专利名称：龙胆苦苷在抗病毒药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及龙胆苦苷或含龙胆苦苷50％以上的龙胆总苷在抗病毒药物中的新用途，属于医药领域。
背景技术：
病毒性心肌炎(viralmyocarditis，VMC)是由病毒感染引起的心脏病，已成为儿童和青少年猝死的一个重要原因。根据世界卫生组织(WHO)全球病毒病监测研究报道显示VMC在新生儿、儿童中的发病率为360/10万，死亡率为8％。根据流行病学调查显示约45％～60％心肌炎与近期或复发的柯萨奇病毒(CVB3)感染有关。CVB3可引起轻微的上呼吸道感染以及无菌性脑炎；在小儿中也可引起下呼吸道感染，但症状较轻微。CVB3可黏附心肌细胞，与受体结合，穿透细胞膜，于细胞内复制，直接损伤细胞或间接的免疫反应引起VMC。可见VMC是一种严重危害人民健康且不易治疗的疾病。目前现代医学对本病的治疗没有特效的抗CVB3药物，中药如黄芪和苦参等制剂经临床应用证明，对VMC虽有一定治疗作用，但成本较高，成分较复杂，疗效并不令人满意。因此，寻找有效抗病毒治疗VMC的药物成为当代医药学的迫切需要。
汉坦病毒感染可引起肾综合征出血热(HFRS)及汉坦病毒肺综合征(HPS)等急性病毒性传染病，流行于世界上很多国家和地区。HFRS是一类以发热、出血和肾脏损害为主要临床特征的疾病，全世界90％以上的HFRS病例发生在我国，疫情非常严重，年发病率超过十万人，且以青壮年居多，死亡率约5-10％，已成为我国目前死亡人数最多的急性病毒性传染病之一。汉坦病毒(HTNV)隶属于布尼亚病毒科汉坦病毒属，在我国发生的HFRS主要由该病毒引起；此外，HTNV还可被用作潜在的生物战剂，已被国际社会列入《禁止生物武器公约》，因此对HTNV的研究具有十分重要的意义。对HFRS的治疗，迄今还没有特异、有效的治疗药物，临床上主要是采取血液透析等方法进行对症处理，且费用昂贵。
龙胆苦苷是从中药秦艽中提取的裂环环烯醚萜化合物，研究表明，龙胆总苷(含龙胆苦苷在50％以上)可用于制备促进胃肠消化功能药物(中国专利97108434.3)，龙胆苦苷还可用于制备抑制乙型肝炎病毒药物(中国专利200410073488.7)，用于制备保肝利胆抗炎药物(中国专利03114558.2)。目前已知龙胆苦苷具有抗乙肝病毒的药理学作用，但其抗CVB3和HTNV病毒作用未见研究报道。
发明内容
本发明的目的是提供龙胆苦苷或含龙胆苦苷50％以上的龙胆总苷在抗病毒药物中的新用途，即在制药中的新应用。
本发明涉及龙胆苦苷或含龙胆苦苷50％以上的龙胆总苷在抗病毒性心肌炎药物中的应用。
本发明涉及龙胆苦苷或含龙胆苦苷50％以上的龙胆总苷在抗汉坦病毒感染所引起肾综合征出血热(HFRS)及汉坦病毒肺综合征(HPS)药物中的应用。
为实现上述目的，本发明的技术方案是从秦艽中制备出龙胆总苷(含龙胆苦苷50％以上)，再精制成龙胆苦苷，利用其抗病毒活性，可应用于制备治疗VMC以及汉坦病毒感染所引起的HFRS和HPS的药物。
龙胆苦苷的制备工艺如下取秦艽，用5-20倍量水煎煮三次，每次15分钟，合并煎煮液离心取上清液；水煎液上D101大孔树脂柱，每克树脂上0.8mL药液2～6倍量的水洗脱，弃去水洗液，大孔树脂再用3～10倍30％的乙醇洗脱，回收洗脱液中的乙醇，减压抽干，得残留物，即龙胆总苷(含龙胆苦苷50％以上)，将龙胆总苷水解后再按上述方法上大孔树脂，30％的乙醇洗脱，回收洗脱液后的残留物溶于2～5倍量的95％乙醇中，过滤，回收乙醇并抽干，再用95％乙醇溶解，再抽干，最后溶于浓乙醇中，放置，析出结晶，过滤，得龙胆苦苷纯品。
