专利名称：：糖皮质激素受体表达的调节的制作方法
技术领域：
：本文公开了用于调节糖皮质激素受体在细胞、组织或动物中的表达的化合物、组合物和方法。
背景技术：
：因为增加的糖异生被视为糖尿病中增加的葡萄糖生产的主要来源，所以用于抑制肝葡萄糖生成的许多治疗靶已得到研究。由于糖皮质激素受体(也称为细胞核受体亚家族3，组C,成员1;NR3C1;GCCR;GCR;GRL;糖皮质激素受体，淋巴细胞)拮抗剂在动物冲莫型中改善糖尿病的能力，此类化合物属于正在探究的潜在疗法。然而，存在糖皮质激素受体拮抗剂的有害全身效应，包括HPA轴的活化(Link,CurrOpinInvestigDrugs,2003，4，421-429)。增加的HPA轴活性与免疫相关的炎性作用抑制相关，这可以增加对于传染剂和赘生物的敏感性。通过HPA轴或其耙组织中的缺陷与免疫介导的炎症抑制相关的状况包括库欣氏综合征、慢性应激、慢性酒精中毒和忧郁型抑郁症(Chrousos,NEnglJMed,1995,332，1351-1362)。因此，开发肝和脂肪特异性糖皮质激素受体拮抗剂是很有价值的。发明概述本发明涉及靶向编码GCCR的核酸分子且可与编码GCCR的核酸分子杂交的寡聚化合物，所述寡聚化合物调节GCCR的表达。本文提供了被称为"缺口聚体(gapmers)"的嵌合寡核苷酸，所述嵌合寡核苷酸包含在5，和3'末端中的每一个上与"翼"侧接的脱氧核苷酸区域或"缺口"，所述"翼"包含1-4个2，-0-甲氧乙基核苷酸。本发明的寡核苷酸的脱氧核苷酸区域包含超过IO个脱氧核苷酸，因此与包含IO个脱氧核苷酸的缺口区域的嵌合化合物，例如美国公开US2005-0164271(所述专利整体引入本文作为参考)中例示的化合物比较，本发明的缺口聚体是"缺口加宽的，，。在某些实施方案中，与具有相同序列但包含在5，和3，末端上都与5个2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸侧接的IO个脱氧核苷酸区域的寡核苷酸比较，缺口加宽的寡核苷酸具有相似或改善的效力，而没有寡核苷酸在肝中的积聚增加。因此，本发明的实施方案包括靶向GCCR的缺口加宽的寡核苷酸，其中效力与具有相同序列但包含在5，和3，末端上都与5个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的10个脱氧核苷酸的区域的寡核苷酸相似或更佳，而没有寡核苷酸在靶组织中的积聚增加。本发明的另一个实施方案包括靶向GCCR的缺口加宽的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸的肾浓度相对于具有相同序列但包含在5'和3'末端上都与5个2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸侧接的IO个脱氧核苷酸的区域的寡核苷酸相似或降低，同时维持或改善在靶组织例如肝中的效力。进一步提供了调节细胞、组织或动物中的GCCR表达的方法，所述方法包括使所述细胞、组织或动物与本发明的一种或多种化合物或组合物接触。例如，在一个实施方案中，本发明的化合物或组合物可以用于减少细胞、组织或动物中的GCCR表达。在一个实施方案中，本发明提供了治疗动物中由糖皮质激素表达介导的疾病或状况的方法，所述方法包括使动物与有效量的本发明的化合物接触。所述疾病或状况包括糖尿病、2型糖尿病、肥胖、代谢综合征X、高血糖症、高脂血症或肝脂肪变性。在某些实施方案中，高脂血症与升高的脂质例如血胆固醇或升高的血甘油三酯相关。血脂包括血浆脂质和血清脂质。进一步提供了通过施用本发明的化合物降低血脂水平的方法，减少体脂量的方法，降低肝脏甘油三酯水平的方法，和改善动物中的胰岛素敏感性的方法。还提供了降低动物中的血糖水平的方法，所述方法包括施用本发明的化合物。血糖水平可以是空腹或餐后葡萄糖水平，并且血糖水平包括血清或血浆葡萄糖水平。进一步提供了增加胰岛素敏感性和抑制肝葡萄糖排出的方法。本发明的另一个方面是通过施用本发明的化合物延迟或预防动物中的血脂或血糖水平开始增加的方法。本申请还与整体引入作为参考的美国申请号60/718，684相关。本申请还与各自整体？I入本文作为参考的美国申请号11/231,243和PCT申请号PCT/US2005/033837相关。详述概述本文公开了用于在编码GCCR的核酸分子表达调节中使用的寡聚化合物，包括反义寡核普酸和其他反义化合物。这通过提供与一种或多种编码GCCR的靶核酸分子杂交的寡聚化合物来完成。依照本发明的是用于调节GCCR(也称为糖皮质激素受体；细胞核受体亚家族3，组C,成员1;GR;GRL;NR3C1)表达的组合物和方法。表1中列举了可以用于设计靶向GCCR的寡聚化合物的序列的GENBANK⑧登记号。本发明的寡聚化合物包括与表1中所示的一种或多种靶核酸分子杂交的寡聚化合物，以及与编码GCCR的其他核酸分子杂交的寡聚化合物。寡聚化合物可以靶向编码GCCR的核酸分子的任何区域、片段或位点。合适的靶区域、片段和位点包括但不限于，5'UTR、起始密码子、终止密码子、编码区、3，UTR、5'帽区、内含子、外显子、内含子-外显子连接处、外显子-内含子连接处、和外显子-外显子连接处。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>活性寡聚化合物将与之杂交的粑核酸上的位置在下文中被称为"验证的靼片段"。如本文所使用的，术语"验证的耙片段"被定义为活性寡聚化合物所耙向的輩巴区域的至少8个核碱基的部分。尽管不希望被理论束缚，但目前认为这些靶片段代表容易进行杂交的靶核酸的部分。本发明包括是嵌合化合物的寡聚化合物。嵌合化合物的例子是具有由非脱氧核苷酸区域或"翼"侧接的2'个脱氧核苷酸区域或"缺口"的缺口聚体。尽管不希望被理论束缚，但缺口聚体的缺口提供了当与RNA靶结合时可由RNA酶H识别的底物，而翼不是最佳底物但可以赋予其他性质，例如促成双链体稳定性或有利的药代动力学效应。每个翼可以是一种或多种非脱氧寡核苷酸单体。在一个实施方案中，缺口聚体包含在5，和3'末端中的每一个上由2个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸的翼侧接的16个2'个脱氧核苷酸的区域。这被称为2-16-2缺口聚体。因此，这种嵌合寡聚化合物或缺口聚体的"基序"是2-16-2。在另一个实施方案中，所有核苷间键都是硫代磷酸酯键。在另一个实施方案中，缺口聚体的胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。本发明的实施方案包括包含长度为13-26个核苷酸的序列的寡聚化合物，所述序列包含在5，和3'末端的每一个上与至少一个2，-0-(2-曱氧乙基)核普酸侧接，长度超过10个核碱基的脱氧核苷酸区域。优选的"缺口加宽的"寡核苷酸在寡核苷酸的缺口部分中包含11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个脱氧核苷酸。优选的5，和3，侧翼区包含1个、2个、3个或4个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸。优选的缺口加宽的缺口聚体具有包括1-18-1、1-17-2、2-17-1、2-16-2、3-14-3和4-12-4的基序。在优选实施方案中，寡聚化合物粑向GCCRRNA或与GCCRRNA杂交。在另一个实施方案中，寡聚化合物减少GCCRRNA的表达。在其他实施方案中，寡聚化合物减少GCCR的表达，其中GCCR的表达减少至少10%、至少20%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%。本发明的寡核苷酸包括其中所述寡核苷酸的肾浓度相对于具有相同序列但包含在5，和3'末端上都与5个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的10个脱氧核苷酸的区域的寡核苷酸降低的那些。本发明的寡核苷酸包含其中所述寡核苷酸的肾浓度相对于具有相同序列但包含在5'和3，末端上都与5个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的10个脱氧核苦酸的区域的寡核苷酸的那些相似或降低的那些。本发明的寡核苷酸包括其中关于靶减少的效力或疗效与具有相同序列但包含在5，和3'末端上都与5个2'-0-(2-甲氧乙基)核普酸侧接的10个脱氧核苦酸的区域的寡核普酸的那种相似或更佳，而没有寡核苷酸在乾组织中的增加积聚的那些。优选的耙组织包括肝和脂肪组织。本发明提供了靶向编码GCCR的核酸分子、长度为13-26个核碱基的反义寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含第一个区域、第二个区域和第三个区域，其中所述第一个区域包含至少11个脱氧核苷酸并且其中所述第二个和第三个区域包含l-4个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸，所述第二个和第三个区域在所述笫一个区域的5，和3，末端上侧接第一个区域。在某些实施方案中，本发明的寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在某些实施方案中，"缺口"区域包含ll个、12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个核碱基。在某些实施方案中，反义寡核苷酸长度为20个核碱基。寡聚化合物可以包含约8-约80个核碱基(即约8-约80个连接的核苷)，优选地约13-约26个核碱基。本领域普通技术人员应当理解预期的优选的寡聚化合物包括长度为13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个或26个核碱基的化合物。本发明的化合物包括这样的寡核苷酸序列，其包含来自举例说明性反义化合物之一的5'末端的至少8个连续核碱基(剩余核碱基是相同寡核普酸的连续段，其在可与耙核酸特异性杂交的反义化合物的5，末端紧邻的上游开始，且持续直至寡核苷酸包含约13-约26个核碱基)。其他化合物可以由这样的寡核苷酸序列表示，其包含来自举例说明性反义化合物之一的3'末端的至少8个连续核碱基(剩余核碱基是相同寡核苷酸的连续段，其在可与靶核酸特异性杂交的反义化合物的3'末端紧邻的下游开始，且持续直至寡核苷酸包含约13-约26个核碱基)。还应当理解化合物可以由这样的寡核普酸序列表示，其包含来自举例说明性化合物的序列内部部分的至少8个连续核碱基，并且可以在2个方向的任一方向或2个方向上延伸直至寡核苷酸包含约13-约26个核碱基。本发明的寡核苷酸包括长度为20个核碱基的反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸靶向编码GCCR的核酸分子，并且包含SEQIDNO:34、33、35、36、37、42、45、56、61、63或96的至少8个核碱基的部分。