用于慢性乙型肝炎病毒感染的基于酵母的治疗剂的制作方法

用于慢性乙型肝炎病毒感染的基于酵母的治疗剂的制作方法
【专利摘要】披露了用于治疗和/或预防HBV感染及其症状的基于酵母的免疫治疗组合物、乙肝病毒(HBV)抗原和融合蛋白，以及使用基于酵母的免疫治疗组合物、HBV抗原和融合蛋白来预防性和/或治疗性治疗HBV和/或其症状的方法。
【专利说明】用于慢性乙型肝炎病毒感染的基于酵母的治疗剂
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请根据35U.S.C.§ 119(e)要求下述各项申请的优先权:2011年2月12日提交的美国临时申请61/442，204、2011年6月14日提交的美国临时申请61/496，945和2011年7月13日提交的美国临时申请61/507，361。美国临时申请61/442，204、美国临时申请61/496,945和美国临时申请61/507，361各自的全部公开内容通过引用并入本文。 [0003]序列表的引用
[0004]本申请含有通过EFS-Web以文本文件形式电子提交的序列表。该名为“3923-32-PCT_ST25”的文本文件的大小为476KB，2012年2月7日记录。该文本文件所含的信息根据37CFR§ 1.52(e) (5)通过引用全部并入本文。
发明领域
[0005]本发明一般地涉及用于预防和/或治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染的免疫治疗组合物和方法。
[0006]发明背景
[0007]乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝病毒家族的成员，是世界范围内急性和慢性肝炎的致病因素。HBV疫情在亚洲和非洲流行，HBV感染是中国的地方性流行病(Williams，R.(2006)，"Global challenges in liver disease^, Hepatology(Baltimore, Md.)44(3):521- 526)。已有超过20亿人口感染该病毒，据估计全世界有3亿5千万慢性HBV感染个体(“Hepatitis B”，World Health Organization, 2009 ;“FAQ About Hepatitis B”，StanfordSchool of Medicine.2008-07-10)。感染途径是通过血液和体液接触，包括输血和静脉注射毒品、性传播、咬伤和损口，以及垂直传播(例如分娩)。
[0008]已发现的HBV根据其包膜蛋白内的抗原表位确定有四种主要血清型(adr、adw、ayr、ayw)。根据基因组中的核苷酸序列变异有八种不同基因型(A-H)。基因型的差别影响着疾病的严重程度、病程和并发症的可能性、对治疗的响应和对接种疫苗的可能响应(Kramvis et al., (2005), Vaccine23(19):2409 - 2423;Magnius and Norder, (1995),Intervirology38(1-2):24 - 34)。
[0009]HBV的临床潜伏期通常为2-3个月；约三分之二这些急性感染者无症状或只有轻度、亚临床症状。其余三分之一的急性感染者可能出现黄疸、肝的炎症、呕吐、疼痛和/或轻度发热，但在多数成年人中疾病最终消退，很少会导致肝衰竭。事实上，约95%的成年人能够从HBV感染完全恢复，不会成为慢性感染。然而，约90%的婴儿和25% -50%的1_5岁儿童会持续慢性感染 HBV (Centers for Disease Control and Prevention, 2010 年 9 月)。在童年成为慢性感染的个体约有25%、童年后成为慢性感染的约有15%会过早地死于肝硬化或肝癌，大多数慢性感染者在出现肝硬化或末期肝病之前仍然没有症状(CDC，2010年9月)。每年全球有I百万人(美国每年的死亡人数约2000-4000)死于慢性HBV感染。慢性感染者有升高的血清谷丙转氨酶(ALT)水平(肝损伤标记物)、肝脏炎症和/或肝活检时可见的纤维化。对于那些发展为肝硬化的患者，5年生存率约50%。[0010]HBV感染及其治疗通常是通过检测病毒抗原和/或针对抗原的抗体来监测。感染HBV后，第一个可检测到的抗原是乙型肝炎表面抗原(HBsAg)，然后是乙型肝炎“e”抗原(HBeAg)。表明病毒清除的是血清中出现抗HBsAg和/或抗核心抗原(HBcAg)的抗体，又称为血清转换。大量研究表明在感染HBV的个体中病毒复制、血症水平和发展为慢性感染状态受到通过辅助性⑶4+ (Th)和⑶8+细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)介导的HBV特异性细胞免疫的直接和间接影响。发展为慢性疾病的患者与消除了急性感染的患者相比，往往没有、有较弱的或者狭隘的HBV特异性T细胞反应。参见例如Chisari, 1997, J Clin Invest99:1472-1477;Maini et al., 1999, Gastroenterology117:1386-1396;Rehermann et al., 2005, Nat Rev Tmmunol2005;5:215-229;Thimme etal., 2001, J Virol75:3984-3987;Urbani et al., 2002, J Virol76:12423-12434;ffielandand Chisari, 2005, J Viro179:9369-9380;Webster et al., 2000, Hepatology32:1117-1124;Penna et al., 1996,J Clin Invest98:1185-1194;Sprengers et al.,2006,JHepatol2006;45:182-189。
[0011]用于预防HBV的疫苗从1980年代早期已有商品。目前的商品疫苗是没有传染性的亚基病毒疫苗，其提供纯化的重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)，在出生时即可开始给药。该疫苗已经有效地降低了常规给予疫苗的那些国家的感染发生率。虽然有几项免疫疗法正在开发中，包括各种HBV蛋白或抗原表位疫苗和细胞因子，目前美国没有已被批准的用于治疗活性HBV感染的免疫疗法。
[0012]目前HBV感染的护理标准(SOC)疗法主要包括抗病毒药物，比如替诺福韦(tenofovir) {VIREAD?)、拉米夫定(Iamivudine) (EPIVIR?)、阿德福
韦(adefovir) (HEPSERA?)、替比夫定(telbivudine) (TYZEKA&)和恩
替卡韦(entecavir) (BARACLUDEli),以及干扰素a 2a和聚乙二醇干扰素
a2a(PEGASYSk)。这些药物，特别是抗病毒药物通常要长时间给药(例如每日或者每
周给药一到五年或者更久)，而且它们虽然能减慢或者终止病毒复制，但一般不能提供完全“愈合”或者消除病毒。基于干扰素的方法有毒性并且缓解率不太大。抗病毒疗法能够抑制病毒复制，比干扰素的耐受性好，但正如以上提到的，这些药物一般无法彻底地治愈病毒，一些情况中不能达到长期缓解率。而且在一些病例中发展出了药物抗性。例如，拉米夫定是一种强力的抑制HBV逆转录酶(Pol)的口服抗病毒药物。因为拉米夫定能够被较好地耐受，并且现在是非专利药物，在发展中国家中它是HBV抗病毒疗法的一个选项。然而，由Pol序列中的点突变造成的每年20%病毒抗性率限制了拉米夫定对HBV的用途。此外，HBV基因型之间对目前的抗病毒和干扰素治疗的反应效率不同(Cao, World Journal of Gastroenterology2009 ;15(46): 5761 - 9)，在一些患者中，由于乙型肝炎病毒DNA在感染被清除后仍能呆在体内，有可能随着时间病毒发生再次激活。
[0013]因此，虽然标准治疗(SOC)疗法对罹患慢性HBV的患者是目前最好的已被批准的疗法，治疗时间长和治疗方案的明显副作用会导致不依从、减少剂量和停止治疗，以及病毒逃避、病毒再活化和对疗法仍然没有响应或者不能维持响应的患者。因此，改进的HBV感染治疗方法是该领域中仍然需要的。[0014]发明概述
[0015]发明的一个实施方案涉及用于治疗和/或预防乙型肝炎病毒(HBV)感染和/或HBV感染症状的免疫治疗组合物。所述免疫治疗组合物包含:(a)酵母媒介物；和(b) —或多个HBV抗原。在一个方面中，HBV抗原被提供为一或多个融合蛋白，虽然也可以提供单蛋白HBV抗原。HBV抗原由下述构成:(i) HBV表面抗原，其包含全长HBV大(L)、中(M)和/或小⑶表面抗原的至少一个免疫原性结构域；(ii) HBV聚合酶抗原，其包含全长HBV聚合酶或其结构域(例如逆转录酶(RT)结构域)的至少一个免疫原性结构域；(iii)HBV核心抗原或者HBV e-抗原，分别包含全长HBV核心蛋白和/或全长HBV e抗原的至少一个免疫原性结构域；和/或(iv)HBV X抗原，其包含全长HBV X抗原的至少一个免疫原性结构域。组合物能够激发HBV特异性免疫反应，所述免疫反应对抗组合物中的一或多个HBV抗原，和/或对抗感染了或者可能感染某个体的乙型肝炎病毒HBV的一或多个抗原。
[0016]在本文描述的任何发明实施方案中，包括涉及免疫治疗组合物、HBV抗原、融合蛋白或者所述组合物、HBV抗原或融合蛋白的用途的任何实施方案中，在一个方面中，HBV大表面抗原(L)的氨基酸序列包括，但不限于SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:1USEQID NO: 15,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:23,SEQ DI N0:27或SEQ ID NO:31 所代表的氨基酸序列，或者来自另一 HBV毒株/分离株的对应序列。HBV聚合酶的氨基酸序列包括，但不限于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 32所代表的氨基酸序列，或者来自另一 HBV毒株/分离株的对应序列。
[0017]在本文描述的任何发明实施方案中，包括涉及免疫治疗组合物、HBV抗原、融合蛋白或者所述组合物、HBV抗原或融合蛋白的用途的任何实施方案中，在一个方面中，作为HBV抗原或者用在本发明的融合蛋白或免疫治疗组合物中的HBV表面抗原的氨基酸可以包括，但不限于 SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 11 的位点 21-47、SEQID NO: 11 的位点 176-400、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID N0:31、SEQ ID NO:34 的位点 9_407、SEQ ID NO:36 的位点 6_257、SEQ ID NO:41 的位点 6-257、SEQ ID NO:92 的位点 92-343、SEQ ID NO:93 的位点 90-488、SEQ ID N0:97、SEQ ID N0:10UW1690-338、SEQ ID NO: 102 的位点 7_254、SEQ ID NO: 107 的位点 1-249、SEQ ID NO: 108 的位点 1-249,SEQ ID NO: 109 的位点 1-249,SEQ ID NO: 110 的位点 1-249、SEQ ID NO: 112 的位点 1-399、SEQ ID NO: 114 的位点 1-399、或者 SEQ ID NO: 116 的位点1-399,SEQ ID NO: 118 的位点 1-399,SEQ ID NO: 120 的位点 1-399,SEQ ID NO: 122 的位点1-399,SEQ ID NO: 124 的位点 1-399,SEQ ID NO: 126 的位点 1-399,SEQ ID NO: 128 的位点231-629、SEQ ID NO: 130 的位点 63-461、SEQ ID NO: 132 的位点 289-687、SEQ ID NO: 134的位点289-687、或者来自不同HBV株的对应序列。
