专利名称：从组分沉淀123中回收白蛋白的方法
技术领域：
本发明涉及一种从制备人血浆蛋白的废弃组分沉淀123中回收残留白蛋白的方法。
背景技术：
白蛋白是人血浆中含量最高的蛋白质，而白蛋白作为治疗和营养补充剂已在国内外大量应用。目前，从人血浆中分离纯化白蛋白的传统方法是E.J.Cohn教授创立的低温乙醇分级沉淀技术。该技术通过有效控制蛋白质沉淀的五个因素PH值、温度、蛋白浓度、离子强度和乙醇浓度来逐级沉淀血浆中的不同蛋白质，其一般步骤是首先沉淀出沉淀组分123，然后再沉淀出沉淀组分4，最后沉淀出沉淀组分5即白蛋白粗制品；也可以一步反应沉淀出沉淀组分1234，然后沉淀出沉淀组分5得到白蛋白粗制品。
然而，由于影响白蛋白分离沉淀的因素很多，血浆中的白蛋白在分级沉淀中往往有大量的损失，其损失率一般为40％，部分白蛋白夹带在组分沉淀123中，还有部分白蛋白夹带在组分沉淀4中；而采用一步反应沉淀组分1234的白蛋白损失就更多了。因此，从组分沉淀中回收白蛋白是一项具有实际意义的工作。而传统的从组分沉淀中回收白蛋白的方法一般是采用改变沉淀条件并结合柱层析的方法，从组分沉淀中选择性地吸附白蛋白，从而达到回收的目的。但是，该传统回收方法存在层析柱的处理量较小、离心分离固液设备投资较大和能耗较高的缺点。
发明内容
本发明的目的在于针对上述问题，提供一种从组分沉淀123中回收白蛋白的方法，可解决现有技术的不足之处。
本发明系利用一定配比的淋洗液充分淋洗组分沉淀123，使其夹带的白蛋白进入溶液中，然后通过超滤浓缩得到体积减少的蛋白液，调整蛋白液中乙醇浓度及添加保护剂，加热处理使杂蛋白变性，最后通过加压过滤得到白蛋白的粗制品。
本发明的技术方案如下从组分沉淀123中回收白蛋白的方法，依次包括如下步骤A、用淋洗液反复淋洗组分沉淀123，其中，淋洗液由蒸馏水、酒精和十二水磷酸氢二钠按重量份为890～1088∶185～227∶1配制而成，PH为7.4～7.5，温度为-5.5～-4.5℃，淋洗液用量为8升/千克组分沉淀123；酒精密度为800克/升。
B、将收集到的洗出液超滤浓缩到蛋白含量在3％以上；C、于浓缩液中加入冷乙醇至乙醇浓度8.0±0.5％(V/V)，并加入辛酸钠保护剂，辛酸钠的用量为0.10～0.16克/升人血浆；D、调整PH6.45～6.55，并将蛋白液恒温热处理40～90分钟，恒温温度为68.0±0.5℃；E、热处理结束后尽快冷却，冷却到30℃以下时调整PH4.2～4.3，并最终冷却到-1.0～1.0℃；F、搅拌一小时以上，并按每升人血浆量加入15～30克硅藻土的比例加入硅藻土混匀；
G、用含硅藻土的洗液预处理压滤机后将蛋白液泵入压滤机中过滤，收集滤出液并澄清过滤，其中洗液由蒸馏水、酒精和氯化钠按重量份为90～110∶6.5～8.5∶1配制而成，温度为-1.0～1.0℃，硅藻土于洗液中的含量为3～8％(W/V)；H、滤液调节PH6.5～7.0并超滤浓缩到蛋白含量3～4％，即回收得到白蛋白的粗制品。
本发明通过改变PH值、温度、蛋白浓度、离子强度和乙醇浓度，采用热处理结合加压过滤技术有效回收组分沉淀中夹带的白蛋白，克服了传统回收方法中层析柱处理量小、离心分离固液设备投资大和能耗高的缺点，有效提高白蛋白的总回收率达到85％以上，而且降低了生产成本，提高了生产利润。
具体实施例方式
现以回收1500升血浆制备的组分沉淀123为例阐述本发明所述的回收方法。
经1500升血浆经制备得到的沉淀组分123，称重为210千克。用配制的淋洗液淋洗沉淀，淋洗液用量为每千克沉淀约用8升，淋洗液的配比蒸馏水713升、酒精186升，十二水磷酸氢二钠721克，PH7.4～7.5，温度-5.5～-4.5℃。
