一种胶陀螺正丁醇提取物、提取方法及用途
【专利摘要】本发明提供了一种胶陀螺正丁醇提取物、提取方法及用途。本发明的胶陀螺提取物是通过以下方法制备得到的：1）将胶陀螺用乙醇或乙醇水溶液提取，浓缩提取液并干燥，从而得到乙醇提取物；以及2）将所述的乙醇提取物进行萃取或回流提取，浓缩所得有机萃取液或提取液并干燥，从而得到所述的胶陀螺提取物。本发明还提供了一种胶陀螺的提取方法以及所述的胶陀螺提取物在制备用于治疗银屑病的药物中的用途。本发明的胶陀螺提取物具有更优秀的治疗银屑病的效果，解决了现有胶陀螺提取物治疗银屑病疗效不确切的问题，具有更好的成为临床用药的前景。
【专利说明】—种胶陀螺正丁醇提取物、提取方法及用途
【技术领域】
[0001]本发明属于制药领域，具体而言，涉及一种胶陀螺提取物及其用途和胶陀螺的提取方法。
【背景技术】
[0002]银屑病(Psoriasis)，又称牛皮癣，是一种常见的慢性皮肤病，其特征是出现大小不等的丘疹、红斑，表面覆盖着银白色鳞屑，边界清楚，好发于头皮、四肢伸侧及背部。男性多于女性。春冬季节容易复发或加重，而夏秋季多缓解。
[0003]银屑病发病原因比较复杂，病因尚未明确。近年来多数学者认为，与遗传、感染、代谢障碍、免疫功能障碍、内分泌失调有关。现时已变得愈来愈普遍，特别是已发展的城市。银屑病并不是一种传染病，但因为银屑病患者的皮肤问题，往往给患者带来极大的身心痛苦和经济负担。
[0004]西医治疗银屑病主要是消除症状，避免进一步恶化，无法根治。副作用较大。因银屑病的病理变化是表皮细胞增殖，所以以往都注重使用能抑制细胞增殖的抗癌药物，50年代起用白血宁，稍后用氨甲蝶呤(METH0TREX0TE)，70年代起用乙亚胺、乙双吗啉等，但这些药物副作用大，且停药后容易复发，再发时病情往往较重，治疗也较顽固，如白血宁容易引起白细胞下降，甚至粒性白细胞缺乏，也可引起肝硬化及肝癌。氨甲蝶呤对肝脏的毒性更大；因使用乙亚胺和乙双吗啉，近年来全国各地区己有数十例导致白血病的报告。而中医传统疗法治疗银屑病由于治疗效果不能量化，也不是很理想。
[0005]中国专利文献CN03128560.0和CN01118726.3中记载了一种胶陀螺或其菌丝体的提取物用于治疗银屑病，该药有一定疗效，目前并未生产和上市，需要进行进一步的研究。
[0006]胶陀螺为民间习用药材，当地居民有食用的习惯，有清热解毒，活血化瘀，抗炎止痒，镇静安神的功效，用于牛皮癣、白癜风、神经性皮炎等病症。胶陀螺未被列入《中国药典》，中医文献古籍也无记载，因此，是一个有待充分开发和利用的药用资源。
[0007]虽然中国专利文献CN03128560.0 (“胶陀螺或其菌丝体的药物应用”)中报道过胶陀螺用于治疗银屑病的用途，但是在该文献中所公开的方法为95%乙醇回流提取，胶陀螺95%乙醇提取物疗效还不够好，并且疗效不确切，目前还未被用于临床治疗银屑病。因此目前还需要开发疗效更好的提取物，为患者提供更好的更确切治疗效果。而现有技术中除了胶陀螺95%乙醇提取物以外，目前还没有胶陀螺的其它提取物及提取方法的公开文献报道。
【发明内容】
[0008]为解决上述现有技术中存在的问题，本发明提供了一种胶陀螺提取物及其用途、胶陀螺的提取方法。
[0009]具体而言，本发明提供:
[0010](I) 一种胶陀螺提取物，所述的胶陀螺提取物是通过以下方法制备得到的:[0011]I)将胶陀螺用乙醇或乙醇水溶液提取，浓缩提取液并干燥，从而得到乙醇提取物；以及
[0012]2)将所述的乙醇提取物进行萃取或回流提取，浓缩所得有机萃取液或提取液并干燥，从而得到所述的胶陀螺提取物；
[0013]其中，在步骤2)中，所述的萃取包括:先将所述的乙醇提取物与水混合，再用水饱和正丁醇进行萃取；
[0014]其中，在步骤2)中，所述的回流提取包括:将所述的乙醇提取物用正丁醇进行回流提取。
[0015](2)根据(I)所述的胶陀螺提取物，其中，所述的乙醇水溶液为60-95% (v/v)的乙醇水溶液；优选为95% (v/v)的乙醇水溶液。
[0016](3)根据(I)所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤I)中，所述的胶陀螺和每次提取所用的乙醇或乙醇水溶液的重量:体积比(单位:g:ml)为1: (2-10);更优选为1:5。
[0017](4)根据(I)所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤I)中，所述的提取选自回流提取、冷浸提取、热浸提取中的一种；优选为回流提取。
[0018]( 5 )根据(I)所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤I)中，所述提取为回流提取，所述的回流提取的次数为1-3次；优选为3次。