有效成分用龙胆苦苷制备抗病毒药物以常规药用制剂的形式来使用；所述的常规药物用制剂含作为活性成分在制剂中与药学上可接受的载体如适宜于肠胃内和肠胃外给药的有机或无机的固体或液体赋形剂混合，该药用制剂可以是固体形式如片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、颗粒剂，也可以是液体形式如注射剂、乳剂等。
上述制剂中可含有辅助物质、稳定剂、润湿剂和其它常用的添加剂，如乳糖、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸镁、石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、花生油、橄榄油、可可脂、乙二醇、抗坏血酸、甘露醇等。
上述的制剂可按照各种制剂常规的制备工艺制成。
体外抗病毒实验证实龙胆苦苷具有抗CVB3和HFRS的活性，因此，龙胆苦苷将可用于制备治疗由这两种病毒引起的病毒性心肌炎和肾综合征出血热等病毒性疾病的药物。
为更好地理解本发明的实质，下面用龙胆苦苷的药理试验及结果来说明其在制药领域中的新用途。
龙胆苦苷的的体外抗病毒实验实验一、考察龙胆苦苷对CVB3的直接灭活作用在24孔板上，加0.5×104/mL浓度的心肌细胞1mL/孔，培养24h，除正常组每孔加100TCID的CVB31mL，孵育1h后，弃去上清液，PBS冲洗3次，加入龙胆苦苷，药物终浓度为1、0.1、0.01mmoL/mL，阳性对照组加入病毒唑1mmoL/mL，每组四孔，加细胞维持液，5％CO2孵箱培养72h，逐日观察细胞病变效应(CPE)。最后用MTT法检测细胞存活率。
实验结果感染病毒后，病毒组所致的CPE特征为细胞皱缩、变圆、脱落、碎裂(
图1所示)。病毒唑组细胞皱缩、脱落，无节律性搏动(图5所示)；龙胆苦苷治疗组细胞仍能够呈节律性搏动，部分细胞皱缩，对CVB3的抑制率与其浓度呈正相关(图2-4所示)。结果显示龙胆苦苷对CVB3具有直接灭活作用。量效关系见表1。
表1龙胆苦苷对CVB3的抑制作用
实验二、考察龙胆苦苷对HTNV的直接灭活作用在24孔板上，加0.5×104/mL浓度的Vero细胞1mL/孔，培养24h，除正常组每孔加100TCID的HTNV1mL，孵育1h后，弃去上清液，PBS冲洗3次，加入龙胆苦苷，药物终浓度为1、0.1、0.01mmoL/mL，阳性对照组加入病毒唑1mmoL/mL，每组四孔，加细胞维持液，5％CO2孵箱培养72h，逐日观察细胞病变效应(CPE)。最后用ElASA法检测病毒滴度。
实验结果感染病毒后，病毒组所致的CPE特征为部分细胞开始老化并有卷缩变形，然后部分脱落。病毒唑组细胞皱缩、脱落；龙胆苦苷治疗组细胞部分细胞皱缩，但无脱落。对HTNV的抑制率与其浓度呈正相关。结果显示龙胆苦苷对HTNV具有直接灭活作用。
发明的有益效果龙胆苦苷或含龙胆苦苷50％以上的龙胆总苷具有抗CVB3和HTNV病毒的药理活性，以龙胆苦苷为药用原料制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、糖浆剂，可用于治疗病毒性心肌炎及肾综合征出血热等疾病。
