专利名称：熊果酸酯衍生物及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及熊果酸的衍生物、熊果酸衍生物的制备方法及熊果酸衍生物的用途。
背景技术：
熊果酸(Ursolid Acid,简称UA)即3 β -羟基-熊果-12-烯-28-酸 (3 β -hydroxy-urs-12-en-28-oic acid)，属于五环三萜类化合物，它是自然界中分布较广 的天然活性化合物，如杜鹃花科植物雄果的叶、果实，玄参科植物毛泡桐的叶，茜草科植物 桅子的果实、龙胆科植物湿生蕾、木樨科植物女贞的叶，紫威科植物毛子草的地上部分等多 种不同科、属植物中、其结构式如下所示<formula>formula see original document page 4</formula>研究表明熊果酸具有抗肿瘤、抗炎，保肝，镇静，抗氧化等多种生物活性。它不仅对 多种致癌，促癌物质有抵抗作用，而且能限制多种恶性肿瘤细胞的生长，1990年被日本列为 最有希r望的癌化学预防药物之一。由于越来越受到人们的重视，不少人对其进行药理机 制研究、结构修饰，从而开发出了一系列药物。例如，公开号为CN1916015A、CN101161670A、 CN101157715A的专利申请中，报道了熊果酸衍生物对宫颈癌细胞的抑制活性；公开号为 CN1589799A的专利申请中，报道熊果酸在制备抗癌药中的应用；公开号为CN101020062A的 专利申请中，报道了通过对熊果酸结构修饰改变它的水溶性和溶血性，当今世界，恶性肿瘤 已成为仅次于心血管疾病的第二大人类致死病因，当今抗肿瘤药物研发已经成为热点之一 因此，开发出更多的具有抗肿瘤活性的熊果酸衍生物有着重要的意义。
发明内容
本发明的目的是以熊果酸为先导化合物，合成熊果酸衍生物，以便开发出新的具 有更好药理活性的抗肿瘤类药物。本发明所述熊果酸衍生物为熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5- 二氢-5-苯酚 酯和熊果酸4’ -取代基-4-查尔酮酯，其特征在于结构式如下<formula>formula see original document page 5</formula>所述烃基为甲基(Me)；所述醚为甲醚(MeO)；所述卤素为氟或氯。本发明通过实验证明熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5- 二氢-5-苯酚酯和熊 果酸4’-取代基-4-查尔酮酯与熊果酸相比，部分化合物抗肿瘤活性更强，可以作为抗肿瘤 药物的药用活性成分开发出药效更好的新药。本发明所述熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5- 二氢-5-苯酚酯和熊果酸4’-取 代基-4-查尔酮酯的制备方法是利用对羟基苯甲醛与苯乙酮或取代苯乙酮在乙醇的氢氧 化钠溶液中发生施密特_克莱森缩合得到4’ -取代基-4-羟基查尔酮；在冰乙酸存在下， 4’ _取代基-4-羟基查尔酮与水合胼发生1,4-Michael加成，经关环、分子内脱水，酯化得 到熊果酸衍生物熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基_4，5- 二氢-5-苯酚酯和熊果酸4’ -取代 基-4-查尔酮酯，其反应式如下
<formula>formula see original document page 5</formula><formula>formula see original document page 6</formula>上述反应式中，1:对羟基苯甲醛5:熊果酸(UA)2a:苯乙酮3a :4_羟基查尔酮4a 4-(1-乙酰基_3_苯基_4，5_ 二氢_2_吡唑啉_5_基)苯酚6a:熊果酸4-查尔酮酯7a 熊果酸1-乙酰基-3-苯基-4，5_ 二氢_5_苯酚酯2b :4-甲基苯乙酮3b :4’ -甲基-4-羟基查尔酮的合成4b 4-(1-乙酰基-3-对甲基苯基-4，5- 二氢_2_吡唑啉_5_基)苯酚6b 熊果酸4’ -甲基-4-查尔酮酯7b 熊果酸1-乙酰基-3-对甲苯基-4，5- 二氢_5_苯酚酯
2c 4-甲氧基苯乙酮3c :4，-甲氧基-4-羟基查尔酮
4c 4-(1-乙酰基-3-对甲氧基苯基-4，5- 二氢_2_吡唑啉_5_基)苯酚6c 熊果酸4’ -对甲氧基-4-查尔酮酯7c 熊果酸1-乙酰基-3-对甲氧基苯基-4，5- 二氢_5_苯酚酯2d :4_氯苯乙酮3d :4，-氯-4-羟基查尔酮4d 4-(1-乙酰基-3-对氯苯基-4，5_ 二氢_2_吡唑啉_5_基)苯酚6d 熊果酸4，-氯-4-查尔酮酯7d 熊果酸1-乙酰基-3-对氯苯基-4，5- 二氢_5_苯酚酯2e:4_氟苯乙酮3e :4，-氟-4-羟基查尔酮4e 4-(1-乙酰基_3_对氟苯基_4，5_ 二氢_2_吡唑啉_5_基)苯酚6e 熊果酸4，-氟-4-查尔酮酯7e 熊果酸1-乙酰基-3-对氟苯基_4，5_ 二氢_5_苯酚酯从上述反应式可以看出，具有如下的工艺步骤(1)4’ -取代基-4-羟基查尔酮的合成。原料及其配方对羟基苯甲醛和苯乙酮或对位取代苯乙酮以及氢氧化钠的摩尔数之比为 1:1:1。溶剂乙醇；工艺步骤于常压、0°C 5°C将苯乙酮或取代苯乙酮加入溶剂中，在磁力搅拌下加入固体 NaOH，缓慢滴加对羟基苯甲醛的乙醇溶液，在搅拌下反应11小时 12小时；反应结束后，用 稀盐酸将反应液调至PH = 6 7，然后将反应物倒入冰水中，静置，抽滤，乙醇重结晶。得到 4’-取代基-4-羟基查尔酮；(2) 4- (1-乙酰基-3-取代苯基-4，5_ 二氢_2_吡唑啉_5_基)苯酚的合成原料及其配方4’ -取代基-4-羟基查尔酮与水合胼的摩尔数之比为1 4，溶剂冰乙酸；工艺步骤于常压、室温向反应容器中分别加入4-取代基-4-羟基查尔酮、水合胼、冰乙酸， 加热回流反应6小时 8小时；反应结束后，冷却至室温，将反应液倒入冰水中，静置，抽滤， 水洗至中性，二氯甲烷洗涤得到4- (1-乙酰基-3-取代苯基-4，5- 二氢-2-吡唑啉-5-基) 苯酚；(3)熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5- 二氢_5_苯酚酯和熊果酸4’ -取代 基-4-查尔酮酯的合成原料及其配方熊果酸、三氟醋酸酐和4- (1-乙酰基-3-取代苯基-4，5- 二氢_2_吡唑啉_5_基)苯酚或4’ -取代基-4-羟基查尔酮的摩尔数之比为1 4 1.2;溶剂①甲苯、②丙酮；工艺步骤于室温，常压将熊果酸溶于甲苯中，在磁力搅拌下加入三氟醋酸酐，继续搅拌 0. 5h，然后向反应器中加入三氟醋酸酐和4- (1-乙酰基-3-取代苯基-4，5- 二氢-2-吡唑 啉-5-基)苯酚或4’ -取代基-4-羟基查尔酮，加热回流7小时 9小时；反应液冷至室 温浓缩，然后溶于丙酮，滴加10%的NaOH溶液将反应液调至PH = 8 9，搅拌下反应22小 时 24小时，反应结束后，反应液通过浓缩，萃取，柱层析分离纯化得权利要求1所述结构 式的熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基_4，5- 二氢-5-苯酚酯和熊果酸4’ -取代基-4-查尔 酮酯，结构式中，R为氢或烃基或醚或卤素。