水性药物与白蛋白结合的稳定性比较
[0185] 将50.Omg实施例1-12W及对比例一-二所得纳米制剂冻干物放入截流分子量为 5000的透析袋中，置于500. 0血、37. 0°C的抑=7. 4的PBS缓冲溶液0). 01M，含0. 5wt%± 溫80)内，定时取出定量的PBS缓冲溶液，用0. 22μm的滤膜过滤，然后用高压液相色谱进 行测定。结果如表3所示。
[0186] 表3纳米制剂复溶稳定性及24h释放率
[0187]
[018 引
[0189]由表3的结果可知，本发明的祀向纳米制剂在PBS缓冲溶液中24h内只有不到 5. 00%的药物释放出来，远低于对比例，说明药物与载体之间结合力较强，更有利于避免或 减少给药后药物在体内循环及到达祀点前的运转过程中从载体泄露出来，从而可W降低药 物毒性、提高药物利用率w及有利于降低给药剂量。根据复溶分散稳定时间可知，本发明的 祀向纳米制剂颗粒分散性较好，团聚倾向较弱，该结果与颗粒粒径在复溶前后没有显著增 加的结果一致。
[0190] 实施例16动物实验
[0191] (1)抑瘤实验
[0192] 使用BALB/c裸鼠构建人MX-1乳腺癌细胞荷瘤小鼠模型，待肿瘤生长至 150-300mm3时将小鼠随机分为生理盐水阴性组，实施例1-2、实施例5-6及对比例一-二药 物组，每组6只小鼠。尾静脉注射药物，剂量为10.Omg/kg，每5天注射一次，连续注射5次， 在试验过程中每5天测量肿瘤体积一次，其体积计算方法如下：V= (fD/%其中d为短方向 的长度，D为长方向的长度。结果如图3所示。
[0193] 由图3可知，本发明的祀向纳米制剂在相同浓度下对肿瘤的抑制作用更加明显， 说明本发明的祀向纳米制剂的药物利用率更高。
[0194] (2)药物在小鼠体内的分布比较
[0195] 紫杉醇祀向纳米制剂在体内的分布的测定是通过使用"C标记的紫杉醇来完成 的。将实施例1、实施例6、对比例一-对比例二的紫杉醇祀向纳米制剂W5.Omg/血的剂量 通过尾静脉注射到已接种肥2肿瘤细胞7天后的小鼠体内。注射后的小鼠在24小时后处 死，分别取内脏和肿瘤，测定其放射强度，计算各组织中紫杉醇的浓度。结果如图4所示。
[0196]由图4可知，本发明的祀向纳米制剂静脉注射后分布在体内的各种组织中，但相 比对比例，本发明的载药颗粒在肿瘤中的累积有了显著的提高，而在其他组织中的累积相 对降低，与上述肿瘤抑制效果一致。从而说明本发明的祀向纳米制剂的毒性相比对比例较 低，有利于降低副作用并提高病患者依从性。
[0197]W上所述实施例的各技术特征可W进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实 施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要运些技术特征的组合不存 在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0198]W上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并 不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来 说，在不脱离本发明构思的前提下，还可W做出若干变形和改进，运些都属于本发明的保护 范围。因此，本发明专利的保护范围应W所附权利要求为准。
【主权项】
1. 一种祀向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂，其特征在于，包括质量比为1 :4-32. 5的疏 水性抗肿瘤药物和载体，所述载体由37. 5-95. 3wt%的白蛋白和4. 7-62. 5wt%的透明质 酸-白蛋白共辄物组成，所述透明质酸-白蛋白共辄物由摩尔比为1 :1-20的白蛋白与透明 质酸制备而成。2. 根据权利要求1所述的靶向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂，其特征在于，包括质量 比为1 :4. 8-19的疏水性抗肿瘤药物和载体，所述载体由50.Owt% -95.Owt%的白蛋白和 5. 0-50.Owt%的透明质酸-白蛋白共辄物组成，所述透明质酸-白蛋白共辄物由摩尔比为 1 :2-20的白蛋白与透明质酸制备而成。3. 根据权利要求1或2所述的靶向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂，其特征在于，所述透明 质酸的分子量为2-60kDa。4. 根据权利要求1或2所述的靶向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂，其特征在于，所述白蛋 白选自人血白蛋白、牛血清白蛋白、卵清白蛋白以及重组人血白蛋白。5. 根据权利要求1或2所述的靶向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂，其特征在于，所述疏水 性抗肿瘤药物选自紫杉醇、多西紫杉醇、阿齐他赛、阿霉素、喜树碱、环孢菌素、雷帕霉素、万 古霉素、塞替派或它们的衍生物。6. 