[0018]在本文描述的任何发明实施方案中，包括涉及免疫治疗组合物、HBV抗原、融合蛋白或者所述组合物、HBV抗原或融合蛋白的用途的任何实施方案中，在一个方面中，作为HBV抗原或者用在本发明的融合蛋白或免疫治疗组合物中的HBV聚合酶抗原的氨基酸可以包括，但不限于 SEQ ID N0:2 的位点 383-602、SEQ ID N0:6 的位点 381_600、SEQ ID NO: 10的位点 381-600、SEQ ID NO: 10 的位点 453-680、SEQ ID NO: 14 的位点 370-589、SEQ IDNO: 18 的位点 380-599, SEQ ID NO:22 的位点 381-600, SEQ ID NO:26 的位点 380-599, SEQID N0:30 的位点 381-600、SEQ ID NO:36 的位点 260-604、SEQ ID NO:38 的位点 7_351、SEQID N0:40 的位点 7-351、SEQ ID NO:41 的位点 260_604、SEQ ID NO:92 的位点 346_690、SEQID NO:94 的位点 90-434、SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 101 的位点 339-566、SEQ ID NO: 102的位点 255-482、SEQ ID NO: 107 的位点 250-477、SEQ ID NO: 108 的位点 250-477、SEQ IDNO: 109 的位点 250-477、SEQ ID NO: 110 的位点 250-477、SEQ ID NO: 120 的位点 582-809、SEQ ID NO: 124 的位点 582-809、SEQ ID NO: 126 的位点 642-869、SEQ ID NO: 128 的位点1-228,SEQ ID NO: 132 的位点位点 1_228、SEQ ID NO: 134 的位点 61-288、或者来自不同 HBV株的对应序列。
[0019]在本文描 述的任何发明实施方案中，包括涉及免疫治疗组合物、HBV抗原、融合蛋白或者所述组合物、HBV抗原或融合蛋白的用途的任何实施方案中，在一个方面中，作为HBV抗原或者用在本发明的融合蛋白或免疫治疗组合物中的HBV核心抗原的氨基酸可以包括，但不限于 SEQ ID NO:1 的位点 31-212、SEQ ID NO:5 的位点 31-212、SEQ ID NO:9 的位点 31-212、SEQ ID NO: 9 的位点 37-188、SEQ ID NO: 13 的位点 31-212、SEQ ID N0:17 的位点 31-212、SEQ ID NO:21 的位点 31-212、SEQ ID NO:25 的位点 14-194、SEQ ID NO:29 的位点 31-212、SEQ ID NO:34 的位点 408_589、SEQ ID NO:36 的位点 605_786、SEQ ID NO:38的位点 352-533、SEQ ID NO:39 的位点 160-341、SEQ ID NO:41 的位点 605-786、SEQ IDNO:92 的位点 691-872、SEQ ID N0:95 的位点 90-271、SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 101 的位点 567-718、SEQ ID NO: 102 的位点 483_634、SEQ ID NO: 105 的位点 2_183、SEQ ID NO: 105的位点 184-395、SEQ ID NO: 105 的位点 396-578、SEQ ID NO: 105 的位点 579-761、SEQ IDNO: 106 的位点 2-183、SEQ ID NO: 106 的位点 338-520、SEQ ID NO: 107 的位点 478-629、SEQ ID NO: 108 的位点 478-629、SEQ ID NO: 109 的位点 478-629、SEQ ID NO: 110 的位点478-629, SEQ ID NO: 112 的位点 400-581、SEQ ID NO: 114 的位点 400-581、SEQ ID NO: 116的位点 400-581、SEQ ID NO: 118 的位点 400-581、SEQ ID NO: 120 的位点 400-581、SEQ IDNO: 122 的位点 400-581、SEQ ID NO: 124 的位点 400-581、SEQ ID NO: 126 的位点 400-581、SEQ ID NO: 128 的位点 630-811、SEQ ID NO: 130 的位点 462-643、SEQ ID NO: 132 的位点688-869, SEQ ID NO: 134的位点688-869，或者来自不同HBV株的对应序列。
[0020]在本文描述的任何发明实施方案中，包括涉及免疫治疗组合物、HBV抗原、融合蛋白或者所述组合物、HBV抗原或融合蛋白的用途的任何实施方案中，在一个方面中，作为HBV抗原或者用在本发明的融合蛋白或免疫治疗组合物中的HBV X抗原的氨基酸可以包括，但不限于 SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 12 的位点 2-154、SEQID NO: 16、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO:4 的位点 52-68 接着是位点 84-126、SEQ ID NO: 8 的位点 52-68 接着是位点 84_126、SEQ ID NO: 12的位点52-68接着是位点84-126,SEQ ID NO: 16的位点52-68接着是位点84-126,SEQ IDNO:20的位点52-68接着是位点84-126、SEQ ID NO:24的位点52-68接着是位点84-126、SEQ ID NO:28的位点52-68接着是位点84-126、SEQ ID NO:32的位点52-68接着是位点84-126,SEQ ID NO:36 的位点 787_939、SEQ ID NO:39 的位点 7_159、SEQ ID N0:92 的位点873-1025, SEQ ID NO: 96 的位点 90-242、SEQ ID NO: 100, SEQ ID N0:101 的位点 719-778、SEQ ID NO: 102 的位点 635-694、SEQ ID NO: 106 的位点 184-337、SEQ ID NO: 106 的位点521-674、SEQ ID NO: 107 的位点 630-689、SEQ ID NO: 108 的位点 630-689、SEQ ID NO: 109的位点 630-689、SEQ ID NO: 110 的位点 630-689、SEQ ID NO: 122 的位点 582-641、SEQ IDNO: 124 的位点 810-869, SEQ ID NO: 126 的位点 582-641, SEQ ID NO: 130 的位点 1-60, SEQID NO: 132的位点229-288,SEQ ID NO: 134的位点1-60，或者来自不同HBV株的对应序列。
[0021]在一个实施方案中，本发明包括免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV抗原的融合蛋白，其中所述HBV抗原由下述构成:⑴包含全长HBV X抗原的至少一个免疫原性结构域的HBV X抗原；(ii)包含全长HBV大表面抗原(L)的至少一个免疫原性结构域的HBV表面抗原，和(iii)包含全长HBV核心蛋白的至少一个免疫原性结构域的HBV核心抗原。在该实施方案的一个方面中，免疫治疗组合物包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV抗原的融合蛋白，其中所述HBV抗原由下述构成:(i)HBV X抗原，其含有的氨基酸序列与全长HBV X抗原的位点52-126至少80%相同；(ii)HBV表面抗原，其含有的氨基酸序列与全长HBV大表面抗原(L)的氨基酸序列至少95%相同，和(iii)HBV核心抗原，其含有的氨基酸序列与全长HBV核心蛋白的氨基酸序列至少95%相同。所述组合物引发HBV特异性免疫反应。
[0022]在该发明实施方案的一个方面中，HBV X抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO: 130 的位点 1-60,SEQ ID NO: 110 的位点 630_689、SEQ ID NO: 122的位点 582-641、SEQ ID NO: 107 的位点 630-689、SEQ ID NO: 108 的位点 630-689、SEQ IDN0:10MW16630-689、SEQ ID NO:4 的位点 52-68接着是位点 84_126、SEQ ID N0:8 的位点52-68 接着是位点 84-126、SEQ ID NO: 12 的位点 52-68 接着是位点 84-126、SEQ ID NO: 16的位点52-68接着是位点84-126,SEQ ID NO:20的位点52-68接着是位点84-126,SEQ IDNO:24的位点52-68接着是位点84-126、SEQ ID NO:28的位点52-68接着是位点84-126、SEQ ID NO:32 的位点 52-68 接着是位点 84-126、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 101 的位点719-778、SEQ ID NO: 102 的位点 635-694、SEQ ID NO: 124 的位点 810-869、SEQ ID NO: 126的位点 582-641、SEQ ID NO: 132 的位点 229_288、SEQ ID NO: 134 的位点 1-60，或者来自不同HBV株的对应序列。在一个 方面中，HBV X抗原的氨基酸序列选自:SEQ ID N0:130的位点 1-60、SEQ ID NO: 110 的位点 630-689、SEQ ID NO: 109 的位点 630-689、SEQ ID NO: 108的位点630-689、SEQ ID NO: 107的位点630-689、SEQ ID NO: 100，或者来自不同HBV株的对应序列。
[0023]在该发明实施方案的一个方面中，HBV表面抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO: 130 的位点 63-461、SEQ ID NO: 118 的位点 1-399、SEQ IDNO: 122 的位点 1-399、SEQ ID NO:34 的位点 9-407、SEQ ID NO: 112 的位点 1-399、SEQ IDNO: 114 的位点 1-399、SEQ ID NO: 116 的位点 1-399、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:1USEQ ID NO: 15,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:27,SEQ ID N0:3USEQ IDNO: 93 的位点 90-488、SEQ ID NO: 120 的位点 1-399、SEQ ID NO: 124 的位点 1-399、SEQ IDNO: 126 的位点 1-399,SEQ ID NO: 128 的位点 231-629,SEQ ID NO: 132 的位点 289-687,SEQID NO: 134的位点289-687，或者来自不同HBV株的对应序列。在一个方面中，HBV表面抗原的氨基酸序列选自:SEQ ID NO: 130的位点63-461、SEQ ID NO: 118的位点1-399、SEQ IDNO: 122 的位点 1-399、SEQ ID NO:34 的位点 9-407、SEQ ID NO: 112 的位点 1-399、SEQ IDNO: 114的位点1-399、SEQ ID NO: 116的位点1_399，或者来自不同HBV株的对应序列。 [0024]在该发明实施方案的一个方面中，HBV核心抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID N0:13(^Wl€462-643、SEQ ID NO: 118 的位点 400_581、SEQ IDNO: 122 的位点 400-581、SEQ ID NO: 34 的位点 408-589、SEQ ID NO: 112 的位点 400-581、SEQID NO: 114 的位点 400-581、SEQ ID NO: 116 的位点 400-581、SEQ ID NO:1 的位点 31_212、SEQID N0:5 的位点 31-212、SEQ ID NO:9 的位点 31_212、SEQ ID NO: 13 的位点 31_212、SEQ IDNO: 17 的位点 31-212、SEQ ID NO: 21 的位点 31-212、SEQ ID NO: 25 的位点 14-194、SEQ IDN0:29的位点31-212、SEQ ID NO: 36 的位点 605_786、SEQ ID NO: 38 的位点 352_533、SEQ IDNO:39 的位点 160-341, SEQ ID NO: 41 的位点 605-786、SEQ ID NO:92 的位点 691-872、SEQID N0:95 的位点 90-271、SEQ ID NO: 105 的位点 2_183、SEQ ID NO: 105 的位点 184_395、SEQID NO: 105 的位点 396-578,SEQ ID NO: 105 的位点 579_761、SEQ ID NO: 106 的位点 2-183、SEQ ID NO: 106 的位点 338-520、SEQ ID NO: 120 的位点 400-581、SEQ ID NO: 124 的位点400-581, SEQ ID NO: 126 的位点 400-581、SEQ ID NO: 128 的位点 630-811、SEQ ID NO: 132的位点688-869、SEQ ID NO: 134的位点688-869，或者来自不同HBV株的对应序列。在一个方面中，HBV核心抗原的氨基酸序列选自:SEQ ID NO: 130的位点462-643、SEQ ID NO: 118的位点 400-581、SEQ ID NO: 122 的位点 400-581、SEQ ID NO:34 的位点 408-589、SEQ IDNO: 116 的位点 400-581、SEQ ID NO: 112 的位点 400-581、SEQ ID NO: 114 的位点 400-581，或者来自不同HBV株的对应序列.[0025]在该发明实施方案的一个方面中，融合蛋白中HBV抗原从N到C端以下列顺序排列:HBV X抗原、HBV表面抗原、HBV核心抗原。在该发明实施方案的一个方面中，融合蛋白中HBV抗原从N到C端以下列顺序排列:HBV表面抗原、HBV核心抗原、HBV X抗原。
