专利名称：一种乙酰哈巴苷对照品的高效制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药化学对照品的制备方法，属中药现代化技术领域，具体而言， 本发明涉及一种从中药材筋骨草中快速分离乙酰哈巴苷对照品的方法。
背景技术：
筋骨草(Ajugae Herba),为唇形科(Labiatae)筋骨草属(Ajuga L.)植物筋骨草 (Ajuga decumbens Thunb.)的干燥全草，又名金疮小草、青鱼胆草、苦地胆草、散血草。性味苦，寒，归肺经。具有清热解毒，凉血消肿的功效。用于咽喉肿痛，肺热咯血，跌打肿痛。为 《中国药典》2010年版新增收载品种。乙酰哈巴苷(8-0-Acetylharpagide)，分子式为C17H26O11,结构式如下脂柱进行吸附，然后分别用2、倍量柱体积的水和广3倍量柱体积的体积分数为40%的乙醇溶液洗脱杂质，再用广3倍量柱体积的体积分数为60%乙醇溶液洗脱目标物质，收集洗脱液，浓缩至原体积的1/10 ；
C.高效制备液相分离将步骤B所得浓缩溶液用微孔滤膜过滤后，上高效制备液相色谱柱分离，在线监测，针对性收集目标化合物色谱峰段制备溶液；
所述高效制备液相色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶(C18)，柱规格为 50cmX 10cm、50cmX8cm 或 50cmX5cm 等。所述高效制备液相的色谱条件为流动相为体积分数20-30%的甲醇溶液，检测波长 210nm。D.产品回收将步骤C所得制备溶液减压回收甲醇，水溶液以2-5BV的速度通过活化好的大孔吸附树脂柱进行富集，然后用1-3倍量柱体积的体积分数95%乙醇洗脱，浓缩洗脱液至干，固体于50 70°C温度下干燥6 8小时，得乙酰哈巴苷对照品。所述大孔吸附树脂选自DlOl或AB-8型。本发明的优点在于
1、步骤少，耗时短，得率高，操作简便，易于工业化生产。2、溶剂消耗少，制备液相色谱分离步骤中的溶剂都可回收再利用。3、溶剂毒性小，所用的有机溶剂甲醇、乙醇等，环境污染小。4、具有较高的学术价值。目前国内关于乙酰哈巴苷分离纯化的文献报道很少，高效制备液相色谱用于乙酰哈巴苷对照品的分离纯化属首次。
图1为本发明实施例1 C步骤所述高效制备液相分离在线监测图谱图2为本发明实施例1所得乙酰哈巴苷产品的HPLC检测图谱。
具体实施例方式实施例1
一种乙酰哈巴苷对照品的高效制备方法，其特征在于按如下工艺步骤进行
A.原料提取将筋骨草药材^cg粉碎成粗粉，加入20L体积分数为40%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，合并提取液，冷却至室温；
B.大孔树脂富集称取IkgDlOl大孔吸附树脂，用直径IOcm玻璃柱填装成树脂柱，树脂床体积约3L ；将冷却后的提取液以3BV的速度通过活化好的大孔吸附树脂柱进行吸附， 然后分别用9L水和6L体积分数为40%的乙醇溶液洗脱杂质，再用6L体积分数为60%的乙醇溶液洗脱目标物质，收集洗脱液，浓缩至约0. 6L ；
C.高效制备液相分离将步骤B所得浓缩溶液用微孔滤膜过滤，上高效制备液相色谱柱分离，色谱柱填料为C18，流动相为体积分数25%的甲醇溶液，检测波长210nm，在线监测， 针对性收集目标化合物色谱峰段制备溶液；
D.产品回收称取500gDlOl大孔吸附树脂，用直径IOcm玻璃柱填装成树脂柱，树脂床体积约1. 5L ；将步骤C所得制备溶液减压回收甲醇，水溶液以:3BV的速度通过活化好的大孔吸附树脂柱进行富集，然后用3L体积分数95%的乙醇洗脱，浓缩洗脱液至干，固体50°C干燥8小时，得乙酰哈巴苷对照品。 实施例2
一种乙酰哈巴苷对照品的高效制备方法，其特征在于按如下工艺步骤进行