ii在一个实施方案中，本发明的寡核苷酸是靶向核酸分子的、长度为20个核碱基的反义寡核苷酸，所述核酸分子编码GCCR并且具有SEQIDNO:34、33、35、36、37、42、45、56、61、63或96的序列。在一个实施方案中，本发明的寡核苦酸具有SEQIDNO:37的核碱基序列。本发明提供了包含SEQIDNO:37的核碱基序列的反义寡核苷酸。在一个实施方案中，本发明的寡核苷酸包含SEQIDNO:37的核石咸基序列的至少8个核碱基的部分。在一个实施方案中，本发明提供了长度为20个核碱基的反义寡核苷酸，所述寡核普酸靶向编码GCCR的核酸分子，并且包含SEQIDNO:34、33、35、36、37、42、45、56、61、63或96的至少8个核石咸基的部分，其中所述寡核苷酸包含长度为12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个核碱基的脱氧核苷酸区域，所述脱氧核普酸区域在其5，和3，末端上与1-4个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接，并且其中所述寡核苷酸与GCCRRNA特异性杂交且减少GCCRRNA的表达。在一个实施方案中，侧翼区是对称的(在5，侧翼区中具有与3'侧翼区中相同数目的核苷酸)。在另一个实施方案中，侧翼区是不对称的(与3，侧翼区比较，在5，侧翼区中具有不同数目的核苷酸)。本发明的反义寡核苷酸可以包含至少一个经修饰的核苷间键。经修饰的核苷间键包括硫代磷酸酯键。本发明的反义寡核苷酸还可以包含至少一个经修饰的核碱基。在优选实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧咬。在其他实施方案中，本发明包括具有SEQIDNO:37的核碱基序列的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸的特征在于在5，和3，末端上与4个2，-0-(2-甲氧乙基)核普酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域，在5，和3，末端上与3个2，-0-(2-曱氧乙基)核普酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域，在5，和3，末端上与2个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域，在5，和3'末端上与1个或2个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域，或在5，和3'末端上与1个2，-0-(2-曱氧乙基)核苦酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQIDNO:37的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5，和3'末端上与4个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQIDNO:37的核石咸基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5，和3，末端上与3个2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一个具体实施方案中，反义寡核普酸具有SEQIDNO:37的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有其5，和3'末端上与2个2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苦间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQIDNO:37的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5，和3，末端上与1个或2个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQIDNO:37的核石咸基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5，和3'末端上与1个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核普间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在另一个实施方案中，反义寡核苷酸包含SEQIDNO:33的核碱基序列。在一个实施方案中，本发明的寡核苷酸包含SEQIDNO:33的核碱基序列的至少8个核碱基的部分。在其他实施方案中，本发明包括具有SEQIDNO:33的核碱基序列的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸的特征在于在5，和3，末端上与4个2，-0-(2-甲氧乙基)核普酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域，在5，和3，末端上与3个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域，在5，和3'末端上与2个2，-0-(2-甲氧乙基)核香酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域，在5，和3，末端上与1个或2个2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域，或在5，和3，末端上与1个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苦酸的区域。在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQIDNO:33的核碱基序列，其中所述反义寡核普酸具有在5，和3，末端上与4个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQIDNO:33的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5，和3'末端上与3个2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQIDNO:37的核石咸基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5，和3'末端上与2个2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQIDNO:37的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5，和3，末端上与1个或2个2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQIDNO:37的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5，和3'末端上与1个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。本发明提供了包含SEQIDNO:45的核碱基序列的反义寡核苷酸。在一个实施方案中，本发明的寡核苷酸包含SEQIDNO:45的核碱基序列的至少8个核碱基的部分。在其他实施方案中，本发明包括具有SEQIDNO:45的核碱基序列的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸的特征在于在5，和3，末端上与4个2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域，在5，和3，末端上与3个2，-0-(2-曱氧乙基)核苦酸侧接的14个脱氧核普酸的区域，在5，和3，末端上与2个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域，在5，和3，末端上与1个或2个2，-0-(2-曱氧乙基)核苦酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域，或在5'和3'末端上与1个2，-0-(2-曱氧乙基)核普酸侧接的18个脱氧核普酸的区域。在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQIDNO:45的核石威基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5，和3，末端上与4个2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQIDNO:45的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5，和3'末端上与3个2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一个具体实施方案中，反义寡核普酸具有SEQIDNO:45的核碱基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5，和3'末端上与2个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQIDNO:45的核石咸基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5，和3，末端上与1个或2个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核普酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苦间键是疏代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在一个具体实施方案中，反义寡核苷酸具有SEQIDNO:45的核i威基序列，其中所述反义寡核苷酸具有在5，和3，末端上与1个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。在一个进一步的实施方案中，反义寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个进一步的实施方案中，至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一个进一步的实施方案中，至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。