上述方法中，合成4’ -取代基-4-羟基查尔酮时，所用取代苯乙酮为4-甲基苯乙 酮、4-甲氧基苯乙酮、4-氟苯乙酮、4-氯苯乙酮中的一种。本发明具有以下有益效果1、本发明所述熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5- 二氢_5_苯酚酯和熊果酸 4’_取代基-4-查尔酮酯与熊果酸相比，部分化合物抗肿瘤活性更强，因而以其为药用活性 成分，可开发出疗效更好的多种抗肿瘤药物，具有明显的社会效益和经济效益。2、本发明所述方法工艺路线十分简单，成本较低，产物的收率较高，能适合于工业 化和扩大生产的需要。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明所述熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5- 二氢-5-苯 酚酯和熊果酸4’-取代基-4-查尔酮酯及其制备方法作进一步说明。下述实施例中，“TLC” 是指薄层色谱。实施例1 本实施例制备熊果酸4-查尔酮酯(简称6a)，其结构式如下
H hW-CH3
HacVSo
Η ηΑηΗ本实施例的工艺步骤如下(1) 4-羟基查尔酮(简称3a)的合成
HO-h~CH=CH-C~~^ )将反应容器放置在冰水浴中，将10. Ommol苯乙酮和15ml乙醇加入反应容器中，在 磁力搅拌下加入10. Ommol固体NaOH，缓慢滴加10. Ommol对羟基苯甲醛的乙醇溶液，在搅拌 下保持0°C 5°C反应12小时，TLC监测反应，反应结束后，用稀盐酸将反应液调至pH = 6 7，然后将反应物倒入冰水中，静置，抽滤，乙醇重结晶。得到4-羟基查尔酮(黄色粉末)。 产率89%, m. ρ· 180-182°0,^ NMR(400MHz, DMS0_d6) d :6· 83 8. 12(m，9H，PhH), 7. 72 (m, 2H，CH = CH)，10. 08(s，1Η，0Η) ；IR(KBr) ν :3224，3013，2894，1650，1559，1509，1348，1216， 1168,1040,977,832, 778,689cm_1 ；MS m/z ( % ) 247. 34([M+Na]+) ；HRMS (ESI)calcd for C15H12O2Na [M+Na]+247. 3491，found 247. 3512。(2)熊果酸4-查尔酮酯(简称6a，结构通式中R = H)的合成于室温，常压下将2. 5mmol熊果酸溶于IOml甲苯中，在磁力搅拌下加入1. 4ml三 氟醋酸酐，继续搅拌0. 5h，然后向反应器中加入3mmol 4-羟基查尔酮，加热回流8小时； TLC监测反应，反应结束后，反应液冷至室温浓缩，然后溶于丙酮，滴加10%的NaOH溶液将 反应液调至PH = 8 9，搅拌下反应22小时，TLC监测反应，反应结束后，反应液浓缩，然 后加入IOml水，乙酸乙酯3X5ml萃取，合并有机层，适量无水Na2SO4干燥，抽滤蒸出乙酸 乙酯，产物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚丙酮=5 1(V/V))得到熊果酸4-查尔酮 酉旨(黄色粉末)，产率62%，m. p. 128 ΠΟΓ/Η NMR(400MHz，CDCl3) d :0· 79 (s，3Η，CH3),
0.88 (s，3H, CH3)，0. 89 (d, J = 6. 4Hz,3H, CH3)，0. 94 (s, 3H, CH3)，0. 99 (d, J = 6. OHz，3H，CH3)，
1.14(s，3H，CH3)，1. 35 (t, J = 6. 4Hz, J = 4. 2Hz，2H，CH2)，1. 50 (t, J = 8. 4Hz, J = 7. 6Hz, 2H, CH2)，1.91(t，J = 4. 4Hz，2H，CH2)，2. 35 (d，J = 11. 2Hz, 1H, H-18)，5. 34 (s，1H，OH), 6. 98 7. 97(m，9H，PhH)，7. 45 (d, J = 12. OHz，1H, a_H)，7. 79 (d, J = 12. 5Hz, 1H, β -H)； IR(KBr) ν :3441，2869，1748，1700，1663，1601，1506，1453，1210，1162，1090，1024,976， 690cm_1 ；MS m/z(% ) :685. 42 ([M+Na]+) ；HRMS (ESI)calcd for C45H58O4Na[M+Na]+685. 4256， found 686. 4254。实施例2 本实施例制备熊果酸4’-甲基-4-查尔酮酯(简称6b)，其结构式如下
<formula>formula see original document page 9</formula>本实施例的工艺步骤如下(1)4’ -甲基-4-羟基查尔酮(简称3b)的合成
<formula>formula see original document page 9</formula>
将反应容器放置在冰水浴中，将10. Ommol对甲基苯乙酮和15ml乙醇加入反应 容器中，在磁力搅拌下加入10. Ommol固体NaOH，缓慢滴加10. Ommol对羟基苯甲醛的乙 醇溶液，在搅拌下保持0°C 5°C反应12小时，TLC监测反应，反应结束后，用稀盐酸将反 应液调至pH = 6 7，然后将反应物倒入冰水中，静置，抽滤，乙醇重结晶。得到4’ -甲 基-4-羟基查尔酮(黄色粉末)产率90%，m.p· Ιδθ-Ιδδ /Η NMR(400MHz, DMS0-d6) d
2.40 (s，3H, CH3)，6· 82 8· 05 (m, 8H, PhH) ,7. 71 (m, 2H, CH = CH)，10. 08 (s，1H, OH) ； IR (KBr)V :3217,3027,2813,2590,1648,1557,1511,1278,1172,1037,979,815cm_1 ；MS m/z( % ) 261. 38([M+Na]+) ；HRMS(ESI)calcd for C15H1202Na[M+Na]+261. 3819，found261. 3845。(2)熊果酸4’ -甲基-4-查尔酮酯(简称6b，结构通式中R = CH3)的合成。于室温，常压下将2. 5mmol熊果酸溶于IOml甲苯中，在磁力搅拌下加入1. 4ml三 氟醋酸酐，继续搅拌0.5h，然后向反应器中加入3mmol 4’ -甲基_4_羟基查尔酮，加热回 流8小时；TLC监测反应，反应结束后，反应液冷至室温浓缩，然后溶于丙酮，滴加10 %的 NaOH溶液将反应液调至PH = 8 9，搅拌下反应22小时，TLC监测反应，反应结束后，反 应液浓缩，然后加入IOml水，乙酸乙酯3X5ml萃取，合并有机层，适量无水Na2SO4干燥，抽 滤蒸出乙酸乙酯，产物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚丙酮=5 1(V/V))得到熊果酸 4，-甲基-4-查尔酮酯(黄色粉末)，产率:72%,m. p. 132 134°C/H NMR(400MHz,CDCl3) d:0. 