O# Η 202反应产生·0Η，在体系内加入水杨酸，可 捕捉羟基自由基并产生有色物质，该物质在510nm处有最大吸收，当反应体系中存在·0Η自 由基清除剂时，此氧化过程受到抑制，吸光度值则降低。在？^04与Η 202反应体系中，分别 加入浓度为30mg/ml的Α组、Β组和对比例分别培养的灵芝粗提取物，测定清除率。
[0034] (5)模拟胃液pH条件下的NO2清除反应作用：清除亚硝酸盐是有效防止N-亚硝 基化合物致癌的途径之一。在模拟体系中加入分别加入浓度为14mg/ml的A组、B组和对 比例分别培养的灵芝粗提取物，测定清除率。
[0035] (6) DPPH法测定灵芝抗氧化活性：DPPH ·在有机溶剂中是一种稳定的自由基，广泛 用于抗氧化评价体系中。在体系中，分别加入浓度为30mg/ml的A组、B组和对比例分别培 养的灵芝粗提取物，测定清除率。
[0036] 3、试验结果：
[0037] 表1不同培养基培养的灵芝粗提取物的还原能力
[0039] 表1结果表明，A组、B组和对比例培养的灵芝粗提取物具有抗氧化性，A组和B组 抗氧化性优于对比例。
[0040] 表2不同培养基培养的灵芝粗提取物清除超氧阴离子的能力
[0042] 表2表明，A组、B组和对比例培养的灵芝粗提取物都具有清除超氧阴离子的能力， A组和B组清除能力优于对比例。
[0043] 表3不同培养基培养的灵芝粗提取物清除羟基自由基的能力
[0045] 表3表明，A组、B组和对比例培养的灵芝粗提取物都具有清除羟基自由基的能力， A组和B组清除能力优于对比例。
[0046] 表4不同培养基培养的灵芝粗提取物对NO2清除作用
[0047]
[0048] 表4表明，A组、B组和对比例培养的灵芝粗提取物对NO2都有清除作用，A组和B 组清除能力优于对比例。
[0049] 表5不同培养基培养的灵芝粗提取物对DPPH清除效果
[0051 ] 表5表明，A组、B组和对比例培养的灵芝粗提取物对DPPH都有清除效果，A组和 B组清除效果优于对比例。
[0052] 综合上述氧化反应体系试验结果，可知A组、B组和对比例培养的灵芝具有抗氧化 性，而A组和B组优于对比例，说明添加本发明添加剂的灵芝培养基能够增强灵芝的抗氧化 功效。
[0053] 试验例2 :本发明培养的灵芝抗癌作用
[0054] 1、实验动物：健康昆明种小鼠，体重（22±3)g，雌雄各半，由广西医科大学实验动 物中心提供。
[0055] 2、肿瘤细胞株：小鼠肉瘤Sls。腹水型瘤株，由广西肿瘤防治研究所提供。
[0056] 3、灵芝药剂制备：
[0057] 分别取A组（向常规灵芝培养基添加本发明实施例2,加入量为培养基总量的 5% )、对比例（常规培养基）培养出的灵芝10g，置于1000mL的玻璃烧杯中，加水500mL，浸 泡lh后，置于火上煎熬，先武火煮沸后改为文火，再煎熬60min后熄火，将药液3500r/min 离心5min，取出上清药液。然后再向沉渣中加入300mL水，用同样方法再煎熬两次。将3次 上清药液混合后置于文火上，浓缩定容成200mL，制成含生药5 %的原药液，将该药液密封， 置于冰箱冷藏保存备用。
[0058] 3、实验方法：
[0059] 取（22±3)g小鼠60只，前肢皮下分别接种经昆明系小鼠传代第7天的小鼠肉瘤 Sls。瘤株细胞（经台盼兰染色活细胞数大于95% )的腹腔稀释液0. 2mL，其浓度5X105/mL。 将注射瘤细胞后的小鼠随机分为3组，每组10只，雌雄各半：A组，同侧同位注射灵芝汤剂 稀释液0. 25mL，终剂量为每只小鼠注射灵芝成分0. 5mg，连续注10次；对比例组，同侧同位 注射灵芝汤剂稀释液0. 25mL，终剂量为每只小鼠注射灵芝成分0. 5mg，连续注10次；对照 组，同侧同位注射生理盐水0. 5mL。观察小鼠的生活状态、肿瘤生长状况及小鼠的生存情况。
[0060] 4、试验结果：
[0061] 自实验之日起，随时观察每只小鼠的生活状况。对照组小鼠 1周开始出现肉眼可 见肿块（约〇. 05cmX0. 05cm)，而A组、对比例组则未见肉眼可见的肿块。A组、对比例组小 鼠全部存活。继续观察至实验第16天起，对照组小鼠开始逐渐死亡，至36天对照组全部死 亡。而A组、对比例组小鼠则全部存活，且均未出现肉眼可见肿块。继续观察至第96天，对 比例组小鼠出现肉眼可见肿块，继续观察至实验第106天起，对比例组小鼠开始逐渐死亡， 至126天对比例组小鼠全部死亡，A组小鼠全部存活，未出现肉眼可见肿块，继续观察至160 天仍全部存活。本实验共重复4次，结果基本相同。小鼠的生存情况见表6。
[0062] 表6不同培养基培养的灵芝抗小鼠 Sls。腹水型肉瘤的实验观察结果
[0064] 灵芝抗癌试验结果表明，A组、对比例培养的灵芝对Sls。腹水型肉瘤细胞有抑制作 用，而A组优于对比例，说明添加本发明添加剂的灵芝培养基能够增强灵芝的抗癌作用。
【主权项】
1. 一种灵芝培养基的添加剂，其特征在于，由以下重量份的原料制成：松节20~40 份，丁公藤10~20份，佩兰5~10份，冬瓜皮10~20份，降香5~10份，血余炭5~10 份，泽兰30~50份，凤仙花10~20份，儿茶5~11份，皂荚10~30份，首乌藤6~16 份。2. 根据权利要求1所述的灵芝培养基的添加剂，其特征在于，由以下重量份的原料制 成：松节30份，丁公藤15份，佩兰8份，冬瓜皮15份，降香7份，血余炭8份，泽兰40份，凤 仙花15份，儿茶8份，皂荚20份，首乌藤11份。
【专利摘要】本发明涉及食用菌培养基添加技术领域，特别涉及一种灵芝培养基的添加剂,由以下重量份的原料制成：松节20～40份，丁公藤10～20份，佩兰5～10份，冬瓜皮10～20份，降香5～10份，血余炭5～10份，泽兰30～50份，凤仙花10～20份，儿茶5～11份，皂荚10～30份，首乌藤6～16份。本发明的灵芝培养基的添加剂应用在灵芝培养基中时，促进灵芝生长，提高产量，同时能够提高灵芝的抗氧化和抗癌功效。
【IPC分类】C05G3/00
【公开号】CN105399557
【申请号】CN201511023756
【发明人】李荣轩
【申请人】广西扬桂生物科技有限公司
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年12月31日