本文还涉及药物组合物，所述药物组合物包含本发明的反义寡核苷酸并任选包含药学上可接受的载体、稀释剂、增强剂或赋形剂。本发明的化合物还可以在用于治疗与由GCCR介导的糖皮质激素活性相关的疾病和病症的药物制备中^f吏用。本发明的实施方案包括减少细胞或组织中的GCCR表达的方法，所述方法包括使所述细胞或组织与本发明的药物组合物或反义寡核苷酸接触，降低动物中的血糖水平、血甘油三酯水平或血胆固醇水平的方法，所述方法包括给所述动物施用本发明的药物组合物。血液水平可以是血浆或血清水平。还涉及增加胰岛素敏感性的方法，降低肝脏甘油三酯水平的方法，和抑制动物中的肝葡萄糖排出的方法，所述方法包括给所述动物施用本发明的药物组合物。增加的胰岛素敏感性可以由循环胰岛素水平中的降低来指示。本发明的另一个方面是减少动物中的体脂量的方法。本发明的其他实施方案包括治疗具有与糖皮质激素受体表达相关的疾病或状况的动物的方法，所述方法包括给所述动物施用治疗或预防有效量的本发明的反义寡核苷酸。疾病或状况可以是代谢疾病或状况。在某些实施方案中，代谢疾病或状况是糖尿病、肥胖、代谢综合征X、高血糖症、高脂血症或胰岛素抵抗。在某些实施方案中，疾病是2型糖尿病。在某些实施方案中，肥胖是饮食诱导的。在某些实施方案中，高脂血症与升高的血脂水平相关。脂质包括胆固醇和甘油三酯。在一个实施方案中，状况是肝脂肪变性。在某些实施方案中，脂肪变性是脂肪肝或非酒精性脂肪肝。还提供了预防或延迟动物中升高的血糖或血脂水平开始的方法。本发明的化合物可以用于调节有需要的动物例如人中的GCCR表达。在一个非限制性实施方案中，该方法包括给所述动物施用有效量的反义化合物的步骤，所述反义化合物减少GCCR的表达。在一个实施方案中，本发明的反义化合物有效减少GCCRRNA的水平或功能。因为GCCRmRNA水平中的减少也可以导致表达的GCCR蛋白质产物中的改变，使用此类所得到的改变也可以进行测量。有效减少GCCRRNA或表达的蛋白质产物的水平或功能的本发明反义化合物被视为活性反义化合物。在一个实施方案中，如通过本文例示的测定法测量的，本发明的反义化合物减少GCCR的表达，引起RNA减少至少10%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%。"反义机制"是涉及化合物与靶核酸杂交的所有那些，其中杂交的结果或效应是耙降解或把占据，伴随涉及例如转录或剪接的细胞机制停止。如本文所使用的，为了方便起见，术语"耙核酸"和"编码GCCR的核酸分子"已用于包含编码GCCR的DNA,由此类DNA转录的RNA(包括前-mRNA和mRNA或其部分)，以及由此类RNA衍生的cDNA。^試，,拔和在,《少一个J巴区域、片段或位点，从而使得将导致所需效应,、例如表达的调节。"区域"被定义为具有至少一种可鉴定的结构、功能或特征的靶核酸的部分。在靶核酸的区域内是片段。"片段"被定义为靶核酸内的区域的较小或亚部分。如本发明所使用的，"位点"被定义为靼核酸内的独特核碱基位置。一旦鉴定一个或多个耙区域、片段或位点，就设计与耙充分互补的寡聚化合物，即充分良好地杂交并且具有足够的特异性，以产生所需效应。麟本领域还已知的是由DNA的相同基因组区域可以产生可变RNA转录物。这些可变转录物一般称为"变体"。更具体而言，"前mRNA变体"是由相同基因组DNA产生的转录物，所述转录物在其起始或终止位置方面不同于由相同基因组DNA产生的其他转录物，并且包含内含子和外显子序列。在剪接过程中一个或多个外显子或内含子区域或其部分切除后，前mRNA变体产生较小的"mRNA变体"。因此，mRNA变体由前mRNA变体进行加工，并且由于剪接，每个独特的前mRNA变体必须始终产生独特的mRNA变体。这些mRNA变体也称为"可变剪接变体"。如果不存在前mRNA的剪接，那么前mRNA变体等同于mRNA变体。本领域还已知的是变体可以通过使用可变信号以起始或终止转录来产生，并且前mRNAs和mRNAs可以具有超过一个起始密码子或终止密码子。源于使用可变起始密码子的前mRNA或mRNA的变体纟皮称为那种前mRNA或mRNA的"可变起始变体"。-使用可变终止密码子的那些转录物被称为那种前mRNA或mRNA的"可变终止变体"。可变终止变体的一种具体类型是"聚腺苷酸变体"，其中产生的多个转录物来源于通过转录机制的"聚腺苷酸终止信号"之一的可变选择，从而产生在独特的聚腺苷酸位点处终止的转录物。因此，本文描述的变体类型也是合适的耙核酸。乾表迷^源，"调节，，意指功能干扰，例如，表达中的增加(刺激或诱导)或降低(抑制或减少)。作为另一个例子，表达的调节可以包括干扰前mRNA加工的剪接位点选择。"表达"包括基因的编码信息通过其转变成细胞中存在和运作的结构的所有功能。这些结构包括转录和翻译产物。"表达的调节"意指此类功能的干扰。"调节剂"是调节GCCR表达并且包含与有效耙片段互补的至少8核碱基部分的那些化合物。乾核酸表达的调节可以通过改变任何数目的核酸(DNA或RNA)功能来达到。待调节的DNA功能可以包括复制和转录。复制和转录例如可以来自内源性细胞模板、载体、质粒构建体或其他。待调节的RNA功能可以包括易位功能，这包括但不限于，RNA易位至蛋白质翻译位点，RNA易位至细胞内远离RNA合成位点的位点，和来自RNA的蛋白质翻译。可以进行调节的RNA加工功能包括但不限于，RNA剪接以产生一种或多种RNA种类、RNA加帽、RNA的3'成熟和可以由RNA参与或由RNA促进的涉及RNA的催化活性或复合物形成。表达的调节可以暂时地或通过净稳态水平导致一个或多个核酸种类的水平增加，或一个或多个核酸种类的水平降低。对于耙核酸功能的此类干扰的一种结果是GCCR表达的调节。因此，在一个实施方案中，表达的调节可以意指靶RNA或蛋白质水平的增加或降低。在另一个实施方案中，表达的调节可以意指一种或多种RNA剪接产物的增加或降低，或2种或更多剪接产物比率的改变。"杂交"意指寡聚化合物的互补链配对。尽管不限制于具体机制，但最常见的配对机制涉及在寡聚化合物链的互补核苷或核苷酸碱基(核碱基)之间的氢键结合，所述氢键结合可以是沃森-克里克、Hoogsteen或反向Hoogsteen氬键结合。例如，腺噪呤和胸腺嘧啶是通过形成氢键配对的互补核碱基。杂交可以在不同环境下发生。当在希望特异性结合的条件下，即，在体内测定法或治疗性处理的情况下在生理条件下，和在体外测定法的情况下进行测定的条件下，存在足够程度的互补性以避免寡聚化合物与非靶核酸序列的非特异性结合时，寡聚化合物是可特异性杂交的。"严格杂交条件"或"严格条件"指寡聚化合物将与其靶序列杂交，但与最少数目的其他序列杂交的条件。严格条件是序列依赖性的，并且在不同环境下将是不同的，并且寡聚化合物与靶序列杂交的"严格条件"由寡聚化合物的性质和组成以及它们在其中进行研究的测定法决定。如本文所使用的，"互补性"指1条或2条寡聚化合物链上的2个核碱基之间精确配对的能力。例如，如果反义化合物的某个位置上的核碱基能够与靶核酸的某个位置上的核碱基氢键键合，那么寡核苷酸和靶核酸之间的氢键键合位置被视为互补位置。当每个分子中足够数目的互补位置由可以与彼此氬键键合的核碱基占据时，寡聚化合物和进一步的DNA或RNA彼此互补。因此，"可特异性杂交的"和"互补的"是用稳定和特异性结合在寡聚^合物和靶核酸之间发生^术语。'本领域中理解，寡聚化合物的序列无需与其可特异性杂交的靶核酸的序列100%互补。此外，寡核苷酸可以在一个或多个片段上杂交，从而使得插入或邻近片段不参与杂交事件(例如，环结构、错配或发夹结构)。本发明的寡聚化合物与其靶向的靶核酸序列内的靶区域包含至少70%、或至少75%、或至少80%、或至少85%、或至少90%、或至少92%、或至少95%、或至少97%、或至少98%、或至少99%的序列互补性。例如，其中反义化合物的20个核碱基中的18个与靶区域互补并且因此是可特异性杂交的寡聚化合物，将表示90%的互补性。在这个例子中，剩余的非互补核碱基可以成蔟或散布在互补核碱基内并且无需彼此邻接或与互补核碱基邻接。因此，长度为18个核碱基，具有由与靶核酸完全互补的2个区域侧接的4个(四个)非互补核碱基的寡聚化合物将与靶核酸具有77.8%的总互补性，并且因此将包含在本发明的范围内。寡聚化合物与耙核酸区域的互补性百分比可以使用本领域已知的BLAST程序(基本局部比对检索工具)和PowerBLAST程序进行常规测定(Altschul等人，J.Mol.Biol.，1990,215，403-410;Zhang和Madden,GenomeRes.,1997,7,649-656)。同源性百分比、序列同一性或互补'l"生可以通过例J(口Gap牙呈序(WisconsinSequenceAnalysisPackage,Version8forUnix,GeneticsComputerGroup,UniversityResearchPark,MadisonWI)，使用缺省设置进行测定，所述Gap程序使用Smith和Waterman(Adv.Appl.Math.,1981,2，482-489)的算法。差,必合參术语"寡聚化合物"指能够与核酸分子区域杂交的聚合结构。这个术语包括寡核苷酸、寡核苷、寡核苷酸类似物、寡核苷酸^t拟物和这些他方式制备成环状的。此外，分支结构是本领域已知的。"反义化合物"或"反义寡聚化合物，，指与核酸分子区域至少部分互补的寡聚化合物，所述核酸分子与之杂交并且调节(增加或降低)其表达。因此，尽管所有反义化合物都可以说成寡聚化合物，但并非所有寡聚化合物都是反义化合物。"反义寡核苷酸"是这样的反义化合物，其是基于核酸的寡聚物。反义寡核苷酸可以进行化学修饰。寡聚化合物的非限制性例子包括引物、探针、反义化合物、反义寡核苷酸、外部指导序列(EGS)寡核苷酸、可变剪接子和siRNAs。因此，这些化合物可以以单链、双链、环状、分支或发夹的形式引入，并且包含结构元件例如内部或末端突起或环。寡聚双链化合物可以是杂交的2条链以形成双链化合物，或具有足够的自我互补性的单链以允许杂交和形成完全或部分双链的化合物。在本发明上下文中的"嵌合"寡聚化合物或"嵌合体"是单或双链寡聚化合物，例如寡核普酸，其包含2个或更多个化学上不同的区域，各自包含至少一个单体单位，即，在寡聚化合物的情况下是核苷酸。"缺口聚体"被定义为具有由非脱氧寡核苷酸片段侧接的2'-脱氧寡核苦酸区域的寡聚化合物，一般是寡核苦酸。中央区被称为"缺口"。侧接片段被称为"翼"。如果翼之一具有O个非脱氧寡核苷酸单体，那么描述了"半聚体，，。术语"非酒精性脂肪性肝病"(NAFLD)包含从肝细胞中的简单甘油三酯积聚(肝脂肪变性)到具有炎症(脂肪肝)、纤维化和硬化的肝脂肪变性的疾病谱。非酒精性脂肪肝(NASH)由NAFLD超过甘油三酯沉积的进展而发生。能够诱导坏死、炎症和纤维化的第二击是NASH发展所需的。关于第二击的候选物可以分成广泛的种类引起氧化应激增加的因子和促进促炎细胞因子表达的因子。