79(s，3H，CH3) ,0. 89 (d, J = 6. 4Hz，3H，CH3) ,0. 90 (d, J = 6. 0Hz，3H，CH3) ,0. 99 (d, J = 6. 0Hz，3H，CH3)，1. 14(s，3H，CH3)，1. 35 (t, J = 6. 4Hz, J = 4. 2Hz，2H，CH2)，1. 50 (t, J = 8. 4Hz, J = 7. 6Hz，2H，CH2)，1.91(t，J = 4. 4Hz，2H，CH2)，2. 35 (d，J = 11. 2Hz, 1H, H-18)，5. 34 (s，1H, OH)，6. 98 7. 97 (m, 8H, PhH)，7. 45 (d, J = 12. OHz, 1Η, a_H)，7. 79 (d, J = 12·5Ηζ，1Η，β -H) ；IR(KBr) ν :3441，2925，2869，1748，1700，1663，1601，1506，1453， 1210,1162,1090,1024,976,690cm_1 ；MS m/z(% ) :699· 43 ([M+Na]+) ；HRMS (ESI)calcd for C46H6tlO4Na [M+Na]+699. 4384，found 699. 4403。实施例3 本实施例制备熊果酸4’-对甲氧基-4-查尔酮酯(简称6c)，其结构式
如下
<formula>formula see original document page 10</formula>本实施例的工艺步骤如下(1)4’ -甲氧基-4-羟基查尔酮(简称3c)的合成
<formula>formula see original document page 10</formula>将反应容器放置在冰水浴中，将10. Ommol对甲氧基苯乙酮和15ml乙醇加入反应 容器中，在磁力搅拌下加入10. Ommol固体NaOH，缓慢滴加10. Ommol对羟基苯甲醛的乙醇溶 液，在搅拌下保持0°C 5°C反应12小时，TLC监测反应，反应结束后，用稀盐酸将反应液调 至pH = 6 7，然后将反应物倒入冰水中，静置，抽滤，乙醇重结晶。得到4’-甲氧基-4-羟 基查尔酮(黄色粉末)，产率77% ；m. p. 178-180°C ；1H NMR(400MHz, DMS0_d6) d :3· 84 (s， 3H, OCH3), 6. 82 8. 15(m，9H，PhH), 7. 74(m，2H，CH = CH)，10. 06 (s, 1H, OH) ；IR(KBr) ν 3182,2931,2834,2582,1643，1601，1581，1553，1439，1345，1227，1167，1022,980,830cm_1 ； MS m/z( % ) :277. 38 ([M+Na]+) ；HRMS (ESI)calcd for C16H14O3Na[M+Na]+277. 3819，found277.3851。(2)熊果酸4’ -对甲氧基-4-查尔酮酯(简称6c，结构通式中R = OCH3)的合成于室温，常压下将2. 5mmol熊果酸溶于IOml甲苯中，在磁力 搅拌下加入1. 4ml三 氟醋酸酐，继续搅拌0.5h，然后向反应器中加入3mmol 4’ -甲氧基_4_羟基查尔酮，加热 回流8小时；TLC监测反应，反应结束后，反应液冷至室温浓缩，然后溶于丙酮，滴加10%的 NaOH溶液将反应液调至PH = 8 9，搅拌下反应22小时，TLC监测反应，反应结束后，反应液 浓缩，然后加入IOml水，乙酸乙酯3X5ml萃取，合并有机层，适量无水Na2SO4干燥，抽滤蒸 出乙酸乙酯，产物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚丙酮=5 1(V/V))得到熊果酸4’-甲 氧基-4-查尔酮酯(黄色粉末)，产率=74%, m.p. 120 122°C, 1H NMR(400MHz, CDCl3) d 0. 79(s，3H，CH3)，0· 88(s，3H，CH3)，0· 91 (d，J = 6. 4Hz，3H，CH3), 0. 94(s，3H，CH3) 0. 99 (d, J =6. 0Hz，3H，CH3)，1. 00 (s, 3H, CH3)，1. 33 (t, J = 6. 4Hz, J = 4. 2Hz,2H, CH2)，1. 52 (t, J = 8. 4Hz, J = 7. 6Hz，2H，CH2)，1.91(t，J = 4. 4Hz，2H，CH2)，2. 34 (d, J = 11. 2Hz, 1H, H-18)， 3.90(s，3H，OCH3) ,5. 34 (s, 1H, OH)，6. 98 8. 02 (m，8H，PhH)，7. 51 (d，J = 12. 0Hz, 1H, a-H) ,7. 79(d, J = 12. OHz,1H, β -H) ；IR(KBr) ν :3446，2925，2869，1747，1658，1601，1505， 1457，1212，1164，1025，974,83301^ ;MS m/z(% ) 715. 44([M+Na]+) ；HRMS(ESI)calcd for C46H6tlO5Na [M+Na]+715. 4416，found 715. 4491.实施例4 本实施例制备熊果酸4’ -氯-4-查尔酮酯(简称6d)，其结构式如下
H H CH3
H3Cj^j
-tCX^ CH3
H H /\ H H3。CH3本实施例的工艺步骤如下(1)4’ -氯-4-羟基查尔酮(简称3d)的合成
/=X ？ /=V
HO-^ h~CH=CH-C~<\Cl将反应容器放置在冰水浴中，将10. Ommol对氯苯乙酮和15ml乙醇加入反应容器 中，在磁力搅拌下加入10. Ommol固体NaOH，缓慢滴加10. Ommol对羟基苯甲醛的乙醇溶液， 在搅拌下保持0°C 5°C反应12小时，TLC监测反应，反应结束后，用稀盐酸将反应液调至 PH = 6 7，然后将反应物倒入冰水中，静置，抽滤，乙醇重结晶。得到4’-氯-4-羟基查尔 酮(黄色粉末)，产率94%，m. p. 174-176°0,^ NMR(400MHz, DMS0_d6) d :6· 83 8. 16 (m, 9H，PhH)，7. 75(m，2H，CH = CH)，10. 14(s,ΙΗ,ΟΗ) ；IR(KBr) ν :3350，1652，1593，1558，1511， 1339,1288,1211,1167,1091,980,817cm_1 ；MS m/z(%) 281· 79 ([M+Na]+) ；HRMS (ESI)calcd for C15H11O2ClNa [M+Na]+281. 7941，found 281. 7958。(2)熊果酸4’ -氯-4-查尔酮酯(简称6d，结构通式中R = Cl)的合成于室温，常压下将2. 5mmol熊果酸溶于IOml甲苯中，在磁力搅拌下加入1. 4ml三氟醋酸酐，继续搅拌0. 