[0026]在该发明实施方案的一个方面中，融合蛋白包含的氨基酸序列与选自SEQ IDNO: 130、SEQ ID NO: 122或SEQ ID NO: 150的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同，或者完全相同。
[0027]发明再一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)来自酿酒酵母的完整热灭活酵母菌；和(b)所述酵母表达的HBV融合蛋白，其中融合蛋白包含SEQ ID NO: 130。
[0028]发明另一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)来自酿酒酵母的完整热灭活酵母菌；和(b)所述酵母表达的HBV融合蛋白，其中融合蛋白包含SEQ ID NO: 150。
[0029]发明再一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)来自酿酒酵母的完整热灭活酵母菌；和(b)所述酵母表达的HBV融合蛋白，其中融合蛋白包含SEQ ID N0:122。在一个方面中，融合蛋白是下述序列从N到C端读框内融合的单个多肽:(I)SEQ ID N0:37的氨基酸序列；(2)苏氨酸-丝氨酸的双氨基酸连接肽；(3) SEQ ID NO: 122的氨基酸序列；和
(4)六氨基酸肽。
[0030]在发明的另一实施方案中，免疫治疗组合物包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV抗原的融合蛋白，其中所述HBV抗原由下述构成:(i)HBV大表面抗原(L)的至少一个免疫原性结构域；和(ii)HBV核心蛋白或HBV e抗原的至少一个免疫原性结构域。组合物引发HBV特异性免疫反应，比如抗HBV大表面抗原(L)和/或HBV核心蛋白或HBV e抗原的免疫反应。[0031]在一个实施方案中，本发明包括免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV抗原的融合蛋白，其中所述HBV抗原由下述构成:(i) HBV表面抗原，其含有的氨基酸序列与全长HBV大表面抗原(L)的氨基酸序列至少95%相同；和(ii)HBV核心抗原，其含有的氨基酸序列与全长HBV核心蛋白的氨基酸序列至少95%相同。所述组合物引发HBV特异性免疫反应。在该实施方案的一个方面中，构成HBV抗原的是包含至少95%全长HBV大表面抗原(L)的氨基酸序列融合了包含至少95%全长HBV核心蛋白或HBV e抗原的氨基酸序列。在该实施方案的一个方面中，构成HBV抗原的是包含至少95%全长HBV大表面抗原(L)的氨基酸序列融合在包含至少95%全长HBV核心蛋白的氨基酸序列的N端。在一个方面中，构成HBV抗原的是HBV大表面抗原(L)的氨基酸2-400 ;和包含HBV核心蛋白和部分HBVe抗原的HBV前核心蛋白的氨基酸31-212。
[0032]在该发明实施方案的一个方面中，HBV表面抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO: 118 的位点 1-399,SEQ ID NO:34 的位点 9_407、SEQ ID NO: 116的位点 1_399、SEQ ID NO: 112 的位点 1_399、SEQ ID NO: 114 的位点 1_399、SEQ ID N0:3 或SEQ ID NO: 3 的位点 2-400、SEQ ID NO: 7 或SEQ ID NO: 7 的位点 2-400、SEQ ID NO: 11 或SEQID NO: 11 的位点 2-400、SEQ ID NO: 15 或 SEQ ID NO: 15 的位点 2_389、SEQ ID NO: 19 或 SEQID N0:19的位点2-399、SEQ ID NO: 23 或 SEQ ID NO: 23 的位点 2_400、SEQ ID NO: 27 或 SEQID NO:27 的位点 2-399、SEQ ID NO:31 或 SEQ ID NO:31 的位点 2-400、SEQ ID NO:93 的位点 90-488、SEQ ID NO: 120 的位点 1-399、SEQ ID NO: 122 的位点 1-399、SEQ ID NO: 124 的位点 1-399,SEQ ID NO: 126 的位点 1-399,SEQ ID NO: 128 的位点 231-629,SEQ ID NO: 130的位点 63-461、SEQ ID NO: 132 的位点 289_687、SEQ ID NO: 134 的位点 289-687，或者来自不同HBV株的对应序列。在一个方面中，HBV表面抗原的氨基酸序列选自:SEQ ID NO: 118的位点 1-399、SEQ ID NO:34 的位点 9-407、SEQ ID NO: 112 的位点 1-399、SEQ ID NO: 114的位点1-399、SEQ ID NO: 116的位点1_399，或者来自不同HBV株的对应序列。
[0033]在该发明实施方案的一个方面中，HBV核心抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或 至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID N0:118 的位点 400-581、SEQ ID NO:34 的位点 408_589、SEQ IDNO: 116 的位点 400-581、SEQ ID NO: 112 的位点 400-581、SEQ ID NO: 114 的位点 400-581、SEQ ID N0:1 的位点 31-212、SEQ ID NO:5 的位点 31_212、SEQ ID NO:9 的位点 31_212、SEQID NO: 13 的位点 31-212、SEQ ID NO: 17 的位点 31-212、SEQ ID NO: 21 的位点 31-212、SEQID N0:25 的位点 14-194、SEQ ID NO:29 的位点 31_212、SEQ ID NO:36 的位点 605_786、SEQID NO: 38 的位点 352-533、SEQ ID NO: 39 的位点 160-341、SEQ ID NO:41 的位点 605-786、SEQ ID N0:92 的位点 691-872、SEQ ID N0:95 的位点 90_271、SEQ ID NO: 105 的位点 2-183、SEQ ID NO: 105 的位点 184-395、SEQ ID NO: 105 的位点 396-578、SEQ ID NO: 105 的位点579-761、SEQ ID NO: 106 的位点 2-183、SEQ ID NO: 106 的位点 338-520、SEQ ID NO: 120的位点 400-581、SEQ ID NO: 122 的位点 400-581、SEQ ID NO: 124 的位点 400-581、SEQ IDNO: 126 的位点 400-581、SEQ ID NO: 128 的位点 630-811、SEQ ID NO: 130 的位点 462-643、SEQ ID N0:132的位点688-869、SEQ ID NO: 134的位点688-869，或者来自不同HBV株的对应序列。在一个方面中，HBV核心抗原的氨基酸序列选自:SEQ ID NO: 118的位点400-581、SEQ ID NO:34 的位点 408-589、SEQ ID NO: 116 的位点 400-581、SEQ ID NO: 112 的位点400-581, SEQ ID NO: 114的位点400-581，或者来自不同HBV株的对应序列。
[0034]在该发明实施方案的一个方面中，HBV抗原由SEQ ID NO: 34的氨基酸9_589，或者来自不同HBV株的对应序列构成。在一个方面中，构成HBV抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或者至少99% 相同、或完全相同:SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 34 的位点 9-589、SEQID NO: 112、SEQ ID NO: 114，或者来自不同HBV株的对应序列。在一个方面中，HBV抗原由全长或接近全长的HBV大表面抗原(L)和全长或接近全长的HBV核心蛋白构成。
[0035]在该发明实施方案的一个方面中，任何一个融合蛋白可以包含SEQ ID NO:37的N末端氨基酸序列(附着在融合蛋白的N端)。在另一个方面中，任何一个融合蛋白可以包含选自SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:90的N端氨基酸序列。在一个方面中，融合蛋白包含SEQ ID NO: 151的氨基酸序列。
[0036]发明再一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)来自酿酒酵母的完整热灭活酵母菌；和(b)所述酵母表达的HBV融合蛋白，其中融合蛋白包含SEQ ID NO: 118。
[0037]发明另一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)来自酿酒酵母的完整热灭活酵母菌；和(b)所述酵母表达的HBV融合蛋白，其中融合蛋白包含SEQ ID NO: 151。
[0038]发明再一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)来自酿酒酵母的完整热灭活酵母菌；和(b)所述酵母表达的HBV融合蛋白，其中融合蛋白包含SEQ ID N0:34的氨基酸序列。
[0039]在另一个实施方案中，本发明包括免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV抗原的融合蛋白。所述HBV抗原由下述构成:⑴由全长HBV大(L)、中(M)或小(S)表面抗原的至少一个免疫 原性结构域构成的HBV表面抗原；(ii)由全长HBV聚合酶的至少一个免疫原性结构域或者HBV聚合酶的逆转录酶(RT)结构域构成的HBV聚合酶抗原；(iii)由全长HBV核心蛋白的至少一个免疫原性结构域或者全长HBV e抗原构成的HBV核心抗原；以及(iv)由全长HBV X抗原的至少一个免疫原性结构域构成的HBV X抗原。组合物引发HBV特异性免疫反应。在该实施方案的一个方面中，HBV表面抗原包含HBV大表面抗原(L)的前SI的肝细胞受体区的至少一个免疫原性结构域和HBV小表面抗原(S)的至少一个免疫原性结构域。