已提出增加的肝脏甘油三酯导致动物和人肝细胞中增加的氧化应激，表明肝脏甘油三酯积聚、氧化应激和肝脂肪变性进展至NASH之间潜在的原因和效应关系(Browning和Horton,/./"veW.,2004，//么147-152)。高甘油三酯血症和高脂肪酸血症(hyperfattyaddemia)可以引起周围组织中的甘油三酯积聚(Shimamura等人，S/oc/zem.6iop/zjAS.Commim.,2004，322,1080-1085)。本发明的一个实施方案是通过施用预防或治疗有效量的本发明的寡聚化合物减少动物肝中的脂质的方法。本发明的另一个实施方案是通过施用预防或治疗有效量的本发明的寡聚化合物治疗动物中的肝脂肪变性的方法。在某些实施方案中，脂肪变性是脂肪肝。在某些实施方案中，脂肪变性是NASH。经修饰和可替代的核碱基本发明的寡聚化合物还包括不同的碱基存在于化合物的一个或多个核苷酸位置上的变体。例如，如果第一种核苷酸是腺苷，那么可以产生在那个位置上包含胸苷、鸟苷或胞苷的变体。这可以在寡聚化合物的任何位置上进行。这些化合物随后使用本文描述的方法进行检测以确定其使GCCRmRNA表达减少的能力。寡聚化合物还可以包括核碱基(在本文中通常称为杂环碱基或简单地"碱基")修饰或取代。如本文所使用的，"未修饰的"或"天然的"核碱基包括噤呤碱基腺噤呤(A)和鸟嘌呤(G),以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。"取代"是用另一种未修饰的或天然的碱基替换未修饰的或天然的碱基。"经修饰的"核碱基意指其他合成的和天然的核碱基例如5-甲基胞嘧啶(5-me-C),5-羟甲基胞嘧啶，黄噤呤，次黄嘌呤，2-氨基腺嘌呤，腺嘌呤和鸟嘌呤的6-曱基及其他烷基衍生物，腺噪呤和鸟噪呤的2-丙基及其他烷基衍生物，2-硫尿嘧啶，2-硫代胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶，5-囟代尿嘧啶和胞嘧啶，5-丙炔基(-OC-CH3)尿嘧啶和胞嘧啶以及嘧啶碱基的其他炔基衍生物、6-偶氮尿嘧咬、胞嘧啶和胸腺嘧咬，5-尿嘧咬(假尿嘧p定)，4-硫尿嘧啶，8-卣素、8-氨基、8-巯基、8-烷硫基、8-羟基及其他8-取代腺嘌呤和鸟嘌呤，5-卣代特别是5-溴、5-三氟曱基及其他5-取代尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鸟嘌呤和7-曱基腺嘌呤，2-F-腺。票呤，2-氨基-腺嘌呤，8-氮鸟嘌呤和8-氮腺噪呤，7-脱氮鸟噤呤，7-脱氮腺嘌呤和3-脱氮鸟噤呤和3-脱氮腺嘌呤。进一步修饰的核碱基包括三环嘧啶例如吩嗜嗪胞苷(1H-嘧啶并(5,4-b)(1,4)苯并^恶。秦-2(3H)-酮),吩噻。秦胞苷(lH-嘧啶并(5,4-b)(1,4)苯并p塞。秦-2(3H)-酮)，G-夹(clamps)例如取代的吩哺嗪胞苷(例如9-(2-氨基乙氧基)-H-嘧啶并(5,4-b)(1,4)苯并嚅嗪-2(3H)-酉同),。卡唑胞苷(2H-嘧啶并(4,5-b)吲哚-2-酮),吡啶并吲哚胞苷(H-吡啶并(3',2':4,5)吡咯并(2,3-d)嘧咬-2-酮)。经修饰的核碱基还可以包括噤呤或嘧啶碱基替换为其他杂环的那些，例如7-脱氮-腺嘌呤、7-脱氮鸟苷、2-氨基吡啶和2-吡啶酮。更多的核碱基包括美国专利号3，687，808中乂>开的那些，77^Co""^5Vzcyc/o/^d,a0/尸o/yww^wg/"een'wg,第858-859页，Kroschwitz，J丄，编辑JohnWiley&Sons,1990中7>开的那些，由Englisch等人，Jwgemw^eC7zem/e,InternationalEdition,1991,J仏613描述的那些，和由Sanghvi,Y.S.，第15章，y^"se朋ei^earc/z顶t/4P/^'ca加似，第289-302页，Crooke,S.T.和Lebleu,B.,编辑，CRCPress,1993公开的那些。这些核碱基中的某些是本领域技术人员已知为适合于增加本发明的化合物的结合亲和力。这些包括5-取代嘧咬，6-氮嘧啶和N-2、N-6和0-6取代噤呤，包括2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。5-曱基胞嘧啶取代已显示使核酸双链体稳定性增加0.6-1.2°C，并且是目前合适的碱基取代，甚至更特别是当与2'-0-甲氧乙基糖修饰组合时。本领域应当理解碱基修饰不会使得此类化学修饰能够在核酸序列中产生取代。教导了上述经修饰的核碱基中的某些以及其他经修饰的核碱基的制备的代表性美国专利包括但不限于，上文描述的U.S.3，687,808，以及U.S.:4,845,205;5,130,302;5,134,066;5,175,273;5,367,066;5,432,272;5,457,187;5,459,255;5,484,908;5,502,177;5,525,711;5,552,540;5,587，469;5,594,121,5,596,091;5,614,617;5,645,985;5,830,653;5,763,588;6,005,096;5,681,941;和5,750,692。本发明的寡聚化合物还可以包括多环杂环化合物代替一个或多个天然存在的杂环碱基部分。许多三环杂环化合物先前已得到报道。这些化合物常规地用于反义应用中以增加经修饰的链与靶链的结合性质。研究最多的修饰靶向鸟苷，因此它们已命名为G-夹或胞苷类似物。在第二条链中与鸟苦形成3个氢键的代表性胞嘧啶类似物包括1,3-二氮杂吩嚅漆-2-酉同(Kurchavov,等人,A^c/eos7.desam/A^c/eo"csfes1,1997,16,1837-1846),1,3-二氮杂吩噻漆画2-酮，(Lin，K,Y.;Jones,R.J.;Matteucci,M.J.Am.Chem.Soc.1995,117,3873-3874)和6,7,8,9-四氟-l,3-二氮杂吩梦恶漆國2-酮(Wang,J.;Lin,K,Y.,Matteucci，M.TetrahedronLett1998，39，8385-8388)。掺入寡核苷酸内的这些碱基修饰显示与互补鸟嘌呤杂交，并且后者也显示与腺嘌呤杂交并且通过延伸的叠加相互作用增强螺旋的热稳定性(还参见美国授权前公开20030207804和20030175906)。当胞嘧啶类似物/取代物具有与刚性1,3-二氮杂吩嚅。秦-2-S同支架附着的氨基乙氧基部分时，已观察到进一步的螺旋稳定性质(Lin,K,Y.;Matteucci，M.J.Am.Chem,Soc.1998,120,8531-8532)。结合研究证实单个掺入可以增强模型寡核苦酸与其互补靶DNA或RNA的结合亲和力，其中相对于5-曱基胞嘧啶(dC5me),ATm最高达18。C,这是关于单个修饰的高亲和力增加。另一方面，螺旋稳定性中的增加不会破坏寡核苷酸的特异性。适于在本发明中使用的更多的三环杂环化合物和使用其的方法公开于美国专利6,028,183和6,007,992中。吩嗜。秦衍生物增强的结合亲和力连同其不受破坏的序列特异性使得它们成为有价值的核碱基类似物用于开发更有效的基于反义的药物。事实上，有希望的数据已从体外实验获得，证实包含吩嚅。秦取代的七核苷酸能够活化RNA酶H、增强细胞摄取并且显示增加的反义活性(Lin,K画Y;Matteucci，M.J.Am.Chem,Soc,1998，120，8531-8532)。活性增加在G-夹的情况下甚至更显著，因为单个取代显示明显改善20聚体2，-脱氧硫代磷酸酯寡核苷酸的体外效力(Flanagan,W.M.;Wolf，J丄;Olson,P.;Grant,D.;Lin,K.-Y.;Wagner,R.W.;Matteucci,M.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1999，96，3513-3518)。作为杂环碱基有用的更多的经修饰的多环杂环化合物公开于下述专利中，但不限于下述专利上文描述的美国专利3,687,808,以及美国专利4,845，205;5,130,302;5,134,066;5,175,273;5,367,066;5,432,272;5,434,257;5,457,187;5,459,255;5,484,鄉；5,502,177;5,525,711;5,552,540;5,587,469;5,594,121,5,596,091;5,614,617;5,645，985;5,646,269;5,750,692;5,830,653;5,763,588;6,005,096;和5,681,941,以及美国授权前公开20030158403。邀合本发明的组合物可以包含2种或更多寡聚化合物。在另一个相关实施方案中，本发明的组合物可以包含靶向第一种核酸的一种或多种反义化合物，特别是寡核苷酸，和靶向笫二种核酸靶的一种或多种另外的反义化合物。可替代地，本发明的組合物可以包含粑向相同核酸輩巴的不同区域的2种或更多反义化合物。2种或更多组合的化合物可以一起或顺次使用。本发明的化合物可以在组合疗法中使用，其中通过施用本发明的一种或多种化合物和一种或多种其他合适的治疗/预防化合物以治疗状况来达到附加效应。合适的一种或多种治疗/预防化合物包括但不限于，降糖剂、减肥药、和降脂剂。降糖剂包括但不限于，激素，激素模拟物或肠降血糖素沖莫拟物(例如，胰岛素，包括吸入胰岛素，GLP-1或GLP-1类似物例如liraglutide、或依西奈肽)，DPP(IV)抑制剂，磺酰脲(例如，乙酸己脲、氯磺丙脲、曱苯磺丁脲、甲磺吖庚脲、格列美脲、格列吡。秦、格列本脲或格列齐特)，双胍(二甲双胍)，氯茴苯酸(例如，那格列奈或瑞格列奈)，噻唑烷二酮或其他PPAR-y激动剂(例如，吡格列酮或罗格列酮)，a-葡糖苷酶抑制剂(例如,阿卡波糖或米格列醇)，或不靼向GCCR的反义化合物。还包括了双PPAR-激动剂(例如，由Bristol-MyersSquibb开发的莫格列他，或由Astm-Zeneca开发的替才各列扎)。还包括了在开发中的其他糖尿病治疗(例如，由Novartis开发的LAF237;由Merck开发的MK-0431;或由Sanofi-Aventis开发的利莫那班)。减肥药包括但不限于，食欲抑制剂(例如苯丁胺或MeridiaTM)，脂肪吸收抑制剂例如奥利司他(例如XenicalTM),和抑制刺激食欲的饥饿信号的改良形式的睫状神经营养因子。降脂剂包括但不限于，胆盐掩蔽树脂(例如考来烯胺、考来替泊和盐酸考来维仑)，HMGCoA-还原酶抑制剂(例如，洛伐他汀、普伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀和氟伐他汀)，烟酸，纤维酸衍生物(例如，氯贝丁酯、吉非贝齐、非诺贝特、苯扎贝特和环丙贝特)，普罗布可，新霉素，右曱状腺素，植物stanol酯，胆固醇吸收抑制剂(例如，依泽替米贝)，CETP抑制剂(例如，拖彻普和JTT-705),MTP抑制剂(例如，英普他派)，胆酸转运体抑制剂(顶端钠依赖性胆酸转运蛋白)，肝CYP7a调节剂，ACAT抑制剂(例如Avasimibe),雌激素替代疗法(例如，它莫西芬)，合成HDL(例如，ETC-216),抗炎剂(例如，糖皮质激素)，或不靶向GCCR的反义化合物。