一种蜂胶提取物及其提取工艺的制作方法
【专利摘要】本申请属于蜂胶提取技术领域，具体涉及一种蜂胶提取物及其提取工艺。该提取工艺，包括如下步骤：1)取蜂胶原料，拣去杂质，在?10℃～?20℃条件下冷冻后粉碎，过筛后得细粉，备用；2)向细粉中加入混合溶剂，15?35℃条件下超声处理30?60分钟，然后过滤，得滤渣和滤液，减压浓缩滤液得固体1；3)向步骤2)所得滤渣中加入乙醇水溶液并于65?75℃下提取1?3次，每次1?3h，将提取液过滤，得滤液；4)将所述滤液减压浓缩后所得固体2与固体1合并后干燥即得蜂胶提取物。由本申请提供的提取工艺提取得到的蜂胶中黄酮、挥发油的含量高，杂质(如铅等)含量少。
【专利说明】
一种蜂胶提取物及其提取工艺
技术领域
[0001]本发明属于蜂胶的提取分离技术领域，具体涉及一种蜂胶提取物及其提取工艺。
【背景技术】
[0002]蜂胶是西方蜜蜂采集植物树脂，并混入蜂蜡、花粉及蜜蜂腺体分泌物后经蜜蜂咀嚼加工而成的一种粘稠物质，有令人愉快的芳香气味。蜜蜂利用蜂胶填补蜂巢空隙，光滑蜂巢内壁，并利用蜂胶防止巢房内异物的腐烂和病菌的传染等。
[0003]蜂胶成分复杂，大约由55%的树脂和树香、30 %左右的蜂蜡、10 %的芳香挥发油和5%的花粉及杂物组成。不同地区由于胶原植物不同，所产蜂胶的化学成分存在很大差异。蜂胶具有低温硬脆、高温变粘的质地特异性，不溶于水，部分溶于乙醇等有机溶剂，因此在利用蜂胶时需对蜂胶进行加工。
[0004]在欧洲及中亚，蜂胶作为一种民间医药，有悠久的应用历史，我国历史文献中对蜂胶的应用和生产记载不多。近年来，由于蜂胶在药理学及化学领域的特殊性质，蜂胶成为国内外研究开发的一大热点。《中华人民共和国药典》2005年版第一部中将蜂胶收录其中。从药学角度看，蜂胶是一味动、植物双源性的中药;从化学成分角度看，蜂胶含有二十余类、300多种天然成分，具有高度的复杂性和可变性。从生物学活性角度看，蜂胶具有广谱抗菌、抗氧化、抗肿瘤、调节血脂血糖等十分广泛的生物学作用。
[0005]目前蜂胶中的己知成分包括多酚类(黄酮和酚酸)、醇、烯、醛、酯、醚、菇类、甾类、糖、氨基酸、脂肪酸及微量元素。蜂胶的最大特点是含有丰富的黄酮类化合物，有“黄酮类化合物的宝库之称”。蜂胶中的黄酮类化合物具有抗菌、杀毒、消炎、止痛、降血脂、促进组织再生和增进机体免疫能力等功效。
[0006]现有技术中对蜂胶的提取主要是针对多酚类，即最大程度的提取出多酚类物质，事实上，蜂胶的药理作用均是其多种活性成分协同起效的结果。但挥发性物质及维生素等营养成分收率极低。蜂胶所含挥发性成分主要为在蜂胶中约占10 %的芳香挥发油。体外抑菌实验显示蜂胶挥发性物质对格兰氏阳性菌:金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和格兰氏阴性菌:绿脓假单胞菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌等细菌及白色念珠菌、热带假丝酵母、光滑念珠菌等真菌有抑制作用。还有科学家研究发现蜂胶挥发性物质在大米储藏过程中对大米脂质过氧化及水解具有抑制作用。但蜂胶中不同于常规用于挥发油提取的植物组织，具有低温硬脆、高温粘稠的质地特异性。
[0007]经检索，与蜂胶提取工艺相关的专利有如下几篇:
[0008]I)中国专利201210227678.4《蜂胶提取的方法》公开了一种蜂胶提取的方法。该方法用超声空化技术与不同浓度乙醇提取蜂胶技术相结合，工艺简单，工艺参数范围准确，提高了蜂胶的黄酮含量、降低了铅含量，提升了蜂胶品质。但该方法对挥发油的提取率低。
[0009]2)中国专利201110117989.0《一种蜂胶的提取工艺》公开了一种蜂胶的提取工艺。该方法利用食用酒精室温浸泡蜂胶原料，然后经过滤、真空浓缩后得到。该发明涉及的蜂胶提纯工艺，蜂胶提纯率高，挥发油损失少，提取后有效成分多，而且整个提纯工艺的步骤简单，节约时间，提纯效率高。但提取得到蜂胶的铅含量高，蜂胶品质低。