具体实施例方式
实施例1药用制剂龙胆苦苷制备成片剂，以生产片剂产品1000片为例所用原料和辅料及其重量配比如下龙胆苦苷200g淀粉100g
或龙胆总苷(含龙胆苦苷约70％)285g淀粉 100g其制备工艺按制剂学片剂的常规工艺进行，每片重0.3g，每片含龙胆苦苷200mg。用法用量口服，每次1片，一日1次，小儿酌减，30天为一个疗程。
实施例2药用制剂龙胆苦苷制备成胶囊剂，以生产胶囊剂产品1000粒为例所用原料和辅料及其重量配比如下龙胆苦苷 200g淀粉 100g或龙胆总苷(含龙胆苦苷约70％)285g淀粉 100g其制备工艺按制剂学胶囊剂的常规工艺进行，每粒重0.3g，每粒含龙胆苦苷200mg。用法用量口服，每次1片，一日1次，小儿酌减，30天为一个疗程。
实施例3药用制剂龙胆苦苷制备成颗粒剂，以生产颗粒剂产品1000g为例所用原料和辅料及其重量配比如下龙胆苦苷 200g蔗糖 400g糊精 400g或龙胆总苷(含龙胆苦苷约70％)285g蔗糖 400g糊精 400g其制备工艺按制剂学颗粒剂的常规工艺进行，每袋重1g，每袋含龙胆苦苷200mg。用法用量口服，每次1袋，一日1次，小儿酌减，30天为一个疗程。
实施例4药用制剂龙胆苦苷制备成糖浆剂，以生产糖浆剂产品1000mL为例所用原料和辅料及其重量配比如下龙胆苦苷 200g蔗糖 600g蒸馏水加至1000mL或龙胆总苷(含龙胆苦苷约70％)285g蔗糖 600g蒸馏水加至1000mL其制备工艺按制剂学颗粒剂的常规工艺进行，每瓶10mL，1mL含龙胆苦苷20mg。用法用量口服，每次1瓶，一日1次，小儿酌减，30天为一个疗程。
实施例5药用制剂龙胆苦苷制备成注射剂，以生产注射剂产品1000支为例所用原料和辅料及其重量配比如下龙胆苦苷 200g注射用甘露醇 20g或龙胆总苷(含龙胆苦苷约70％)285g注射用甘露醇 20g其制备工艺按制剂学注射剂的常规工艺进行，每支重0.22g，每支含龙胆苦苷200mg。用法用量溶解在250mL葡萄糖注射液中，一日1次，小儿酌减，30天为一个疗程。
权利要求
1.龙胆苦苷或含龙胆苦苷50％以上的龙胆总苷在制备治疗抗柯萨奇病毒药物中的用途。
2.龙胆苦苷或含龙胆苦苷50％以上的龙胆总苷在制备治疗抗汉坦病毒药物中的用途。
3.龙胆苦苷或含龙胆苦苷50％以上的龙胆总苷在制备治疗病毒性心肌炎药物中的用途。
4.龙胆苦苷或含龙胆苦苷50％以上的龙胆总苷在制备治疗肾综合征出血热药物中的用途。
5.龙胆苦苷或含龙胆苦苷50％以上的龙胆总苷在制备治疗汉坦病毒肺综合征药物中的用途。
6.根据权利要求1-5任意之一所述用途，其特征在于制备的药物采用片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、颗粒剂、注射剂或乳剂。
全文摘要
本发明公开了龙胆苦苷或含龙胆苦苷50％以上的龙胆总苷在抗病毒药物中的新用途。体外抗病毒实验证实龙胆苦苷具有抗CVB
文档编号A61K36/515GK1965853SQ20061010485
公开日2007年5月23日 申请日期2006年11月6日 优先权日2006年11月6日
发明者孙晓莉, 孙文基, 王四旺, 丁媛媛, 王海波 申请人:中国人民解放军第四军医大学