驯化培养，获得能很好利用高粱秸杆的側孢芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌优秀变异菌株纯培养；
(3)用接种环取高粱-7号纯培养先在高粱秸杆抽提液无菌琼脂平板中间划一条直线、再用側孢芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌分别与高粱_7号所划出的直线垂直相交，呈“丰”型，各划一条横线。培养结果证明这四种菌混合培养在高粱秸杆抽提液平板上，互相没有杀菌作用，只有一点竞争抑制作用，可以进行混菌培养；
(4)采用高密度培养措施，将高粱-7号、側孢芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌共同混菌培养于6倍高粱秸杆抽提液中，34°C，250转/分钟，34小时，得到特殊有效功能微生物群液体菌种(cfu=l.6X 101Q/ml)；
(5)将高粱秸杆打碎或破碎，并用915MHz功率50W的微波处理58秒钟，起到杀死秸杆细胞，促进秸杆腐熟，防止秸杆腐熟过程中温度过高，造成僵苗缺苗、杀死菌原菌和虫卵，减少下茬作物病虫害的作用。往打碎的高粱秸杆中拌入0.11%的氮肥，以避免分解细菌与作物对氮的竞争，促进秸杆在土中腐熟；
(6)再喷雾接入4.7%特殊有效微生物群液体菌种，使每克高粱秸杆带有一百万个以上功能微生物群细胞，拌匀后结合翻地，将高粱秸杆埋入表土 14厘米下的土层中。其上再播种下茬作物的种子(或移栽秧苗)。
[0012]所述高粱-7号为短小杆菌，不为连杆状排列，不产生芽孢，是高粱秸杆快速腐熟的专属菌种，最适生长温度范围30-37°C。
[0013]实施例2:
(1)用高粱秸杆加水5.8倍的抽提液，对采集于事先掩埋在14厘米深肥沃土壤中5天、尚带绿色的高粱茎杆材料中的细菌进行优化培养13小时，划线接种于高粱秸杆抽提液琼脂平板上，于摄氏35度温度条件下培养27小时，得到数十个单菌落，挑取单个菌落接种于LB斜面培养基上，获得一系列纯培养，经过数轮实验室和田间试验的反复筛选，最后选出对高粱秸杆腐熟活力最强的细菌菌株，命名为高粱_7号菌株；
(2)用8.8倍高粱秸杆抽提液制作无菌琼脂平板，分别接种高粱_7号细菌、側孢芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌，在摄氏32度条件下培养48小时后，挑取4个菌种平板上生长的菌落中直径最大的菌落，接种于LB斜面培养基上，作为下一轮诱导驯化的菌种。如此反复诱导驯化7次，每次都挑取4个菌种平板上生长的菌落中直径最大的菌落作为下一次驯化接种的菌种。经数轮反复诱导驯化培养，获得能很好利用高粱秸杆的側孢芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌优秀变异菌株纯培养；
(3)用接种环取高粱-7号纯培养先在高粱秸杆抽提液无菌琼脂平板中间划一条直线、再用側孢芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌分别与高粱_7号所划出的直线垂直相交，呈“丰”型，各划一条横线。培养结果证明这四种菌混合培养在高粱秸杆抽提液平板上，互相没有杀菌作用，只有一点竞争抑制作用，可以进行混菌培养；
(4)采用高密度培养措施，将高粱-7号、側孢芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌共同混菌培养于7.5倍高粱秸杆抽提液中，36°C，280转/分钟，30小时，得到特殊有效功能微生物群液体菌种(cfu=l.8X 1010/ml)；
(5)将高粱秸杆打碎或破碎，并用915MHz功率45W的微波处理10秒钟，起到杀死秸杆细胞，促进秸杆腐熟，防止秸杆腐熟过程中温度过高，造成僵苗缺苗、杀死菌原菌和虫卵，减少下茬作物病虫害的作用。往打碎的高粱秸杆中拌入0.24%的氮肥，以避免分解细菌与作物对氮的竞争，促进秸杆在土中腐熟；
