、滴加或喷涂;药 膏、乳液、乳霜、凝胶或类似物的涂抹;粉末的喷撒;液体或气雾剂成分的喷雾;或者通过任 何其他合适的方式。
[0131] 本文使用的"从药物学角度来看的有效数量""从化妆品角度来看的有效数量"或 "从药妆角度来看的有效数量是指向哺乳动物施用后能产生治疗或有益作用的本发明任何 成分的数量。药物、药妆或化妆功效能够医治、尽可能减少、预防或缓解细菌感染，改善外 表，进行美化(如滋润皮肤），或者可能具备任何其他药物、药妆或化妆品的有益功效。所选 择的本发明成分的浓度足W发挥其药物、药妆或化妆品功效，但浓度要足够低，W避免在熟 练技工掌握的范围和合理判断的范围内的明显副作用。该成分的有效数量可能随着所治疗 的特定上皮组织、所治疗的生物对象的年龄和身体状况、症状的严重程度、治疗的持续时 间、同期疗法的性质、使用的具体化合物、成分或其他活性成分，利用的特定载体和类似因 素而有所改变。
[0132] 熟练技工能够通过确定单位剂量，判定发明成分的药物学有效数量。本文使用的 "单位剂量"是指产生50%最大功效响应所需的本发明成分的数量（即m)5〇)。可W根据通过 体外或动物模型实验系统获得的剂量-响应曲线的外推来评估单位剂量。
[0133] 根据本发明的运一方面，本发明的成分最好根据需要局部施用。在另一个优选的 实施例中，本发明成分每天局部施用一到四次，最好每天两次(例如，一早一晚）。本发明成 分的局部施用最好持续进行1到30天的时间，更理想的情况是大约十四天时间。一些症状可 能要求局部施用不确定的时间长度。
[0134] 本发明所提供的方法使成分如上文所述局部接触曾接触过细菌的皮肤、粘膜、头 发或动物毛皮。
[013引"细菌"的含义是通常通过细胞分裂繁殖的单细胞原核微生物。
[0136] "细菌感染"的含义是宿主哺乳动物被细菌侵入。举例来说，感染可能包括正常存 在于动物体内或体表的细菌的过度生长或动物体内或体表通常不存在的细菌的生长。一般 而言，细菌感染可能是菌群的存在对宿主哺乳动物构成损伤的任何情况。因此在哺乳动物 的体内或体表存在过量的菌群，或菌群对哺乳动物的细胞或其他组织构成损伤的情况下， 哺乳动物会遭受细菌感染之苦。
[0137] W下实例描述了示例的技术和示例的结果，作为本发明的例证，并不应认为是限 制性的。 巧13引实例1抗菌成分的M1C90测定
[0139]l%w/v(~10,000ppm)的季锭化壳聚糖衍生物(DMDC-Q-g-EM)与挪油酷两性基二 乙酸二钢化CC)(在水溶液中浓度在5%和25%之间）W生成试验性抗菌成分，随后通过MIC90 测定的方式进行验证。
[0140]简单来说，在培养基中接种细菌细胞(MH肉汤），让其生长一夜。将细菌悬浮液涂布 在琼脂板上，形成分散的菌落。随后通过在MH肉汤中接种提纯的细菌从单个聚落开始培养， 并在37°C下生长一夜W达到对数生长中期，随后稀释到104到105C即mri。
[0141]随后将抗菌成分溶解在预期浓度的ΜΗ肉汤中。在96孔微型板上制作10化1产品溶 液在ΜΗ肉汤中的二倍稀释系列，从1号到10号。11号和12号孔用作阴性/阳性对照。阳性对照 不含产品，而阴性对照不含细菌接种体。将细菌悬浮液稀释到10 4-105CFUmri。将10化1的 细菌悬浮液加入1-10号孔W及阳性对照孔，而将10化1的无菌MH肉汤加入阴性对照孔。将孔 板在37°C下培养24小时或其他预期的时间。
[0142]使用酶标仪或肉眼观察微孔板中细菌的生长。用酶标仪（BI0-RAD，美国）测定 600nm处的吸光度。测定MIC作为抑制超过90 %的细菌生长的最低浓度。
[0143] 表1给出了抗菌成分对金黄色葡萄球菌ATCC6538和大肠杆菌ATCC8939的抗菌效 果。可W看出将4%w/v的季锭化壳聚糖衍生物与挪油酷两性基二乙酸二钢(检测抗菌成分） 结合时，MIC90值明显提高。 巧144]表1:MIC9q值汇总表
