专利名称：一种从野生铃兰里提取铃兰苦甙的新型工艺方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生铃兰里提取铃兰苦甙的方法，特别是涉及种利用超声波提取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化的新方法。
背景技术：
铃兰，百合科铃兰属，别名香水花、鹿铃花、草玉铃、草玉兰、小芦藜、山苞米，生于由地林下林缘灌丛。大兴安岭呼中、塔河、加格达奇等地有产。植物形态多年生草本。根状茎细长，具节，于节处生多数分枝状的须根。叶2，极少3，叶柄长8-22厘米，基部有数枚膜质鞘状叶，叶片长圆形或卵状披针形，长6-20厘米，宽
2-8厘米，基部渐狭，花葶由根状茎抽出，稍弯曲，比叶短。总状花序顶生，具6-10花。苞片膜质。花白色，俯垂，偏向一侧，短钟状，花被顶端6浅裂。雄蕊6，着生花被筒基部，花药基着。子房卵状球形，花柱柱状。浆果球形，熟后红色。种子扁圆形或双凸状，表面具细网纹。国内一般用溶剂法提取苦甙，存在着操作温度高，得率偏低，耗时长等缺点，本发明的不同之处在于主要采用超声波萃取法，后期采用大孔树脂纯化铃兰苦甙，产品不仅得率高，而且纯度高。
发明内容
本发明优点本发明主要采用超声波萃取技术，采用乙醇做提取剂，提取时间短，有效成分活性高；后期采用大孔树脂吸附，纯化效果好。本发明方法简单易操作，适合人生产，成本低，选用食品允许使用的乙醇，无化学残留。为实现上述目的，本发明采用的技术方案是一种利用超声波提取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化铃兰苦甙的新方法，具步骤如下(I)超声提取铃兰全草切断至3_5cm,加入一定浓度的乙醇，采用超声波萃取，超声频率50-100KHZ，料液比I 16，超声时间30-50min，提取温度40-50°C ;⑵收集回收乙醇，薄层层析检测分析，收集铃兰苦甙部分；(3)超滤分离采用一定截留分子量的超滤膜分离，膜操作压力为02-0. 3MPa，截留率为90-95% ；(4)大孔树脂纯化采用大孔吸附树脂吸附纯化铃兰苦甙、树脂型号为AB-8、HPD-100或NKA-1l中的一种，调节pH值，在径高比1: 6-1 8，体积流量2-4BV/h，流速为3-5BV/h下进行吸附；
(5)洗脱用体积分数70-80%乙醇，体积流量2_3BV/h条件下进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；(6)得半成品回收乙醇，将铃兰苦甙各阶段洗脱液浓缩，得苦甙半成品，其含量为75%以上；(7)硅胶柱层析粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70-90%浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；(8)回收乙醇，收集洗脱液浓缩，冷冻干燥，得到含量为98%以上铃兰苦甙成品。
具体实施例方式实施例1 :一种利用超声波提取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化铃兰苦甙的新方法，其步骤如下(I) IOOOg铃兰全草切断至3cm,加入体积分数70%乙醇,采用超声波萃取,超声频率50KHZ，料液比1: 4，超声时间30min，提取温度40°C，回收乙醇，薄层层析检测分析，收
集铃兰苦甙部分；(2)回收乙醇，薄层层析检测分析，收集铃兰苦甙部分；(3)采用超滤膜分离，膜操作压力为O. 2MPa，截留分子量1000，截留率为90% ；
(4)采用大孔吸附树脂吸附纯化铃兰苦甙、树脂型号为AB-8，最佳吸附条件为径高比1: 6，体积流量2BV/h，流速为3BV/h，吸附pH值为6 ;(5)用70%乙醇体积分数，体积流量2BV/h进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；(6)将铃兰苦甙各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得100. 2g苦甙半成品，其含量为
75.2% ；(7)取IOg粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70-80%浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；(8)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为98. 3%的铃兰苦甙成品 O. 496g实施案例2 :—种利用超声波提取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化铃兰苦甙的新方法，其步骤如下(I) IOOOg铃兰全草切断至4cm,加入体积分数75%乙醇,采用超声波萃取,超声频率80KHZ，料液比I 5，超声时间40min，提取温度45°C，(2)回收乙醇，薄层层析检测分析，收集铃兰苦甙部分。残渣。(3)采用超滤膜分离，膜操作压力为O. 3MPa，截留分子量2000，截留率为5% ；(4)采用大孔吸附树脂吸附纯化铃兰苦甙、树脂型号为HPD-100，最佳吸附条件为径高比17，体积流量3BV/h，流速为4BV/h，吸附pH值为6 ;(5)用75%乙醇体积分数，体积流量3BV/h进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；(6)将铃兰苦甙各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得130. 4g苦甙半成品，其含量为
