。
[0133] 术语"治疗有效量"是指能够在治疗对象体内达到治疗目的的PAQR3或衍生物、其 激动剂或枯抗剂的量。本领域的普通技术人员应理解，所述"治疗有效量"可随PAQR3或其 衍生物、其激动剂或枯抗剂的给药途径、所用药物辅料W及与其他药物联合用药情况的不 同而有所不同。
[0134] 药物组合物和施用方法
[0135] 本发明的药物组合物包含安全、有效量范围内的本发明PAQR3或衍生物、其激 动剂或枯抗剂（活性成分）及药理上可W接受的赋形剂或载体。其中"安全、有效量"指 的是；活性成分的量足W明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物 含有0.0 Ol-1000 mg的活性成分/剂，较佳地0. 05-300mg的活性成分/剂，更佳地，含有 0. 5-200mg的活性成分/剂。
[0136] 本发明的活性成分及其药理上可接受的盐可制成各种制剂，其中包含安全、有效 量范围内的本发明的活性成分或其药理上可接受的盐及药理上可W接受的赋形剂或载体。 其中"安全、有效量"指的是：活性成分的量足W明显改善病情，而不至于产生严重的副作 用。活性成分的安全、有效量根据治疗对象的年龄、病情、疗程等具体情况来确定。
[0137] "药理上可W接受的赋形剂或载体"指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或 凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。"相容性"在此指 的是组合物中各组份能与本发明的化合物W及它们之间相互渗和，而不明显降低化合物的 药效。药理上可W接受的赋形剂或载体部分例子有纤维素及其衍生物（如駿甲基纤维素 钢、己基纤维素钢、纤维素己酸醋等）、明胶、滑石、固体润滑剂（如硬脂酸、硬脂酸镇）、硫酸 巧、植物油（如豆油、芝麻油、花生油、橄揽油等）、多元醇（如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇 等）、乳化剂（如吐龜睐、润湿剂（如十二烷基硫酸钢）、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、 防腐剂、无热原水等。
[0138] 施用本发明组合物时，可W 口服、直肠、肠胃外（静脉内、肌肉内或皮下）、局部给 药。
[0139] 本发明组合物可W单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
[0140] 含有本发明的组合物的微胶囊可用于本发明的活性成分的缓释给药。重组蛋白 的微囊缓释给药技术已成功应用于重组人生长激素（rhGH)、重组人干扰素（rhIFN)、白介 素-2 和 MNr 甜 120 (Johnson et al.,化 t. Med. ,2:795-799(1996) ;Yasuda, Biomed. Ther 27:1221-1223(1993) ;W0 97/03692，W0 96/40072，W0 96/07399 化 S.化t. No. 5654010。
[0141] 本发明的活性成分的缓释制剂可用具有良好生物兼容性和宽泛生物可降解性 的乳酸居基己酸高聚物（PLGA)制备。PLGA的降解产物，乳酸和居基己酸可被人体很 快清除。而且，该高聚物的降解能力可随其分子量和组成的不同，从几个月延长到几 年(Lewis, "Controlled release of bioactive agents form lactide/glycolide polymer, "in:M.Chasin and R.Langer (Eds. ), Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems(Marcel Dekker:化W York, 1990),卵.1-41))O
[0142] 使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明的活性成分适用于需要治疗的哺乳 动物（如人），其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，每 次给药剂量通常为0.0 l~300mg，优选0. 5~lOOmg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、 病人健康状况等因素，送些都是熟练医师技能范围之内的。
[0143] 本发明的主要优点在于：
[0144] (1)首次掲示了 PAQR3与Scap的相互作用；
[0145] 似首次掲示了 PAQR3与SREBP的相互作用。
[0146] (3)首次掲示了 PAQR3影响SREBP或Scap在高尔基体的定位；
[0147] (4)首次掲示了 PAQR3能够调节SREBP和Scap的结合；
[0148] (5)首次掲示了 PAQR3能够调节胆固醇和/或脂质的合成；
[0149] (6)首次掲示了 PAQR3与体内胆固醇和/或脂质的合成相关。
[0150] 下面结合具体实施例，进一步陈述本发明。应理解，送些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明详细条件的实验方法，通常按照常规条 件如 Sambrook 等人，分子克隆；实验室手册（New York = Cold Spring Harbor L油oratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和 份数按重量计算。
[0151] 材料和方法
[0152] 1.1实验材料
[0153] 1.1.1 试剂