(6)再喷雾接入4.2%特殊有效微生物群液体菌种，使每克高粱秸杆带有一百万个以上功能微生物群细胞，拌匀后结合翻地，将高粱秸杆埋入表土 11厘米下的土层中。其上再播种下茬作物的种子(或移栽秧苗)。
[0014]所述高粱-7号为短小杆菌，不为连杆状排列，不产生芽孢，是高粱秸杆快速腐熟的专属菌种，最适生长温度范围30-37°C。
【主权项】
1.一种高粱秸杆收获时全量还田的方法，其特征在于包括以下几个步骤: (1)用高粱秸杆加水5-10倍的抽提液，对采集于事先掩埋在10-15厘米肥沃土壤中5天、尚带绿色的高粱茎杆材料中的细菌进行优化培养12-24小时，划线接种于高粱秸杆抽提液琼脂平板上，于摄氏28-37度温度条件下培养24-48小时，得到数十个单菌落，挑取单个菌落接种于LB斜面培养基上，获得一系列纯培养，经过数轮实验室和田间试验的反复筛选，最后选出对高粱秸杆腐熟活力强的细菌菌株，命名为高粱-7号菌株； (2)用5-10倍高粱秸杆抽提液制作无菌琼脂平板，分别接种高粱_7号细菌、側孢芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌，在30-37°C条件下培养48小时后，挑取4个菌种平板上生长的菌落中直径最大的菌落，接种于LB斜面培养基上，作为下一轮诱导驯化的菌种；如此反复诱导驯化5-7次，每次都挑取4个菌种平板上生长的菌落中直径最大的菌落作为下一次驯化接种的菌种，经数轮反复诱导驯化培养，获得能很好利用高粱秸杆的側孢芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌优秀变异菌株纯培养； (3)用接种环取高粱-7号纯培养先在高粱秸杆抽提液无菌琼脂平板中间划一条直线、再用側孢芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌分别与高粱_7号所划出的直线垂直相交，呈“丰”型，各划一条横线； (4)采用高密度培养措施，将高粱-7号、側孢芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌共同混菌培养于5-10倍高粱秸杆抽提液中，摄氏30-37度，每分钟200-300转，培养25-35小时，得到特殊有效功能微生物群液体菌种，cfu在1.5X1010/ml以上； (5)将高粱秸杆粉碎后并用915MHz功率30W-60W的微波处理5_60秒钟，往打碎的高粱秸杆中拌入0.1% — 0.3%的氮肥； (6)喷雾接入1-5%特殊有效微生物群液体菌种，使每克高粱秸杆带有一百万个以上功能微生物群液体细胞，拌匀后结合翻地，将高粱秸杆埋入表土 10厘米-15厘米下的土层中，其上再播种下茬作物的种子或移栽秧苗。2.根据权利要求1所述高粱秸杆收获时全量还田的方法，其特征在于:所述高粱_7号为短小杆菌，不为连杆状排列，不产生芽孢；最适生长温度范围30-37°C。
【专利摘要】本发明公开了一种高粱秸秆收获时全量还田的方法。该方法包括（1）用高粱秸秆抽提液作培养基筛选出对高粱秸秆腐熟活力很强的专属细菌菌株高粱-7号；（2）用高粱秸秆抽提液，将高粱-7？号细菌、側孢芽孢杆菌、巨大芽孢杆和胶冻样芽孢杆菌高密度共同培养得到能在高粱秸秆上迅速旺盛生长的特殊有效微生物群液体菌种；（3）将高粱秸秆打碎，并用微波处理，拌入氮肥，再喷雾接入1-5%特殊有效微生物群液体菌种，拌匀后结合翻地将高粱秸秆埋入10-15厘米土层下面后。本发明的高粱秸秆还田后可立即播种下一茬农作物，下一茬农作物比不还田、不追肥的增产30-40%，具有良好的经济效益和生态效益。
【IPC分类】C12N1/20, C12R1/11, C05G3/00, C05F11/08, C05G3/02, C12R1/07
【公开号】CN105254416
【申请号】CN201510659751
【发明人】田宏现, 彭司英
【申请人】吉首大学
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年10月14日