专利名称：一种亥茅酚苷的分离纯化方法
技术领域：
本发明属于中药有效成分的分离纯化技术领域，具体涉及一种亥茅酚苷的分离纯化方法。
背景技术：
防风为伞形科植物防风 Saposhnikovia divaricata(Turcz.) Schischk.的干燥根。是我国常用大宗药材之一，具有解表祛风、胜湿、止痉功能，用于感冒头疼、风湿痹痛、风疹瘙痒、破伤风等治疗。防风主要的活性成分为升麻素苷、升麻素、5-0-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷等色原酮类以及多糖、香豆素类等，现代药理研究表明防风色原酮具有解热、镇痛、抗炎、抗肿瘤、抗血小板聚集等多种功效，用于治疗脑震荡、小儿呼吸道感染、过敏性皮炎、面神经炎、牙痛等。迄今为止，防风色原酮的药理活性、应用及其制备方法研究较少。专利200710001127. 5提供了一种防风总色原酮提取物及其制备方法，该发明通过溶剂萃取、 大孔吸附树脂法等多种防风制备获得总色原酮含量5-100%的总色原酮提取物，但并未对各个单体成分进行分离纯化，只是混合物。本发明通过对亥茅酚苷的提取纯化为亥茅酚苷的含量测定提供有效的对照品来源，从而为防风及其制剂的指标物的测定、更全面反应其内在质量奠定了基础。
发明内容
本发明的目的在于提供一种亥茅酚苷的分离纯化方法。本发明通过对亥茅酚苷的提纯工艺进行全面的考察，确定了最佳的纯化工艺，成功对亥茅酚苷进行了分离提纯。本发明的目的是通过以下技术方案实现的一种亥茅酚苷的分离纯化方法，其特征在于包含以下步骤将防风色原酮提取物加入甲醇、乙醇、丙酮或它们的混合溶剂，加热回流溶解，回收试剂至总体积的1/10-6/10， 加入大孔树脂柱吸附，水洗柱至糖反应为阴性，再以50-80%乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩成浸膏，依次以石油醚、乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩至浸膏状，将浸膏通过凝胶柱层析分离纯化，甲醇、丙酮或乙醇水溶液洗脱，收集下注液，薄层检测，合并相同流分，低温干燥，丙酮重结晶，减压抽滤、冷冻干燥或冷喷雾得亥茅酚苷。所述防风色原酮提取物为总色原酮含量5-20%的提取物。所述加热回流溶解时间为1-4小时，温度为60_85°C。所述大孔树脂型号可选D140、HPD100、HPD600、HPD700中的一种，洗脱剂用量为 3-8BV，柱层析次数为1-3次。所述萃取步骤中石油醚的用量为浸膏体积的2-4倍，乙酸乙酯的用量为浸膏体积的3-6倍。所述凝胶柱层析柱填料包括kphadex LH-20, Sephadex G, Toyopearl 冊_40。所述凝胶柱层析洗脱条件为甲醇、丙酮或乙醇水溶液洗脱，体积百分比为 50-100%。
本方法利用大孔树脂和凝胶层析柱分离等方法，从低纯度的防风总色原酮提取物中分离得到含量大于95%的亥茅酚苷。该方法工艺简单、收率高、适合小规模生产，在分离纯化过程可分离得到其他色原酮单体成分，达到联产、提高经济效益的目的。
具体实施例方式以下将结合实施例对发明作进一步说明，但并不限制本发明的范围。实施例1 取500g防风色原酮提取物，用2. 5L90%乙醇加热回流提取，温度控制在70°C左右，提取2次，合并提取液，减压回收试剂至500ml，加入柱体积为IL的D140大孔树脂柱吸附，上柱流速0. 6BV/h,吸附饱和后用水洗脱至糖反应为阴性，再以60 %乙醇洗脱，流速1. OL/h,收集富含亥茅酚苷的洗脱液，减压浓缩至相对密度为1. 15，加IOOml石油醚萃取，萃取2次，弃去萃取液，再用150ml乙酸乙酯萃取2次，减压浓缩，加入预处理好的 Toyopearl HW-40 (200g)柱层析，用80%甲醇水溶液洗脱，薄层监测，收集目标成分流出液， 合并相同流分，低温干燥，得粗晶，丙酮重结晶得产品，含量95. 74%。实施例2:取500g防风色原酮提取物，用2.0L70%丙酮加热回流提取，温度控制在65°C左右，提取3次，合并提取液，减压回收试剂至500ml，加入柱体积为IL的HPD600大孔树脂柱吸附，上柱流速0. 7BV/h，吸附饱和后用水洗脱至糖反应为阴性，再以80%乙醇洗脱，流速 1. OL/h,收集富含亥茅酚苷的洗脱液，减压浓缩至相对密度为1. 18，加120ml石油醚萃取， 萃取2次，弃去萃取液，再用180ml乙酸乙酯萃取2次，减压浓缩，加入预处理好的kphadex G(200g)柱层析，用60%乙醇水溶液洗脱，薄层监测，收集目标成分流出液，合并相同流分， 低温干燥，得粗晶，丙酮重结晶得产品，含量96. 。实施例3:取IOOOg防风色原酮提取物，用5L90%甲醇加热回流提取，温度控制在80°C，提取2次，合并提取液，减压回收试剂至500ml，加入柱体积为IL的D140大孔树脂柱吸附， 上柱流速0. 5BV/h，吸附饱和后用水洗脱至糖反应为阴性，再以75%乙醇洗脱，流速1.0L/ h，收集富含亥茅酚苷的洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.20，加170ml石油醚萃取，萃取 2次，弃去萃取液，再用200ml乙酸乙酯萃取2次，减压浓缩，加入预处理好的Toyopearl HW-40(400g)柱层析，用70%丙酮水溶液洗脱，薄层监测，收集目标成分流出液，合并相同流分，低温干燥，得粗晶，丙酮重结晶得产品，含量95. 