5h，然后向反应器中加入3mmol 4’ -氯-4-羟基查尔酮，加热回流 8小时；TLC监测反应，反应结束后，反应液冷至室温浓缩，然后溶于丙酮，滴加10%的NaOH 溶液将反应液调至PH = 8 9，搅拌下反应22小时，TLC监测反应，反应结束后，反应液 浓缩，然后加入IOml水，乙酸乙酯3X 5ml萃取，合并有机层，适量无水Na2SO4干燥，抽滤 蒸出乙酸乙酯，产物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚丙酮=5 1(V/V))得到熊果酸 4，-氯-4-查尔酮酯(黄色粉末)，产率67% .m. p. 138 HO0Cj1H NMR(400MHz, CDCl3) d 0. 79(s，3H，CH3), 0. 88(s，3H，CH3), 0. 89 (d, J = 6. 4Ηζ，3Η，CH3), 0. 94(s，3H，CH3) 0. 99 (d, J = 6. 0Ηζ，3Η，CH3)，1. 14(s，3H，CH3)，1. 33 (t, J = 6. 4Hz, J = 4. 2Ηζ，2Η，CH2)，1. 52 (t, J = 8. 4Hz, J = 7. 6Ηζ，2Η，CH2)，1.91(t，J = 4. 4Ηζ，2Η，CH2)，2. 35 (d，J = 11.2Ηζ，1Η， H-18)，5. 32 (s，1Η, OH)，6· 98 7. 97 (m, 8Η, PhH)，7. 43 (d, J = 12. OHz, 1Η, a_H)，7. 79 (d, J = 12. 0Hz,1H, β -H) ；IR(KBr) ν :3446，2925，2869，1747，1664，1596，1505，1454，1210， 1163,1090,1003, 975,827cm_1 ；MS m/z ( % ) :719· 38 ([M+Na]+) ；HRMS (ESI) calcd for C45H57O4ClNa [M+Na]+719. 3916，found 719. 38 91。实施例5 本实施例制备熊果酸4’ -氟-4-查尔酮酯(简称6e)，其结构式如下
<formula>formula see original document page 12</formula>本实施例的工艺步骤如下(1)4’ -氟-4-羟基查尔酮(简称3e)的合成
<formula>formula see original document page 12</formula>将反应容器放置在冰水浴中，将10. Ommol对氟苯乙酮和15ml乙醇加入反应容器 中，在磁力搅拌下加入10. Ommol固体NaOH，缓慢滴加10. Ommol对羟基苯甲醛的乙醇溶液， 在搅拌下保持0°C 5°C反应12小时，TLC监测反应，反应结束后，用稀盐酸将反应液调至 PH = 6 7，然后将反应物倒入冰水中，静置，抽滤，乙醇重结晶。得到4’-氟-4-羟基查尔 酮(黄色粉末)，产率:81%,m. ρ· 184-186°C · 1H NMR(400MHz,DMS0-d6) d :6· 83 8. 24(m, 9H，PhH)，7. 73(m，2H，CH = CH)，10. 12(s，1H，0H) ；IR(KBr) ν :3340，1655，1600，1561，1509， 1340,1286,1211,1167,1037,979,817cm_1 ；MS m/z( % ) :265· 33([M+Na]+) ；HRMS(ESI) calcd for C15H11O2FNa[M+Na]+265. 3395, found 265.3426。(2)熊果酸4’ -氟-4-查尔酮酯(简称6e，结构通式中R = F)的合成于室温，常压下将2. 5mmol熊果酸溶于IOml甲苯中，在磁力搅拌下加入1. 4ml三 氟醋酸酐，继续搅拌0. 5h，然后向反应器中加入3mmol 4’ -氟-4-羟基查尔酮，加热回流 8小时；TLC监测反应，反应结束后，反应液冷至室温浓缩，然后溶于丙酮，滴加10%的NaOH 溶液将反应液调至PH = 8 9，搅拌下反应22小时，TLC监测反应，反应结束后，反应液浓缩，然后加入IOml水，乙酸乙酯3X 5ml萃取，合并有机层，适量无水Na2SO4干燥，抽滤 蒸出乙酸乙酯，产物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚丙酮=5 1(V/V))得到熊果酸 4，-氟-4-查尔酮酯(黄色粉末)，产率66%，m. p. 124 126°C, 1H NMR(400MHz, CDCl3) d 0. 79(s，3H，CH3), 0. 89(s，3H，CH3), 0. 94 (d, J = 6. 4Ηζ，3Η，CH3), 0. 99(s，3H，CH3) 1. 00 (d, J = 6. 0Ηζ，3Η，CH3)，1. 14(s，3H，CH3)，1. 33 (t, J = 6. 4Hz, J = 4. 2Ηζ，2Η，CH2)，1. 56 (t, J = 8. 4Hz, J = 7. 6Ηζ，2Η，CH2), 1. 89 (t, J = 4. 4Ηζ，2Η，CH2)，2. 38 (d，J = 11.2Ηζ，1Η， H-18)，5. 34 (s，1Η, OH)，6· 79 7. 80 (m, 8Η, PhH)，7. 43 (d, J = 12. OHz, 1Η, a_H)，7. 75 (d, J = 12. 0Hz,1H, β -H) ；IR(KBr) ν :3442，2926，2870，1749，1701，1664，1601，1505，1455， 1209，1159，1090，1027，976,83601^ ;MS m/z(% ) :703· 43 ([M+Na]+) ；HRMS (ESI)calcd for C45H57O4FNa [M+Na]+703. 4316，found 703. 4411。实施例6 本实施例制备熊果酸1-乙酰基-3-苯基-4，5- 二氢_5_苯酚酯(简称 7a)，其结构式如下<formula>formula see original document page 13</formula>本实施例的工艺步骤如下(1) 4-(1-乙酰基-3-苯基-4，5-二氢-2-吡唑啉-5-基)苯酚(简称4a)的合成
<formula>formula see original document page 13</formula>
