专利名称：一种初步纯化丹酚酸b转化原料的方法
技术领域：
本发明涉及一种初步纯化丹酚酸B转化原料的方法。
背景技术：
丹参是我国心脑血管病的基本治疗药物，因疗效确切，丹参已成为我国用量最大 (1. 5万吨/年)、销售额最高、制剂生产厂最多的中药(制剂生产厂960家，剂型主要有丹参滴丸、丹参注射液、丹参片、丹参颗粒、丹参冲剂和丹参胶囊)，此外丹参还与其它药材组方，还用于治疗肺心病、高脂血症、高血粘度综合征、哮喘、支气管肺炎、肝炎、肝硬化、肾病综合征、关节炎、糖尿病循环障碍、各种细菌性和病毒性感染、抗内毒素、肿瘤、硬皮病、皮肤炎、银屑病、过敏性紫癜、红斑狼疮、血栓闭塞性脉管炎、痤疮、难治性癫痫、视网膜病变等多种疾病。丹参的主要有效成分是丹酚酸。现代药理研究表明，丹酚酸是以抗氧化、抗炎(通过NF-κ β途径抑制多种炎性细胞因子表达)为特点、同时具有保护脉管内皮细胞、降脂、 升高高密度脂蛋白、保护心肌缺血缺氧、扩张冠脉血管、改善微循环、抑制血小板聚集、抑制纤维蛋白原合成、激活纤溶、抑制血栓形成、螯合钙铁离子等多种药理作用。在所有已知酚类化合物中(包括黄酮类化合物)丹酚酸类化合物的抗氧化活性最强，其中又以丹酚酸 A(salvianolic acid A，SA)的活性最佳〔《中草药现代研究》II，1996，498-533. Yi Yang Hu et al. ， World JGastroentero,2000 ；6 (3) :402-404. Cheng Hai Liu et al. ， World J Gastroentero,2000 ；6 (3) :361-364. Yun-Lian Lin et al. J. Nat. Prod. 2002,65,745-747. Lin YL et al. . J. Ethnopharmaco1. 2005.Chen YF et al. . J. Chromatogr A.2005 ； 1088(1-2) :140-5. Hsu YC et al. . J Biomed Sci. 2005 ；12(1) :185-95. Lay IS et al.. J Surg Res. 2003 ；115 (2) :279-85. Lay IS et al. . Planta Med. 2003 ；69(1) :26-32. Chen YL et al. . J CellBiochem. 2001 ；83 (3) :484-93. Chen YH et al. . J Cell Biochem. 2001 ； 82(3) :512-21. Hung HH et al. . Histol Histopathol. 2001 ；16(1) :175-83. Wu YJ et al.. ArteriosclerThromb Vasc Biol. 1998 ；18(3) :481-6.〕，但是，丹参中丹酚酸 A 的天然含量及其纯化技术一直制约着丹酚酸A的研发。丹参水提物中酚酸类化合物以丹酚酸B为主，还有少量的丹A、紫草酸、迷迭香酸、 丹酚酸C、D和E。紫草酸可转化为丹A，其它酚酸在转化过程可通过自身的降解对丹A起保护作用。丹参水提物中存在丹A邻近杂质，由丹酚酸B转化丹A也会生成新的丹A邻近杂质。并且由于转化反应的关键因素是反应体系的pH和反应温度。pH过高，对酚酸类化合物破坏严重，PH过低，转化反应基本不发生。在转化反应可发生的pH范围内，转化收率与反应温度密切相关，是产物生成与破坏的平衡结果。在转化反应可发生的PH范围内，反应体系由室温升至转化温度的过程中，大量的丹酚酸B巳被破坏。因此，将丹参水提物进行初步纯化后再转化将有利于丹酚酸A的整个制备过程。 初步纯化丹参水提物的工艺目的是除去水溶杂质(包括铁、铜、铝、钙等金属离子)、前沿