[0010]3)中国专利201310473370.2《一种蜂胶提取物及其应用》公开了一种利用不同浓度乙醇提取净化蜂胶的方法，该方法得到的提取物种具有抗炎、保肝作用，对人白细胞弹性蛋白酶具有抑制作用；对四氯化碳致肝损伤具有保护作用。但这种方法得到的提取物中主要有效成分为黄酮类。
[0011]从上面已公开的专利可以看出，目前对蜂胶的提取主要是以乙醇为溶剂，进行室温浸泡或回流提取，但根据相似相溶原理，挥发油中的弱极性的成分萜类、烯类等碳氢化合物在强极性的乙醇(或乙醇水溶液)中溶解性较小，所以，上述专利中已公开的蜂胶的提取方法中提取得到的蜂胶中的挥发油的含量极低，无法满足实际生产的需要。
【发明内容】
[0012]为了解决现有技术中的上述问题，本申请旨在提供一种蜂胶提取工艺，使得到的蜂胶黄酮、挥发油的含量高，同时杂质(如铅等)含量少。
[0013]为了实现上述发明目的，本申请提供了一种蜂胶提取工艺，其包括如下步骤:
[0014]I)取蜂胶原料，拣去杂质，在-10°C?_20°C条件下冷冻8?12h;然后粉碎，过80?100目筛后得细粉，备用；
[0015]2)向细粉中按细粉:混合溶剂=I: (8?22) W/V的比例加入混合溶剂，15?35 °C条件下超声处理30?60分钟，然后过滤，得滤渣和滤液，减压浓缩滤液得固体I;
[0016]其中，混合溶剂为正己烷:乙酸乙酯:95%乙醇水溶液=(I?6):1: (0.01?0.I )V/V/V；
[0017]3)向步骤2)所得滤渣中按滤渣:75%乙醇水溶液=1: (4?8)￥八比例加入乙醇水溶液，并于65?75 °C下提取I?3次，每次I?3h，将提取液过滤，得滤液；
[0018]4)将所述滤液减压浓缩后所得固体2与固体I合并后干燥即得蜂胶提取物。
[0019]优选地，步骤I)操作如下:取蜂胶原料，拣去杂质，在-10°C?-20 °C条件下冷冻2?4h后粉碎成4?36cm3大小的块状;继续在-10°C?-20°C下冷冻I?3h后粉碎，过20?60目筛后得粗粉；最后在-10°C?_20°C条件下冷冻I?9h后过80?100目筛后得细粉，备用。分多次、梯度碎化蜂胶原料，可以避免因粉碎过程中温度升高造成的蜂胶塑化而相互粘附或粘附在粉碎仪上造成蜂胶原料的损失，其中以三次为最佳，既提高了整个提取工艺的提取效率，还可以降低粉碎过程中的能耗。
[0020]优选地，步骤I)操作如下:取蜂胶原料，拣去杂质，在-10°C?-20 °C条件下冷冻8?12h;向其中加入相当于蜂胶原料3?8重量％的粉碎介质后粉碎，过80?100目筛后得细粉，备用。
[0021]在蜂胶原料中加入粉碎介质也可以避免因粉碎过程中温度升高造成的蜂胶塑化而相互粘附或粘附在粉碎仪上。
[0022]进一步优选地，所述的粉碎和过筛要控制在20?30分钟完成；所述的粉碎介质为稻壳、米糠或麸皮。
[0023 ]更进一步优选地，向所述的粉碎介质中加入相当于该粉碎介质I?5重量％的药学上可接受的润滑剂，如滑石粉、碳酸钙、硬脂酸镁等。
[0024]优选地，步骤3)中，在进行乙醇提取时，还加入有相当于蜂胶原料0.3?0.8重量％的天然表面活性剂，进一步优选地，所述天然表面活性剂为卵磷脂，如大豆卵磷脂。在乙醇提取时加入天然表面活性剂，可以提高蜂胶中水溶性成分的溶出，进而可以提高有效成分的提取效率。
[0025]由上述蜂胶提取工艺提取得到的蜂胶提取物，其中，黄酮含量为22-30%，挥发油含量为7-9.5%。
[0026]与现有技术相比，本申请提供的蜂胶提取工艺具有以下优点:
[0027]I)分多次、梯度碎化蜂胶原料，可以避免因粉碎过程中温度升高造成的蜂胶塑化而相互粘附或粘附在粉碎仪上造成蜂胶原料的损失，其中以三次为最佳，既提高了整个提取工艺的提取效率，还可以降低粉碎过程中的能耗。