向反应容器中分别加入5mmol 4_羟基查尔酮、Iml水合胼、15ml冰乙酸，加热回流 反应8小时，TLC监测反应；反应结束后，冷却至室温，将反应液倒入冰水中，静置，抽滤，水 洗至中性，二氯甲烷洗涤得到4- (1-乙酰基-3-苯基-4，5- 二氢-2-吡唑啉-5-基)苯酚 (白色粉末)，产率:83%,m. p. 212-214V ；1H NMR(400MHz, DMS0-d6) d 2. 28 (s, 3H,-COCH3)， 3. 09 (d, J = 18. 4Hz，2H，CH2C = N)，3. 80 (t, J = 12. OHz, 1H, PhCHN)，6. 68 7. 79(m，9H， PhH),9. 35(s,1H, 0H) ；IR(KBr) ν :3259，3056，3021，2958，1641，1594，1513，1456，1418， 1362,1224,1163,1037,963,828, cm-1 ；MS m/z(%) 303. 42 ([M+Na]+) ；HRMS (ESI) calcd for C17H16O2N2Na [M+Na]+303. 4282，found 303. 4315。(2熊果酸1-乙酰基-3-苯基-4，5- 二氢-5-苯酚酯(简称7a，结构通式中R = H)的合成于室温，将2. 5mmol熊果酸溶于IOml甲苯中，在磁力搅拌下加入1. 4ml三氟醋酸 酐，继续搅拌0. 5h，然后向反应器中加入3mmol 4- (1-乙酰基-3-苯基-4，5- 二氢-2-吡唑 啉-5-基)苯酚，加热回流8小时；反应结束后，反应液冷至室温浓缩，然后溶于丙酮，滴加 10%的NaOH溶液将反应液调至PH = 8 9，搅拌下反应22小时，TLC监测反应，反应结束后，反应液浓缩，然后加入IOml水，乙酸乙酯3X 5ml萃取，合并有机层，适量无水Na2SO4干 燥，抽滤蒸出乙酸乙酯，产物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚丙酮=6 1(V/V))得到熊 果酸1-乙酰基-3-苯基-4，5-二氢-5-苯酚酯(白色粉末)，产率:48%,m.p. 166_168°C， 1H 匪R(400MHz，DMS0-d6)d :0· 71 (s，3Η，CH3)，0· 74 (s，3H，CH3)，0· 77 (s，3H，CH3)，0. 79(s，3H， CH3), 0. 83 (d, J = 2. 4Hz，3H，CH3)0. 86 (d, J = 1. 2Hz，3H，CH3)，0· 91 (s，3H，CH3)，0. 97(s，3H， CH3)，0· 99(s，3H，CH3)，1. 12(s，3H，CH3)，1. 35 (t, J = 6. 4Hz, J = 4. 2Hz，2H，CH2)，1. 50 (t, J =8. 4Hz, J = 7. 6Hz，2H，CH2)，1. 91 (t，J = 4. 4Hz，2H，CH2)，2. 31 (d，J = 11. 2Hz, 1H，H_18)， 2. 41 (s, 3H, -COCH3)，3. 20 (t，J = 4. OHz，2H，CH2C = N) ，3. 80 (t，J = 8. OHz，1H, PhCHN)， 5. 28(s，lH，OH)，6. 95 7. 74(m，9H，PhH) ；IR(KBr) ν :3455，2926，2869，1746，1668，1507， 1448，1203，1165，1028，959，853，761，691，542CHT1 :MS m/z (% ) 719. 47([M]+) ；HRMS (ESI) calcd for C47H62O4N2[M]+ 719. 4788, found 719.4780。实施例7 本实施例制备熊果酸1-乙酰基-3-对甲苯基-4，5- 二氢_5_苯酚酯 (简称7b)，其结构式如下
<formula>formula see original document page 14</formula>本实施例的工艺步骤如下(1) 4-(1-乙酰基-3-对甲基苯基-4，5-二氢-2-吡唑啉-5-基)苯酚(简称4b) 的合成<formula>formula see original document page 14</formula>向反应容器中分别加入5mmol 4’ -甲基_4_羟基查尔酮、Iml水合胼、15ml冰乙 酸，加热回流反应8小时，TLC监测反应；反应结束后，冷却至室温，将反应液倒入冰水中，静 置，抽滤，水洗至中性，二氯甲烷洗涤得到4-(1_乙酰基-3-对甲基苯基-4，5- 二氢-2-吡 唑啉-5-基)苯酚(白色粉末)，产率81%，m. p. 238-240 °C，1H NMR(400MHz, DMS0_d6) d 2. 26(s，3H，-COCH3), 2. 34(s，3H，PhCH3), 3. 18 (d, J = 4·0Ηζ，2Η，CH2C = N)，3.74 (t，J =7. 4Ηζ，1Η，PhCHN), 6. 68 7. 68(m，8H，PhH)，9. 35 (s，1Η，OH) ；IR(KBr) ν :3304，3015， 2950,2590,1873，1646，1596，1454，1361，1224，1165，1034，960，818. 532cm_1 ；MS m/z(% ) 317. 46([M+Na]+) ；HRMS (ESI) calcd for C18H18O2N2Na [M+Na]+317. 4611，found 317.4689。(2)熊果酸1-乙酰基-3-对甲苯基-4，5-二氢-5-苯酚酯(简称7b，结构通式中 R = CH3)的合成于室温，将2. 5mmol熊果酸溶于IOml甲苯中，在磁力搅拌下加入1. 4ml三氟醋 酸酐，继续搅拌0. 5h，然后向反应器中加入3mmol 4_(1_乙酰基-3-对甲基苯基-4，5- 二氢-2-吡唑啉-5-基)苯酚，加热回流8小时；反应结束后，反应液冷至室温浓缩，然后溶 于丙酮，滴加10%的NaOH溶液将反应液调至PH = 8 9，搅拌下反应22小时，TLC监测反 应，反应结束后，反应液浓缩，然后加入IOml水，乙酸乙酯3 X 5ml萃取，合并有机层，适量无 水Na2SO4干燥，抽滤蒸出乙酸乙酯，产物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚丙酮=6 KV/ V))得到熊果酸1-乙酰基-3-对甲基苯基-4，5- 二氢-5-苯酚酯(白色粉末)，产率56%， m. p. 172-174°C，1H 匪R(400MHz，DMS0-d6) d 0. 74 (s, 3H, CH3)，0. 77 (s, 3H, CH3)，0. 84 (d, J = 2. 4Hz，3H，CH3)，0· 86(s，3H，CH3) 0. 92 (d, J=L 2Hz，3H，CH3), 0. 94(s，3H，CH3), 0. 97(s，3H， CH3), 0. 99(s，3H，CH3)，1. 12(s，3H，CH3)，1. 36 (t, J = 6. 4Hz，2H，CH2)，1. 44 (d, J = 32Hz, 3H, CH3)，1. 51 (t, J = 8. 4Hz, J = 7. 6Hz,2H, CH2)，1. 91 (t, J = 4. 4Hz,2H, CH2)，2. 31 (d, J =11. 2Hz, 1H, H-18)，2· 41(s，3H，-COCH3)，3. 18 (d, J = 6. 0Hz，2H，CH2C = N)，3. 74 (t, J = 7. 2Hz，lH，PhCHN)，5. 29(s，1H，0H)，6. 94 7. 63(m，8H，PhH) ； IR (KBr) ν 3443，2925，2868， 1746，1666，1508，1450，1204，1164，1096，1026，813,53601^ ;MS m/z( % ) 733. 49([M]+)； HRMS (ESI)calcd for C48H64O4N2[M]+:733. 4923，found 733.4948。实施例8 本实施例制备熊果酸1-乙酰基-3-对甲氧基苯基-4，5- 二氢_5_苯酚 酯(简称7c)，其结构式如下
