专利名称：一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子(igf－1)的方法
技术领域：
本发明属于一种从鹿茸中提取活性物质的方法，特别是涉及一种鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子即IGF-1的方法。
背景技术：
鹿茸为梅花鹿或马鹿的尚未骨化的幼角，几千年来，鹿茸都被认为是一种名贵的滋补品。现代药物化学分析表明，鹿茸中含有多种生理活性成份，主要有磷脂、多肽、生物胺类化合物、前列腺素、维生素、氨基酸、无机元素、高不饱和脂肪酸、脂类和甾体类成份以及皮质醇等。随着生物技术的快速发展，人们发现鹿茸中除了含有以上各种生理活性成份以外，还含有胰岛素样生长因子(IGF-1)、人生长激素(HGH)、促生长释放因子(GHRF-6)、神经生长因子(NGF)、表皮生长因子(EGF)、成纤维生长因子(FGF)等活性蛋白；这些物质都有着各自的功效，但又相互关联；而IGF-1则有着突出的作用。
在传统的鹿茸加工过程中，鹿茸要经过煮炸、烘干等步骤，高温会使其中的IGF-1等活性蛋白变性而失去生理功能；通常人们对鹿茸的利用往往是将其泡在高酒精含量的酒中，而酒精作为一种有机溶剂也会使蛋白变性。因此在鹿茸的传统加工过程中及一般利用时，IGF-1等活性蛋白都会被破坏，从而大大降低了鹿茸的应用价值，造成很大的资源浪费。目前还没有一种较好的办法将IGF-1从鹿茸中提取出来以供人们有效利用。
发明内容
本发明针对上述现有技术存在的不足，提出了一种从鹿茸中提取IGF-1的方法，该方法工艺合理、可行，并能保持IGF-1的活性。
本发明的技术方案是一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法，包括切片、低温匀浆、超声波处理、高速离心分离、超滤、冷冻干燥步骤(1)切片用切片机将鲜鹿茸切成薄片；(2)低温匀浆将鲜鹿茸薄片放入匀浆机中匀浆，匀浆过程可加入适量的预冷的去离子水，使整个匀浆过程保持低温，匀浆操作应进行至匀浆中没有大的组织块才结束；
(3)超声波处理将匀浆物用超声波破碎，使细胞破裂，超声波处理过程中，匀浆物应置于冰浴中；(4)高速离心分离匀浆物经超声波处理后进行高速离心分离，取上清液；在沉淀中加入一定量的去离子水，重悬后再次进行高速离心分离，取上清液；然后可再重复一次；(5)超滤混合各次离心分离所得上清液，用膜进行超滤，去除小分子物质和大分子物质，并对上清液进行浓缩，得浓缩液；(6)冷冻干燥先将超滤所得浓缩液冷冻，然后在超低温下用冷冻干燥机进行冷冻干燥。
所述鲜鹿茸应当在新鲜割下后尽快存放于-20℃冷藏。
所述切片步骤(1)应当在从冷藏处取出后立即进行，操作的温度应当在0℃～30℃内；鲜鹿茸切片的厚度为1mm～5mm。
所述低温匀浆步骤(2)可以将匀浆机置于冷库或冷柜中进行。
在所述高速离心分离步骤(4)中离心的速度为5000rpm～20000rpm，离心的时间10min～30min；在沉淀中加入的去离子水的量为其体积的2～5倍。
所述超滤步骤(5)所采用的膜是1000Da～100000Da的膜。
在所述冷冻干燥步骤(6)中将浓缩液冷冻的温度为-20℃，冷冻干燥机的工作温度为-30℃～-50℃，干燥后产品的含水量为3％～10％。
为提高IGF-1收率和含量，在上述方法的超声波处理步骤(3)与高速离心分离步骤(4)之间可增加低温浸提步骤；所述低温浸提步骤是将经超声波处理后的匀浆物静置于0℃～4℃的低温下0～24hr。
应用本发明技术从鹿茸中提取IGF-1，活性保持良好，具有很高的营养价值，可用作抗衰老保健品的原料。
具体实施例方式
实施例1称取1kg鹿茸，切片后用匀浆机在4℃进行匀浆，然后在冰浴条件下，加入2L预冷的去离子水，混匀后进行超声波破碎。接着将此产物以5000rpm离心20min；沉淀物中再加入2L去离子水，离心；再重复上述步骤一次。混合3次离心上清，用截留分子量为100000Da的超滤膜进行超滤，滤出液再用1000Da的超滤膜超滤，浓缩到1L的体积。将浓缩液进行冷冻干燥，得到IGF-1成品40克。这种方法得到的产品中，除具有较高含量的IGF-1外，还有EGF、FGF等各种活性蛋白。
实施例2称取1kg鹿茸，切片后用匀浆机在4℃进行匀浆，然后在冰浴条件下，加入2L预冷的去离子水，混匀后进行超声波破碎。然后放置在4℃浸提24小时。接着将此产物以5000rpm离心20min；沉淀物中再加入2L去离子水，离心；再重复上述步骤一次。混合3次离心上清，用截留分子量为100000Da的超滤膜进行超滤，滤出液再用1000Da的超滤膜超滤，浓缩到1L的体积。将浓缩液进行冷冻干燥，得到IGF-1成品45克。这种方法得到的产品中，IGF-1的含量较高。