根据权利要求1或2所述的靶向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂，其特征在于，还包括 纳米粒子稳定剂，所述纳米粒子稳定剂选自聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯崁段聚合物， d-α生育酚琥珀酸聚乙二醇酯、聚维酮，所述纳米粒子稳定剂为疏水性抗肿瘤药物的质量 的 1. 0-10. 0%〇7. -种权利要求1-6任一项所述的祀向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂的制备方法，其特 征在于，包括以下步骤： (1) 制备透明质酸-白蛋白共辄物： 将透明质酸和白蛋白加入到水性介质中溶解，调节溶液pH为5. 0-6. 0,然后将1-乙 基-3-(3-二甲胺丙基）碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐加入到上述溶液中 反应15-60min，调节溶液pH为7. 0-7. 5,在室温下继续搅拌反应3-24h，反应完毕后，透析除 去未键合的透明质酸、未反应的1-乙基-3-(3-二甲胺丙基）碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫 代琥珀酰亚胺钠盐和其它副产物，冷冻干燥后得透明质酸-白蛋白共辄物；或 将透明质酸溶于水性介质中，调节溶液pH为5. 0-6. 0,然后加入1-乙基-3-(3-二甲 胺丙基）碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐，室温下搅拌反应15-60min，得到 透明质酸琥珀酰亚胺活性脂；再将透明质酸琥珀酰亚胺活性脂逐滴加入到白蛋白的水性介 质溶液中或将白蛋白的水性介质溶液逐滴加入到透明质酸琥珀酰亚胺活性脂中，调节溶液 pH为7. 0-7. 5,在室温下搅拌反应3-24h，反应完毕后，透析除去未键合的透明质酸、未反应 的1-乙基-3-(3-二甲胺丙基）碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐和其它副 产物，冷冻干燥后得透明质酸-白蛋白共辄物； (2) 配制载体溶液： 将白蛋白和步骤（1)制备的透明质酸-白蛋白共辄物溶于水性介质中，得到载体溶 液； (3) 配制药物溶液： 将疏水性抗肿瘤癌药物或疏水性抗肿瘤癌药物和纳米粒子稳定剂溶于有机溶剂中，得 到药物溶液； (4)制备纳米制剂： 均质条件下，将上述步骤（3)配制的药物溶液加入到步骤（2)配制的载体溶液中获得 初乳，再于高压均质下获得复乳，然后除去有机溶剂，过滤，冷冻干燥得到靶向疏水性抗肿 瘤药物纳米制剂。8. 根据权利要求7所述的祀向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂的制备方法，其特征在于， 步骤（2)所述的载体溶液中载体的浓度为4. 0-50.Omg/mL，步骤（3)所述的药物溶液中疏水 性抗肿瘤药物的浓度为16. 0-345.Omg/mL。9. 根据权利要求7或8所述的祀向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂的制备方法，其特征 在于，步骤（1)所述的水性介质为2-(N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液、磷酸盐缓冲液或无菌 水；步骤（2)所述的水性介质为无菌水、磷酸盐缓冲液、生理盐水、5.Owt%葡萄糖水溶液或 5.Owt%甘露醇水溶液；步骤（3)所述的有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、二氯甲烷与乙醇的混 合物、或氯仿与乙醇的混合物。10. 根据权利要求7或8所述的靶向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂的制备方法， 其特征在于，步骤（4)所述的高压均质的压力为10000-40000psi，高压均质的物料流 量为10. 0-25.OL/h，高压均质的循环次数为7-20次；所述除去有机溶剂的方法为在 15. 0-45. 0°C的条件下减压旋转蒸发除去有机溶剂。
【专利摘要】本发明涉及一种靶向疏水性抗肿瘤药物纳米制剂，包括质量比为1：4-32.5的疏水性抗肿瘤药物和载体，所述载体由37.5-95.3wt％的白蛋白和4.7-62.5wt％的透明质酸-白蛋白共轭物组成，所述透明质酸-白蛋白共轭物由摩尔比为1：1-20的白蛋白与透明质酸制备而成。该纳米制剂的制备方法包括：制备透明质酸-白蛋白共轭物；配制载体溶液；配制药物溶液；制备纳米制剂。该纳米制剂粒径分布较均匀，分散性好，稳定不团聚，冻干复溶后粒径基本不变，微孔滤器过滤(0.22μm)后收率高，药效好。
【IPC分类】A61K31/675, A61P35/00, A61K31/4745, A61K38/14, A61K31/704, A61K47/42, A61K31/337, A61K9/19
【公开号】CN105412024
【申请号】CN201510932623
【发明人】刘锋, 赖树挺, 曹付春, 郑阳, 连远发
【申请人】广州帝奇医药技术有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月14日