<formula>formula see original document page 15</formula>本实施例的工艺步骤如下(1) 4-(1-乙酰基-3-对甲氧基苯基-4，5-二氢-2-吡唑啉-5-基)苯酚(简称 4c)的合成
<formula>formula see original document page 15</formula>向反应容器中分别加入5mmol 4’-甲氧基_4_羟基查尔酮、Iml水合胼、15ml冰乙 酸，加热回流反应8小时，TLC监测反应；反应结束后，冷却至室温，将反应液倒入冰水中，静 置，抽滤，水洗至中性，二氯甲烷洗涤得到4-(1_乙酰基-3-对甲氧基苯基-4，5-二氢-吡 唑啉-5-基)苯酚(浅黄色晶体)，产率:89%,m. p. 202-204°0,^ NMR(400MHz,DMS0-d6) d
2.26 (s，3H, -COCH3)，3. 06 (d, J = 17. 6Hz,2H, CH2C = N)，3· 75 (t, J = 12. OHz, 1Η, PhCHN)，
3.80(s，3H，0CH3)，6. 68 7. 73(m，8H，PhH)，9. 34(s，lH，0H) ；IR(KBr) ν :3205，2962，2933， 2835，2596，2362，1882，1641，1514，1454，1366，1252，1173，1036,861, 536cm_1 ；MS m/z(%) 333. 46([M+Na]+) ；HRMS (ESI)calcd forC18H1803N2Na[M+Na]+333. 4605，found 333.4674。(2)熊果酸1-乙酰基-3-对甲氧基苯基-4，5-二氢-5-苯酚酯(简称7c，结构通 式中R = OCH3)的合成
于室温，将2. 5mmol熊果酸溶于IOml甲苯中，在磁力搅拌下加入1. 4ml三氟醋酸 酐，继续搅拌0. 5h，然后向反应器中加入3mmol 4- (1-乙酰基-3-对甲氧基苯基-4，5- 二 氢-2-吡唑啉-5-基)苯酚，加热回流8小时；反应结束后，反应液冷至室温浓缩，然后 溶于丙酮，滴加10%的NaOH溶液将反应液调至PH = 8 9，搅拌下反应22小时，TLC监 测反应，反应结束后，反应液浓缩，然后加入IOml水，乙酸乙酯3X5ml萃取，合并有机层， 适量无水Na2SO4干燥，抽滤蒸出乙酸乙酯，产物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚丙酮= 6 1(V/V))得到熊果酸1-乙酰基-3-对甲氧基苯基-4，5-二氢-5-苯酚酯(白色粉末)， 产率:52%,m. p. 176-178°0,^ NMR(400MHz, DMS0-d6) d 0. 74(s，3H，CH3)，0· 77 (s，3H，CH3)， 0. 86(s，3H，CH3), 0. 92 (d, J=L 2Ηζ，3Η，CH3), 0. 94(s，3H，CH3), 0. 97(s，3H，CH3), 0. 99 (s, 3Η, CH3)，1. 12 (s，3Η，CH3)，1. 36(t, J = 6. 4Hz，2H，CH2)，1. 44 (d, J = 32Hz, 3H, CH3)，1. 51 (t，J =8. 4Hz, J = 7. 6Hz，2H，CH2)，1. 91 (t，J = 4. 4Hz，2H，CH2)，2. 31 (d，J = 11. 2Hz, 1H，H_18)， 2. 41 (s，3H, -COCH3)，3. 21 (d, J = 8. 0Hz，2H，CH2C = N)，3. 68 (t, J = 12. OHz, 1H, PhCHN)， 3.83(s，3H，OCH3) ,5. 29 (s, 1H, OH) ,6. 98 7.68(m，8H，PhH) ；IR(KBr) ν :3429，2927， 2870,1699,1607,1512,1457,1383,1203,1167,1037,837cm-1 ；MS m/z(% ) 749. 49([M]+)； HRMS (ESI)calcd for C48H64O5N2[M]+:749. 4893，found 749.4903。实施例9 本实施例制备熊果酸1-乙酰基-3-对氯苯基-4，5-二氢-5-苯酚酯 (简称7d)，其结构式如下 <formula>formula see original document page 16</formula>本实施例的工艺步骤如下(1) 4-(1-乙酰基-3-对氯苯基-4，5-二氢-2-吡唑啉-5-基)苯酚(简称4d)的
合成
<formula>formula see original document page 16</formula>
向反应容器中分别加入5mmol 4’ -氯_4_羟基查尔酮、Iml水合胼、15ml冰乙 酸，加热回流反应8小时，TLC监测反应；反应结束后，冷却至室温，将反应液倒入冰水中， 静置，抽滤，水洗至中性，二氯甲烷洗涤得到4-(1_乙酰基-3-对氯苯基-4，5- 二氢-2-吡 唑啉-5-基)苯酚(白色粉末)，产率84%, m. ρ· 240-2420C ；1H NMR(400MHz, DMS0-d6) d 2. 27 (s，3H, -COCH3)，3. 15 (d, J = 14. OHz, 2H, CH2C = N)，3. 79 (t, J = 12. OHz, 1H, PhCHN)， 6. 68 7. 80(m，8H，PhH)，9. 36(s，1H，OH) ；IR(KBr) ν :3258，3019，2957，1878，1644，1594， 1513,1453,1362,1225,1140,1088,962,826,728cm_1 ；MS m/z( % ) :337· 86([M+Na]+)； HRMS (ESI)calcd fOrC17H15O2N2ClNa[M+Na] +337. 8688，found337. 8576。
(2)熊果酸1-乙酰基-3-对氯苯基-4，5-二氢-5-苯酚酯(简称7d，结构通式中， R = Cl)的合成于室温，将2. 5mmol熊果酸溶于IOml甲苯中，在磁力搅拌下加入1. 4ml三氟醋 酸酐，继续搅拌0. 5h，然后向反应器中加入3mmol 4_(1_乙酰基-3-对氯苯基_4，5- 二 氢-2-吡唑啉-5-基)苯酚，加热回流8小时；反应结束后，反应液冷至室温浓缩，然后 溶于丙酮，滴加10%的NaOH溶液将反应液调至PH = 8 9，搅拌下反应22小时，TLC监 测反应，反应结束后，反应液浓缩，然后加入IOml水，乙酸乙酯3X5ml萃取，合并有机层， 适量无水Na2SO4干燥，抽滤蒸出乙酸乙酯，产物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚丙酮= 6 1(V/V))得到熊果酸1-乙酰基-3-对氯苯基-4，5-二氢-5-苯酚酯(白色粉末)， 产率52%, m. p. 154-156°C, 1HNMR(400MHz, DMS0_d6) d :0· 71(s，3H，CH3),0. 74(s，3H，CH3), 0.77(s，3H，CH3), 0. 84 (d, J = 2. 0Ηζ，3Η，CH3), 0. 86(s，3H，CH3) 0. 94(s，3H，CH3), 0. 97 (s, 3Η, CH3)，0· 99(s，3H，CH3)，1· 12 (s，3Η，CH3)，1· 35 (t，J = 6. 8Hz, J = 5·6Ηζ，2Η，CH2),