收集到的洗出液1630升，用NMWL10000规格的超滤机浓缩得到蛋白液约200升。浓缩液中加冷乙醇达到乙醇浓度8.0±0.5％，并加入180克辛酸钠保护剂。加入醋酸钠-醋酸缓冲液调整PH6.45～6.55，并将蛋白液放入恒温温度为68.0±0.5℃的恒温水箱中热处理40分钟。热处理结束后尽快冷却，冷却到30℃以下时加稀盐酸调整PH4.2～4.3，最终冷却到-1.0～1.0℃。
将上述蛋白液搅拌两小时，加入25千克硅藻土混匀，并用含硅藻土3％(W/V)的洗液预处理压滤机，洗液由蒸馏水320升、酒精30升和氯化钠3150克配制而成，温度为-1.0～1.0℃。压滤机预处理后将蛋白液泵入其中过滤，收集到的滤出液用A80型澄清滤器澄清过滤。滤液加0.2mol/L的碳酸氢钠溶液调节PH6.5～7.0，用规格为NMWL10000的超滤机浓缩，得到蛋白含量3.2％的浓缩液。
本实施例白蛋白的回收量约为300克。
权利要求
1.从组分沉淀123中回收白蛋白的方法，其特征是用由蒸馏水、酒精和十二水磷酸氢二钠配制而成的淋洗液充分淋洗组分沉淀123，使其夹带的白蛋白进入溶液中，然后通过超滤浓缩得到体积减少的蛋白液，调整蛋白液中乙醇浓度及添加保护剂，加热处理使杂蛋白变性，最后通过加压过滤得到白蛋白的粗制品。
2.根据权利要求1所述的方法，其依次包括如下步骤A、用淋洗液反复淋洗组分沉淀123，其中，淋洗液由蒸馏水、酒精和十二水磷酸氢二钠按重量份为890～1088∶185～227∶1配制而成，PH为7.4～7.5，温度为-5.5～-4.5℃，淋洗液用量为8升/千克组分沉淀123；B、将收集到的洗出液超滤浓缩到蛋白含量在3％以上；C、于浓缩液中加入冷乙醇至乙醇浓度8.0±0.5％(V/V)，并加入辛酸钠保护剂，辛酸钠的用量为0.10～0.16克/升人血浆；D、调整PH6.45～6.55，并将蛋白液恒温热处理40～90分钟，恒温温度为68.0±0.5℃；E、热处理结束后尽快冷却，冷却到30℃以下时调整PH4.2～4.3，并最终冷却到-1.0～1.0℃；F、搅拌一小时以上，并按每升人血浆量加入15～30克硅藻土的比例加入硅藻土混匀；G、用含硅藻土的洗液预处理压滤机后将蛋白液泵入压滤机中过滤，收集滤出液并澄清过滤，其中洗液由蒸馏水、酒精和氯化钠按重量份为90～110∶6.5～8.5∶1配制而成，温度为-1.0～1.0℃，硅藻土于洗液中的含量为3～8％(W/V)；H、滤液调节PH6.5～7.0并超滤浓缩到蛋白含量3～4％，即回收得到白蛋白的粗制品。
3.根据权利要求2所述的方法，A步所述淋洗液由蒸馏水、酒精和十二水磷酸氢二钠按重量份为989∶206∶1配制而成。
4.根据权利要求2所述的方法，C步所述辛酸钠的用量为0.12克。
5.根据权利要求2所述的方法，G步所述洗液由蒸馏水、酒精和氯化钠按重量份为102∶7.6∶1配制而成。
6.根据权利要求2所述的方法，D步用醋酸钠-醋酸缓冲液调整PH值。
7.根据权利要求2所述的方法，E步用稀盐酸调整PH值。
8.根据权利要求2所述的方法，H步用0.2mol/L的碳酸氢钠溶液调整PH值。
全文摘要
本发明涉及一种从制备人血浆蛋白的废弃组分沉淀123中回收残留白蛋白的方法。本发明所述的方法，用由蒸馏水、酒精和十二水磷酸氢二钠配制而成的淋洗液充分淋洗组分沉淀123，使其夹带的白蛋白进入溶液中，然后通过超滤浓缩得到体积减少的蛋白液，调整蛋自液中乙醇浓度及添加保护剂，加热处理使杂蛋白变性，最后通过加压过滤得到白蛋白的粗制品。本发明通过改变pH值、温度、蛋白浓度、离子强度和乙醇浓度，采用热处理结合加压过滤技术有效回收组分沉淀中夹带的白蛋白，克服了传统回收方法中层析柱处理量小、离心分离固液设备投资大和能耗高的缺点，有效提高白蛋白的总回收率达到85％以上，而且降低了生产成本，提高了生产利润。
文档编号C07K14/47GK1660898SQ20041007766
公开日2005年8月31日 申请日期2004年12月29日 优先权日2004年12月29日
发明者朱光祖, 梅伟伶 申请人:三九集团湛江开发区双林药业有限公司