[0019](6)根据(I)所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行萃取时，所述的乙醇提取物、所述的水以及每次萃取所用的水饱和正丁醇的重量:体积:体积的比例(单位:g:ml:ml)为1: (1-3): (1-3);更优选为1:1:1。
[0020](7)根据(I)所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行萃取时，用所述的水饱和正丁醇进行萃取的次数为1-3次；优选为3次。
[0021](8)根据(I)所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行回流提取时，所述的乙醇提取物和每次回流提取所用的正丁醇的重量:体积比(单位:g:ml)为 1: (1-3);更优选为 1:1。
[0022](9)根据(I)所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行回流提取时，所述的回流提取的次数为1-3次，优选为3次。
[0023](10)根据(I)所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤I)和/或步骤2)中，所述的浓缩为减压浓缩。
[0024](11)根据(I)所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤I)和/或步骤2)中，所述的干燥为冷冻干燥或减压干燥。
[0025]( 12)根据(I)所述的胶陀螺提取物，其中，所述的胶陀螺提取物是通过以下方法制备得到的:将胶陀螺用95% (v/v)的乙醇回流提取3次，浓缩提取液，减压干燥，从而得到乙醇提取物；以及将所述的乙醇提取物先与水混合，再用水饱和正丁醇萃取3次，浓缩有机萃取液，冷冻干燥，从而得到所述的胶陀螺提取物。
[0026](13) 一种胶陀螺的提取方法，其包括:
[0027]I)将胶陀螺用乙醇或乙醇水溶液提取，浓缩提取液并干燥，从而得到乙醇提取物；以及
[0028]2)将所述的乙醇提取物进行萃取或回流提取，浓缩所得有机萃取液或提取液并干燥，从而得到胶陀螺提取物；[0029]其中，在步骤2)中，所述的萃取包括:先将所述的乙醇提取物与水混合，再用水饱和正丁醇进行萃取；
[0030]其中，在步骤2)中，所述的回流提取包括:将所述的乙醇提取物用正丁醇进行回流提取。
[0031](14)根据(13)所述的方法，其中，所述的乙醇水溶液为60-95% (v/v)的乙醇水溶液；优选为95% (v/v)的乙醇水溶液。
[0032](15)根据(13)所述的方法，其中，在步骤I)中，所述的胶陀螺和每次提取所用的乙醇或乙醇水溶液的重量:体积比(单位:g:ml)为1: (2-10);更优选为1:5。
[0033](16)根据(13)所述的方法，其中，在步骤I)中，所述的提取选自回流提取、冷浸提取、热浸提取中的一种；优选为回流提取。
[0034](17)根据(13)所述的方法，其中，在步骤I)中，所述提取为回流提取，所述的回流提取的次数为1-3次；优选为3次。
[0035](18)根据(13)所述的方法，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行萃取时，所述的乙醇提取物、所述的水以及每次萃取所用的水饱和正丁醇的重量:体积:体积的比例(单位:g:ml:ml)为 1: (1-3): (1-3);更优选为 1:1:1。
[0036](19)根据(13)所述的方法，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行萃取时，用所述的水饱和正丁醇进行萃取的次数为1-3次；优选为3次。
[0037](20)根据(13) 所述的方法，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行回流提取时，所述的乙醇提取物和每次回流提取所用的正丁醇的重量:体积比(单位:g:ml)为I: (1-3);更优选为1:1。
[0038](21)根据(13)所述的方法，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行回流提取时，所述的回流提取的次数为1-3次，优选为3次。
[0039](22)根据(13)所述的方法，其中，在步骤I)和/或步骤2)中，所述的浓缩为减压浓缩。
[0040](23)根据(13)所述的方法，其中，在步骤I)和/或步骤2)中，所述的干燥为冷冻干燥或减压干燥。
[0041](24)根据(13)所述的方法，其中，所述的方法包括:将胶陀螺用95% (v/v)的乙醇回流提取3次，浓缩提取液，减压干燥，从而得到乙醇提取物；以及将所述的乙醇提取物先与水混合，再用水饱和正丁醇萃取3次，浓缩有机萃取液，冷冻干燥，从而得到所述的胶陀螺提取物。
[0042](25)根据(I) - (12)中任意一项所述的胶陀螺提取物在制备用于治疗银屑病的药物中的用途。
