专利名称：一种蔷薇酸和委陵菜酸的联合制备方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种采用高效液相制备色谱法从固公果中同时制备蔷薇酸和委陵菜酸的方法。
背景技术：
固公果Tfo1Sa odorata Sweet var. gigantea Rehd. et ffils.属蔷薇属植物，其根性平、味酸，具有涩肠止泻的功效，常用于治疗腹泻、菌痢等疾病，是一味应用历史悠久的彝族民间药材。现代研究表明固公果根中含有多种三萜类成份，该三萜类成分具有较好的镇痛抗炎作用，蔷薇酸与委菱菜酸是其中量较高的三萜成分。此外，刘梁等研究表明以委陵菜酸为主要成分的三叶委陵菜三萜类化合物具有明显抗病毒作用。鉴于这两种三萜类物质的特殊药理作用，其开发前景是无限大的。蔷薇酸(Rosolicacid)，分子式=C19H14O3 ；分子量:290. 31。委陵菜酸(Tormentic acid)，分子量488. 71，理化性质无色结晶型粉末， mp.260 ^2°C (甲醇-/JO ；mp273°C，[ α ]D_20° (批唆)。IR y maxcm\-l 3400 (-0H), 1700 (C=O)，835 (C=C)。MSm/z :488 (Μ+)，264。IHNMR0 13CNMR。白色棒晶(丙酮)，mp276 279°C。药化作用降血糖作用和抗菌作用。现有文献中对委陵菜酸及蔷薇酸的相关研究报道相对较少，未见有两种物质同时制备的方法，也未见有相关专利报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种蔷薇酸和委陵菜酸的联合制备方法，该方法操作简单，制得产品含量高。本发明是通过以下技术方案实现的
一种蔷薇酸和委陵菜酸的联合制备方法，其特征在于包含以下步骤
1)提取取固公果药材粉碎，加4(Γ70%乙醇提取2 3次，药材与溶剂比例为1:(5 10)， 合并提取液，浓缩成浸膏；
2)大孔树脂除杂将上述提取物过大孔树脂处理，先用水及水溶性有机溶剂低浓度水溶液洗脱糖和其他杂质，再用水溶性有机溶剂较高浓度的水溶液进行洗脱，洗脱液减压浓缩至干得总三萜提取物；
3)制备高效液相进一步分离纯化将上述总三萜提取物用甲醇溶解，滤膜过滤，用高效液相制备色谱对其进行分离纯化，分别收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶；
4)重结晶将上述结晶用甲醇热回流结晶2 3次得蔷薇酸和委陵菜酸产品。所述步骤1)中的提取方法可选用加热回流法或超声提取法，提取温度控制在 60 100°C。所述步骤2)中的水溶性有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇等中的一种。所述步骤3)中的滤膜孔径为0. 2^0. 45 μ m。
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所述步骤3)中的高效液相制备色谱是以反相键合硅胶为固定相，以乙腈-0. 3%三氟乙酸(3(T38 62^70 )为流动相，紫外检测器监测收集目标流分。所述的反相键合硅胶是C-8或C-18键合硅胶。所述的紫外检测器的波长设定为210nm。本发明的积极效果是
1)采用大孔树脂脱除多糖类杂质，操作简单，大孔树脂处理量大，可重复使用；
2)制备高效液相进一步分离纯化所用的反相高效液相制备色谱，具有分离度高、重现性好、分离时间短、制备量大等优点，分离的到产品纯度可达98%以上；
3)本发明使用的溶剂系统较为简单，还具有低成本，回收率高的优点。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1
取固公果药材1kg，粉碎，加10L40%乙醇液热回流提取2次，合并提取液，浓缩至低醇， 上大孔树脂吸附，先用2BV水及;3BV30%乙醇水溶液洗脱糖和其他杂质，再用5BV65%乙醇水溶液进行洗脱，洗脱液减压浓缩至干得总三萜提取物，将所得总三萜用少量甲醇溶解，流动相稀释，经0. 45 μ m滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进一步分离纯化，以C-18键合硅胶为固定相，乙腈-0. 3%三氟乙酸(30:70)溶液为流动相，流速设定为30ml/min，设定紫外检测器波长210nm，分段收集蔷薇酸流分和委陵菜酸流分，回收试剂至小体积，放置结晶， 滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶3次，滤出晶体，得高纯度的蔷薇酸1. 2g (含量 98. 2%)和委陵菜酸0. 7g (含量98. 7%)。实施例2:
取固公果药材lKg，粉碎，加5L70%乙醇超声提取3次，合并提取液，浓缩至低醇，上大孔树脂吸附，先用2BV水及;3BV30%甲醇水溶液洗脱糖和其他杂质，再用5BV70%甲醇水溶液进行洗脱，洗脱液减压浓缩至干得总三萜提取物，将所得总三萜用少量甲醇溶解，流动相稀释，经0. 22 μ m滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进一步分离纯化，以C-18键合硅胶为固定相，乙腈-0. 3%三氟乙酸(32:68)溶液为流动相，流速设定为30ml/min，设定紫外检测器波长210nm，分段收集蔷薇酸流分和委陵菜酸流分，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶2次，滤出晶体，得高纯度的蔷薇酸1. Ig (含量98. 3%)和委陵菜酸0.8g (含量98.5%)。实施例3:
取固公果药材^(g，粉碎，加40L50%乙醇超声提取2次，合并提取液，浓缩至低醇，上大孔树脂吸附，先用2BV水及;3BV25%丙醇水溶液洗脱糖和其他杂质，再用5BV70%丙醇水溶液进行洗脱，洗脱液减压浓缩至干得总三萜提取物，将所得总三萜用少量甲醇溶解，流动相稀释，经0. 22 μ m滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进一步分离纯化，以C-18键合硅胶为固定相，乙腈-0. 3%三氟乙酸(35:65)溶液为流动相，流速设定为30ml/min，设定紫外检测器波长210nm，分段收集蔷薇酸流分和委陵菜酸流分，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶3次，滤出晶体，得高纯度的蔷薇酸5. 4g (含量98. 5%)和
4委陵菜酸3. Ig (含量99. 1%)。实施例4:
取固公果药材^(g，粉碎，加35L55%乙醇加热回流提取3次，合并提取液，浓缩至低醇， 上大孔树脂吸附，先用2BV水及;3BV30%乙醇水溶液洗脱糖和其他杂质，再用5BV75%乙醇水溶液进行洗脱，洗脱液减压浓缩至干得总三萜提取物，将所得总三萜用少量甲醇溶解，流动相稀释，经0. 22 μ m滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进一步分离纯化，以C-18键合硅胶为固定相，乙腈-0. 3%三氟乙酸(33:67)溶液为流动相，流速设定为30ml/min，设定紫外检测器波长210nm，分段收集蔷薇酸流分和委陵菜酸流分，回收试剂至小体积，放置结晶， 滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶3次，滤出晶体，得高纯度的蔷薇酸4. Ig (含量 99. 2%)和委陵菜酸2. 8g (含量99. 3%)。实施例5
取固公果药材10Kg，粉碎，加60L65%乙醇超声提取2次，合并提取液，浓缩至低醇，上大孔树脂吸附，先用2BV水及;3BV35%乙醇水溶液洗脱糖和其他杂质，再用5BV75%乙醇水溶液进行洗脱，洗脱液减压浓缩至干得总三萜提取物，将所得总三萜用少量甲醇溶解，流动相稀释，经0. 45 μ m滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进一步分离纯化，以C-18键合硅胶为固定相，乙腈-0. 3%三氟乙酸(38:62)溶液为流动相，流速设定为30ml/min，设定紫外检测器波长210nm，分段收集蔷薇酸流分和委陵菜酸流分，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶2次，滤出晶体，得高纯度的蔷薇酸9. Sg (含量98. 5%) 和委陵菜酸5. 9g (含量98.6%)。实施例6:
取固公果药材10Kg，粉碎，加70L40%甲醇加热回流提取2次，合并提取液，浓缩至低醇， 上大孔树脂吸附，先用2BV水及;3BV30%乙醇水溶液洗脱糖和其他杂质，再用5BV70%乙醇水溶液进行洗脱，洗脱液减压浓缩至干得总三萜提取物，将所得总三萜用少量甲醇溶解，流动相稀释，经0. 45 μ m滤膜滤过，再采用反相制备高效液相进一步分离纯化，以C-18键合硅胶为固定相，乙腈-0. 3%三氟乙酸(30:70)溶液为流动相，流速设定为30ml/min，设定紫外检测器波长210nm，分段收集蔷薇酸流分和委陵菜酸流分，回收试剂至小体积，放置结晶，滤出结晶物用甲醇加热回流溶解，放冷析晶3次，滤出晶体，得高纯度的蔷薇酸10. 2g (含量 98. 1%)和委陵菜酸7. Ig (含量98. 1%)。
权利要求
1.一种蔷薇酸和委陵菜酸的联合制备方法，其特征在于包含以下步骤1)提取取固公果药材粉碎，加4(Γ70%乙醇提取2 3次，药材与溶剂比例为1:(5 10)， 合并提取液；2)大孔树脂除杂将上述提取物过大孔树脂处理，先用水及水溶性有机溶剂低浓度水溶液洗脱糖和其他杂质，再用水溶性有机溶剂较高浓度的水溶液进行洗脱，洗脱液减压浓缩至干得总三萜提取物；3)制备高效液相进一步分离纯化将上述总三萜提取物，用甲醇溶解，滤膜过滤，用高效液相制备色谱对其进行分离纯化，分别收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，放置结晶；4)重结晶将上述结晶用甲醇热回流结晶2 3次得蔷薇酸和委陵菜酸产品。
2.如权利要求1所述的一种蔷薇酸和委陵菜酸的联合制备方法，其特征在于所述步骤1)中的提取方法可选用加热回流法或超声提取法，提取温度控制在6(T10(TC。
3.如权利要求1所述的一种蔷薇酸和委陵菜酸的联合制备方法，其特征在于所述步骤2)中的水溶性有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇等中的一种。
4.如权利要求1所述的一种蔷薇酸和委陵菜酸的联合制备方法，其特征在于所述步骤3)中的滤膜孔径为0.2 0. 45 μ m。
5.如权利要求1所述的一种蔷薇酸和委陵菜酸的联合制备方法，其特征在于所述步骤3)中的高效液相制备色谱是以反相键合硅胶为固定相，以乙腈-0. 3%三氟乙酸 (30^38 62 70 )为流动相，紫外检测器监测收集目标流分。
全文摘要
本发明属于天然产物分离领域，提供了一种蔷薇酸和委陵菜酸的联合制备方法。制备方法包括乙醇液提取，大孔树脂处理，用水及水溶性有机溶剂低浓度水溶液洗脱糖和其他杂质，再用水溶性有机溶剂较高浓度的水溶液进行洗脱，洗脱液减压浓缩至干得总三萜提取物，再经高效液相制备色谱纯化，分段收集蔷薇酸流分和委陵菜酸流分，最后用甲醇热回流结晶得高纯度的蔷薇酸和委陵菜酸。本发明制得产品纯度高，质量好。
文档编号C07J63/00GK102391347SQ20111022594
公开日2012年3月28日 申请日期2011年8月9日 优先权日2011年8月9日
发明者刘东锋, 吴艳波 申请人:南京泽朗医药科技有限公司