实施例3称取1kg鹿茸，切片后用匀浆机在4℃进行匀浆，然后在冰浴条件下，加入2L预冷的去离子水，混匀后进行超声波破碎。接着将此产物5000rpm离心20min；沉淀物中再加入2L去离子水，离心；再重复上述步骤一次。混合3次离心上清，用截留分子量为10000Da的超滤膜进行超滤，滤出液再用1000Da的超滤膜超滤，浓缩到1L的体积。将浓缩液进行冷冻干燥，得到IGF-1成品20克。这种方法由于使用截留分子量为10000Da的超滤膜进行超滤，去除了更多的大分子物质，得到的产品中IGF-1的含量更高。
权利要求
1.一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法，其特征在于包括切片、低温匀浆、超声波处理、高速离心分离、超滤、冷冻干燥步骤(1)切片用切片机将鲜鹿茸切成薄片；(2)低温匀浆将鲜鹿茸薄片放入匀浆机中匀浆，匀浆过程可加入适量的预冷的去离子水，使整个匀浆过程保持低温，匀浆操作应进行至匀浆中没有大的组织块才结束；(3)超声波处理将匀浆物用超声波破碎，使细胞破裂，超声波处理过程中，匀浆物应置于冰浴中；(4)高速离心分离匀浆物经超声波处理后进行高速离心分离，取上清液；在沉淀中加入一定量的去离子水，重悬后再次进行高速离心分离，取上清液；然后可再重复一次；(5)超滤混合各次离心分离所得上清液，用膜进行超滤，去除小分子物质和大分子物质，并对上清液进行浓缩，得浓缩液；(6)冷冻干燥先将超滤所得浓缩液冷冻，然后在超低温下用冷冻干燥机进行冷冻干燥。
2.如权利要求1所述的一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法，其特征在于所述鲜鹿茸应当在新鲜割下后尽快存放于-20℃冷藏。
3.如权利要求1所述的一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法，其特征在于所述切片步骤(1)应当在从冷藏处取出后立即进行，操作的温度应当在0℃～30℃内；鲜鹿茸切片的厚度为1mm～5mm。
4.如权利要求1所述的一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法，其特征在于所述低温匀浆步骤(2)可以将匀浆机置于冷库或冷柜中进行。
5.如权利要求1所述的一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法，其特征在于在所述高速离心分离步骤(4)中离心的速度为5000rpm～20000rpm，离心的时间10min～30min；在沉淀中加入的去离子水的量为其体积的2～5倍。
6.如权利要求1所述的一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法，其特征在于所述超滤步骤(5)所采用的膜是1000Da～100000Da的膜。
7.如权利要求1所述的一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法，其特征在于在所述冷冻干燥步骤(6)中将浓缩液冷冻的温度为-20℃，冷冻干燥机的工作温度为-30℃～-50℃，干燥后产品的含水量为3％～10％。
8.如权利要求1所述的一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法，其特征在于在所述超声波处理步骤(3)与所述高速离心分离步骤(4)之间可增加低温浸提步骤。
9.如权利要求8所述的一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法，其特征在于所述低温浸提步骤是将经超声波处理后的匀浆物静置于0℃～4℃的低温下0～24hr。
全文摘要
本发明涉及一种鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子即IGF－1的方法。鹿茸中含有多种生理活性成分以及胰岛素样生长因子(IGF－1)和表皮生长因子(EGF)、成纤维生长因子(FGF)等活性蛋白。在鹿茸的传统加工过程中及一般利用时，IGF－1等活性蛋白都会被破坏，从而大大降低了鹿茸的应用价值，造成很大的资源浪费。本发明提出了一种从鹿茸中提取IGF－1的方法，包括切片、低温匀浆、超声波处理、高速离心分离、超滤、冷冻干燥等步骤。应用本发明技术从鹿茸中提取IGF－1，活性保持良好，具有很高的营养价值，可用作抗衰老保健品的原料。
文档编号C07K1/00GK1603344SQ200410053399
公开日2005年4月6日 申请日期2004年8月4日 优先权日2004年8月4日
发明者朱成钢, 王利忠 申请人:王利忠