[0043]本发明的胶陀螺提取物与现有技术相比具有以下优点和积极效果:
[0044]本发明解决了现有胶陀螺提取物治疗银屑病疗效不确切的问题，提供了一种新的胶陀螺提取物及胶陀螺提取方法，本发明的新的胶陀螺提取物具有更优秀的治疗银屑病的效果，具有更好的成为临床用药的前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0045]图1为正常对照组对小鼠尾部鳞片表皮角化的影响的病理结果图；[0046]图2为阳性药组对小鼠尾部鳞片表皮角化的影响的病理结果图；
[0047]图3为17-B大剂量组对小鼠尾部鳞片表皮角化的影响的病理结果图；
[0048]图4为17-B小剂量组对小鼠尾部鳞片表皮角化的影响的病理结果图；
[0049]图5为17-C大剂量组对小鼠尾部鳞片表皮角化的影响的病理结果图；
[0050]图6为17-C小剂量组对小鼠尾部鳞片表皮角化的影响的病理结果图；
[0051]图7为17-E大剂量组对小鼠尾部鳞片表皮角化的影响的病理结果图；
[0052]图8为17-E小剂量组对小鼠尾部鳞片表皮角化的影响的病理结果图；
[0053]图9为阳性对照药对小鼠阴道有丝分裂指数的影响的病理结果图；
[0054]图10为17-B大剂量组对小鼠阴道有丝分裂指数的影响的病理结果图；
[0055]图11为17-B小剂量组对小鼠阴道有丝分裂指数的影响的病理结果图；
[0056]图12为17-C大剂量组对小鼠阴道有丝分裂指数的影响的病理结果图；
[0057]图13为17-C小剂量组对小鼠阴道有丝分裂指数的影响的病理结果图；
[0058]图14为17-E大剂量组对小鼠阴道有丝分裂指数的影响的病理结果图；
[0059]图15为17-E小剂量组对小鼠阴道有丝分裂指数的影响的病理结果图；
[0060]图16为模型组对小鼠阴道有丝分裂指数的影响的病理结果图；
[0061]图17为正常对照组对小鼠阴道有丝分裂指数的影响的病理结果图。
【具体实施方式】
[0062]以下通过【具体实施方式】的描述并参照附图对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
[0063]胶陀螺一般为胶陀螺科真菌胶陀螺Bulgaria inquinans (Pers.) Fr.的干燥子实体，夏秋季节采收，烘干，原产地长白山林区，常见当地居民连续多次或一次过量食用胶陀螺后，经阳光曝晒，颜面等身体暴露部位出现红肿，尤以口唇为重。故又称胶陀螺为“猪嘴蘑”或“拱嘴蘑”。本发明中针对胶陀螺所进行的提取包括对胶陀螺或其菌丝体进行的提取。
[0064]本发明人在现有技术的胶陀螺95%乙醇提取物的基础上，通过大量的实验筛选研究，例如采用了多种溶剂进行提取或萃取，最终发现了新的胶陀螺提取物及提取方法，本发明人还通过药效学试验，研究胶陀螺提取物的疗效。其中，药效学试验使用动物模型进行。
[0065]本发明的目的在于提供一种新的胶陀螺提取物及其用途、胶陀螺的提取方法。
[0066]具体而言，本发明首先提供了一种胶陀螺提取物，所述的胶陀螺提取物是通过以下方法制备得到的:
[0067]1)将胶陀螺用乙醇或乙醇水溶液提取，浓缩提取液并干燥，从而得到乙醇提取物；以及
[0068]2)将所述的乙醇提取物进行萃取或回流提取，浓缩所得有机萃取液或提取液并干燥，从而得到所述的胶陀螺提取物；
[0069]其中，在步骤2)中，所述的萃取包括:先将所述的乙醇提取物与水混合，再用水饱和正丁醇进行萃取；
[0070]其中，在步 骤2)中，所述的回流提取包括:将所述的乙醇提取物用正丁醇进行回流提取。[0071]在本文中，术语“水饱和正丁醇”是本领域已知的，也称“饱和正丁醇”、“水饱和的正丁醇”等，可采用本领域常用方法制备。
[0072]优选的是，在步骤I)中，所述的胶陀螺在进行提取前是经过粉碎的，粉碎后的粒径范围可根据实际情况进行确定，例如优选为本领域常用的适宜提取的粒径。
[0073]优选的是，所述的乙醇水溶液为60-95% (v/v)的乙醇水溶液；优选为95% (v/v)的乙醇水溶液。
[0074]优选的是，在步骤I)中，所述的胶陀螺和每次提取所用的乙醇或乙醇水溶液的重量:体积比(单位:g:ml)为1:(2-10);更优选为1:5。
[0075]优选的是，在步骤1)中，所述的提取选自回流提取、冷浸提取、热浸提取中的一种；优选为回流提取。回流提取、冷浸提取、热浸提取的温度、次数和时间等可根据实际情况进行确定。
[0076]优选的是，在步骤1)中，所述提取为回流提取，所述的回流提取的次数为1-3次；优选为3次。所述的提取的时间优选为1-2小时/每次。
[0077]优选的是，在步骤1)中，浓缩提取液至相对密度为1-2 (更优选为1.3)的稠膏，再进行干燥。
[0078]优选的是，在步骤2)中，所述的乙醇提取物在进行萃取或提取前是经过粉碎的，粉碎后的粒径范围可根据实际情况进行确定，例如优选为本领域常用的适宜萃取或提取的粒径。
