例中，步骤（1)所述的水性介质为2-(N-吗啡嘟）乙横酸缓冲 液、憐酸盐缓冲液或无菌水；步骤（2)所述的水性介质为无菌水、憐酸盐缓冲液、生理盐水、 5.Owt%葡萄糖水溶液或5.Owt%甘露醇水溶液；步骤（3)所述的有机溶剂为二氯甲烧、氯 仿、二氯甲烧与乙醇的混合物、或氯仿与乙醇的混合物。
[0030] 在其中一些实施例中，步骤（4)所述的高压均质的压力为10000-400(K)psi，高压 均质的物料流量为10. 0-25.化A，高压均质的循环次数为7-20次；所述除去有机溶剂的方 法为在15. 0-45. (TC的条件下减压旋转蒸发除去有机溶剂。
[0031] 本发明的发明人在长期的经验积累和实验过程中发现，在透明质酸-白蛋白共辆 物中加入未改性的白蛋白，可W减小本发明所述祀向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂颗粒的粒 径，使粒径分布更均匀，可W避免或减少纳米粒子之间的互相聚集与附着，因此本发明所述 的祀向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂，其具有W下的优点：
[0032] 1、本发明的纳米制剂的粒径分布较均匀且绝大部分小于220nm，而且复溶后粒径 没有增加，经微孔滤器化22μm)过滤后具有较高的收率，大大降低了因粒径过大而被截 留造成的损失，从而可W提高药效，增强对肿瘤的抑制作用。
[0033] 2、本发明的纳米制剂的粒径绝大部分小于220nm，而且粒子复溶后粒径没有增