3杂质和拟“胶体”类杂质。拟“胶体”类杂质是从色谱行为上对植物中目前尚未给出明确化学表征的一类物质。该类物质在正相和反相TLC上均主要集中于原点，却又少量全程分布于正相和反相TLC 上；在TLC上没有明确的斑点，在HPLC又无明确的UV吸收峰；在任何极性的洗脱液洗脱时， 都有少量被洗脱。这一独特的行为使拟“胶体”类杂质去除成为天然产物分离纯化关键问题之一，特别是对那些不能结晶的化合物。它的去除与否在很大程度上决定了目标化合物的纯度是否满足药用要求。作为口服制剂，只有在肠道游离的目标化合物才能被吸收，胶体与目标化合物相互作用强，影响生物利用度；作为注射剂，刺激、过敏、凝聚试验和异常毒性均可能与这类物质密切相关。因此，综上所述，尽管热处理丹参提取物制备丹酚酸A的技术尽管基本解决了丹酚酸A的来源问题，但仍然存在转化率低，对后分离纯化不利和分离纯化收率低的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种初步纯化丹酚酸B原料的方法，从而有利于丹酚酸A 后续的分离，更有利于提高丹酚酸B转化制备丹酚酸A的产率。经过系统的筛选和优化，本发明提供了一种初步纯化丹酚酸B转化原料的方法， 其中初步纯化丹酚酸B采用联合色谱法，所述联合色谱法为大孔树脂前沿色谱与大孔树脂置换色谱联用，所述前沿色谱填料为对丹酚酸B吸附率小、洗脱率高的大孔吸附树脂 ADS-5、D101或DM130，所述置换色谱填料为吸附率和洗脱率均高的大孔吸附树脂HPD100或 ADS-8，前沿色谱填料与置换色谱的填料重量比为(1 2) 4。优选的，前沿色谱填料与置换色谱的填料重量比为1 4。优选的，丹参酚酸B与置换色谱填料的重量比为1 (10 30)。更优选的，丹参酚酸B与置换色谱填料的重量比为1 20优选的，前沿色谱填料为ADS-5，置换色谱填料为HPD100。其中，纯化丹酚酸B的色谱联用方法是前沿色谱柱与置换色谱柱串联，将PH为 3.0的丹参提取物水溶液按先前沿色谱柱后置换色谱柱的顺序上样后，用去离子水洗脱 3 5个柱体积，断开两柱，置换色谱柱用水溶液洗脱2 3个柱体积收集丹酚酸B。优选的，洗脱置换色谱柱用的水溶液为浓度> 70%的甲醇或乙醇或丙醇的水溶液。其中，经联合色谱法初步纯化的转化原料，其中丹酚酸B > 50%，且原料丹酚酸B 浓度为0. 5% 2%。本发明通过提供一种初步纯化丹酚酸B原料的方法，从而有利于丹酚酸A后续的分离，更有利于提高丹酚酸B转化制备丹酚酸A的产率。采用本发明的初步纯化的丹参提取物为转化原料，既除去了不利于转化的金属离子成分，又除去了大部分不利于丹酚酸后续分离的“拟胶体”杂质和前沿杂质。使用本方法制备的丹酚酸B定向转化丹酚酸A的转化率> 10%,甚至达60%，显著提高了丹酚酸A的产率。
图1联合色谱操作的流程图
具体实施例方式发明提供了一种初步纯化丹酚酸B转化原料的方法，其中初步纯化丹酚酸B采用联合色谱法，所述联合色谱法为大孔树脂前沿色谱与大孔树脂置换色谱联用，所述前沿色谱填料为对丹酚酸B吸附率小、洗脱率高的大孔吸附树脂ADS-5、DlOl或DM130，所述置换色谱填料为吸附率和洗脱率均高的大孔吸附树脂HPD100或ADS-8，前沿色谱填料与置换色谱的填料重量比为(1 幻4。具体的，前沿色谱的填料与置换色谱的填料重量比可以采用如下表1所示，但并不局限于表1所示的具体实施方式
。表1:
前沿色谱的填料置换色谱的填料2 4前沿色谱的填料置换色谱的填料1. 9 4前沿色谱的填料置换色谱的填料1. 8 4前沿色谱的填料置换色谱的填料1. 7 4前沿色谱的填料置换色谱的填料1. 6 4前沿色谱的填料置换色谱的填料1. 5 4前沿色谱的填料置换色谱的填料1. 33 4(1 3)前沿色谱的填料置换色谱的填料1. 2 4前沿色谱的填料置换色谱的填料1. 1 4前沿色谱的填料置换色谱的填料1 4优选的，前沿色谱填料与置换色谱的填料重量比为1 4。优选的，丹参酚酸B与置换色谱填料的重量比为1 (10 30)，具体的，丹参酚酸B与置换色谱的填料重量比可以采用如下表2所示，但并不局限于表2所示的具体实施方式
。表2
丹参酚酸B 置换色谱的填料1 10丹参酚酸B 置换色谱的填料1 12丹参酚酸B 置换色谱的填料1 15丹参酚酸B 置换色谱的填料1 18
权利要求
1.一种初步纯化丹酚酸B转化原料的方法，其中初步纯化丹酚酸B采用联合色谱法，所述联合色谱法为大孔树脂前沿色谱与大孔树脂置换色谱联用，所述前沿色谱填料为对丹酚酸B吸附率小、洗脱率高的大孔吸附树脂ADS-5、DlOl或DM130，所述置换色谱填料为吸附率和洗脱率均高的大孔吸附树脂HPD100或ADS-8，前沿色谱填料与置换色谱的填料重量比为(1 2) 4。
2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于前沿色谱填料与置换色谱的填料重量比为 1 4。
3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于丹参酚酸B与置换色谱填料的重量比为 1 (10 30)。
4.按照权利要求3所述的方法，其特征在于丹参酚酸B与置换色谱填料的重量比为 1 20
5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于前沿色谱填料为ADS-5，置换色谱填料为 HPD100。
6.按照权利要求1所述的方法，其特征在于纯化丹酚酸B的色谱联用方法是前沿色谱柱与置换色谱柱串联，将PH为3. 0的丹参提取物水溶液按先前沿色谱柱后置换色谱柱的顺序上样后，用去离子水洗脱3 5个柱体积，断开两柱，置换色谱柱用水溶液洗脱2 3 个柱体积收集丹酚酸B。
7.按照权利要求6所述的方法，其特征在于，洗脱置换色谱柱用的水溶液为浓度 ^ 70%的甲醇或乙醇或丙醇的水溶液。
8.按照权利要求1所述的方法，其特征在于经联合色谱法初步纯化的转化原料，其中丹酚酸B彡50 %，且原料丹酚酸B浓度为0. 5 % 2 %。
全文摘要
本发明提供了一种初步纯化丹酚酸B转化原料的方法，其中初步纯化丹酚酸B采用联合色谱法，所述联合色谱法为大孔树脂前沿色谱与大孔树脂置换色谱联用，所述前沿色谱填料为对丹酚酸B吸附率小、洗脱率高的大孔吸附树脂ADS-5、D101或DM130，所述置换色谱填料为吸附率和洗脱率均高的大孔吸附树脂HPD100或ADS-8，前沿色谱填料与置换色谱的填料重量比为(1～2)∶4。本发明以尿素为催化剂的转化方法，大大缩短了丹酚酸B处于易破坏状态的时间，显著提高了丹酚酸A的产率。使用本方法制备的丹酚酸B定向转化丹酚酸A的转化率≥10％，甚至达60％，显著提高了丹酚酸A的产率。
文档编号C07C69/732GK102212050SQ20101014368
公开日2011年10月12日 申请日期2010年4月6日 优先权日2010年4月6日
发明者何克江, 刘军锋, 刘珂, 张祁, 陈栋, 韩飞 申请人:山东靶点药物研究有限公司, 海南鑫鸿凯实业有限公司