[0079]优选的是，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行萃取时，所述的乙醇提取物、所述的水以及每次萃取所用的水饱和正丁醇的重量:体积:体积的比例(单位
(即，乙醇提取物的重量(g):水的体积(ml):每次萃取所用的水饱和正丁醇的体积(ml)的比例)为1: (1-3): (1-3);更优选为1:1:1。
[0080]优选的是，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行萃取时，用所述的水饱和正丁醇进行萃取的次数为1-3次；优选为3次。
[0081]优选的是，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行回流提取时，所述的乙醇提取物和每次回流提取所用的正丁醇的重量:体积比(单位:g:ml)为1: (1-3);更优选为1:1。
[0082]优选的是，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行回流提取时，所述的回流提取的次数为1-3次，优选为3次。回流提取的温度、次数和时间等可根据实际情况进行确定。
[0083]优选的是，在步骤1)和/或步骤2)中，所述的浓缩为减压浓缩。减压浓缩的温度、压力和时间可根据实际情况进行确定。
[0084]优选的是，在步骤1)和/或步骤2)中，所述的干燥为冷冻干燥或减压干燥。冷冻干燥的温度和时间、减压干燥的温度、压力和时间可根据实际情况进行确定。
[0085]优选的是，所述的胶陀螺提取物是通过以下方法制备得到的:将胶陀螺用95% (v/v)的乙醇回流提取3次，浓缩提取液，减压干燥，从而得到乙醇提取物；以及将所述的乙醇提取物先与水混合，再用水饱和正丁醇萃取3次，浓缩有机萃取液，冷冻干燥，从而得到所述的胶陀螺提取物。
[0086]本发明第二方面提供了一种胶陀螺的提取方法，其包括:
[0087]1)将胶陀螺用乙醇或乙醇水溶液提取，浓缩提取液并干燥，从而得到乙醇提取物；以及[0088]2)将所述的乙醇提取物进行萃取或回流提取，浓缩所得有机萃取液或提取液并干燥，从而得到胶陀螺提取物；
[0089]其中，在步骤2)中，所述的萃取包括:先将所述的乙醇提取物与水混合，再用水饱和正丁醇进行萃取；
[0090]其中，在步骤2)中，所述的回流提取包括:将所述的乙醇提取物用正丁醇进行回流提取。
[0091 ] 优选的是，在步骤I)中，所述的胶陀螺在进行提取前是经过粉碎的，粉碎后的粒径范围可根据实际情况进行确定，例如优选为本领域常用的适宜提取的粒径。[0092]优选的是，所述的乙醇水溶液为60-95% (v/v)的乙醇水溶液；优选为95% (v/v)的乙醇水溶液。
[0093]优选的是，在步骤I)中，所述的胶陀螺和每次提取所用的乙醇或乙醇水溶液的重量:体积比(单位:g:ml)为1:(2-10);更优选为1:5。
[0094]优选的是，在步骤1)中，所述的提取选自回流提取、冷浸提取、热浸提取中的一种；优选为回流提取。回流提取、冷浸提取、热浸提取的温度、次数和时间等可根据实际情况进行确定。
[0095]优选的是，在步骤1)中，所述提取为回流提取，所述的回流提取的次数为1-3次；优选为3次。所述的提取的时间优选为1-2小时/每次。
[0096]优选的是，在步骤1)中，浓缩提取液至相对密度为1-2 (更优选为1.3)的稠膏，再进行干燥。
[0097]优选的是，在步骤2)中，所述的乙醇提取物在进行萃取或提取前是经过粉碎的，粉碎后的粒径范围可根据实际情况进行确定，例如优选为本领域常用的适宜萃取或提取的粒径。
[0098]优选的是，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行萃取时，所述的乙醇提取物、所述的水以及每次萃取所用的水饱和正丁醇的重量:体积:体积的比例(单位:g:ml:ml)为I: (1-3): (1-3);更优选为 1:1:1。
[0099]优选的是，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行萃取时，用所述的水饱和正丁醇进行萃取的次数为1-3次；优选为3次。
[0100]优选的是，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行回流提取时，所述的乙醇提取物和每次回流提取所用的正丁醇的重量:体积比(单位:g:ml)为1: (1-3);更优选为1:1。
[0101]优选的是，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行回流提取时，所述的回流提取的次数为1-3次，优选为3次。回流提取的温度、次数和时间等可根据实际情况进行确定。