[0154] Protein A/G PLUS-琼脂糖交联珠购自 Santa Cruz Biotechnology 公司（St. Louis, USA) ;mevaStatin、Betaine PCR reagent、蛋白酶抑制剂（Protease inhibitor cocktail)，磯脂酶抑制剂（Phosphatase inhibitor cocktailiyII)、聚己帰亚胺 (polyethylenime, PEI)、25-Hydroxycholesterol、mevalonate 为美国 Sigma 公司(St. Louis，USA)产品；脂质体转染试剂 polyjet 购自 Si即agen I油orato;ries(;rockville，MD， USA) ;Nonidet P-40(NP-40)购自上海生工生物；Qiolesterol 购自 Amresco 公司（Solon, OH, USA) ;E化检测试剂购自 Pierce 公司；蛋白预染化ge Ruler Plus Prestained Protein Ladder 购自 F'ermentas 公司；琼脂糖购自 biowest (gene company, hon址ong);寡聚核巧 酸由上海生工公司（化an曲ai,化ina)合成；strip buffer购自上海启动元生物科技有限 公司；去脂蛋白血清（LPP巧购自 biomedical technologies (Stou曲ton, MA, USA) ;SYBR Green Realtime PCR Master Mix和AMV逆转录酶系统为日本Toyobo公司产品；质粒小量 提取试剂盒、PCR胶回收试剂盒为中国天根公司产品；PVDF膜、0. 22 U m和0. 45 U m过滤器 为美国Millipore公司产品；化管和枪头为美国Axygen公司产品；mRNA抽提试剂Trizol 购自 Life Technologies 公司（Rockville, USA);各种 DNA 内切酶、PCR 试剂、T4DNA 连接 酶、Pyrobest DNA聚合酶、LaTaq酶为中国大连TaKaRa公司产品；其余一般药品及试剂购 自中国西己斯试剂公司，为分析试剂纯；一般试验用器具及耗材购自上海实生公司；测序 工作由上海桑尼完成；PAQR3短肤由上海吉尔生化有限公司（GL Biochem, shan曲ai)合成； 各规格细胞培养皿、冻存管、离必管购于康宁（Corning)公司；小鼠高糖低脂饲料TD88122 为HarLan公司产品。
[0155] 1. 1. 2细胞株及细胞培养基
[0156] CH0-7细胞是由中国仓鼠卵巢癌来源的细胞系CHO-Kl细胞在含去脂蛋白血清的 培养基中筛选得到的亚克隆，培养于含5%血清的培养基A(l:l混合的Ham' S F-12medium 和Du化ecco'S modified Eagle's medium,含 lOOU/ml 的氨予青霉素和 IOOy g/ml链霉素）。 化h7是人肝癌细胞系，293T细胞是293细胞派生，表达SV40大T抗原的人肾上皮细胞系， 化Ia是人子宫颈癌细胞系，化h7、Hela和293T均培养于含10%血清的培养基B〇)u化ecco's modified Eagle' S medium,含 lOOU/ml 的氨予青霉素和 100 U g/ml 链霉素）。293A 细胞来 源于肥K293细胞，具有更好的贴壁性和空斑形成性，该细胞是养在含有10%灭活FBS (经 56°C温育30分钟）的培养基B中。所有细胞培养条件均为；95%湿度，5% C02, 37°C。CH0-7 细胞、化117、2934、2931\胎1曰均购于中国科学院上海生命科学研究院细胞库。
[0157] 1.1. 3菌株与质粒
[0158] 大肠杆菌D册Ct可W购于中国科学院上海生命科学研究院细胞库。质粒 PCS2+MT-PAQR3, PEGFP-C1-PAQR3, pBS-hU6-1-shPAQR3-121， pCMV-3xFlag-ATF6 W 及 PAQR3的缺失突变体的构建见参考文献（Feng et al.，2007)。pCMV-Flag-SREBP-2， pTK-Flag-SREBP-la, pCMV-6Myc-Insig-l, P化3-Basic-pSRE-Luciferase 质粒的 构建见参考文献灯ang et al.，2011)。pCS2+MT-SCAP，pCMV-3xFlag-SREBP-la， pCMV-3xFlag-SREBP-lc，pCMV-3xFlag-Insig-l均按标准分子克隆方法由人cDNA中克隆得 到，构建方法可W参考文献灯ang et曰1.，2011)，并通过测序验证。
[0159] 1. 1. 4Q-PCR 引物序列
[0160] 小鼠 SREBP信号通路相关基因引物参见参考文献灯ang et al.，2011)。其余引物 序列如下：
[0161]
[0163] I. I. 5 抗体
[0164] 一抗：anti_Myc(9E10)，Normal Mouse IgG，强於 i-畜-绿泛 t.i 打 7 anti-SlP(SKI_l， H-300)，anti-SREBP-UH-160)，anti-SCAP 巧D5)，anti-GFP (SC-8334) Antibody 购 于 Santa Ouz 公司。Golgin-97 购于 molecular probes 公司；anti-S肥BP-I (2A4)， anti-S肥BP_2(ab72856)，anti-Insig-1 购于 abeam 公司；anti-S肥BP-2(10007663) from Cayman 公司；anti-GAPDH 购自 SAB (SignalWay Antibody)公司；anti-S2P(MBTPS2) Antibody 贝勾自 Cell Signaling Technology 公司；anti-Flag，anti-calnexin 贝勾于 Sigma-Aldrich 公司。
[0165] 二抗：goat anti-mouse IgG、goat anti-rabbit IgG 购于 GE Healthcare ; Alexa Fluor 488donkey anti-mouse IgG、Alexa Fluor 546goat anti-rabbit IgG 贝勾于 molecular probes。
[0166] I. 2实验方法
[0167] I. 2. I分子生物学常规方法
[0168] 聚合酶链式反应、琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶反应、割胶回收、DNA的己醇沉 淀、连接反应、大肠杆菌转化W及质粒抽提等分子克隆常规操作参考《分子克隆》第二版 (Molecular Cloning, A Laboratory Manual,2nd， ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)，及《精编分子生物学实验指南》第H版（Sho;rt Protocols in Molecular Biology, 3rd, ed, John Wiley&Sons, Inc.，199f5)。
[0169] I. 2. 2真核表达质粒的转染
[0170] 293T、化la用25邸a聚己帰亚胺（polyet的le