这些药物中的一种或多种可以与GCCR的一种或多种反义抑制剂组合以达到附加疗效。寡聚物合成经修饰的和未修饰的核苷的寡聚化可以根据关于DNA(ProtocolsforOligonucleotidesandAnalogs,编辑Agrawal(1993)，HumanaPress)和/或RNA(Scaringe，Methods(2001),23,206-217.Gait等人，ApplicationsofChemicallysynthesizedRNAinRNA:ProteinInteractions,编辑Smith(1998),1-36.Gallo等人，Tetrahedron(2001)，57，5707-5713)的文献操作和美国公开号US2005-0164271常规地进行，所述专利引入本文作为参考。本发明的寡聚化合物可以通过众所周知的固相合成技术来方便地和常规地制备。用于此类合成的设备由几个厂商出售，包括，例如AppliedBiosystems(FosterCity，CA)。可以另外地或可替代地使用本领域已知的用于此类合成的任何其他方法。众所周知的是使用相似技术以制备寡核苷酸例如硫代磷酸酯和烷基化衍生物。寡聚物纯化和分析寡核苷酸纯化和分析的方法是本领域技术人员已知的。分析方法包括毛细管电泳法(CE)和电雾化质镨法。此类合成和分析方法可以在多孔板中进行。#艰力容和//入作》參^#尽管已依照某些实施方案具体地描述了本发明的某些化合物、组合对其进行限制。本申请中引用的参考文献、GENBANK⑧登记号等各自整体引入本文作为参考。实施例1测定表达的调节GCCR表达的调节可以以本领域已知的各种方法进行测定。GCCRmRNA水平可以通过例如RNA印迹分析、竟争聚合酶链式反应(PCR)或实时PCR来定量。RNA分析可以通过本领域已知的方法对总细胞RNA或poly(A)+mRNA来进行。RNA分离的方法在例如Ausubel,F.M.等人,Cwn^wf/Vc^oco/sz力A^o/ecw/or5/o/ogy,笫1巻,第4.1.1-4.2.9和4.5.1-4.5.3页，JohnWiley&Sons,Inc.,1993中教导。RNA印迹分析是本领域常规的，并且在例如Ausubel,F.M.等人，Cw/rewf尸n9toco/5w'wMo/ecw/or5/o/ogy，第1巻，第4.2.1-4.2.9页,JohnWiley&Sons，Inc.,1996中教导。实时定量(PCR)可以使用商购可得的ABIPRISM7700序列检测系统来方便地完成，其可从PE-AppliedBiosystems,FosterCity,CA获得并且根据制造商的说明书来使用。由GCCR编码的蛋白质水平可以以本领域众所周知的各种方法进行定量，例如免疫沉淀、蛋白质印迹分析(免疫印迹)、ELISA或荧光激活的细胞分选(FACS)。针对由GCCR编码的蛋白质的抗体可以从各种来源进行鉴定且获得，例如MSRS抗体目录(AerieCorporation,Birmingham,MI),或可以经由常规抗体产生方法进行制备。用于制备多克隆抗血清的方法在例如Ausubel，F.M.等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,第2巻，第11,12.1-11.12.9页，JohnWiley&Sons,Inc.，1997中教导。用于制备单克隆抗体的方法在例如Ausubel,F.M.等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,第2巻，第11.4.1-11.11.5页，JohnWiley&Sons,Inc.,1997中教导。免疫沉淀法是本领域标准的，并且可以在例如Ausubel,F.M.等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,第2巻，第10.16.1-10.16.11页，JohnWiley&Sons，Inc.,1998找到。蛋白质印迹(免疫印迹)分析是本领域标准的，并且可以在例如Ausubel,F.M.等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,笫2巻，第10.8.1-10.8.21页，JohnWiley&Sons,Inc.,1997找到。酶联免疫吸附测定法(ELISA)是本领域标准的，并且可以在4列^t口Ausubel,F.M.等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,第2巻，第11.2.1-11.2.22页，JohnWiley&Sons,Inc.,1991找到。本发明的寡聚化合物对靶核酸表达的影响可以在各种细胞类型中的任何一种中进行测试，条件是粑核酸以可测量的水平存在。本发明的寡聚化合物对靶核酸表达的影响可以使用例如PCR或RNA印迹分析常头见地测定。细胞系衍生自正常组织和细胞类型并且衍生自与各种病症27(例如过度增殖性病症)相关的细胞。衍生自多种组织和种类的细胞系可以得自美国典型培养物保藏中心(ATCC,Manassas,VA)、日本癌症研究资源库(JapaneseCancerResearchResourcesBank)(Tokyo,Japan)、或英国应用微生物与研究中心(CentreforAppliedMicrobiologyandResearch)(Wiltshire,UnitedKingdom)。原代细胞或从动物中分离且不实施连续培养的那些细胞可以根据本领域已知的方法进行制备，或从各种商业供应者获得。此外，原代细胞包括从临床情况中的人受试者(即供血者，手术患者)获得的那些。细胞类型寡聚化合物对靶核酸表达的影响在HepG2细胞和原代大鼠肝细胞中进行测试。HepG2细胞人肝胚细胞瘤细胞系HepG2得自美国典型培养物保藏中心(Manassas，VA)。HepG2细胞在Eagle'sMEM中进行常规培养，所述Eagle'sMEM补充有10%胎牛血清、1mM非必需氨基酸和1mM丙酮酸钠(InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)。当它们达到约90%汇合时，细胞通过胰蛋白酶消化和稀释进行常规传代。通过用在磷酸盐緩冲盐水中1:100稀释的1型大鼠尾部胶原(BDBiosciences,Bedford,MA)包被，制备多孔培养板用于细胞培养。包含胶原的板于37。C温育约1小时，这之后去除胶原并且用磷酸盐緩冲盐水洗涤孔2次。以约8,000个细胞/孔的密度将细胞种植到96孔板(Falcon-Primaria#353872，BDBiosciences,Bedford,MA)内用于在寡聚化合物转染实验中使用。原代大鼠肝细胞原4戈大鼠肝细月包由购自CharlesRiverLabs(Wilmington,MA)的Spmgue-Dawley大鼠制备，并且在高糖DMEM(InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)中进行常规培养，所述DMEM补充有IO%胎牛血清(InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)、100单位/mL青霉素和100|ug/ml链霉素(InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)。以约4,000-6,000个细胞/孔的密度将细胞种植到96孑L板(Falcon國Primaria#353872,BDBiosciences,Bedford,MA)内用本发明的寡聚化合物处理。用寡聚化合物处理当细胞达到合适的汇合时，如所述的使用转染方法将它们用寡核苷酸进行处理。本领域已知的其他合适的转染试剂包括但不限于，LIPOFECTAMINETM、OLIGOFECTAMINE和FUGENETM。本领域已知的其他合适的转染方法包括但不限于电穿孔。LIPOFECTIN当细胞达到65-75%汇合时，将它们用寡核苷酸进行处理。使寡核苷酸在Opti-MEMTM-l减少的血清培养基(InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)中与LIPOFECTINTM(InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)进行混合，以达到寡核苷酸的所需浓度和2.5或3yg/mL/100nM寡核苦酸的LIPOFECTINTM浓度。使这种转染混合物在室温下温育约0.5小时。对于在96孔板中生长的细胞，细胞用100)LiLOPTI-MEMTM-l洗涂1次，并随后用130转染混合物进4亍处理。在24孔板或其他标准组织培养板中生长的细胞使用合适体积的培养基和寡核苷酸进行类似地处理。一式两份或一式三份地处理细胞且获得数据。于37。C处理约4-7小时后，将包含转染混合物的培养基替换为新鲜培养基。在寡核苷酸处理后16-24小时收获细胞。CYTOFECTIN当细胞达到65-75%汇合时，将它们用寡核苷酸进行处理。使寡核苷酸在Opti-MEMTM-l减少的血清培养基(InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)中与CYTOFECTINTM(GeneTherapySystems,SanDiego，CA)进行混合，以达到寡核苷酸的所需浓度和2或4iag/mL/100nM寡核普酸的CYTOFECTINTM浓度。使这种转染混合物在室温下温育约0.5小时。对于在96孔板中生长的细胞，细胞用100|uLOPTI-MEMTM-l洗涤1次，并随后用130转染混合物进行处理。在24孔板或其他标准组织培养板中生长的细胞使用合适体积的培养基和寡核苷酸进行类似地处理。一式两份或一式三份地处理细胞且获得数据。于37X:处理约4-7小时后，将包含转染混合物的培养基替换为新鲜培养基。在寡核苷酸处理后16-24小时收获细胞。对照寡核苷酸对照寡核苷酸用于测定关于特定细胞系的最佳寡聚化合物浓度。此外，当本发明的寡聚化合物在寡聚化合物筛选实验或表型分析中进行测试时，对照寡核苷酸与本发明的化合物平行地进行测试。在某些实施方案中，对照寡核苷酸用作阴性对照寡核苷酸，即作为用于测量对基因表达或表型的影响不存在的手段。在可替代的实施方案中，对照寡核苷酸用作阳性对照寡核苷酸，即作为已知影响基因表达或表型的寡核普酸。对照寡核苷酸显示于表2中。"靶名称"指寡核苷酸靶向的基因。"靶种类"指其中寡核苷酸与靶mRNA完全互补的种类。"基序"是包含寡核苷酸的化学上独特区域的指示。表2中的某些化合物是嵌合寡核苷酸，包含由2，-脱氧核苷酸组成的中央"缺口"区，所述中央"缺口"区在两侧(5'和3，)上由"翼"侧接。