[0102]优选的是，在步骤I)和/或步骤2)中，所述的浓缩为减压浓缩。减压浓缩的温度、压力和时间可根据实际情况进行确定。
[0103]优选的是，在步骤I)和/或步骤2)中，所述的干燥为冷冻干燥或减压干燥。冷冻干燥的温度和时间、减压干燥的温度、压力和时间可根据实际情况进行确定。
[0104]优选的是，本发明的方法包括:将胶陀螺用95% (v/v)的乙醇回流提取3次，浓缩提取液，减压干燥，从而得到乙醇提取物；以及将所述的乙醇提取物先与水混合，再用水饱和正丁醇萃取3次，浓缩有机萃取液，冷冻干燥，从而得到所述的胶陀螺提取物。
[0105]本发明第三方面提供了上述的胶陀螺提取物在制备用于治疗银屑病的药物中的用途。
[0106]本发明的一种具体实施方案为:
[0107]一种胶陀螺提取物，该提取物由以下方法制得:胶陀螺药材用乙醇提取得到乙醇提取物，乙醇提取物与水混合，再用水饱和正丁醇萃取，合并有机萃取液浓缩，干燥，即得。
[0108]优选的是，所述乙醇提取可以为回流提取、冷浸提取、热浸提取等，优选回流提取。
[0109]优选的是，所述干燥为冷冻干燥。
[0110]优选的是，所述浓缩为减压浓缩。
[0111]优选的是，所述的乙醇为60-95%的乙醇。更优选为95%的乙醇。
[0112]优选的是，所述的萃取的次数为1-3次。更优选为3次。
[0113]优选的是，该提取物由以下方法制得:胶陀螺用95%乙醇回流提取；称取胶陀螺乙醇提取物，与水混合，用水饱和正丁醇萃取3次，合并有机萃取液浓缩，冷冻干燥，得到正丁
醇层萃取物。
[0114]本发明的另一种具体实施方案为:
[0115]一种胶陀螺的提取方法，其特征在于，胶陀螺药材用乙醇回流提取得到乙醇提取物，乙醇提取物与水混合，再用水饱和正丁醇萃取，合并有机萃取液浓缩，干燥，即得。
[0116]优选的，所述干燥为冷冻干燥。
[0117]优选的，所述浓缩为减压浓缩。
[0118]优选的，所述的乙醇为60-95%乙醇。优选95%乙醇。
[0119]优选的，所述的萃取的次数为1-3次。优选3次。
[0120]优选的，胶陀螺用95%乙醇回流提取；称取胶陀螺乙醇提取物，与水混合，再用水饱和正丁醇萃取3次，合并有机萃取液浓缩，冷冻干燥，得到正丁醇层萃取物。
[0121]以下通过例子的方式进一步解释或说明本
【发明内容】
，但这些实施例不应被理解为对本发明保护范围的限制。
[0122]实施例1
[0123]称取胶陀螺10kg，用50L的95%乙醇回流三次，回流时间分别为2.0,1.5,1.5小时，之后将所得到的提取液浓缩至相对密度为1.3的稠膏，减压干燥，即得胶陀螺的乙醇提取物，重量500g。
[0124]称取胶陀螺的乙醇提取物500g，溶于500ml蒸馏水中，以500ml水饱和正丁醇萃取3次，合并有机萃取液，减压浓缩，冷冻干燥，得到正丁醇萃取物(深褐色硬膏状):53.6g。
[0125]实施例2
[0126]称取胶陀螺10kg，用50L的95%乙醇回流三次，回流时间分别为2.0,1.5,1.5小时，之后将所得到的提取液浓缩至相对密度为1.3的稠膏，减压干燥，即得胶陀螺的乙醇提取物，重量500g。
[0127]称取胶陀螺的乙醇提取物500g，以500ml正丁醇热回流提取3次，合并有机液，减压浓缩，冷冻干燥，得到正丁醇提取物(深褐色硬膏状):49.lg。
[0128]实施例3
[0129]称取胶陀螺20kg，用60L的70%乙醇回流三次，回流时间分别为1.5,1.5,1.5小时，之后将所得到的提取液浓缩至相对密度为I的稠膏，减压干燥，即得胶陀螺的乙醇提取物，重量800g。[0130]称取胶陀螺的乙醇提取物500g，溶于500ml蒸馏水中，以1000ml水饱和正丁醇萃取I次，对有机萃取液减压浓缩，冷冻干燥，得到正丁醇萃取物(深褐色硬膏状):47.5g。
[0131]实施例4
[0132]称取胶陀螺20kg，用40L的60%乙醇热浸提取I次，时间为2小时，之后将所得到的提取液浓缩至相对密度为2的稠膏，减压干燥，即得胶陀螺的乙醇提取物，重量700g。
[0133]称取胶陀螺的乙醇提取物500g，溶于500ml蒸馏水中，以600ml水饱和正丁醇萃取2次，合并有机萃取液，常压浓缩，减压干燥，得到正丁醇萃取物(深褐色硬膏状):45.3g。
[0134]实施例5
[0135]称取胶陀螺20kg，用200L的80%乙醇冷浸提取3次，时间分别为1.5、1.5、I小时，之后将所得到的提取液浓缩至相对密度为1.5的稠膏，减压干燥，即得胶陀螺的乙醇提取物，重量1200g。
[0136]称取胶陀螺乙醇提取物500g，溶于500ml蒸馏水中，以500ml水饱和正丁醇萃取3次，合并有机萃取液，减压浓缩并干燥，得到正丁醇萃取物(深褐色硬膏状):56.lg。
[0137]试验例1:胶陀螺不同提取物对银屑病小鼠药效学试验
[0138]以下将对胶陀螺五个不同提取物(正己烷、二氯甲烷、正丁醇、水层、95%乙醇粗提物，分别称为17-A、17-B、17-C、17-D和17-E)抗银屑病药效学作用进行筛选，从而为上述提取物临床治疗银屑病提供更充分的药理学依据。