[0040]在该实施方案的一个方面中，HBV抗原由下述构成:HBV大表面抗原(L)的前SI的全长肝细胞受体区的至少95%、全长HBV小表面抗原(S)的至少95%、HBVB聚合酶的逆转录酶结构域的至少95%、全长HBV核心蛋白或HBV e-抗原的至少95%，以及全长X抗原的至少95%。在一个方面中，HBV抗原由下述构成:HBV大表面抗原(L)，其包含HBV大表面抗原(L)中氨基酸120-368的至少95% ;HBV聚合酶的RT结构域，其包含HBV聚合酶的RT结构域中氨基酸453-680的至少95% ；HBV核心蛋白，其包含HBV核心蛋白中氨基酸37-188的至少95% ；和HBV X抗原，其包含HBV X抗原中氨基酸52-127的至少80%。在一个方面中，HBV抗原由下述构成:HBV大表面抗原(L)的氨基酸21-47，包含前SI的肝细胞受体结构域；HBV大表面抗原(L)的氨基酸176-400，包含HBV小表面抗原(S) ;HBV聚合酶的氨基酸247 - 691，包含逆转录酶结构域；HBV前核心蛋白的氨基酸31-212，包含HBV核心蛋白和一部分HBV e抗原；以及HBV X抗原的氨基酸2-154。在一个方面中，HBV抗原由下述构成:与HBV大表面抗原(L)的氨基酸120-368至少95%相同的氨基酸序列；与HBV聚合酶的RT结构域中氨基酸453-680至少95%相同的氨基酸序列；与HBV核心蛋白的氨基酸37-188至少95%相同的氨基酸序列；以及与HBV X抗原的氨基酸52-127至少80%相同的氨基酸序列。在一个方面中，HBV抗原经过改造引入了一或多个表5中列出的T细胞表位，在此以SEQ ID NOs:42-88或者SEQ ID NOs: 135-140代表。在一个方面中，HBV大表面抗原(L)包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列或者与SEQ ID N0:9795%相同的序列。在一个方面中，HBV聚合酶的RT结构域SEQ ID NO:98的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:9895%相同的序列。在一个方面中，HBV核心蛋白包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列或者与SEQ ID N0:9995%相同的序列。在一个方面中，HBV X抗原包含SEQ ID NO: 100的氨基酸序列或者与SEQ ID NO: 10095%相同的序列。
[0041]在该发明实施方案的一个方面中，HBV表面抗原的氨基酸序列与全长HBV大表面抗原(L)的氨基酸序列至少95%相同。在一个方面中,HBV表面抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO: 124的位点1-399、SEQ ID NO: 126的位点1-399、SEQID N0:132的位点289-687、SEQ ID NO: 134 的位点 289_687、SEQ ID NO: 3,SEQ ID NO: 7,SEQID NO:1USEQ ID NO: 15,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:27,SEQ ID N0:3USEQID NO:34 的位点 9-407、SEQ ID NO:93 的位点 90-488、SEQ ID NO: 112 的位点 1-399、SEQID NO: 114 的位点 1-399、SEQ ID NO: 116 的位点 1-399、SEQ ID NO: 118 的位点 1-399、SEQID NO: 120 的位点 1-399、SEQ ID NO: 122 的位点 1-399、SEQ ID NO: 128 的位点 231-629、SEQ ID NO: 130的位点63-461，或者来自不同HBV株的对应序列.[0042]在该实施方案的一个方面中，HBV表面抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序 列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO:97,SEQ ID NO: 107 的位点 1-249,SEQ ID NO: 108 的位点 1-249,SEQID NO: 109 的位点 1-249、SEQ ID NO: 110 的位点 1-249、SEQ ID NO: 11 的位点 21-47、SEQID NO: 11 的位点 176-400、SEQ ID NO:36 的位点 6-257、SEQ ID NO:41 的位点 6-257、SEQID NO:92 的位点 92-343、SEQ ID NO: 101 的位点 90-338、SEQ ID NO: 102 的位点 7-254，或者来自不同HBV株的对应序列。
[0043]在该实施方案的一个方面中，HBV聚合酶抗原由HBV聚合酶的RT结构域的至少一个免疫原性结构域构成。在一个方面中，HBV聚合酶抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 124 的位点 582-809、SEQ ID NO: 126 的位点642-869、SEQ ID NO: 132 的位点 1-228、SEQ ID NO: 134 的位点 61 - 288、SEQ ID NO: 107的位点 250-477、SEQ ID NO: 108 的位点 250-477、SEQ ID NO: 109 的位点 250-477、SEQ IDN0:11(^W16250-477、SEQ ID NO: 2 的位点 383_602、SEQ ID NO: 6 的位点 381_600、SEQ IDN0:l(^Wlg381-600、SEQ ID NO: 10 的位点 453_680、SEQ ID NO: 14 的位点 370-589、SEQ IDNO: 18 的位点 380-599, SEQ ID NO:22 的位点 381-600, SEQ ID NO:26 的位点 380-599, SEQID N0:30 的位点 381-600、SEQ ID NO:36 的位点 260-604、SEQ ID NO:38 的位点 7_351、SEQID N0:40 的位点 7-351、SEQ ID NO:41 的位点 260_604、SEQ ID NO:92 的位点 346_690、SEQID NO:94 的位点 90-434,SEQ ID NO: 101 的位点 339-566,SEQ ID NO: 102 的位点 255-482、SEQ ID N0:120的位点582-809、SEQ ID NO: 128的位点1-228，或者来自不同HBV株的对应序列。
[0044]在该实施方案的一个方面中，HBV核心抗原的氨基酸序列与全长HBV核心蛋白的氨基酸序列至少95%相同。在一个方面中，HBV核心抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO: 124 的位点 400-581、SEQ ID NO: 126 的位点 400-581、SEQ IDNO: 132 的位点 688-869、SEQ ID NO: 134 的位点 688-869、SEQ ID NO:34 的位点 408-589、SEQ ID NO: 112 的位点 400-581、SEQ ID NO: 114 的位点 400-581、SEQ ID NO: 116 的位点400-581、SEQ ID NO: 118 的位点 400-581、SEQ ID NO:1 的位点 31-212、SEQ ID N0:5 的位点 31-212、SEQ ID NO: 9 的位点 31-212、SEQ ID NO: 13 的位点 31-212、SEQ ID N0:17 的位点 31-212、SEQ ID NO:21 的位点 31-212、SEQ ID NO:25 的位点 14-194、SEQ ID NO:29 的位点 31-212、SEQ ID NO:36 的位点 605_786、SEQ ID NO:38 的位点 352_533、SEQ ID NO:39的位点 160-341、SEQ ID NO:41 的位点 605-786、SEQ ID NO:92 的位点 691-872、SEQ IDNO:95 的位点 90-271、SEQ ID NO: 105 的位点 2-183、SEQ ID NO: 105 的位点 184-395、SEQID NO: 105 的位点 396-578,SEQ ID NO: 105 的位点 579_761、SEQ ID NO: 106 的位点 2-183、SEQ ID NO: 106 的位点 338-520、SEQ ID NO: 120 的位点 400-581、SEQ ID NO: 122 的位点400-581、SEQ ID NO: 128 的位点 630-811、SEQ ID NO: 130 的位点 462-643，或者来自不同HBV株的对应序列.[0045]在该实施方案的一个方面中，HBV核心抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO:99的位点、SEQ ID NO:9的位点37-188、SEQ ID NO: 101的位点567-718、SEQ ID NO: 102 的位点 483-634、SEQ ID NO: 107 的位点 478-629、SEQ ID NO: 108的位点 478-629、SEQ ID NO: 109 的位点 478-629、SEQ ID NO: 110 的位点 478-629，或者来自不同HBV株的 对应序列。
[0046]在该实施方案的一个方面中，HBV X抗原由与全长HBV X抗原至少95%相同的氨基酸序列构成。在一个方面中，HBV X抗原与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO:4、SEQID NO:8、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 12 的位点 2-154、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO:20、SEQID NO:24, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO: 36 的位点 787-939、SEQ ID NO: 39 ^位点 7-159、SEQ ID NO:92 的位点 873_1025、SEQ ID NO:96 的位点 90_242、SEQ ID NO: 106的位点184-337、SEQ ID NO: 106的位点521-674、或者来自不同HBV株的对应序列.[0047]在一个方面中，HBV X抗原由与全长HBV X抗原位点52-126至少80%相同的氨基酸序列构成。在一个方面中，HBV X抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 124 的位点 810-869、SEQ ID NO: 126 的位点 582-641、SEQID NO: 132 的位点 229-288、SEQ ID NO: 134 的位点 1-60, SEQ ID NO: 107 的位点 630-689、SEQ ID NO: 108 的位点 630-689、SEQ ID NO: 109 的位点 630-689、SEQ ID NO: 110 的位点630-689,SEQ ID N0:4 的位点 52-68 接着是位点 84_126、SEQ ID NO:8 的位点 52-68 接着是位点 84-126,SEQ ID NO: 12 的位点 52-68 接着是位点 84-126,SEQ ID NO: 16 的位点 52-68接着是位点84-126、SEQ ID NO:20的位点52-68接着是位点84_126、SEQ ID NO:24的位点52-68 接着是位点 84-126、SEQ ID NO: 28 的位点 52-68 接着是位点 84-126、SEQ ID NO: 32的位点52-68接着是位点84-126、SEQ ID NO: 101的位点719-778、SEQ ID NO: 102的位点635-694、SEQ ID NO: 122 的位点 582-641、SEQ ID NO: 130 的位点 1-60，或者来自不同 HBV株的对应序列.[0048]在该实施方案的一个方面中，HBV抗原具有的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO:36 的位点 6-939、SEQ ID NO:92 的位点 92-1025、SEQ ID NO: 101的位点90-778、SEQ ID NO: 102的位点7-694，或者来自不同HBV株的对应序列.[0049]在该实施方案的一个方面中，融合蛋白包含的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO: 107,SEQ ID NO: 108,SEQ ID NO: 109,SEQ ID NO: 110,SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:132 或 SEQ ID NO:134。
[0050]任何一个融合蛋白可能在一个方面中包含选自SEQ ID NO:37, SEQ ID N0:89或SEQ ID NO: 90的N端序列。