[0145]
[0146] 对4 %w/v季锭化壳聚糖衍生物和挪油酷两性基二乙酸二钢(检测抗菌成分）的结 合，针对犬脈皮病病因的野生菌株，即伪中间葡萄球菌（80%的案例）和金黄色葡萄球菌 (15%的案例)进行检测。更重要的伪中间葡萄球菌菌株观察到MIC90值进一步的提高，证明 了向4%w/v季锭化壳聚糖衍生物中添加挪油酷两性基二乙酸二钢的增效作用。 巧147]表2:MIC9q值汇总表[014引
[0150]~针对4%w/v季锭化壳聚糖衍生物与挪油酷两性基二乙酸二钢(检测抗菌成分）的 结合，对患有犬脈皮病的6只狗的皮肤的微生物群落(主要是伪中间葡萄球菌)进行进一步 检测。所得结果证明所有6只狗的微生物群落平均减少了 50倍W上：
[0"1]表3:皮肤细菌量的汇总表(INLOGio-)
[0152]
巧15引实例2大鼠急性口服毒性
[0154] 采用的程序来自于OECD化学品检测指导方针，急性口服毒性-性毒性分类方法 423。
[0155] 对于使用检测抗菌成分的水溶液进行检测的每组动物，程序如下：
[0156] 1.取得Ξ只健康的雌性未生育和未怀孕的威斯塔(WI)鼠，6-7周大，使其适应新加 坡国家学院实验室动物毒性研究的环境至少5天。所有Ξ只动物在一个独立通风笼（IVC)中 一起关在笼子里。室溫保持在22-26°C，湿度保持在40-70%，12小时光照和12小时黑暗周 期。饲喂针对受过福射的晒齿动物的标准实验室饲料。通过经过高压灭菌的水瓶任意提供 饮用水。在口服检测物质之前，将饲料保留过夜(但水不用）。在给药之前记录体重。
[0157] 2.对每组3只雌鼠进行单一口服填喂，喂食检测抗菌成分，喂食剂量相当于每只鼠 50mg/kg、150mg/kg和300mg/kg。喂食量不超过每只鼠Iml/lOOg体重，并尽可能保持不变。
[0158] 3.喂食检测物质后，再停喂食物(但水不用)3-4小时。
[0159] 4.在给药后的前30分钟内至少观察一次所有动物，然后在头24个小时定期观察， 特别注意头四个小时。此后，对动物每天进行观察，共计14天，除非它们动物需要退出研究， 出于动物福利原因需要将其人道杀死，或者发现动物死亡。
[0160] 5.服食检测物质前不久测定每只鼠的体重，此后至少每周称重一次。在研究结束 时对所有存活的动物进行称重、人道安乐死和尸体剖验。
[0161]结果;
[0162] 1.死亡率:各组未观察到死亡，包括给药剂量为300mg/kg的后续组的3只老鼠。
[0163] 2.物理观察:所有老鼠此后表现正常直至实施安乐死。在此期间未观察到不良的 临床症状。
[0164] 3.尸体剖验:通过吸入过量C0实施安乐死。所有老鼠在大体病理方面未观察到明 显病变。
[0165]结论:根据本方法无法精确测定针对本检测抗菌成分的老鼠LD50,但认为LD50大于 300mg/kg体重。
【主权项】
1. 一种局部抗菌成分，包含季铵化壳聚糖衍生物，该衍生物含有可聚合的有机部分和 两性表面活性剂。2. -种局部抗菌成分，其本质上是由季铵化壳聚糖衍生物构成的，该衍生物中含有可 聚合的有机部分和两性表面活性剂。3. -种局部抗菌成分，包含季铵化壳聚糖衍生物，该衍生物含有可聚合的有机部分和 两性表面活性剂，用作治疗哺乳动物皮肤感染的药物。4. 一种局部抗菌成分，包含季铵化壳聚糖衍生物，该衍生物含有可聚合的有机部分和 两性表面活性剂，在药用洗发水的制造中用于治疗细菌皮肤感染。5. 根据权利要求1到4中任一项所述的局部抗菌成分，其进一步包含由保湿剂、湿润剂、 pH值调节剂、除臭剂、香料、护发素、螯合剂、防腐剂、乳化剂、增稠剂、增溶剂、缓冲剂、络合 剂、抗氧化剂、稳定剂、渗透促进剂、抗刺激剂、着色剂和除两性表面活性剂以外的其他表面 活性剂组成的基团中选择的载体。6. 根据权利要求1到5中任一项所述的局部抗菌成分，其中在所述成分中采用的所述季 铵化壳聚糖衍生物的浓度在大约2 %w/v和4 %w/v之间。