[0139]1.材料与方法
[0140]1.1实验动物
[0141]取体重18_22g健康昆明种小鼠130只(北京大学医学部实验动物科学部提供)，雌雄兼用，用于鼠尾鳞片模型实验；
[0142]取体重18_22g健康昆明种小鼠140只(北京大学医学部实验动物科学部提供)，雌性，用于阴道上皮模型实验。
[0143]1.2 药物
[0144]己烯雌酚注射液，天津金耀氨基酸有限公司生产，批号0805261。
[0145]阿维A胶囊，重庆华邦制药股份有限公司生产，批号0902030。
[0146]秋水仙碱片，昆明制药集团股份有限公司生产，090818-01。
[0147]胶陀螺的正己烷、二氯甲烷、正丁醇、水层、95%乙醇粗提物由方正医药研究院有限公司提供。提取方法如下:胶陀螺40kg，5倍量95%乙醇回流三次，回流时间分别为2.0、
1.5、1.5小时，回收乙醇，浓缩提取液至相对密度1.3稠膏，减压干燥，即得胶陀螺95%乙醇提取物，重量2000g。
[0148]称取500g胶陀螺95%乙醇提取物，溶于500ml蒸馏水中，以500ml正己烷萃取三次，合并有机萃取液，减压浓缩，冷冻干燥，即得胶陀螺的正己烷提取物，重量59.2g，为柏油状物质；
[0149]称取500g胶陀螺95%乙醇提取物，溶于500ml蒸馏水中，以500ml 二氯甲烷萃取三次，合并有机萃取液，减压浓缩，冷冻干燥，即得胶陀螺的二氯甲烷提取物，重量27.lg，为褐色膏状物质；
[0150]称取500g胶陀螺95%乙醇提取物，溶于500ml蒸馏水中，以500ml水饱和正丁醇
萃取三次，合并有机萃取液浓缩，减压浓缩，冷冻干燥，即得胶陀螺的正丁醇提取物，重量53.6g,为深褐色硬膏状物质；
[0151]将上述经水饱和正丁醇萃取后剩余的水相减压浓缩，冷冻干燥，即得胶陀螺的水层提取物，重量89.4g，为褐色硬膏状物质；
[0152]1.3实验方法
[0153]可参照(例如)以下文献中所公开的试验方法进行:“王学军，陶以成，刘长发.丹槐银屑浓缩丸对小鼠银屑病模型的病理实验研究，中国中医急症，2010，19(1): 104-05”。
[0154]1.3.1胶陀螺不同提取物对小鼠尾部鳞片表皮角化的影响:
[0155]将小鼠随机分成正常对照组、溶剂组、阳性对照药阿维A组和17-A、17-B、17_C、17-D和17-E各大、小剂量组共13组。各组小鼠每天分别灌胃给予生理盐水、阿维A或不同剂量的胶陀螺提取物，给药容积0.2ml/10g体重，每天I次，连续21天。于第22天脱椎处死小鼠，在距尾根2cm处取鼠尾表皮，以10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，HE染色，在光镜下观察每个小鼠的尾部鳞片。凡鳞片表皮有连续成行的颗粒细胞者，称为有颗粒层形成的鳞片，颗粒细胞为表皮中扁平或菱形细胞所组成，胞浆内充满粗大深嗜碱性、HE染色呈深兰色透明的角质颗粒。计数鼠尾表皮100个鳞片中有颗粒层形成数。
[0156]1.3.2胶陀螺不同提取物对雌激素期小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响:
[0157]将小鼠随机分成正常对照组、溶剂对照组、模型组、阳性对照药阿维A组和17-A、17-BU7-CU7-D和17-E各大、小剂量组共14组。除正常对照组及溶剂对照组外，其余各组小鼠腹腔注射己烯雌酚(0.2mg/只)，每天I次，连续3天，使小鼠处于动情期；3天后隔天腹腔注射己烯雌酚(0.2mg/只)，至实验第12天为止。正常对照组小鼠腹腔注射等容量生理盐水，溶剂对照组腹腔注射等容量1%CMC (羧甲基纤维素)。各组小鼠从第4天起开始灌胃分别给予阿维A或不同剂量的胶陀螺提取物，给药容积0.2ml/10g体重，每天I次，连续8天。第12天上午8-9时所有小鼠均ig秋水仙碱4mg/kg,6小时后脱椎处死所有小鼠,取小鼠阴道组织用10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，HE染色，在光镜下观察每100个小鼠阴道基底细胞的有丝分裂数。分组比较，进行统计学处理。
[0158]1.3.3剂量计算及配药方案:(下文中的“生药”指胶陀螺)
[0159](I) 17-A，正己烷(提取物与生药比1:162)[小剂量:15mg/kg，大剂量:75mg/kg]。
[0160]人用剂量:5g生药,一日3次,计每日15g生药。按15g/60kg=0.25g/kg。
[0161]小鼠剂量换算:0.25g/kgX9.1=2.275g/kg。
[0162]按生药剂量换算为提取物量:2.275g/162=0.014g/kg,5X0.014g/kg=0.07g/kg。
[0163]配药:0.2ml/10g, 20ml/kg.0.075 X 5=0.38%。