[0051]在该实施方案的一个方面中，融合蛋白包含的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO: 101 或 SEQ ID NO: 102。
[0052]发明另一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV抗原的融合蛋白，其中所述HBV抗原由下述构成:⑴由HBV大(L)表面抗原的前SI的肝细胞受体区的至少一个免疫原性结构域和HBV小表面抗原(S)的至少一个免疫原性结构域构成的HBV表面抗原；(ii)由HBV聚合酶的逆转录酶结构域的至少一个免疫原性结构域构成的HBV聚合酶抗原和(iii)由HBV核心蛋白的至少一个免疫原性结构域构成的HBV核心抗原。组合物引发HBV特异性免疫反应。在一个方面中，HBV抗原由下述构成:HBV大表面抗原(L)的前SI的全长肝细胞受 体区的至少95%、全长HBV小表面抗原的至少95%、HBV聚合酶的全长逆转录酶结构域的至少95%,和全长HBV核心蛋白的至少95%。在一个方面中，HBV抗原由下述构成:全长HBV大表面抗原(L)的至少95%、HBV聚合酶的全长逆转录酶结构域的至少95%，和全长HBV核心蛋白的至少95%。
[0053]在该实施方案的一个方面中，HBV表面抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID N0:12(^Wl6l-399、SEQ ID NO: 128 的位点 231_629、SEQ ID NO: 112的位点 1-399,SEQ ID NO: 114 的位点 1-399,SEQ ID NO: 116 的位点 1-399,SEQ ID NO: 118的位点 1-399,SEQ ID NO:41 的位点 6_257、SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:7,SEQ ID N0:11、SEQID NO: 11 的位点 21-47、SEQ ID NO: 11 的位点 176-400、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 19、SEQID NO:23, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:34 的位点 9-407、SEQ ID N0:36 的位点 6-257、SEQ ID NO:92 的位点 92-343、SEQ ID NO:93 的位点 90-488、SEQ ID NO:97, SEQID NO: 101 的位点 90-338,SEQ ID NO: 102 的位点 7-254,SEQ ID NO: 107 的位点 1-249,SEQID NO: 108 的位点 1-249、SEQ ID NO: 109 的位点 1-249、SEQ ID NO: 110 的位点 1-249、SEQID NO: 122 的位点 1-399, SEQ ID NO: 124 的位点 1-399, SEQ ID NO: 126 的位点 1-399, SEQID NO: 130 的位点 63-461、SEQ ID NO: 132 的位点 289-687、SEQ ID NO: 134 的位点 289-687，或者来自不同HBV株的对应序列。
[0054]在该发明实施方案的一个方面中，氨基酸序列of HBV聚合酶抗原与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO: 120的位点582-809、SEQ ID NO: 128的位点1-228、SEQ ID NO: 107 的位点 250-477、SEQ ID NO: 108 的位点 250-477、SEQ ID NO: 109 的位点250-477、SEQ ID NO: 110 的位点 250-477、SEQ ID NO:41 的位点 260-604、SEQ ID NO:2 的位点 383-602,SEQ ID NO:6 的位点 381-600,SEQ ID NO: 10 的位点 381-600,SEQ ID NO: 10的位点 453-680、SEQ ID NO: 14 的位点 370-589、SEQ ID NO: 18 的位点 380-599、SEQ IDNO: 22 的位点 381-600、SEQ ID NO: 26 的位点 380-599、SEQ ID NO: 30 的位点 381-600、SEQID NO:36 的位点 260-604、SEQ ID NO:38 的位点 7-351、SEQ ID NO:40 的位点 7-351、SEQID NO:92 的位点 346-690、SEQ ID NO:94 的位点 90-434、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO: 101的位点 339-566、SEQ ID NO: 102 的位点 255-482、SEQ ID NO: 124 的位点 582-809、SEQ IDN0:126 的位点 642-869、SEQ ID NO: 132 的位点 1_228、SEQ ID NO: 134 的位点 61-288，或者来自不同HBV株的对应序列。
[0055]在该发明实施方 案的一个方面中，HBV核心抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO: 120 的位点 400-581、SEQ ID NO: 128 的位点 630-811、SEQ IDNO: 112 的位点 400-581、SEQ ID NO: 114 的位点 400-581、SEQ ID NO: 116 的位点 400-581、SEQ ID NO: 118 的位点 400-581、SEQ ID NO:41 的位点 605_786、SEQ ID NO:1 的位点 31-212、SEQ ID N0:5 的位点 31-212、SEQ ID NO:9 的位点 31_212、SEQ ID NO:9 的位点 37_188、SEQID N0:13的位点31-212、SEQ ID NO: 17 的位点 31_212、SEQ ID NO: 21 的位点 31_212、SEQ IDN0:25 的位点 14-194、SEQ ID NO:29 的位点 31_212、SEQ ID NO:34 的位点 408_589、SEQ IDNO: 36 的位点 605-786、SEQ ID NO: 38 的位点 352-533、SEQ ID NO: 39 的位点 160-341、SEQID NO:92 的位点 691-872,SEQ ID NO:95 的位点 90-27USEQ ID NO:99,SEQ ID NO: 101 的位点 567-718、SEQ ID NO: 102 的位点 483_634、SEQ ID NO: 105 的位点 2_183、SEQ ID NO: 105的位点 184-395、SEQ ID NO: 105 的位点 396-578、SEQ ID NO: 105 的位点 579-761、SEQ IDNO: 106 的位点 2-183、SEQ ID NO: 106 的位点 338-520、SEQ ID NO: 107 的位点 478-629、SEQ ID NO: 108 的位点 478-629、SEQ ID NO: 109 的位点 478-629、SEQ ID NO: 110 的位点478-629, SEQ ID NO: 122 的位点 400-581、SEQ ID NO: 124 的位点 400-581、SEQ ID NO: 126的位点 400-581、SEQ ID NO: 130 的位点 462-643、SEQ ID NO: 132 的位点 688-869、SEQ IDNO: 134的位点688-869，或者来自不同HBV株的对应序列。
[0056]在该发明实施方案的一个方面中，融合蛋白具有的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO:41 的位点 6-786 或 SEQ IDNO: 41，或者来自不同HBV株的对应序列。
[0057]发明另一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV抗原的融合蛋白，其中所述HBV抗原由下述构成:⑴由HBV聚合酶的逆转录酶(RT)结构域的至少一个免疫原性结构域构成的HBV聚合酶抗原；和(ii)由HBV核心蛋白的至少一个免疫原性结构域构成的HBV核心抗原。组合物引发HBV特异性免疫反应。在该发明实施方案的一个方面中，HBV抗原由下述构成:与HBV聚合酶的全长RT结构域至少95%相同的氨基酸序列，和与全长HBV核心蛋白至少95%相同的氨基酸序列。 [0058]在该发明实施方案的一个方面中，HBV聚合酶抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID N0:38 的位点 7-351、SEQ ID NO:2 的位点 383_602、SEQ ID NO:6的位点 381-600、SEQ ID NO: 10 的位点 381-600、SEQ ID NO: 10 的位点 453-680、SEQ IDNO: 14 的位点 370-589, SEQ ID NO: 18 的位点 380-599, SEQ ID NO: 22 的位点 381-600, SEQID NO: 26 的位点 380-599、SEQ ID NO: 30 的位点 381-600、SEQ ID NO: 36 的位点 260-604、SEQ ID N0:40 的位点 7-351、SEQ ID NO:41 的位点 260_604、SEQ ID NO:92 的位点 346-690、SEQ ID N0:94 的位点 90-434、SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 101 的位点 339_566、SEQ ID NO: 102的位点 255-482、SEQ ID NO: 107 的位点 250-477、SEQ ID NO: 108 的位点 250-477、SEQ IDNO: 109 的位点 250-477、SEQ ID NO: 110 的位点 250-477、SEQ ID NO: 120 的位点 582-809、SEQ ID NO: 124 的位点 582-809、SEQ ID NO: 126 的位点 642-869、SEQ ID NO: 128 的位点1-228, SEQ ID NO: 132 的位点 1-228、SEQ ID NO: 134 的位点 61-288，或者来自不同 HBV 株的对应序列。
[0059]在该发明实施方案的一个方面中，HBV核心抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO:38 的位点 352-533、SEQ ID NO:1 的位点 31-212、SEQ ID NO:5的位点 31-212、SEQ ID NO:9 的位点 31_212、SEQ ID NO:9 的位点 37_188、SEQ ID NO: 13 ^位点 31-212、SEQ ID NO: 17 的位点 31_212、SEQ ID NO:21 的位点 31_212、SEQ ID NO:25 ^位点 14-194、SEQ ID NO:29 的位点 31-212、SEQ ID NO:34 的位点 408-589、SEQ ID NO:36的位点 605-786、SEQ ID NO:39 的位点 160-341、SEQ ID NO:41 的位点 605-786、SEQ IDN0:92 的位点 691-872、SEQ ID N0:95 的位点 90_271、SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 101 的位点567-718,SEQ ID NO: 102 的位点 483-634、SEQ ID NO: 105 的位点 2_183、SEQ ID NO: 105 的位点 184-395、SEQ ID NO: 105 的位点 396_578、SEQ ID NO: 105 的位点 579_761、SEQ ID NO: 106的位点 2-183、SEQ ID NO: 106 的位点 338-520、SEQ ID NO: 107 的位点 478-629、SEQ IDNO: 108 的位点 478-629、SEQ ID NO: 109 的位点 478-629、SEQ ID NO: 110 的位点 478-629、SEQ ID NO: 112 的位点 400-581、SEQ ID NO: 114 的位点 400-581、SEQ ID NO: 116 的位点400-581, SEQ ID NO: 118 的位点 400-581、SEQ ID NO: 120 的位点 400-581、SEQ ID NO: 122的位点 400-581、SEQ ID NO: 124 的位点 400-581，SEQ ID NO: 126 的位点 400-581，SEQ IDNO: 128 的位点 630-811、SEQ ID NO: 130 的位点 462-643、SEQ ID NO: 132 的位点 688-869、SEQ ID NO: 134的位点688-869，或者来自不同HBV株的对应序列.[0060]在该发明实施方案的一个方面中，融合蛋白具有的氨基酸序列与SEQ ID NO: 38的氨基酸序列，或者来自不同HBV株的对应序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同。