7. 根据权利要求1到6中任一项所述的局部抗菌成分，其进一步包含从由保护剂、润肤 剂、收敛剂、刺激剂、角质软化剂、防晒剂、抗生素、抗真菌剂、抗病毒剂、抗原虫剂、麻醉剂、 甾体消炎剂、非留体消炎剂、止痒剂、抗氧化剂、化学治疗剂、抗组胺剂和清洁剂组成的基团 中选择的药剂。8. 根据权利要求1到7中任一项所述的局部抗菌成分，其中局部抗菌成分能有效治疗细 菌感染。9. 根据权利要求8所述的局部抗菌成分，其中细菌感染是由嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢 杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽 孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆 菌、棒状杆菌属、变铅青链霉菌、鼠灰链霉菌、酿脓链球菌、间擦疹链球菌、海豚链球菌、肺炎 链球菌、金黄色葡萄球菌、中间葡萄球菌、伪中间葡萄球菌、表皮葡萄球菌、屎肠球菌、伤寒 沙门氏菌、大肠杆菌、霍乱弧菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌和绿脓杆菌中的一种或多 种所造成的。10. 根据权利要求9所述的局部抗菌成分，其中细菌感染是由金黄色葡萄球菌或伪中间 葡萄球菌造成的。11. 根据权利要求9所述的局部抗菌成分，其中细菌感染是由大肠杆菌造成的。12. 根据权利要求5到11中任一项所述的局部抗菌成分，其中螯合剂是从由乳酸、酒石 酸、己二酸、琥珀酸、梓檬酸、抗坏血酸、扁桃酸、乙酸、山梨酸、酸式焦磷酸钠、酸钠六偏磷酸 盐和乙二胺四乙酸及其盐类组成的基团中选出的。13. 根据权利要求5到12中任一项所述的局部抗菌成分，其中稳定剂是从由单硬脂酸甘 油酯、硬脂酸、三乙醇胺、乙醇、聚山梨醇酯20、鲸蜡醇、硬脂醇、西曲溴铵、柠檬酸、环甲硅 油、二甲聚硅氧烷、鲸蜡醇聚醚20、鲸蜡硬脂醇聚醚20、混合辛癸酸甘油单酯、PEG40聚羟基 硬脂酸、聚乙烯吡咯烷酮、醋酸溶液、甘油硬脂酸酯、黄原胶、香叶油、薰衣草油、桉油、茶树 油、柠檬油、茴香油、鲸蜡醇磷酸酯DEA盐、硬脂酸钠、硬脂酸钾、羊毛醇、硬脂酸辛酯、巴西棕 榈蜡、地蜡、卡波姆胶、苯氧乙醇、尼泊金甲酯和尼泊金丙酯及其混合物组成的基团中选出 的。14. 形成包含含有可聚合有机部分和两性表面活性剂的季铵化壳聚糖衍生物的局部抗 菌成分的方法包含将至少一种含有可聚合有机部分的季铵化壳聚糖衍生物与至少一种两 性表面活性剂混合的步骤。15. 治疗哺乳动物的皮肤感染的方法包含依据权利要求1到12中的任何一条，向所述皮 肤局部施用有效数量的局部成分的步骤。16. 治疗和预防哺乳动物的细菌皮肤感染的方法包含依据权利要求1到12中的任何一 条，向所述哺乳动物施用局部成分的步骤。17. 根据权利要求15或16的一种方法，其中所述局部抗菌成分被施用于所述哺乳动物 受感染的皮肤。18. 包含含有可聚合有机部分和一种消炎剂的季铵化壳聚糖衍生物的一种消炎成分。19. 根据权利要求16所述的一种消炎成分，其中消炎剂属于双萜类。
【专利摘要】本发明涉及一种局部抗菌成分及其使用方法。特别值得一提的是，本发明涉及的局部抗菌成分，包含季铵化壳聚糖衍生物，其中含有可聚合的有机部分和两性表面活性剂。
【IPC分类】A61P31/04, A61P29/00, A61K31/722
【公开号】CN105431154
【申请号】CN201480013502
【发明人】蔡英庆, 刘信志
【申请人】亚绿基生物科技有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2014年2月10日
【公告号】US20160015735, WO2014168579A1