[0164](2) 17-B，二氯甲烷(提取物与生药比1:354)[小剂量:6.6mg/kg，大剂量:33mg/kg]。
[0165]人用剂量:5g生药,一日3次,计每日15g生药。按15g/60kg=0.25g/kg。[0166]小鼠剂量换算:0.25g/kgX9.1=2.275g/kg。
[0167]按生药剂量换算为提取物量:2.275g/345=6.6mg/kg, 5X6.6mg/kg=33mg/kg。
[0168]配药:0.2ml/10g, 20ml/kg.0.033 X 5=0.17%。
[0169](3) 17-C，正丁醇(提取物与生药比1:179)[小剂量:13mg/kg，大剂量:65mg/kg]。
[0170]人用剂量:5g生药,一日3次,计每日15g生药。按15g/60kg=0.25g/kg。
[0171]小鼠剂量换算:0.25g/kgX9.1=2.275g/kg。[0172]按生药剂量换算为提取物量:2.275g/179=13mg/kg, 5 X 13mg/kg=63mg/kgo
[0173]配药:0.2ml/10g, 20ml/kg.0.065 X 5=0.33%。
[0174](4) 17-D，水层(提取物与生药比1:107)[小剂量:21mg/kg，大剂量:105mg/kg]。
[0175]人用剂量:5g生药,一日3次,计每日15g生药。按15g/60kg=0.25g/kg。
[0176]小鼠剂量换算:0.25g/kgX9.1=2.275g/kg。
[0177]按生药剂量换算为提取物量:2.275g/107=21mg/kg,5X21mg/kg=106mg/kg。
[0178]配药:0.2ml/10g, 20ml/kg.0.105 X 5=0.53%。
[0179](5) 17-E, 95%乙醇粗提物(提取物与生药比1:19.2)[小剂量:0.12g/kg，大剂量:
0.6g/kg] 粒。
[0180]人用剂量:5g生药,一日3次,计每日15g生药。按15g/60kg=0.25g/kg。
[0181]小鼠剂量换算:0.25g/kgX9.1 = 2.275g/kg。
[0182]按生药剂量换算为提取物量'2.275g/19.2=0.12g/kg，5X0.12g/kg=0.6g/kg。
[0183]配药:0.2ml/10g, 20ml/kg.0.6 X 5=3%。
[0184](6)阿维A:人用剂量50mg/天/人，即0.83mg/kg,换算为小鼠剂量,7.7mg/kg,定为 10mg/kg。计算需要量:10mg/kg + 5=2mg/ 只 X 10 只=20mg/ 天 X 30 天=600mg,规格:10mg*30 粒。
[0185]配药:0.2ml/10g, 20ml/kg.0.07 X 5=0.35%。
[0186]2.结果
[0187]2.1胶陀螺不同提取物对小鼠尾部鳞片表皮角化的影响
[0188]2.1.1胶陀螺不同提取物对小鼠尾部鳞片表皮颗粒层细胞增生作用的影响
[0189]检验指标:主要观察鼠尾上皮在应用胶陀螺不同提取物后组织病理学的变化，以药物能促进鼠有连续成行的颗粒层细胞形成作为疗效指标。
[0190]表1胶陀螺不同提取物对小鼠尾部鳞片表皮颗粒层细胞增生作用的影响(Mean土SD)
[0191]
【权利要求】
1.一种胶陀螺提取物，所述的胶陀螺提取物是通过以下方法制备得到的: 1)将胶陀螺用乙醇或乙醇水溶液提取，浓缩提取液并干燥，从而得到乙醇提取物；以及 2)将所述的乙醇提取物进行萃取或回流提取，浓缩所得有机萃取液或提取液并干燥，从而得到所述的胶陀螺提取物； 其中，在步骤2)中，所述的萃取包括:先将所述的乙醇提取物与水混合，再用水饱和正丁醇进行萃取； 其中，在步骤2)中，所述的回流提取包括:将所述的乙醇提取物用正丁醇进行回流提取。
2.根据权利要求1所述的胶陀螺提取物，其中，所述的乙醇水溶液为60-95%(v/v)的乙醇水溶液；优选为95% (v/v)的乙醇水溶液。
3.根据权利要求1所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤I)中，所述的胶陀螺和每次提取所用的乙醇或乙醇水溶液的重量:体积比(单位:g:ml)为1: (2-10);更优选为1:5。
4.根据权利要求1所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤I)中，所述的提取选自回流提取、冷浸提取、热浸提取中的一种；优选为回流提取。
5.根据权利要求1所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤I)中，所述提取为回流提取，所述的回流提取的次数 为1-3次；优选为3次。
6.根据权利要求1所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行萃取时，所述的乙醇提取物、所述的水以及每次萃取所用的水饱和正丁醇的重量:体积:体积的比例(单位:g:ml:ml)为1: (1-3): (1-3);更优选为1:1:1。