翼由2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸，也称为2'-MOE核苷酸组成。每个缺口聚体寡核苷酸的"基序"在表2中举例说明，并且指出了每个缺口区和翼中的核苷酸数目，例如"5-10-5"指具有由5个核苷酸的翼侧接的10个核苷酸的缺口区的缺口聚体。ISIS29848是随机化的寡聚化合物的混合物；其序列显示于表2中，其中N可以是A、T、C或G。表2中的寡核苷酸自始至终核普间(主链)键是硫代磷酸酯。未修饰的胞嘧啶由核苷酸序列中的"UC"指出；所有其他胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>细胞，阳性对照寡核苷酸可以是例如ISIS15770。导致靶mRNA减少80%的阳性对照寡核普酸的浓度，随后用作对于那种细胞系的后续实验中关于新寡核苷酸的筛选浓度，所述靶mRNA例如对于ISIS15770是大鼠Raf激酶C。如果未达到80%减少，那么导致靶mRNA减少60%的阳性对照寡核苷酸的最低浓度，随后用作对于那种细胞系的后续实验中的寡核苷酸筛选浓度。如果未达到减少60%,那么那种特定细胞系被视为不适合于寡核苷酸转染实验。当反义寡核苷酸使用脂质体试剂进行转染时，本文使用的反义寡核普酸浓度为50nM-300nM,当反义寡核苷酸通过电穿孔进行转染时，浓度为1mM-40juM。实施例2GCCRmRNA水平的实时定量PCR分析GCCRmRNA水平的定量通过实时定量PCR使用ABIPRISM7600、7700或7900序列冲企测系统(PE-AppliedBiosystems,FosterCity,CA)根据制造商的说明书来完成。通过RT、实时PCR获得的基因靼量使用表达恒定的基因-GAPDH的表达7J^平，或通过^吏用RiboGreenTM(MolecularProbes,Inc.Eugene,OR)定量总RNA进行标准化。总RNA使用RiboGreenRNA定量试剂(MolecularProbes,Inc.Eugene,OR)进行定量。将170|nLRiboGreenTM工作试剂(在10mMTris-HCl，ImMEDTA,pH7.5中l:350稀释的RiboGreenTM试剂)移液到包含30|iL纯化的细胞RNA的96孔板内。板在CytoFluor4000(PEAppliedBiosystems)中进行读数，其中在485nm处激发和在530nm处发射。GAPDH表达通过RT、实时PCR与靶的定量同时或分开进行定量。对于与耙水平的测量同时的测量，就其在定量PCR分析前与GAPDH扩增反应"多路进行(multiplexed)"的能力评估对测量的靶基因特异的引物-探针组。多路进行指在单管中进行多个DNA种类(在这种情况下是靶和内源性GAPDH对照)的检测，这要求GAPDH的引物-探针组不干扰靶的扩增。用于在实时PCR中使用的探针和引物^皮设计成与靶特异性序列杂交。引物和探针设计的方法是本领域已知的。用于在实时PCR中使用的引物和探针的设计可以使用商购可得的软件来进行，例如PrimerExpress,PEAppliedBiosystems,FosterCity,CA。引物和才果4十及与之杂交的靶核酸序列呈现于表4中。靶特异性PCR探针具有与5'末端共价连接的FAM和与3'末端共价连接的TAMRA或MGB,其中FAM是荧光染料，TAMRA或MGB是猝灭染料。分离后，对RNA实施顺次的逆转录酶(RT)反应和实时PCR,这两者都在同一孔中进行。RT和PCR试剂得自InvitrogenLifeTechnologies(Carlsbad,CA)。RT、实时PCR通过向包含30juL总RNA溶液(20_200ng)的96孔板中加入20juLPCR混合物(cocktail)(2.5xPCR緩冲液减MgCl2,6.6mMMgCl2,dATP、dCTP、dCTP和dGTP各375juM,正向引物和反向引物各375nM,125nM探针，4单位RNA酶抑制剂，1.25单位PLATINUMTaq,5单位MuLV逆转录酶和2.5xROX染料)同样进行。通过于48。C温育30分钟来进行RT反应。于95。C温育10分钟以激活PLATINUMTaq后，进行40个循环的2步PCR方案95°C15秒(变性)，随后为60°C1.5分钟(复性/延伸)。通过如本文其他实施例中所述的定量实时PCR,评估本发明的化合物对人耙mRNA水平的影响，其中使用设计为与人GCCR杂交的引物-探针组。例如正向引物TTGACATTTTGCAGGATTTGGA(作为SEQIDNO:17引入本文)反向引物CCAAGGACTCTCATTCGTCTCTTT(作为SEQIDNO:18引入本文)和PCR探针FAM-TTTCTTCTGGGTCCCC-MGB(作为SEQIDNO:19引入本文)，其中FAM是荧光染料，MGB是非荧光猝灭染料。通过如本文其他实施例中所述的定量实时PCR，评估本发明的化合物对大鼠靶mRNA水平的影响，其中使用设计为与大鼠GCCR杂交的引物-探针组。例如正向引物AAACAATAGTTCCTGCAGCATTACC(作为SEQIDNO:20引入本文)反向引物CATACAACACCTCGGGTTCAATC(作为SEQIDNO:21引入本文)和PCR探针FAM隱ACCCCTACCTTGGTGTCACTGCT-TAMRA(作为SEQIDNO:22引入本文)，其中FAM是荧光染料，TAMRA是猝灭染料。通过如本文其他实施例中所述的定量实时PCR,评估本发明的化合物对小鼠靶mRNA水平的影响，其中使用设计为与小鼠GCCR杂交的引物-探针组。例如正向引物GACATCTTGCAGGATTTGGAGTT(作为SEQIDNO:23引入本文)反向引物AACAGGTCTGACCTCCAAGGACT(作为SEQIDNO:24引入本文)和PCR探针FAM誦CGGGTCCCCAGGTAAAGAGACAAACGA國TAMRA(作为SEQIDNO:25引入本文)，其中FAM是萸光染料，TAMRA是猝灭染料。实施例3通过5-10-5缺口聚体反义抑制人GCCR表达设计一系列寡聚化合物以靶向人GCCR的不同区域，其中使用表1中引用的公开序列。化合物显示于表3中。表3中的所有化合物都是长度为20个核苷酸的嵌合寡核苷酸("缺口聚体")，包含由10个2，-脱氧核苷酸组成的中央"缺口"区，所述中央"缺口"区在两侧(5，和3，)上由5-核苷酸"翼"侧接。翼由2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸，也称为2，-MOE核苷酸组成。寡核苷酸自始至终核苷间(主链)键是硫代磷酸酯。所有胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。表3中显示的是寡核苷酸的序列，以及化合物结合的粑序列上的第一个(最5，)位置的靶位点。通过如本文其他实施例中所述的定量实时PCR分析化合物对基因靶mRNA水平的影响，其中使用设计为与人GCCR杂交的引物-探针组。数据是来自3次实验的平均值，在所述实验中HepG2细胞用50nM公开的寡聚化合物使用LIPOFECTINTM进行处理。表达的减少表示为表3中的抑制百分比。如果存在，那么"N.D."指"未测定，，。这些寡聚化合物所抑制的耙区域在本文中被称为"验证的耙片段"。表3通过5-10-5缺口聚体抑制人GCCRmRNA水平<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>表3中显示的使GCCR表达减少至少30%的5-10-5缺口聚体寡核苦酸是优选的。与这些优选序列互补的耙片段在本文中被称为"优选靶明的另一个方面是靶向GCCR的反义化合物，其包含SEQIDNOs:26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112或113的8个核石咸基的部分，其中所述化合物与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个实施方案中，反义化合物是长度为20个核碱基的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3，末端上与5个2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸侧接的10个脱氧核苷酸的区域。在一个实施方案中，所有核苷间键都是硫代磷酸酯键。在一个实施方案中，所有胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。实施例4通过缺口加宽的寡核苷酸反义抑制人GCCR表达依照本发明，还测试了具有与表4中所述化合物相同序列的缺口加宽的寡核苷酸。表4中的所有化合物都是长度为20个核苷酸的嵌合寡核苷酸("缺口聚体")，包含由16个2，-脱氧核苷酸组成的中央"缺口，，区，所述中央"缺口"区在两侧(5，和3，)上由2-核苷酸"翼"侧接。翼由2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸，也称为2'-MOE核苷酸组成。寡核苷酸自始至终核苷间(主链)键是硫代磷酸酯。所有胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。表4中显示的是寡核苷酸的序列，以及化合物与之结合的靶序列上的第一个(5'最末端)位置的靶位点。通过如本文所述的定量实时PCR就其对基因粑mRNA水平的影响分析2-16-2基序化合物。数据是来自3次实验的平均值，在所述实验中HepG2细胞用50nM公开的寡聚化合物使用LIPOFECTINTM进行处理。表达的减少表示为表4中的抑制百分比。如果存在，那么"N.D."指"未测定"。这些寡聚化合物所抑制的耙区域在本文中被称为"验证的耙片段"。表4通过2-16-2缺口聚体抑制人GCCRmRNA水平<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>表4中显示的使GCCR表达减少至少30%的2-16-2寡核苷酸是优选的。与这些优选序列互补的靶片段在本文中被称为"优选靶片段"，并且因此对于通过本发明的化合物的粑向是优选的。本发明的另一个方面是靶向GCCR的反义化合物，其包含SEQIDNOs:26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112或113的8个核碱基的部分，其中所述化合物与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。在一个实施方案中，反义化合物是长度为20个核碱基的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3，末端上与2个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域。在一个实施方案中，所有核苷间键都是硫代磷酸酯键。在一个实施方案中，所有胞嘧啶都是5-曱基胞嘧啶。