1.44 (d, J = 32Ηζ，3Η，CH3)，1.91(t，J = 4. 4Ηζ，2Η，CH2), 2. 31 (d, J = 11.2Ηζ，1Η，Η—18)，
2.41 (s，3Η, -COCH3)，3. 21 (d, J = 12. 0Hz，2Η，CH2C = N)，3· 68 (t, J = 8. OHz, 1Η, PhCHN)， 5. 29(s，lH，OH)，6. 95 7. 67(m，8H，PhH) ；IR(KBr) ν :3441，2925，2870，1745，1667，1597， 1506,1446,1204,1164,1028,829,619cm_1 ；MS m/z(%) 753. 43 ([M]+) ；HRMS (ESI) calcdfor C47H61O4N2Cl[M]+ 753. 4398 found 753.4372。实施例10 本实施例制备熊果酸1-乙酰基-3-对氟苯基-4，5- 二氢_5_苯酚酯 (简称7e)，其结构式如下
<formula>formula see original document page 17</formula>本实施例的工艺步骤如下(1) 4-(1-乙酰基-3-对氟苯基-4，5-二氢-2-吡唑啉-5-基)苯酚(简称4e)的
合成
<formula>formula see original document page 17</formula>向反应容器中分别加入5mmol 4’ -氟_4_羟基查尔酮、Iml水合胼、15ml冰乙 酸，加热回流反应8小时，TLC监测反应；反应结束后，冷却至室温，将反应液倒入冰水中， 静置，抽滤，水洗至中性，二氯甲烷洗涤得到4-(1_乙酰基-3-对氟苯基-4，5- 二氢-2-吡 唑啉-5-基)苯酚(白色粉末)，产率86%，m. p. 234-236°C, 1H NMR(400MHz, DMS0_d6) d 2. 27 (s，3H, -COCH3)，3. 17 (d, J = 17. 6Hz,2H, CH2C = N)，3· 79 (t, J = 16. OHz, 1Η, PhCHN)， 6.68 7. 85(m，8H，PhH)，9. 35(s，1H，OH) ；IR(KBr) ν :3250，3022，2960，2814，1889，1643，1604,1513,1457,1332,1226,1102,963,832,6866, 532cm_1 ；MS m/z(%) :321· 41 ([M+Na]+)； HRMS(ESI)calcd for C17H15O2N2FNa[M+Na]+321. 4142, found321. 42370(2)熊果酸1-乙酰基-3-对氟苯基-4，5-二氢-5-苯酚酯(简称7e，结构通式中， R = F)的合成于室温，将2. 5mmol熊果酸溶于IOml甲苯中，在磁力搅拌下加入1. 4ml三氟醋 酸酐，继续搅拌0. 5h，然后向反应器中加入3mmol 4_(1_乙酰基-3-对氟苯基_4，5_ 二 氢-2-吡唑啉-5-基)苯酚，加热回流8小时；反应结束后，反应液冷至室温浓缩，然后溶 于丙酮，滴加10%的NaOH溶液将反应液调至PH = 8 9，搅拌下反应22小时，TLC监测反 应，反应结束后，反应液浓缩，然后加入IOml水，乙酸乙酯3 X 5ml萃取，合并有机层，适量无 水Na2SO4干燥，抽滤蒸出乙酸乙酯，产物经硅胶柱层析分离纯化(石油醚丙酮=6 KV/ V))得到熊果酸1-乙酰基-3-对氟苯基-4，5- 二氢-5-苯酚酯(白色粉末)，产率49 %， m. p. 150-152°C, 1HNMR(400MHz, DMS0_d6)d :0· 74(s，3H，CH3),0. 77(s，3H，CH3),0. 84(d, J = 1 · 6Hz，3Η，CH3)，0· 86 (s，3Η，CH3)，0· 91 (d，J = 4. OHz，3Η，CH3)，0· 97 (s，3Η，CH3)，0. 99 (s，3H， CH3)，1. 12 (s，3H, CH3)，1. 25 (t, J = 2. 8Hz,2H, CH2)，1. 52 (s, 3H, CH3)，1. 91 (t, J = 4. OHz, 2H, CH2)，2. 31 (d, J= 11. 2Hz, 1H, H-18)，2. 40 (s, 3H, -COCH3)，3. 19 (d, J = 16. 6Hz, 1H, CH2C =N)，3· 72 (t, J = 12. OHz, 1Η, PhCHN)，5· 28 (s, 1H, OH), 6. 95 7. 74(m，8H，PhH) ；IR(KBr) ν =3444,2926,2869,1743，1666，1605，1510，1448，12304，1163，1029,838,537cm_1 ；MS m/ z(% ) 737. 46 ([M]+) ；HRMS (ESI)calcd for C47H61O4N2F[M]+: 737. 4734，found 737.4677。实施例11本实施例对实施例1 实施例10制备的熊果酸衍生物6a、6b、6c、6d、6e、7a、7b、 7c、7d、7e与熊果酸进行肿瘤细胞抑制活性对比实验。按照《新药临床前研究指导原则》要求，采用MTT法测定药物对肿瘤细胞毒性作为 抑制活性筛选指标，药理实验方法根据《中药药理研究方法学》《中药新药研制开发技术与 方法》以及《新药临床前研究指导原则》的标准制定。注《新药临床前研究指导原则》，卫生部药政局，1993. 7 ；《中药药理研究方法学》 人民卫生出版社，2006年1月；《中药新药研制开发技术与方法》上海科学技术出版社，2001年。1.实验药品受试药(1)实施例1 实施例10制备的熊果酸衍生物6a 6e，7a 7e.6a 熊果酸4-查尔酮酯(实施例1制备)6b 熊果酸4’ -甲基-4-查尔酮酯(实施例2制备)6c 熊果酸4’ -对甲氧基-4-查尔酮酯(实施例3制备)6d 熊果酸4，-氯-4-查尔酮酯(实施例4制备)6e 熊果酸4’ -氟_4_查尔酮酯(实施例5制备)7a 熊果酸1-乙酰基_3_苯基-4，5_ 二氢_5_苯酚酯(实施例6制备)7b 熊果酸1-乙酰基-3-对甲苯基-4，5- 二氢_5_苯酚酯(实施例7制备)7c 熊果酸1-乙酰基-3-对甲氧基苯基-4，5_ 二氢_5_苯酚酯(实施例8制备)7d 熊果酸1-乙酰基-3-对氯苯基-4，5- 二氢_5_苯酚酯(实施例9制备)