[0061]发明再一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV抗原的融合蛋白，其中所述HBV抗原由下述构成:(i)由HBV X抗原的至少一个免疫原性结构域构成的HBV X抗原；和(ii)由HBV核心蛋白的至少一个免疫原性结构域构成的HBV核心抗原。组合物引发HBV特异性免疫反应。在该实施方案的一个方面中，HBV抗原由下述构成:与全长HBV X抗原至少95%相同的氨基酸序列，和与全长HBV核心蛋白至少95%相同的氨基酸序列。
[0062]在该发明实施方案的一个方面中，HBV核心抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO:39 的位点 160-341、SEQ ID NO:1 的位点 31-212、SEQ ID NO:5的位点 31-212、SEQ ID NO:9 的位点 31_212、SEQ ID NO:9 的位点 37_188、SEQ ID NO: 13 ^位点 31-212、SEQ ID NO: 17 的位点 31_212、SEQ ID NO:21 的位点 31_212、SEQ ID NO:25 ^位点 14-194、SEQ ID NO:29 的位点 31-212、SEQ ID NO:34 的位点 408-589、SEQ ID NO:36的位点 605-786、SEQ ID NO:38 的位点 352-533、SEQ ID NO:41 的位点 605-786、SEQ IDNO:92 的位点 691-872、SEQ ID NO:95 的位点 90-271、SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 101 的位点 567-718、SEQ ID NO: 102 的位点 483_634、SEQ ID NO: 105 的位点 2_183、SEQ ID NO: 105的位点 184-395、SEQ ID NO: 105 的位点 396-578、SEQ ID NO: 105 的位点 579-761、SEQ IDNO: 106 的位点 2-183、SEQ ID NO: 106 的位点 338-520、SEQ ID NO: 107 的位点 478-629、SEQ ID NO: 108 的位点 478-629、SEQ ID NO: 109 的位点 478-629、SEQ ID NO: 110 的位点478-629, SEQ ID NO: 112 的位点 400-581、SEQ ID NO: 114 的位点 400-581、SEQ ID NO: 116的位点 400-581、SEQ ID NO: 118 的位点 400-581、SEQ ID NO: 120 的位点 400-581、SEQ IDNO: 122 的位点 400-581、SEQ ID NO: 124 的位点 400-581、SEQ ID NO: 126 的位点 400-581、SEQ ID NO: 128 的位点 630-811、SEQ ID NO: 130 的位点 462-643、SEQ ID NO: 132 的位点688-869、SEQ ID NO: 134的位点688-869，或者来自不同HBV株的对应序列.[0063]在该发明实施方案的一个方面中，HBV X抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO:39 的位点 7-159、SEQ ID NO:4, SEQ ID N0:8、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 12 的位点 2-154、SEQ ID NO: 16,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:28,SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:4 的位点 52-68 接着是位点 84-126、SEQ ID NO:8 的位点 52-68接着是位点84-126,SEQ ID NO: 12的位点52-68接着是位点84-126,SEQ ID NO: 16的位点52-68 接着是位点 84-126、SEQ ID NO: 20 的位点 52-68 接着是位点 84-126、SEQ ID NO: 24的位点52-68接着是位点84-126,SEQ ID NO:28的位点52-68接着是位点84-126,SEQ IDN0:32的位点 52-68接着是位点84-126、SEQ ID NO:36 的位点 787_939、SEQ ID N0:92 的位点 873-1025、SEQ ID NO: 96 的位点 90_242、SEQ ID NO: 100,SEQ ID NO: 101 的位点 719-778、SEQ ID NO: 102 的位点 635-694、SEQ ID NO: 106 的位点 184-337、SEQ ID NO: 106 的位点521-674、SEQ ID NO: 107 的位点 630-689、SEQ ID NO: 108 的位点 630-689、SEQ ID NO: 109的位点 630-689、SEQ ID NO: 110 的位点 630-689、SEQ ID NO: 122 的位点 582-641、SEQ IDNO: 124 的位点 810-869、SEQ ID NO: 126 的位点 582-641、SEQ ID NO: 130 的位点 1-60, SEQID N0:132的位点 229-288、SEQ ID NO: 134的位点1_60，或者来自不同HBV株的对应序列.[0064]在该发明实施方案的一个方面中，融合蛋白具有的氨基酸序列与SEQ ID NO: 39的氨基酸序列，或者来自不同HBV株的对应序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同。
[0065]发明另一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV抗原的融合蛋白，所述融合蛋白由HBV大表面抗原(L)的至少一个免疫原性结构域构成，其中组合物引发HBV特异性免疫反应。在该实施方案的一个方面中，HBV表面抗原由全长HBV大表面抗原(L)的至少95%构成。在一个方面中，HBV表面抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少 99% 相同、或者完全相同:SEQ ID NO:93 的位点 90-488、SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7, SEQID NO: 11, SEQ ID NO: 11 的位点 21_47、SEQ ID NO: 11 的位点 176-400, SEQ ID NO: 15, SEQID NO: 19、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34 的位点 9-407、SEQID NO:36 的位点 6-257、SEQ ID NO:41 的位点 6_257、SEQ ID NO:92 的位点 92_343、SEQ IDNO:93 的位点 90-488、SEQ ID NO:97, SEQ ID NO: 101 的位点 90_338、SEQ ID NO: 102 的位点7-254,SEQ ID NO: 107 的位点 1-249,SEQ ID NO: 108 的位点 1-249,SEQ ID NO: 109 的位点1-249,SEQ ID NO: 110 的位点 1-249,SEQ ID NO: 112 的位点 1-399,SEQ ID NO: 114 的位点1-399,SEQ ID NO: 116 的位点 1-399,SEQ ID NO: 118 的位点 1-399,SEQ ID NO: 120 的位点1-399,SEQ ID NO: 122 的位点 1-399,SEQ ID NO: 124 的位点 1-399,SEQ ID NO: 126 的位点1-399、SEQ ID NO: 128 的位点 231-629、SEQ ID NO: 130 的位点 63-461、SEQ ID NO: 132 的位点289-687、SEQ ID NO: 134的位点289-687，或者来自不同HBV株的对应序列。在一个方面中，融合蛋白具有的氨基酸序列与SEQ ID NO: 93的氨基酸序列，或者来自不同HBV株的对应序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同。
[0066]发明再一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV聚合酶抗原的融合蛋白，所述融合蛋白由HBV聚合酶的逆转录酶结构域的至少一个免疫原性结构域构成，其中组合物引发HBV特异性免疫反应。在该发明实施方案的一个方面中，HBV聚合酶抗原由HBV聚合酶的全长逆转录酶结构域的至少95%构成。在一个方面中，HBV聚合酶抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同，或者完全相同:SEQ ID NO:40的位点 7-351、SEQ ID NO:94 的位点 90-434、SEQ ID NO:2 的位点 383-602、SEQ ID NO:6 的位点 381-600、SEQ ID NO: 10 的位点 381-600、SEQ ID NO: 10 的位点 453-680、SEQ ID NO: 14的位点 370-589、SEQ ID NO: 18 的位点 380-599、SEQ ID NO:22 的位点 381-600、SEQ IDNO: 26 的位点 380-599、SEQ ID NO: 30 的位点 381-600、SEQ ID NO: 36 的位点 260-604、SEQID N0:38 的位点 7-351、SEQ ID NO:41 的位点 260_604、SEQ ID NO:92 的位点 346_690、SEQID NO:98, SEQ ID NO: 101 的位点 339_566、SEQ ID NO: 102 的位点 255_482、SEQ ID NO: 107的位点 250-477、SEQ ID NO: 108 的位点 250-477、SEQ ID NO: 109 的位点 250-477、SEQ IDNO: 110 的位点 250-477、SEQ ID NO: 120 的位点 582-809、SEQ ID NO: 124 的位点 582-809、SEQ ID N0:126的位点642-869、SEQ ID NO: 128 的位点 1_228、SEQ ID NO: 132 的位点 1-228、SEQ ID NO: 134的位点61-288，或者来自不同HBV株的对应序列。在一个方面中，融合蛋白具有的氨基酸序列与SEQ ID NO: 40或SEQ ID NO: 94的氨基酸序列，或者来自不同HBV株的对应序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同。
