一种同时快速测定胰岛素样生长因子-1和胎儿纤维连接蛋白的检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种同时快速测定阴道分泌物胰岛素样生长因子-1和胎儿纤维连接蛋白的检测试剂盒及其制备方法和用途。本发明提供一种同时快速测定胰岛素样生长因子-1和胎儿纤维连接蛋白的检测试剂盒，包括互相独立的胰岛素样生长因子-1检测试纸卡和胎儿纤维连接蛋白检测试纸卡，所述胰岛素样生长因子-1和胎儿纤维连接蛋白检测试纸卡均各自包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。本发明所提供的检测试剂盒首次将胰岛素样生长因子-1和胎儿纤维连接蛋白通过荧光微球免疫层析技术同时进行检测，不受血清、尿液、精液干扰，准确度偏差＜10%。
【专利说明】一种同时快速测定胰岛素样生长因子-1和胎儿纤维连接 蛋白的检测试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种同时快速测定阴道分泌物胰岛素样生 长因子-1和胎儿纤维连接蛋白的检测试剂盒及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 胰岛素样生长因子（insulin-likegrowthfactors，简称IGFs)是一类多功能细 胞增殖调控因子。在细胞的分化、增殖、个体的生长发育中具有重要的促进作用。
[0003] 1957年Salmon和Daughaday在研宄生长激素的过程中，首先发现给予切除垂体 的大鼠GH后其血清能刺激S渗入体外培养的软骨中，但培养液中直接加入GH却没有作 用，故认为GH本身不能直接刺激软骨生长，而是通过一种"硫酸化因子"起作用的，这种 因子后来被称为生长调节素。1963年Froesh等发现血清中对肌肉和脂肪细胞的胰岛素 样作用只有小部分被胰岛素的抗血清抑制，剩下不被抑制的胰岛素样活性可溶于酸化的 乙醇中，并命名为NSILAS即不被抑制的胰岛素样活性（nonsuppressibleinsulin-like activity)。1972年Pieron和Temin从牛血清中纯化出一种能刺激细胞分裂的因子，命 名为"增殖刺激活性"。在上述三个实验完成后，人们发现了上面三种物质所具有的不可抑 制的胰岛素样活性及生长刺激作用。随着分子生物技术的发展，1978年人们纯化了两种 形式的NSILA(I、11 )并发现其结构与胰岛素原相似，分别命名为胰岛素样生长因子I、 II(IGFBP-l、IGFBP-2)以强调它们与胰岛素结构的同源性。同时证实了"硫酸化因子"和 "增殖刺激活性"与IGF为同一蛋白多肽家族的成员。
[0004] 胎儿纤维连接蛋白（fetalFibronectin，fFN)，是子宫绒毛膜细胞外的基质成分， 存在于绒毛膜与蜕膜之间，主要由滋养层细胞产生。由于孕21周以后，绒毛膜与蜕膜的融 合阻止了fFN的释放，而使正常的孕妇在22-35孕周时，fFN的含量极低，只有在绒毛膜与 蜕膜分离、绒毛膜与蜕膜界面的细胞外基质遭到机械损伤或蛋白水解酶的降解时，fFN才可 见于宫颈阴道分泌物中。因此，在孕22-35周之间，宫颈阴道分泌物中fFN的水平与是否发 生早产有很大的相关性。
【发明内容】
[0005] 鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种同时快速测定阴道分 泌物胰岛素样生长因子-1和胎儿纤维连接蛋白的检测试剂盒及其制备方法和用途，用于 解决现有技术中的问题。
[0006] 为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种同时快速测定胰岛素样生长因 子-1和胎儿纤维连接蛋白的检测试剂盒，包括互相独立的胰岛素样生长因子-1检测试纸 卡和胎儿纤维连接蛋白检测试纸卡，所述胰岛素样生长因子-1和胎儿纤维连接蛋白检测 试纸卡均各自包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、荧光标记物 结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述胰岛素样生长因子-1检测试纸卡的荧光标记物结 合垫上包含IGFBP-1抗体，所述胎儿纤维连接蛋白检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包 含fFN抗体，所述各硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述荧光标记物结合垫上的 IGFBP-1抗体和fFN抗体采用荧光微球标记。
[0007] 优选的，所述所述荧光标记物结合垫上的IGFBP-1抗体和fFN抗体采用180nm荧 光微球标记，Ex(nm)=650/Em(nm) = 670,具有信号受背景干扰小，检测灵敏度高，结果重 复性好的优点。
[0008] 优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明中所述的荧光标 记物结合垫还经过预处理，预处理中所使用的预处理缓冲液包括下列组分：水苏糖、明矾、 果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸 的总浓度为3. 5 - 7. 5g/L，缓冲液的pH值为7. 2 - 7. 6。
[0009] 优选的，各组分在缓冲液中的浓度为：
[0010]
【权利要求】
1. 一种同时快速测定胰岛素样生长因子-1和胎儿纤维连接蛋白的检测试剂盒，包括 互相独立的胰岛素样生长因子-1检测试纸卡和胎儿纤维连接蛋白检测试纸卡，所述胰岛 素样生长因子-1和胎儿纤维连接蛋白检测试纸卡均各自包括底板、及位于底板表面的从 加样端开始依次排列的样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述胰岛素样 生长因子-1检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包含IGFBP-1抗体，所述胎儿纤维连接蛋白 检测试纸卡的荧光标记物结合垫上包含fFN抗体，所述各硝酸纤维素膜上包被有检测线和 质控线，所述荧光标记物结合垫上的IGFBP-1抗体和fFN抗体采用荧光微球标记。
2. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述各硝酸纤维素膜上，检测线位于 离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。
3. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述胰岛素样生长因子-1检测试纸 卡的检测线上包被有IGFBP-1抗体。
4. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述胎儿纤维连接蛋白检测试纸卡 的检测线上包被有fFN抗体。
5. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述各质控线上包被羊抗鼠抗体。
6. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括卡壳，所述卡壳包括背卡和上 盖，所述背卡设有两个平行的试纸卡卡槽，所述试纸卡分别嵌于所述试纸卡卡槽内，所述上 盖设有两个测试窗和两个加样孔，所述两个测试窗的位置分别与两个试纸卡的检测线和质 控线的位置相配合，所述两个加样孔的位置与两个试纸卡的样品垫的位置相配合。
7. 如权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述两个加样孔之间还设有连接两 个加样孔的横槽。
8. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒用于同时定量检测 胰岛素样生长因子-1和胎儿纤维连接蛋白的含量。
9. 如权利要求1-8任一权利要求所述的定量检测胰岛素样生长因子-1和胎儿纤维连 接蛋白的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤： 1) 用荧光微球标记的IGFBP-1抗体和fFN抗体溶液分别喷涂IGFBP-1、fFN荧光标记 物结合垫； 2) 在IGFBP-1硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂IGFBP-1抗体及羊抗鼠抗 体，在fFN硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂fFN抗体及羊抗鼠抗体； 3) 将两套样品垫、步骤1制备的荧光标记物结合垫、步骤2制备的硝酸纤维素膜、吸水 垫依次粘贴在各自的底板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测 试剂盒。
【文档编号】G01N33/68GK104459116SQ201410738084
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月5日 优先权日:2014年12月5日
【发明者】吴瑜佳 申请人:重庆乾德生物技术有限公司