A.原料提取将筋骨草药材^g粉碎成粗粉，加入40L体积分数为45%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，合并提取液，冷却至室温；
B.大孔树脂富集称取^gAB-8大孔吸附树脂，用直径IOcm玻璃柱填装成树脂柱，树脂床体积约6L ；将冷却后的提取液以4BV的速度通过活化好的大孔吸附树脂柱进行吸附， 然后分别用18L水和12L体积分数为40%的乙醇溶液洗脱杂质，再用12L体积分数为60% 的乙醇溶液洗脱目标物质，收集洗脱液，浓缩至约1. 2L ；
C.高效制备液相分离将步骤B所得浓缩溶液用微孔滤膜过滤，上高效制备液相色谱柱分离，色谱柱填料为C18，流动相为体积分数30%的甲醇溶液，检测波长210nm，在线监测， 针对性收集目标化合物色谱峰段制备溶液；
D.产品回收称取IkgAB-8大孔吸附树脂，用直径IOcm玻璃柱填装成树脂柱，树脂床体积约3L ；将步骤C所得制备溶液减压回收甲醇，水溶液以4BV的速度通过活化好的大孔吸附树脂柱进行富集，然后用7L体积分数95%的乙醇洗脱，浓缩洗脱液至干，固体70°C干燥 6小时，得乙酰哈巴苷对照品。 所得乙酰哈巴苷对照品重11. 3g，HPLC纯度分析为99.觊。
权利要求
1.一种乙酰哈巴苷对照品的高效制备方法，其特征在于按如下工艺步骤进行A.原料提取将筋骨草药材粉碎成粗粉，按照质量体积比kg/L加入8-10倍量的体积分数为40-60%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，合并提取液，冷却至室温；B.大孔树脂富集将步骤A冷却后的提取液以2 5BV的速度通过活化好的大孔吸附树脂柱进行吸附，然后分别用2、倍量柱体积的水和广3倍量柱体积的体积分数为40%的乙醇溶液洗脱杂质，再用广3倍量柱体积的体积分数为60%乙醇溶液洗脱目标物质，收集洗脱液，浓缩至原体积的1/10 ；C.高效制备液相分离将步骤B所得浓缩溶液用微孔滤膜过滤后，上高效制备液相色谱柱分离，在线监测，针对性收集目标化合物色谱峰段制备溶液；D.产品回收将步骤C所得制备溶液减压回收甲醇，水溶液以2-5BV的速度通过活化好的大孔吸附树脂柱进行富集，然后用1-3倍量柱体积的体积分数95%乙醇洗脱，浓缩洗脱液至干，固体于50 70°C温度下干燥6 8小时，得乙酰哈巴苷对照品。
2.如权利要求1所述乙酰哈巴苷对照品的高效制备方法，其特征在于所述高效制备液相色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，柱规格为50cmX10cm、50cmX8cm或50cmX5cm。
3.如权利要求1所述乙酰哈巴苷对照品的高效制备方法，其特征在于所述高效制备液相的色谱条件为流动相为体积分数20-30%的甲醇溶液，检测波长210nm。
4.如权利要求1所述乙酰哈巴苷对照品的高效制备方法，其特征在于所述大孔吸附树脂选自DlOl或AB-8型。
全文摘要
本发明公开了一种乙酰哈巴苷对照品的高效制备方法，属中药现代化技术领域。该方法按如下工艺步骤进行A.原料提取采用40-60%乙醇回流提取3次，每次2小时；B.大孔树脂富集以水、乙醇除杂后，再以乙醇洗脱目标物质；C.高效制备液相分离流动相为20-30%的甲醇溶液，检测波长210nm；D.产品回收以乙醇洗脱，浓缩干燥得纯度99%以上乙酰哈巴苷对照品。本发明方法简易快速，溶剂消耗少，得率高，经济环保，具有较高的经济价值和学术价值。
文档编号C07H17/04GK102399250SQ20111042010
公开日2012年4月4日 申请日期2011年12月15日 优先权日2011年12月15日
发明者刘丁, 夏柯, 文焕松, 郭建华 申请人:成都普思生物科技有限公司