[0067]发明另一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV核心抗原的融合蛋白，所述融合蛋白由HBV核心蛋白的至少一个免疫原性结构域构成 ，其中组合物引发HBV特异性免疫反应。在该发明实施方案的一个方面中，HBV抗原由全长HBV核心蛋白的至少95%构成。在一个方面中，HBV核心抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID N0:95 的位点 90-271、SEQ ID NO:1 的位点 31_212、SEQ ID NO:5的位点 31-212、SEQ ID NO:9 的位点 31_212、SEQ ID NO:9 的位点 37_188、SEQ ID NO: 13 位点 31-212、SEQ ID NO: 17 的位点 31_212、SEQ ID NO:21 的位点 31_212、SEQ ID NO:25 位点 14-194、SEQ ID NO:29 的位点 31-212、SEQ ID NO:34 的位点 408-589、SEQ ID NO:36的位点 605-786、SEQ ID NO:38 的位点 352-533、SEQ ID NO:39 的位点 160-341、SEQ IDNO:41 的位点 605-786,SEQ ID NO:92 的位点 691-872,SEQ ID NO:99, SEQ ID NO: 101 的位点 567-718、SEQ ID NO: 102 的位点 483_634、SEQ ID NO: 105 的位点 2_183、SEQ ID NO: 105的位点 184-395、SEQ ID NO: 105 的位点 396-578、SEQ ID NO: 105 的位点 579-761、SEQ IDNO: 106 的位点 2-183、SEQ ID NO: 106 的位点 338-520、SEQ ID NO: 107 的位点 478-629、SEQ ID NO: 108 的位点 478-629、SEQ ID NO: 109 的位点 478-629、SEQ ID NO: 110 的位点478-629, SEQ ID NO: 112 的位点 400-581、SEQ ID NO: 114 的位点 400-581、SEQ ID NO: 116的位点 400-581、SEQ ID NO: 118 的位点 400-581、SEQ ID NO: 120 的位点 400-581、SEQ IDNO: 122 的位点 400-581、SEQ ID NO: 124 的位点 400-581、SEQ ID NO: 126 的位点 400-581、SEQ ID NO: 128 的位点 630-811、SEQ ID NO: 130 的位点 462-643、SEQ ID NO: 132 的位点688-869、SEQ ID NO: 134的位点688-869，或者来自不同HBV株的对应序列。在一个方面中，蛋白具有的氨基酸序列与SEQ ID NO:95的氨基酸序列，或者来自不同HBV株的对应序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同。
[0068]发明再一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV X抗原的融合蛋白，所述融合蛋白由全长HBV X抗原的至少一个免疫原性结构域构成，其中组合物引发HBV特异性免疫反应。在一个方面中，HBV抗原由全长HBV X抗原的至少95%构成。在一个方面中，HBV X抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQID NO:96 的位点 90-242、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 12 的位点 2-154、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:32、SEQID NO:4的位点52-68接着是位点84-126,SEQ ID NO:8的位点52-68接着是位点84-126、SEQ ID NO: 12的位点52-68接着是位点84-126、SEQ ID NO: 16的位点52-68接着是位点84-126,SEQ ID NO: 20 的位点 52-68接着是位点 84_126、SEQ ID NO: 24 的位点 52-68接着是位点 84-126,SEQ ID NO:28 的位点 52-68 接着是位点 84-126,SEQ ID NO:32 的位点 52-68接着是位点 84-126、SEQ ID NO:36 的位点 787-939、SEQ ID NO:39 的位点 7-159、SEQ IDNO:92 的位点 873-1025、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 101 的位点 719-778、SEQ ID NO: 102的位点 635-694、SEQ ID NO: 106 的位点 184-337、SEQ ID NO: 106 的位点 521-674、SEQ IDNO: 107 的位点 630-689、SEQ ID NO: 108 的位点 630-689、SEQ ID NO: 109 的位点 630-689、SEQ ID NO: 110 的位点 630-689、SEQ ID NO: 122 的位点 582-641、SEQ ID NO: 124 的位点810-869、SEQ ID NO: 126 的位点 582-641、SEQ ID NO: 130 的位点 1-60, SEQ ID NO: 132 的位点229-288、SEQ ID NO: 134的位点1_60，或者来自不同HBV株的对应序列。在一个方面中，蛋白具有的氨基酸序列与SEQ ID NO:96的氨基酸序列，或者来自不同HBV株的对应序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同。
[0069]发明另一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含任意两种、三种或四种以上或者本文其他地方描述的免疫治疗组合物，特别是任意两种、三种或四种以上描述的涉及单一 HBV蛋白的免疫治疗组合物。
[0070]发明再一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV抗原的融合蛋白，其中所述HBV抗原由两个、三个或四个HBV表面抗原蛋白的至少一个免疫原性结构域构成，其中每个HBV表面抗原来自不同HBV基因型。组合物引发HBV特异性免疫反应。
[0071]发明再一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV抗原的融合蛋白，其中所述HBV抗原由两个、三个或四个HBV聚合酶蛋白的至少一个免疫原性结构域构成，其中每个HBV聚合酶蛋白来自不同HBV基因型。组合物引发HBV特异性免疫反应。
[0072]发明再一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV抗原的融合蛋白，其中所述HBV抗原由两个、三个或四个HBV X抗原的至少一个免疫原性结构域构成，其中每个HBV X抗原来自不同HBV基因型。组合物引发HBV特异性免疫反应。
[0073]发明再一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含HBV抗原的融合蛋白，其中所述HBV抗原由两个、三个或四个HBV核心蛋白的至少一个免疫原性结构域构成，其中每个HBV 核心蛋白来自不同HBV基因型。组合物引发HBV特异性免疫反应。在一个方面中，每个HBV核心蛋白由全长HBV核心蛋白的至少95%构成。在一个方面中，每个HBV核心蛋白由HBV核心蛋白的氨基酸31-212构成。在一个方面中，HBV基因型包括基因型C ;在一个方面中，HBV基因型包括基因型D ;在一个方面中，HBV基因型包括基因型A ;在一个方面中，HBV基因型包括基因型B。在一个方面中，每个HBV核心蛋白由HBV核心蛋白的氨基酸37-188构成。在一个方面中，融合蛋白包含来自基因型A、基因型B、基因型C和基因型D的四个HBV核心蛋白。
[0074]在该发明实施方案的一个方面中，任何一或多个HBV核心抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO:95的位点90-271、SEQ ID NO:1的位点31-212、SEQ ID N0:5 的位点 31-212、SEQ ID NO:9 的位点 31_212、SEQ ID NO:9 的位点 37_188、SEQID NO: 13 的位点 31-212、SEQ ID NO: 17 的位点 31-212、SEQ ID NO: 21 的位点 31-212、SEQID N0:25 的位点 14-194、SEQ ID NO:29 的位点 31_212、SEQ ID NO:34 的位点 408_589、SEQID NO: 36 的位点 605-786、SEQ ID NO: 38 的位点 352-533、SEQ ID NO: 39 的位点 160-341、SEQ ID NO:41 的位点 605-786、SEQ ID N0:92 的位点691_872、SEQ ID NO:99,SEQ ID NO: 101的位点 567-718、SEQ ID NO: 102 的位点 483-634、SEQ ID NO: 105 的位点 2-183、SEQ IDNO: 105 的位点 184-395、SEQ ID NO: 105 的位点 396-578、SEQ ID NO: 105 的位点 579-761、SEQ ID NO: 106 的位点 2-183、SEQ ID NO: 106 的位点 338-520、SEQ ID NO: 107 的位点478-629, SEQ ID NO: 108 的位点 478-629、SEQ ID NO: 109 的位点 478-629、SEQ ID NO: 110的位点 478-629、SEQ ID NO: 112 的位点 400-581、SEQ ID NO: 114 的位点 400-581、SEQ IDNO: 116 的位点 400-581、SEQ ID NO: 118 的位点 400-581、SEQ ID NO: 120 的位点 400-581、SEQ ID NO: 122 的位点 400-581、SEQ ID NO: 124 的位点 400-581，SEQ ID NO: 126 的位点400-581，SEQ ID NO: 128 的位点 630-811、SEQ ID NO: 130 的位点 462-643、SEQ ID NO: 132的位点688-869、SEQ ID NO: 134的位点688-869、或者来自不同HBV株的对应序列.在一个方面中，HBV抗原具有的氨基酸序列与SEQ ID NO: 105的氨基酸序列，或者来自不同HBV株的对应序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同。
[0075]发明再一个实施方案涉及免疫治疗组合物，其包含:(a)酵母媒介物；和(b)包含至少两个HBV核心蛋白和至少两个HBV X抗原的融合蛋白，其中每个HBV核心蛋白来自不同HBV基因型，每个HBV X抗原来自不同HBV基因型。组合物引发HBV特异性免疫反应。在一个方面中，HBV基因型包括基因型C ;在一个方面中，HBV基因型包括基因型D ;在一个方面中，HBV基因型包括基因型A ;在一个方面中，HBV基因型包括基因型B。在一个方面中，每个HBV核心蛋白由全长HBV核心蛋白的至少95%构成。在一个方面中，每个HBV核心蛋白由HBV核心蛋白的氨基酸31-212构成。在一个方面中，每个HBV核心蛋白由HBV核心蛋白的氨基酸37-188构成。在一个方面中，每个HBV X抗原由全长HBV X抗原的至少95%构成。在一个方面中，每个HBV X抗原包含HBV X抗原的氨基酸52-127。
[0076]在一个方面中，HBV核心抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQID N0:95 的位点 90-271、SEQ ID NO:1 的位点 31_212、SEQ ID NO:5 的位点 31_212、SEQ IDN0:9 的位点 31-212、SEQ ID NO:9 的位点 37-188、SEQ ID NO: 13 的位点 31-212、SEQ IDNO: 17 的位点 31-212、SEQ ID NO: 21 的位点 31-212、SEQ ID NO: 25 的位点 14-194、SEQ IDNO:29 的位点 31-212、SEQ ID NO:34 的位点 408-589、SEQ ID NO:36 的位点 605-786、SEQID NO: 38 的位点 352-53 3、SEQ ID NO: 39 的位点 160-341、SEQ ID NO:41 的位点 605-786、SEQ ID NO:92 的位点 691-872、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO: 101 的位点 567-718、SEQ IDN0:102 的位点 483-634、SEQ ID NO: 105 的位点 2_183、SEQ ID NO: 105 的位点 184_395、SEQID N0:105 的位点 396-578、SEQ ID NO: 105 的位点 579_761、SEQ ID NO: 106 的位点 2-183、SEQ ID NO: 106 的位点 338-520、SEQ ID NO: 107 的位点 478-629、SEQ ID NO: 108 的位点478-629, SEQ ID NO: 109 的位点 478-629、SEQ ID NO: 110 的位点 478-629、SEQ ID NO: 112的位点 400-581、SEQ ID NO: 114 的位点 400-581、SEQ ID NO: 116 的位点 400-581、SEQ IDNO: 118 的位点 400-581、SEQ ID NO: 120 的位点 400-581、SEQ ID NO: 122 的位点 400-581、SEQ ID NO: 124 的位点 400-581、SEQ ID NO: 126 的位点 400-581、SEQ ID NO: 128 的位点630-811, SEQ ID NO: 130 的位点 462-643、SEQ ID NO: 132 的位点 688-869、SEQ ID NO: 134的位点688-869，或者来自不同HBV株的对应序列。