[0028]2)本申请根据相似相溶原理，采用不同极性溶剂组成的混合溶剂先对蜂胶进行提取，然后再用乙醇提取，提取得到的蜂胶提取物中黄酮含量可至30%、挥发油的含量可至9.5%，同时杂质(如铅等)含量少。
【具体实施方式】
[0029]下面结合实施例对本发明做进一步阐述。这些实施例仅是出于解释说明的目的，而不限制本发明的范围和实质。如无特殊说明，本申请的操作采用本领域技术人员的常规手段进行，如过滤，采用减压过滤;干燥，则在真空条件下进行。所用到的溶剂为分析纯。蜂胶原料均购于北京市大兴区。
[0030]如无特殊说明，本发明中的百分比均为重量百分比；乙醇水溶液的浓度均为体积百分比浓度。
[0031]实施例1
[0032]一种蜂胶提取工艺，其包括如下步骤:
[0033]I)取蜂胶原料，拣去杂质，在-20°C条件下冷冻1h;然后粉碎，过100目筛后得细粉，备用；
[0034]2)向细粉中按细粉:混合溶剂=1:22W/V的比例加入混合溶剂，30°C条件下超声处理60分钟，然后过滤，得滤渣和滤液，减压浓缩滤液得固体I;
[0035]其中，混合溶剂为正己烷:乙酸乙酯:95%乙醇水溶液=1: 1:0.1V/V/V;
[0036]3)向步骤2)所得滤渣中按滤渣:75 %乙醇水溶液=1: 5W/V比例加入乙醇水溶液并于65 °C下提取2次，每次2h，将提取液过滤，得滤液；
[0037]4)将所述滤液减压浓缩后所得固体2与固体I合并后干燥即得蜂胶提取物。
[0038]实施例2
[0039]一种蜂胶提取工艺，其包括如下步骤:
[0040]I)取蜂胶原料I千克，拣去杂质，在-20 °C条件下冷冻6h，粉碎，继续在-20 °C条件下冷冻6h，粉碎，过100目筛后得细粉，备用；
[0041 ] 2)向细粉中按细粉:混合溶剂=1:22W/V的比例加入混合溶剂，30°C条件下超声处理60分钟，然后过滤，得滤渣和滤液，减压浓缩滤液得固体I;
[0042]其中，混合溶剂为正己烷:乙酸乙酯:95%乙醇水溶液=1: 1:0.1V/V/V;
[0043]3)向步骤2)所得滤渣中按滤渣:75 %乙醇水溶液=1: 5W/V比例加入乙醇水溶液并于65 °C下提取2次，每次2h，将提取液过滤，得滤液；
[0044]4)将所述滤液减压浓缩后所得固体2与固体I合并后干燥即得蜂胶提取物。
[0045]其中，测得本实施例提取得到蜂胶提取物952克，参照GB/T24283-2009《蜂胶》中总黄酮的测定方法测得本施例提取得到的蜂胶提取物中黄酮类物质的含量是22%，采用GC-MS测得该提取物中挥发性成分的含量为7 %。
[0046]实施例3
[0047]一种蜂胶提取工艺，其包括如下步骤:
[0048]I)取蜂胶原料I千克，拣去杂质，在-20°C条件下冷冻4h后粉碎成25cm3大小的块状;继续在_20°C下冷冻2h后粉碎，过20目筛后得粗粉;最后在-20°C条件下冷冻4h后粉碎过80目筛后得细粉，备用。
[0049]2)向细粉中按细粉:混合溶剂=1:22W/V的比例加入混合溶剂，30°C条件下超声处理60分钟，然后过滤，得滤渣和滤液，减压浓缩滤液得固体I;
[0050]其中，混合溶剂为正己烷:乙酸乙酯:95%乙醇水溶液=1: 1:0.1V/V/V;
[0051 ] 3)向步骤2)所得滤渣中加入3克的大豆卵磷脂，然后按滤渣:75%乙醇水溶液=1:5W/V比例加入乙醇水溶液并于65 °C下提取2次，每次2h，将提取液过滤，得滤液；
[0052]4)将所述滤液减压浓缩后所得固体2与固体I合并后干燥即得蜂胶提取物。
[0053]测得本实施例提取得到的蜂胶提取物966克，采用同实施例2的方法测得蜂胶提取物中黄酮类物质的含量是25%，采用GC-MS测得该提取物中挥发性成分的含量为9%。
[0054]实施例4
[0055]一种蜂胶提取工艺，其包括如下步骤:
[0056]I)取蜂胶原料I千克，拣去杂质，在-10°C条件下冷冻8h;向其中加入50克的稻壳，粉碎，过100目筛后得细粉，备用。
[0057]2)向细粉中按细粉:混合溶剂=1:22W/V的比例加入混合溶剂，30°C条件下超声处理60分钟，然后过滤，得滤渣和滤液，减压浓缩滤液得固体I;
[0058]3)向步骤2)所得滤渣中加入5克的大豆卵磷脂，然后按滤渣:75%乙醇水溶液=1:5W/V比例加入乙醇水溶液并于65 °C下提取3次，每次3h，将提取液过滤，得滤液；
[0059]4)将所述滤液减压浓缩后所得固体2与固体I合并后干燥即得蜂胶提取物。
[0060]本施例提取得到的蜂胶提取物963克，采用同实施例2的方法测得蜂胶提取物中黄酮类物质的含量是24 %，采用GC-MS测得该提取物中挥发性成分的含量为7.8 %。
[0061 ] 实施例5
[0062]一种蜂胶提取工艺，其包括如下步骤:
[0063]I)取蜂胶原料I千克，拣去杂质，向其中加入50克的稻壳和0.5克的滑石粉，在-15°C条件下冷冻2h后粉碎成36cm3大小的块状;继续在-15°c下冷冻2h后粉碎，过20目筛后得粗粉;最后在_15°C条件下冷冻Sh后粉碎过80目筛后得细粉，备用；
[0064]2)向细粉中按细粉:混合溶剂=1:12W/V的比例加入混合溶剂，30°C条件下超声处理60分钟，然后过滤，得滤渣和滤液，减压浓缩滤液得固体I;
[0065]其中，混合溶剂为正己烷:乙酸乙酯:95%乙醇水溶液=6:1:0.01V/V/V；
[0066]3)向步骤2)所得滤渣中加入5克的大豆卵磷脂，然后按滤渣:75%乙醇水溶液=1:5W/V比例加入乙醇水溶液并于65 °C下提取3次，每次3h，将提取液过滤，得滤液；
[0067]4)将所述滤液减压浓缩后所得固体2与固体I合并后干燥即得蜂胶提取物。
[0068]本施例提取得到的蜂胶提取物970克，采用同实施例2的方法测得蜂胶提取物中黄酮类物质的含量是28%，采用GC-MS测得该提取物中挥发性成分的含量为9.3%。
[0069]对比例I
[0070]一种蜂胶提取工艺，其包括如下步骤:
[0071]I)将蜂胶原料I千克在-10°C的液氮环境下冷冻12小时，然后粉碎，先将冷冻好的块胶破碎成5-10mm的小块，然后在粉粹机中粉碎成300目的细粉，备用；
[0072]2)向细粉中加入3-4倍重的食用酒精，酒精的浓度是75%，浸泡7天，浸泡过程中每隔2小时搅拌20-30分钟；
[0073]3)先用100目的滤布粗滤，将滤液在O 0C冷库贮存24小时后进行精滤，精滤时用400目的滤布，得到的滤液待用，其中，粗滤后残留的滤渣加入食用酒精后再进行精滤，得到的滤液也加入其中待用；
[0074]4)经真空减压浓缩得到蜂胶膏，其中真空度控制在0.0SMPa以下，蒸发的酒精通过回收后再次利用。
[0075]本对比例提取得到的蜂胶提取物937克，采用同实施例2的方法测得蜂胶提取物中黄酮类物质的含量是20%，采用GC-MS测得该提取物中挥发性成分的含量为5%。
[0076]对比例2
[0077]—种蜂胶提取的方法，其包括如下步骤:
[0078]I)将蜂胶原料I千克置于-4?_8°C的环境下冷冻24小时；
[0079]2)冷冻后的毛胶，辅以10%的粉碎介质，所得毛胶颗粒，立即进入震动筛；