实施例5靶向GCCR的跨物种寡核苷酸先前实施例中描述的某些寡核普酸是跨物种互补的，并且因此预期减少跨物种的糖皮质激素受体表达。表5中显示的是此类跨物种的寡核苷酸的序列，以及寡核苷酸的5-10-5基序形式和2-16-2基序形式的ISIS编号。关于每个序列还指出的是与化合物结合的人靶序列(NM_000176.1，作为SEQIDNO:1引入本文)上的第一个(最5，)位置的靶位点。指出了关于人、猕猴、大鼠和小鼠GCCRmRNA的互补性("是"意指完全互补性，"1mm"意指来自完全互补性的1个错配)。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>实施例6人和大鼠GCCRmRNA水平的反义抑制-使用5-10-5缺口聚体的剂量反应研究在本发明的一个进一步的实施方案中，选择11种寡核苷酸用于另外的剂量反应研究。原代大鼠肝细胞用5、10、25、50、100或200nMISIS180274、ISIS180275、ISIS180276、ISIS180281、ISIS180304、ISIS361137、ISIS361141、ISIS361151、ISIS361156、ISIS345198、ISIS361137或阴性对照寡核苦酸ISIS141923(CCTTCCCTGAAGGTTCCTCC,作为SEQIDNO:114引入本文)进行处理，并且如本文的其他实施例中所述测量mRNA水平。ISIS141923是包含由2，-MOE翼侧接的10个脱氧核苷酸的缺口和碌u代磷酸酯主链的5-10-5缺口聚体。所有胞嘧啶都是5-曱基胞嘧啶。未处理的细胞充当对照，数据对其进行标准化。这些研究的结果显示于表6中。通过如本文所描述的实时PCR测量靶mRNA水平。数据是来自3次实验的平均值并且表示为相对于未处理对照的抑制百分比。表6在大鼠原代肝细胞中的GCCR表达的剂量依赖性抑制<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>在本发明的一个进一步的实施方案中，在人HepG2细胞系中测试相同的寡核苷酸在指出的剂量时减少GCCRmRNA表达的能力。未处理的细胞充当对照，数据对其进行标准化。这些研究的结果显示于表7中。通过如本文所描述的实时PCR测量靶mRNA水平。数据是来自3次实验的平均值并且表示为相对于未处理对照的抑制百分比。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>如表6和表7中所示，耙向GCCR的反义寡核普酸在以剂量依赖性方式减少人和大鼠耙mRNA水平方面是有效的。实施例7大鼠GCCRmRNA水平的反义抑制-用5-10-5缺口聚体的体内剂量反应研究在大鼠中以各种剂量评估5种5-10-5缺口聚体基序寡核苷酸(ISIS180281、ISIS361137、ISIS345198、ISIS180304和ISIS361141)减少肝中的GCCRmRNA水平的能力。将8周龄的SpragueDawley大鼠分成经由注射接受50、25或12.5mg/kg剂量的指出的寡核苷酸之一的治疗组。每个治疗组包含4只动物，并且每周给药2次，共3周。单独用盐水注射的动物充当对照组。每周评估动物的标准血液参数(ALT/AST、胆固醇、甘油三酯和葡萄糖)。在研究结束时处死动物，并且收集肝组织并使用本文描述的实时PCR分析法分析靶减少。结果作为用指出的寡核苦酸的指出的剂量处理后测量的GCCRmRNA的减少百分比显示于表8a和8b(分开实验)中。表8a体内大鼠筛选-GCCR反义寡核苷酸<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>表8b体内大鼠筛选-GCCR反义寡核苷酸<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>表8a和8b中的数据显示粑向GCCR的反义寡核普酸在以剂量依赖性方式体内减少表达方面是有效的。选择ISIS345198(GTCAAAGGTGCTTTGGTCTG;SEQIDNO:37)用于在集中于缺口优化的结构-活性实验中的进一步评估。这种化合物与小鼠、大鼠、人、猴、兔和豚鼠糖皮质激素受体RNA完全互补。实施例8体内GCCRmRNA水平的反义抑制-缺口优化研究设计一系列寡聚化合物以耙向具有各种大小的脱氧核苷酸缺口和2，-MOE翼的GCCR。测试的每种寡核苷酸具有相同的核碱基序列(GTCAAAGGTGCTTTGGTCTG,作为SEQIDNO:37引入本文)且因此耙向SEQIDNO:1的相同片段(核碱基689-709)。如实施例5中所示，这种寡核苷酸也与大鼠GCCR完全互补。化合物显示于表9中。文本指脱氧核苷酸，用粗体、加下划线的文本指定的核碱基是2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸。自始至终，核苷间键是硫代磷酸酯，所有胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。表9中指出的是每种化合物指示包含寡核苷酸的化学上独特区域的"基序"。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>9周龄的Sprague-Dawley大鼠用50、25、12.5和6.25mg/kg剂量的表9中呈现的寡核苷酸每周处理2次，共3周。单独用盐水注射的动物充当对照组。每个处理组包含4只动物，并且每周监控动物的血浆转氨酶、脂质、葡萄糖水平和体重增加。如对于正常动物预期的，没有观察到葡萄糖中的大量改变。基线(在治疗开始前)血浆胆固醇(CHOL)和甘油三酯(TRIG)水平和在第3周时测量的水平以mg/dL作为每个治疗组的平均值显示于表10中。表10在正常大鼠中靶向GCCR的寡核苷酸对血浆脂质水平的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>如表10中所示，用粑向GCCR的反义寡核普酸处理引起胆固醇和甘油三酯水平的剂量依赖性降低。因此，本发明的一个实施方案是降低动物中的血脂水平的方法，所述方法包括给所述动物施用缺口加宽的寡核苷酸。在一个优选实施方案中，缺口加宽的寡核苷酸具有SEQIDNO:37的序列。在其他优选实施方案中，缺口加宽的寡核苷酸是ISIS372339、ISIS377130或ISIS377131。在研究结束时，处死动物，测量器官重量，并且收集组织用于测定耙减少和寡核苦酸浓度。使用本文描述的实时PCR分析方法分析白色脂肪组织的靶减少。结果作为用指出的寡核苷酸的指出的剂量处理后测量的GCCRmRNA的减少百分比显示于表lla、llb和11c(分开实验)中。测定来自用每种缺口加宽的寡核苷酸处理的动物的组织的靶减少，与来自用5-10-5基序寡核苷酸处理的动物的组织一起用于比较。表lla<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>表lib使用3-14-3寡核苷酸的白色脂肪组织中GCCR水平的体内减少<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>表llc使用4-12-4寡核苷酸的白色脂肪组织中GCCR水平的体内减少<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>同样使用本文描述的实时PCR分析方法分析肝组织的靶减少。结果作为用指出的寡核普酸的指出的剂量处理后测量的GCCRmRNA的减少百分比显示于表12a、12b和12c(分开实验)中。测定来自用每种缺口加宽的寡核苷酸处理的动物的组织的靶减少，与来自用5-10-5基序寡核香酸处理的动物的组织一起用于比较。表12a<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>如表lla、llb和llc中所示，测试的所有缺口加宽的寡核苷酸在体内以剂量依赖性方式减少GCCR水平方面都是有效的。此外，缺口加宽的寡核苷酸显示在肝中朝向比5-10-5缺口聚体更大的效力的趋势。此外，为了确定改变缺口大小对药代动力学的影响，测定了肾和肝中的寡核苷酸浓度。测定组织中的寡核苷酸浓度的方法是本领域已知的(Geary等人，t5,oc/^w,1999，27(241-248)。总寡核苷酸是在组织中检测到的所有寡核普酸代谢产物总和。表12中显示的是用指出浓度的指出的寡核苷酸处理的动物肝中的总浓度和全长寡核苷酸(pg/g)浓度。表12<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>如表12中所示，与ISIS345198比较，对于ISIS372339和ISIS377130,肝中的全长寡核苦酸水平是相似或减少的。加上如表11中所示的耙减少，这些数据显示缺口加宽的化合物的增强效力不是由于化合物在肝中的增加积聚。因此，本发明的优选寡核苷酸包括缺口加宽的寡核苷酸，其相对于相应的5-10-5缺口聚体的在靶减少方面显示增加或相似的效力，而没有化合物在靶组织中的增加积聚。在某些实施方案中，靶组织是脂肪，在某些实施方案中，靶组织是肝。权利要求1.一种长度为20个核碱基的反义寡核苷酸，所述寡核苷酸靶向编码GCCR的核酸分子，并且包含SEQIDNO:34、33、35、36、37、42、45、56、61、63或96的至少8个核石咸基的部分，其中所述寡核苷酸包含长度为12个、13个、14个、15个、16个、17个或18个核碱基的脱氧核普酸区域，所述脱氧核普酸区域在其5，和3'末端上与1-4个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接，并且其中所述寡核苷酸与GCCR特异性杂交且减少GCCR的表达。2.权利要求1的反义寡核苷酸，其中在所述5，和3'末端上与所述脱氧核苷酸区域侧接的所述核普酸数目相同。3.权利要求1的反义寡核苷酸，其中在所述5，和3'末端上与所述脱氧核苦酸区域侧接的所述核苷酸数目不同。4.权利要求1的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。5.权利要求1的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-曱基胞嘧口定。6.权利要求1的反义寡核苷酸，其具有SEQIDNO:37的核碱基序列。7.权利要求6的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上与2个2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域。8.权利要求7的反义寡核苷酸，其中至少一个核普间键是硫代磷酸酯键。9.权利要求7的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-曱基胞嘧咬。10.