87%。实施例4 取1500g防风色原酮提取物，用6L80%丙酮加热回流提取，温度控制在75°C左右， 提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收试剂至500ml，加入柱体积为2L的HPD100大孔树脂柱吸附，上柱流速0. 7BV/h,吸附饱和后用水洗脱至糖反应为阴性，再以60%乙醇洗脱，流速1. OL/h，收集富含亥茅酚苷的洗脱液，减压浓缩至相对密度为1. 17，加150ml石油醚萃取，萃取2次，弃去萃取液，再用300ml乙酸乙酯萃取2次，减压浓缩，加入预处理好的 SephadexLH-20(700g)柱层析，用60%甲醇水溶液洗脱，薄层监测，收集目标成分流出液， 合并相同流分，低温干燥，得粗晶，丙酮重结晶得产品，含量96. 13%。实施例5
取2500g防风色原酮提取物，用7. 5L75 %乙醇加热回流提取，温度控制在60°C 左右，提取2次，每次2. 5小时，合并提取液，减压回收试剂至500ml，加入柱体积为2L的 HPD600大孔树脂柱吸附，上柱流速0. 6BV/h,吸附饱和后用水洗脱至糖反应为阴性，再以 70%乙醇洗脱，流速1.0L/h，收集富含亥茅酚苷的洗脱液，减压浓缩至相对密度为1. 12，加 500ml石油醚萃取，萃取2次，弃去萃取液，再用400ml乙酸乙酯萃取2次，减压浓缩，加入预处理好Wkphadex G(Ikg)柱层析，用50%乙醇水溶液洗脱，薄层监测，收集目标成分流出液，合并相同流分，低温干燥，得粗晶，丙酮重结晶得产品，含量96. 22%。实施例6 取5000g防风色原酮提取物，用25L85%甲醇加热回流提取，温度控制在85°C 左右，提取3次，每次1. 5小时，合并提取液，减压回收试剂至500ml，加入柱体积为3L的 HPD700大孔树脂柱吸附，上柱流速0. 8BV/h,吸附饱和后用水洗脱至糖反应为阴性，再以 80%乙醇洗脱，流速1.0L/h，收集富含亥茅酚苷的洗脱液，减压浓缩至相对密度为1. 13，加 800ml石油醚萃取，萃取2次，弃去萃取液，再用IL乙酸乙酯萃取2次，减压浓缩，加入预处理好的kphadex LH-20(2kg)柱层析，用80%丙酮水溶液洗脱，薄层监测，收集目标成分流出液，合并相同流分，低温干燥，得粗晶，丙酮重结晶得产品，含量95. 79%。
权利要求
1.一种亥茅酚苷的分离纯化方法，其特征在于包含以下步骤将防风色原酮提取物加入甲醇、乙醇、丙酮或它们的混合溶剂，加热回流溶解，回收试剂至总体积的1/10-6/10，加入大孔树脂柱吸附，水洗柱至糖反应为阴性，再以50-80%乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩成浸膏，依次以石油醚、乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩至浸膏状，将浸膏通过凝胶柱层析分离纯化，甲醇、丙酮或乙醇水溶液洗脱，收集下注液，薄层检测，合并相同流分， 低温干燥，丙酮重结晶，减压抽滤、冷冻干燥或冷喷雾得亥茅酚苷。
2.根据权利要求1所述亥茅酚苷的分离纯化方法，其特征在于所述防风色原酮提取物为总色原酮含量5-20%的提取物。
3.根据权利要求1所述亥茅酚苷的分离纯化方法，其特征在于所述加热回流溶解时间为1-4小时，温度为60-85°C。
4.根据权利要求1所述亥茅酚苷的分离纯化方法，其特征在于所述大孔树脂型号可选 D140、HPD100、HPD600、HPD700中的一种，洗脱剂用量为3-8BV，柱层析次数为1_3次。
5.根据权利要求1所述亥茅酚苷的分离纯化方法，其特征在于所述萃取步骤中石油醚的用量为浸膏体积的2-4倍，乙酸乙酯的用量为浸膏体积的3-6倍。
6.根据权利要求1所述亥茅酚苷的分离纯化方法，其特征在于所述凝胶柱层析柱填料包括 S印hadex LH-20、S印hadex G、Toyopearl HW_40o
7.根据权利要求1所述亥茅酚苷的分离纯化方法，其特征在于所述凝胶柱层析洗脱条件为甲醇、丙酮或乙醇水溶液洗脱，体积百分比为50-100%。
全文摘要
本发明涉及一种亥茅酚苷的分离纯化方法，其特征是通过大孔树脂吸附和凝胶柱层析法从防风色原酮提取物中分离纯化亥茅酚苷的方法。所述方法以市售防风色原酮提取物为原料，包括溶剂回流溶解，树脂吸附、有机溶剂萃取、凝胶柱层析分离纯化、重结晶等步骤，其特征在于以甲醇、乙醇、丙酮或它们的混合溶剂为溶解溶媒，加热回流1-3小时，经树脂吸附分离得到富集亥茅酚苷的部位，再经凝胶柱层析分离纯化亥茅酚苷。本发明所述的亥茅酚苷的提取方法简单，重现性高，干燥温度低，产品质量好，纯度高。
文档编号C07H17/07GK102532220SQ201010603919
公开日2012年7月4日 申请日期2010年12月24日 优先权日2010年12月24日
发明者刘东锋, 李法庆 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司