[0080]3)将筛分后颗粒细度为40?60目的毛胶颗粒，按82%的含用乙醇与毛胶的配料比4:1(固液比)配料后，在25?30°C下浸提48小时，每隔I小时搅拌30min，并正反相间，浸提过程中辅以超声波强化提取，每隔6小时超声I次，每次超声时间30min，超声功率2000W，48小时后第一次抽滤上清液栗入带有冷却盘管沉降缺罐中，再以75%的食用乙醇按配料比2:1(固液比)配料后，在25?30°C下浸提24小时，每隔I小时搅拌20min，并正反相间，浸提过程中辅以超声波强化提取，每隔12小时超声I次，每次超声时间20min，超声功率1000W，后第二次抽滤上清液栗入带有冷却盘管沉降缺罐中，再次以90%的食用乙醇按配料比1:1(固液比)配料后，在25?30°C下浸提24小时，每隔I小时搅拌lOmin，并正反相间，浸提过程中辅以超声波强化提取，每隔12小时超声I次，每次超声时间lOmin，超声功率800W，后第三次抽滤上清液栗入带有冷却盘管沉降缺罐中。三次上清液抽完后，将余下的残留液连同残渣一起用加三层80-120目滤布的离心机甩干，经过滤后取滤液并入上述沉降罐，用气流混合均质后再在-4?-0°C冷却沉降48小时以上，沉降液再经500目滤布的板框过滤，滤液待浓缩。待浓缩滤液分几次进入减压蒸发器，每次300升，采用水浴加热。浓缩温度40?50°C，真空度
0.096MPa以上，浓缩后即得蜂胶，注模成型后即成蜂胶浸膏。
[0081]本对比例提取得到的蜂胶提取物935克，采用同实施例2的方法测得蜂胶提取物中黄酮类物质的含量是24%，采用GC-MS测得该提取物中挥发性成分的含量为4.7%。
[0082]上述实施例仅作为解释本发明的目的，本发明的范围不受此限制。对本领域的技术人员来说所做的修改是显而易见的，本发明仅受所附权利要求范围的限制。
【主权项】
1.一种蜂胶提取工艺，其包括如下步骤: 1)取蜂胶原料，拣去杂质，在-10°c?-20°c条件下冷冻8?12h；然后粉碎，过80-100目筛后得细粉，备用； 2)向细粉中按细粉:混合溶剂=I: (8?22)W/V的比例加入混合溶剂，15?35°C条件下超声处理30?60分钟，然后过滤，得滤渣和滤液，减压浓缩滤液得固体I; 其中，混合溶剂为正己烷:乙酸乙酯:95 %乙醇水溶液=(I?6):1: (0.0I?0.I) V/V/V; 3)向步骤2)所得滤渣中按滤渣:75%乙醇水溶液=1: (4?8)W/V比例加入乙醇水溶液，并于65?75 °C下提取I?3次，每次I?3h，将提取液过滤，得滤液； 4)将所述滤液减压浓缩后所得固体2与固体I合并后干燥即得蜂胶提取物。2.根据权利要求1所述的提取工艺，其中，步骤I)操作如下:取蜂胶原料，拣去杂质，在_10°C?_20°C条件下冷冻2?4h后粉碎成4?36cm3大小的块状;继续在-10°C?_20°C下冷冻I?3h后粉碎，过20?60目筛后得粗粉;最后在-10°C?-20°C条件下冷冻I?9h后过80?100目筛后得细粉，备用。3.根据权利要求1所述的提取工艺，其中，步骤I)操作如下:取蜂胶原料，拣去杂质，在_10°C?_20°C条件下冷冻8?12h;向其中加入相当于蜂胶原料3?8重量％的粉碎介质后粉碎，过80-100目筛后得细粉，备用。4.根据权利要求3所述的提取工艺，其中，所述的粉碎和过筛要控制在20?30分钟完成;所述的粉碎介质为稻壳、米糠或麸皮。5.根据权利要求4所述的提取工艺，其中，向所述的粉碎介质中加入相当于该粉碎介质.1-5重量％的药学上可接受的润滑剂。6.根据权利要求5所述的提取工艺，所述的润滑剂为滑石粉、碳酸钙、硬脂酸镁。7.根据权利要求1-6中任一项所述的提取工艺，其中，步骤3)中，在进行乙醇提取时，还加入有相当于蜂胶原料0.3?0.8重量％的天然表面活性剂。8.根据权利要求7所述的提取工艺，所述的天然表面活性剂为卵磷脂。9.一种蜂胶提取物，其是由权利要求1-8任一项所述的提取工艺得取得到。10.根据权利要求9所述的蜂胶提取物，其中，黄酮含量为22-30%，挥发油含量为7-.9.5%。
【文档编号】A61K35/644GK106074617SQ201610716731
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年8月24日
【发明人】刘兵, 于荣贤, 余玉芳, 张勇, 王祖忠, 孙小玲
【申请人】深圳市荣格保健品有限公司