权利要求6的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上与3个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域。11.权利要求10的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。12.权利要求10的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。13.权利要求6的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3，末端上与4个2，-0-(2-甲氧乙基)核苦酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域。14.权利要求13的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。15.权利要求13的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧咬。16.权利要求6的反义寡核苷酸，其特征在于在5'和3，末端上与1个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。17.权利要求16的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。18.权利要求16的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧。定。19.权利要求6的反义寡核苦酸，其特征在于在5，和3，末端上与1个或2个2，-0-(2-曱氧乙基)核苦酸侧接的17个脱氧核普酸的区域。20.权利要求19的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。21.权利要求19的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。22.权利要求1的反义寡核苷酸，其具有SEQIDNO:33的核碱基序列。23.权利要求22的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上与2个2，-0-(2-甲氧乙基)核普酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域。24.权利要求23的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。25.权利要求23的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。26.权利要求22的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上与3个2，-0-(2-甲氧乙基)核苦酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域。27.权利要求26的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。28.权利要求26的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。29.权利要求22的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上与4个2，-0-(2-曱氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域。30.权利要求29的反义寡核苷酸，其中至少一个核苦间键是硫代磷酸酯键。31.权利要求29的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧咬。32.权利要求22的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3，末端上与1个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的18个脱氧核苷酸的区域。33.权利要求32的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。34.权利要求32的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧咬。35.权利要求22的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3，末端上与1个或2个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域。36.权利要求35的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。37.权利要求35的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。38.权利要求1的反义寡核苷酸，其具有SEQIDNO:45的核碱基序列。39.权利要求38的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3，末端上与2个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的16个脱氧核苷酸的区域。40.权利要求39的反义寡核苷酸，其中至少一个核苦间键是硫代磷酸酯键。41.权利要求39的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。42.权利要求38的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3，末端上与3个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的14个脱氧核苷酸的区域。43.权利要求42的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。44.权利要求42的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。45.权利要求38的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上与4个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的12个脱氧核苷酸的区域。46.权利要求45的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。47.权利要求45的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-甲基月包嘧啶。48.权利要求38的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上与1个2，-0-(2-甲氧乙基)核普酸侧接的18个脱氧核苦酸的区域。49.权利要求48的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。50.权利要求48的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。51.权利要求38的反义寡核苷酸，其特征在于在5，和3'末端上与1个或2个2，-0-(2-甲氧乙基)核苷酸侧接的17个脱氧核苷酸的区域。52.权利要求51的反义寡核苷酸，其中至少一个核苷间键是硫代磷酸酯键。53.权利要求51的反义寡核苷酸，其中至少一个胞嘧啶是5-曱基胞嘧啶。54.—种药物组合物，其包含权利要求1的反义寡核苷酸并任选包含药学上可接受的载体、稀释剂、增强剂或赋形剂。55.—种减少细胞或组织中的糖皮质激素受体表达的方法，其包括使所述细胞或组织与权利要求54的药物组合物接触。56.权利要求55的方法，其中所述组织是脂肪或肝组织。57.—种治疗动物中由糖皮质激素表达介导的疾病或状况的方法，其包括使所述动物与有效量的权利要求54的药物组合物接触。58.权利要求57的方法，其中所述疾病或状况是糖尿病、肥胖、代谢综合征X、高血糖症或高脂血症。59.权利要求57的方法，其中所述疾病是2型糖尿病。60.权利要求57的方法，其中所述疾病是与升高的血胆固醇或升高的血甘油三酯水平相关的高脂血症。61.权利要求57的方法，其中所述状况是肝脂肪变性。62.权利要求61的方法，其中所述脂肪变性是脂肪肝。63.权利要求61的方法，其中所述脂肪变性是非酒精性脂肪肝。64.—种降低动物中的血糖水平的方法，其包括给所述动物施用治疗有效量的权利要求54的药物组合物。65.权利要求64的方法，其中所述动物是人。66.权利要求64的方法，其中所述血糖水平是空腹血糖水平。67.—种降低动物中的血脂水平的方法，其包括给所述动物施用治疗有效量的权利要求54的药物组合物。68.权利要求67的方法，其中所述血脂水平是血胆固醇水平。69.权利要求67的方法，其中所述血脂水平是血甘油三酯水平。70.—种降低动物中的肝脏甘油三酯水平的方法，其包括给所述动物施用治疗有效量的权利要求54的药物组合物。71.—种减少动物中的体脂量的方法，其包括给所述动物施用治疗有效量的权利要求54的药物组合物。72.—种减少或改善动物中的胰岛素敏感性的方法，其包括给所述动物施用治疗有效量的权利要求54的药物组合物。73.—种抑制动物中的肝葡萄糖排出的方法，其包括给所述动物施用治疗有效量的权利要求54的药物组合物。74.—种延迟或预防动物中的血脂或血糖水平开始增加的方法，其包括给所述动物施用治疗有效量的权利要求54的药物组合物。75.—种治疗具有代谢疾病或状况的动物的方法，其包括给所述动物施用与选自下述的抗糖尿病剂组合的权利要求1的化合物PPAR激动剂，包括PPAR-Y、双PPAR或全PPAR激动剂、二肽基肽酶(IV)抑制剂、GLP-1类似物、胰岛素和胰岛素类似物、胰岛素促分泌素、SGLT2抑制剂、人胰淀素类似物，包括普兰林肽、葡萄糖激酶活化剂、双胍和a-葡萄糖苷酶抑制剂，以达到附加的疗效。全文摘要提供了用于调节糖皮质激素受体表达的化合物、组合物和方法。组合物包括具有特别的体内性质，靶向编码糖皮质激素受体的核酸的反义化合物，特别是反义寡核苷酸。提供了使用这些化合物用于调节糖皮质激素受体表达和用于治疗疾病的方法。文档编号C07H21/00GK101313066SQ200680043242公开日2008年11月26日申请日期2006年9月19日优先权日2005年9月19日发明者B·P·莫尼亚,L·沃茨,R·麦凯,S·M·弗赖尔,S·巴诺特申请人:强生医药研究及开发有限责任公司