76.4% ；(7)取IOg粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用75-80%浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；(8)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为98. 7%铃兰苦甙成品O. 173g实施案例3 :—种利用超声波提取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化铃兰苦甙的析方法，其步骤如下(I) 500g铃兰全草切断至5cm,加入体积分数80%乙醇,采用超声波萃取，超声频率100KHZ，料液比I 6，超声时间50min，提取温度50。。，(2)回收乙醇，薄层层析检测分析，收集铃兰苦甙部分。残渣。(3)采用超滤膜分离，膜操作压力为O. 2MPa，截留分子量5000，截留率为95% ；(4)采用大孔吸附树脂吸附纯化铃兰苦甙、树脂型号为NKA-1I，最佳吸附条件为径高比18，体积流量4BV/h，流速为5BV/h，吸附pH值为7 ;(5)用80% 乙醇体积分数，体积流量3BV/h进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液；(6)将铃兰苦甙各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得苦甙半成品512g，其含量为75. 8% ；(7)取IOg粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进有再次纯化，用水洗掉杂质，再用80-90%浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；(8)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为98.1铃兰苦甙成品
O.211g。
权利要求
1.一种利用超声波提取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化铃兰苦甙的新方法，其步骤如下 (1)超声提取 铃兰全草切断至3-5cm，加入一定浓度乙醇，采用超声波萃取，超声频率50-100KHZ，料液比I 4-6，超声时间30-50min，提取温度40-50°C ； (2)收集 回收乙醇，薄层层析检测分析，收集铃兰苦甙部分； (3)超滤分离 采用一定截留分子量的超滤膜分离，膜操作压力为0. 2-0. 3MPa，截留率为90-95% ； (4)大孔树脂纯化 采用大孔树脂吸附纯化铃兰苦甙、树脂型号为AB-8、HPD-100或NKA-1I中的一种，最佳吸附条件为径高比1: 6-1 8，体积流量2-4BV/h，流速为3-5BV/h ; (5)洗脱 用体积分数70-80%乙醇，体积流量2-3BV/h条件下进行解析，用薄层色谱法跟踪检测，收集各阶段洗脱液； (6)得半成品 回收乙醇，将铃兰苦甙各阶段洗脱液浓缩，得苦甙半成品，其含量为75%以上； (7)硅胶柱层析 粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，干法上样，上200-300目硅胶柱层析对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70-90%浓度的乙醇洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测； (8)回收乙醇，收集洗脱液浓缩，冷冻干燥，得到含量为98%以上铃兰苦甙成品。
2.根据权利要求1所述的利用超声波提取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化铃兰苦甙的新方法，其特征是在所述的步骤(I)中，乙醇体积浓度为70-80%。
3.根据权利要求2所述的利用超声波提取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化铃兰苦甙的新方法，其特征是在所述的步骤(3)中，超滤膜截留分子量为500-6000。
4.根据权利要求3所述的利用超声波提取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化铃兰苦甙的新方法，其特征是在所述的步骤(4)中，大孔树脂吸附时，调整吸附pH值为6-7。
全文摘要
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生铃兰里提取铃兰苦甙的方法，特别是涉及一种利用超声波提取、超滤分离、大孔树脂吸附再结合柱层析纯化的新方法。本发明优点1、应用超声波提取技术，有效成分溶出速度快，活性成分损失少。2、采用大孔树脂纯化技术，有效成分纯化效果好，有利于工业化大生产。3、超滤是在常温下进行的，因此避免了因热效应引起的有效成分结构变化、损失以及生理活性降低，提高了有效成分的收率。本发明利用超声波提取与大孔树脂藕联技术，先用乙醇做提取溶剂，经过超滤分离，再经大孔树脂纯化，柱层析进一步纯化后；将铃兰中的苦甙纯度提高到98.7％。
文档编号C07J71/00GK103044516SQ20121059562
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月13日 优先权日2012年12月13日
发明者张亚红, 姚德坤, 姚德利, 万莉, 祁佩时 申请人:大兴安岭林格贝有机食品有限责任公司