7.根据权利要求1所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行萃取时，用所述的水饱和正丁醇进行萃取的次数为1-3次；优选为3次。
8.根据权利要求1所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行回流提取时，所述的乙醇提取物和每次回流提取所用的正丁醇的重量:体积比(单位:g:ml)为 1: (1-3);更优选为 1:1。
9.根据权利要求1所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行回流提取时，所述的回流提取的次数为1-3次，优选为3次。
10.根据权利要求1所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤I)和/或步骤2)中，所述的浓缩为减压浓缩。
11.根据权利要求1所述的胶陀螺提取物，其中，在步骤I)和/或步骤2)中，所述的干燥为冷冻干燥或减压干燥。
12.根据权利要求1所述的胶陀螺提取物，其中，所述的胶陀螺提取物是通过以下方法制备得到的:将胶陀螺用95% (v/v)的乙醇回流提取3次，浓缩提取液，减压干燥，从而得到乙醇提取物；以及将所述的乙醇提取物先与水混合，再用水饱和正丁醇萃取3次，浓缩有机萃取液，冷冻干燥，从而得到所述的胶陀螺提取物。
13.一种胶陀螺的提取方法，其包括: 1)将胶陀螺用乙醇或乙醇水溶液提取，浓缩提取液并干燥，从而得到乙醇提取物；以及 2)将所述的乙醇提取物进行萃取或回流提取，浓缩所得有机萃取液或提取液并干燥，从而得到胶陀螺提取物； 其中，在步骤2)中，所述的萃取包括:先将所述的乙醇提取物与水混合，再用水饱和正丁醇进行萃取； 其中，在步骤2)中，所述的回流提取包括:将所述的乙醇提取物用正丁醇进行回流提取。
14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述的乙醇水溶液为60-95%(v/v)的乙醇水溶液；优选为95% (v/v)的乙醇水溶液。
15.根据权利要求13所述的方法，其中，在步骤I)中，所述的胶陀螺和每次提取所用的乙醇或乙醇水溶液的重量:体积比(单位:g:ml)为1: (2-10);更优选为1:5。
16.根据权利要求13所述的方法，其中，在步骤1)中，所述的提取选自回流提取、冷浸提取、热浸提取中的一种；优选为回流提取。
17.根据权利要求13所述的方法，其中，在步骤1)中，所述提取为回流提取，所述的回流提取的次数为1-3次；优选为3次。
18.根据权利要求13所述的方法，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行萃取时，所述的乙醇提取物、所述的水以及每次萃取所用的水饱和正丁醇的重量:体积:体积的比例(单位:g:ml:ml)为 1: (1-3): (1-3);更优选为 1:1:1。
19.根据权利要求13所述的方法，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行萃取时，用所述的水饱和正丁醇进行萃取的次数为1-3次；优选为3次。
20.根据权利要求13所述的方法，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行回流提取时，所述的乙醇提取物和每次回流提取所用的正丁醇的重量:体积比(单位:g:ml)为I: (1-3);更优选为1:1。
21.根据权利要求13所述的方法，其中，在步骤2)中，当将所述的乙醇提取物进行回流提取时，所述的回流提取的次数为1-3次，优选为3次。
22.根据权利要求13所述的方法，其中，在步骤1)和/或步骤2)中，所述的浓缩为减压浓缩。
23.根据权利要求13所述的方法，其中，在步骤1)和/或步骤2)中，所述的干燥为冷冻干燥或减压干燥。
24.根据权利要求13所述的方法，其中，所述的方法包括:将胶陀螺用95%(v/v)的乙醇回流提取3次，浓缩提取液，减压干燥，从而得到乙醇提取物；以及将所述的乙醇提取物先与水混合，再用水饱和正丁醇萃取3次，浓缩有机萃取液，冷冻干燥，从而得到所述的胶陀螺提取物。
25.根据权利要求1-12中任意一项所述的胶陀螺提取物在制备用于治疗银屑病的药物中的用途。
【文档编号】A61P17/06GK103893217SQ201210581322
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2012年12月27日 优先权日:2012年12月27日
【发明者】易崇勤, 邹明琛, 郭欲晓, 李育巧 申请人:北大方正集团有限公司, 方正医药研究院有限公司, 北大国际医院集团有限公司