7e:熊果酸1-乙酰基-3-对氟苯基-4，5-二氢-5-苯酚酯(实施例10制备)(2)熊果酸西安江兴生物科技有限公司3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)美国SIGMA公司二甲基 亚砜(DMSO):爱斯特(成都)医药技术有限公司2.实验细胞人体肺癌细胞A549，人体卵巢癌细胞SK0V-3，人体肝癌细胞H印G2购买于美国标 准培养物收藏所(ATCC)3.实验仪器美国Bio-rad Model 680 酶标仪4.药品配制将实施例1 实施例10制备的熊果酸衍生物6a 6e，7a 7e以及熊果酸。用 DMSO做溶剂配制成浓度为10mg/ml的母液，加药前用DEME培养基稀释至工作浓度0. 5、1、 5、10、20、40μ g/ml 以及 0. 625、1. 25,2. 5、5· 0、10μ g/ml 的溶液5.实验方法将生长良好的人肺癌细胞A549、人卵巢癌SK0V-3细胞、人肝癌细胞H印G2分别接 种于96孔板，2 X IO3/孔· 24h后将不同浓度的试药(0. 5、1、5、10、20、40 μ g/ml作用于人肺 癌细胞A549、人卵巢癌SK0V-3细胞中，0. 625,1. 25,2. 5,5. OUOy g/ml作用于人肝癌细胞 H印G2)分别加入板中，100 μ 1/孔，培养48h。然后加入MTT溶液10 μ 1 (5mg/ml)，37°C作用 4h,弃上清，加入DMSO 150 μ 1/孔，室温振摇30min，测定0D570nm值。根据细胞增殖抑制 率公式计算抑制率(％ )=(对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值X 100%。IC50 值利用统计软件进行计算。表1目标化合物对A549、SK0V3、HepG2细胞的抑制活性测定结果
编号 A549细胞SKOV-3细胞
_HepG2 细胞_
16421363
6a13.614.6--
6b19.818.4--6c24.622.2— 6d13.215.2--6e21.223.1--7a21.520.8--7b27.129.4--7c21.726.5--7d25.327.8--
_7e_18Λ_18^_-注表1中1代表熊果酸，空白组作为对照组，“一”表示在测定的浓度范围内没有 抑制活性。从表1的数据可以看出，实施例1 实施例10制备的熊果酸衍生物6a、6d对A549，SK0V-3细胞的抑制活性较熊果酸均有所增强，6b、7a、7e对SK0V-3细胞的抑制活性较熊果 酸均有所增强。
实验结果表明，本发明所提供的部分熊果酸衍生物可以开发出新的具有更好药理 活性的抗肿瘤药物。
权利要求
熊果酸衍生物熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5-二氢-5-苯酚酯和熊果酸4’-取代基-4-查尔酮酯，其特征在于结构式如下所述结构式中，R为氢或烃基或醚或卤素。FSA00000122429600011.tif
2.根据权利要求1所述的熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5-二氢-5-苯酚酯和熊 果酸4’ -取代基-4-查尔酮酯，其特征在于所述烃基为甲基。
3.根据权利要求1所述的熊果酸衍生物熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5-二 氢-5-苯酚酯和熊果酸4’ -取代基-4-查尔酮酯，其特征在于所述醚为甲醚。
4.根据权利要求1所述的熊果酸衍生物熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5-二 氢-5-苯酚酯和熊果酸4’ -取代基-4-查尔酮酯，其特征在于所述卤素为氟或氯。
5.一种的制备方法，其特征在于工艺步骤如下(1)4’-取代基-4-羟基查尔酮的合成原料及其配方对羟基苯甲醛和苯乙酮或对位取代苯乙酮以及氢氧化钠的摩尔数之比为111;溶剂乙醇；工艺步骤于常压、0°C 5°C将苯乙酮或取代苯乙酮加入溶剂中，在磁力搅拌下加入固体NaOH， 缓慢滴加对羟基苯甲醛的乙醇溶液，在搅拌下反应11小时 12小时；反应结束后，用稀 盐酸将反应液调至pH = 6 7，然后将反应物倒入冰水中，静置，抽滤，乙醇重结晶。得到 4’ _取代基-4-羟基查尔酮；(2)4- (1-乙酰基-3-取代苯基-4 ；5- 二氢-2-吡唑啉-5-基)苯酚的合成原料及其配方4_取代基-4-羟基查尔酮与水合胼的摩尔数之比为1 4;溶剂冰乙酸；工艺步骤于常压、室温向反应容器中分别加入4-取代基-4-羟基查尔酮、水合胼、冰乙酸，加热 回流反应6小时 8小时；反应结束后，冷却至室温，将反应液倒入冰水中，静置，抽滤，水洗至中性，二氯甲烷洗涤得到4- (1-乙酰基-3-取代苯基-4，5- 二氢-2-吡唑啉-5-基)苯 酚；(3)熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5- 二氢-5-苯酚酯和熊果酸4’-取代基-4-查 尔酮酯的合成原料及其配方熊果酸、三氟醋酸酐和4-(1_乙酰基-3-取代苯基-4，5- 二氢-2-吡唑啉-5-基)苯 酚或4’ -取代基-4-羟基查尔酮的摩尔数之比为1 4 1.2;溶剂①甲苯、②丙酮；工艺步骤于室温，常压将熊果酸溶于甲苯中，在磁力搅拌下加入三氟醋酸酐，继续搅拌0. 5h，然 后向反应器中加入三氟醋酸酐和4- (1-乙酰基-3-取代苯基-4，5- 二氢-2-吡唑啉-5-基) 苯酚或4-取代基-4-羟基查尔酮，加热回流7小时 9小时；反应液冷至室温浓缩，然后溶 于丙酮，滴加10%的NaOH溶液将反应液调至PH = 8 9，搅拌下反应22小时 24小时，反 应结束后，反应液通过浓缩，萃取，柱层析分离纯化得权利要求1所述结构式的熊果酸1-乙 酰基-3-取代苯基_4，5- 二氢-5-苯酚酯和熊果酸4’ -取代基-4-查尔酮酯，结构式中，R 为氢或烃基或醚或卤素。
6.根据权利要求5所述熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5-二氢-5-苯酚酯和熊果 酸4’ -取代基-4-查尔酮酯的制备方法，其特征在于合成4’ -取代基-4-羟基查尔酮时， 所用取代苯乙酮为4-甲基苯乙酮、4-甲氧基苯乙酮、4-氟苯乙酮、4-氯苯乙酮中的一种。
7.权利要求1至4中任一权利要求所述熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5-二 氢-5-苯酚酯和熊果酸4’ -取代基-4-查尔酮酯在制备抗肿瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了熊果酸衍生物熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5-二氢-5-苯酚酯和熊果酸4’-取代基4-查尔酮酯，其结构式如下所述结构式中，R为氢或烃基或醚或卤素。部分化合物的抗肿瘤活性较熊果酸均有所增强。其制备方法如下(1)4’-取代基-4-羟基查尔酮的合成；(2)4-(1-乙酰基-3-取代苯基-4，5-二氢-2-吡唑啉-5-基)苯酚的合成；(3)熊果酸1-乙酰基-3-取代苯基-4，5-二氢-5-苯酚酯和熊果酸4’-取代基-4-查尔酮酯的合成。
文档编号C07J63/00GK101830961SQ201010172450
公开日2010年9月15日 申请日期2010年5月14日 优先权日2010年5月14日
发明者张萍, 李颖, 白雪, 石万棋, 陈华凤, 陈科 申请人:四川国康药业有限公司