[0077]在一个方面中，HBV X抗原的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQID NO:96 的位点 90-242、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 12 的位点 2-154、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:32、SEQID NO:4的位点52-68接着是位点84-126,SEQ ID NO:8的位点52-68接着是位点84-126、SEQ ID NO: 12的位点52-68接着是位点84-126、SEQ ID NO: 16的位点52-68接着是位点84-126,SEQ ID NO: 20 的位点 52-68接着是位点 84_126、SEQ ID NO: 24 的位点 52-68接着是位点 84-126,SEQ ID NO:28 的位点 52-68 接着是位点 84-126,SEQ ID NO:32 的位点 52-68接着是位点 84-126、SEQ ID NO:36 的位点 787-939、SEQ ID NO:39 的位点 7-159、SEQ IDNO:92 的位点 873-1025、SEQ ID NO: 100，SEQ ID NO: 101 的位点 719-778、SEQ ID NO: 102的位点 635-694、SEQ ID NO: 106 的位点 184-337、SEQ ID NO: 106 的位点 521-674、SEQ IDNO: 107 的位点 630-689、SEQ ID NO: 108 的位点 630-689、SEQ ID NO: 109 的位点 630-689、SEQ ID NO: 110 的位点 630-689、SEQ ID NO: 122 的位点 582-641、SEQ ID NO: 124 的位点810-869、SEQ ID NO: 126 的位点 582-641、SEQ ID NO: 130 的位点 1-60, SEQ ID NO: 132 的位点229-288、SEQ ID NO: 134的位点1_60、或者来自不同HBV株的对应序列.[0078]在该发明实施方案的一个方面中，融合蛋白具有的氨基酸序列与SEQ ID NO: 106的氨基酸序列，或者来自不同HBV株的对应序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同。
[0079]在本文，包括上文或下文描述的任何实施方案中，涉及融合蛋白、HBV抗原，或者包含所述融合蛋白或HBV抗原的免疫治疗组合物。在再一个实施方案中，融合蛋白的N端可以附加额外的序列。在一个方面中，N端序列选自与SEQ ID NO:3795%相同的氨基酸序列、与SEQ ID N0:8995%相同的氨基酸序列或者与SEQ ID N0:9095%相同的氨基酸序列。在一个方面中，N端序列选自 SEQ ID NO:37,SEQ ID NO:37 的位点 1_5、SEQ ID N0:89 或 SEQ IDNO: 90，或者来自不同HBV株的对应序列.[0080]在以上或者本文其他地方描述的任何发明实施方案的一个方面中，融合蛋白由酵母媒介物表达。在以上或者本文其他地方描述的任何发明实施方案的另一个方面中，酵母媒介物是完整酵母。所述完整酵母在一个方面中是被杀死的。在一个方面中，完整酵母被热灭活。
[0081 ] 在以上或者本文其他地方描述的任何发明实施方案的一个方面中，酵母媒介物所来自的酵母属选自:酵母菌属、假丝酵母属、隐球菌属、汉逊酵母属、克鲁维酵母属、毕赤酵母属、红酵母属、裂殖酵母属和耶 氏酵母属。在一个方面中，酵母媒介物来自酵母菌属。在一个方面中，酵母媒介物来自酿酒酵母。
[0082]在以上或者本文其他地方描述的任何发明实施方案的一个方面中，组合物被配制用于给予受试对象或患者。在一个方面中，组合物被配制成通过注射给予受试对象或患者(例如经胃肠外途径，比如皮下或腹腔内或肌内注射)。在一个方面中，组合物在适合给予人的药学上可接受的赋形剂中配制。在一个方面中，组合物含有90%以上的酵母蛋白。在一个方面中，组合物含有90%以上的酵母蛋白，并且配制成给予患者。
[0083]在以上或者本文其他地方描述的任何发明实施方案的一个方面中，融合蛋白在酵母中没有凝聚。在一个方面中，融合蛋白在酵母中不形成内含体。在一个方面中，融合蛋白不在酵母中形成VLPs或其他大的抗原颗粒。在一个方面中，融合蛋白在酵母中形成VLPs或其他大的抗原颗粒。
[0084]在以上或者本文其他地方描述的任何发明实施方案的一个方面中，在一个方面中，HBV序列来自HBV基因型A。在另一个方面中，HBV序列来自HBV基因型B。在另一个方面中，HBV序列来自HBV基因型C。在另一个方面中，HBV序列来自HBV基因型D。在另一个方面中，HBV序列来自HBV基因型E。在另一个方面中，HBV序列来自HBV基因型F。在另一个方面中，HBV序列来自HBV基因型G。在另一个方面中，HBV序列来自HBV基因型H。在一个方面中，HBV序列来自任何以上提到的HBV基因型或者任何已知的HBV基因型或基因亚型的组合。
[0085]发明另一个实施方案涉及作为本发明免疫治疗组合物一部分的以上描述的或者本文其他地方描述的任何融合蛋白。在该实施方案的一个方面中，融合蛋白包含HBV抗原，所述HBV抗原选自，但不限于:(a)由HBV大表面抗原(L)、HBV核心蛋白和HBV X抗原构成的HBV抗原；(b)由HBV大表面抗原(L)和HBV核心蛋白构成的HBV抗原；(c)由HBV大表面抗原(L)的前SI的肝细胞受体结构域、HBV小表面抗原(S)、HBV聚合酶的逆转录酶结构域、HBV核心蛋白或HBV e抗原，以及HBV X抗原构成的HBV抗原；(d)由HBV大表面抗原(L) ,HBV聚合酶的逆转录酶结构域、HBV核心蛋白或HBV e抗原，以及HBV X抗原构成的HBV抗原；(e)由HBV大表面抗原(L)、HBV聚合酶的逆转录酶结构域和HBV核心蛋白构成的HBV抗原；(f)由HBV聚合酶(RT结构域)和HBV核心蛋白构成的HBV抗原；(g)由HBVX抗原和HBV核心蛋白构成的HBV抗原；(h)由HBV大表面抗原(L)的前SI的肝细胞受体结构域、HBV小表面抗原(S) ,HBV聚合酶的逆转录酶结构域，以及HBV核心蛋白或HBV e抗原构成的HBV抗原；(i)由HBV大表面抗原(L)构成的HBV抗原；(j)由HBV核心抗原构成的HBV抗原；(k) HBV聚合酶，包括逆转录酶结构域构成的HBV抗原；(I)由HBV X抗原构成的HBV抗原；(m)由两个到四个HBV表面抗原、HBV聚合酶抗原、HBV核心抗原，或者HBV X抗原构成的HBV抗原，其中所述两个到四个HBV抗原来自不同HBV基因型；以及(η)由两个HBV核心抗原和两个HBV X抗原构成的HBV抗原，其中两个HBV核心抗原中的每一个或者两个HBV X抗原中的每一个来自不同HBV基因型。以上描述了涉及各个HBV抗原(包括可用于这些抗原的多种序列)的发明方面。
[0086]在该发明实施方案的一个方面中，融合蛋白包含的氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列至少95%相同、或至少96%相同、或至少97%相同、或至少98%相同、或至少99%相同、或者完全相同:SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 151、SEQ IDNO:34、SEQ ID NO:120、SE Q ID NO:122、SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:36,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:39,SEQ ID NO:40,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:92,SEQ IDNO:93、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ IDNO:99, SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109 和 SEQ ID NO:110。
[0087]发明另一个实施方案涉及编码本文描述的任何一个融合蛋白的重组核酸分子。在一个方面中，所述重组核酸分子包含的核酸序列选自，但不限于:SEQ ID NO: 33、SEQ IDN0:35、SEQ ID N0:91、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 113、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 117、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:127、SEQ IDNO: 129、SEQ ID NO: 131 或者 SEQ ID NO: 133。
[0088]发明再一个实施方案涉及分离的细胞，所述细胞转染了本文描述的任何重组核酸分子。在一个方面中，细胞是酵母细胞。
[0089]发明另一个实施方案涉及组合物，其包含本文描述的任何融合蛋白。发明再一个实施方案涉及组合物，其包含本文描述的任何重组核酸分子。发明另一个实施方案涉及组合物，其包含本文描述的任何分离的细胞。
[0090]发明再一个实施方案涉及治疗受试对象中乙型肝炎病毒(HBV)感染或者至少一个由HBV感染导致的症状的方法，所述方法包括给予感染了 HBV的受试对象本文描述的任何免疫治疗组合物中的至少一个，包括任何HBV抗原、融合蛋白或者基于酵母的免疫治疗组合物。给予受试对象所述组合物减少受试对象中的HBV感染或者至少一个由HBV感染导致的症状。
[0091]发明再一个实施方案涉及引发抗HBV抗原的抗原特异性细胞介导的免疫反应的方法，所述方法包括给予受试对象本文描述的任何免疫治疗组合物中的至少一个，包括任何HBV抗原、融合蛋白或者基于酵母的免疫治疗组合物。
[0092]发明再一个实施方案涉及防止受试对象中HBV感染的方法，所述方法包括给予还未感染HBV的受试对象本文描述的一或多个组合物，包括任何HBV抗原、融合蛋白或者基于酵母的免疫治疗组合物。
[0093]发明另一个实施方案涉及将一个群体免疫抗HBV，所述方法包括给予所述群体本文描述的一或多个组合物，包括任何HBV抗原、融合蛋白或者基于酵母的免疫治疗组合物。
[0094]发明另一个实施方案涉及本文描述的任何一或多个组合物(包括任何HBV抗原、融合蛋白或者基于酵母的免疫治疗组合物)用于治疗HBV感染或其症状。
[0095]发明另一个实施方案涉及本文描述的任何一或多个组合物(包括任何HBV抗原、融合蛋白或者基于酵母的免疫治疗组合物)用于预防HBV感染或其症状。
[0096]发明再一个实施方案涉及本文描述的任何一或多个组合物(包括任何HBV抗原、融合蛋白或者基于酵母的免 疫治疗组合物)在制备治疗HBV感染或其症状的药物中的用途。
[0097]发明再一个实施方案涉及本文描述的任何一或多个组合物(包括任何HBV抗原、融合蛋白或者基于酵母的免疫治疗组合物)在制备预防HBV感染或其症状的药物中的用途。
[0098]在涉及以上或者本文其他地方描述的发明方法或者用途的任何实施方案的一个方面中，方法可以包括给予本文描述的至少两、三、四或更多个组合物，包括任何HBV抗原、融合蛋白或者基于酵母的免疫治疗组合物。在一个方面中，可以给予其他能够预防或治疗HBV感染的组合物或化合物(例如抗病毒化合物、干扰素、其他免疫治疗组合物，或者它们的组合)。在一个方面中，各种组合物或化合物是同时给予个体的。在一个方面中，各种组合物或化合物是顺序给予个体的。在一个方面中，各种组合物中的每一个是通过注射到个体的不同部位给予的。在一个方面中，本发明的基于酵母的HBV免疫治疗组合物的单个剂量是每剂共40Y.U.-80Y.U.，等量地在个体的两个、三个或四个不同部位给予。
[0099]在涉及以上或者本文其他地方描述的发明方法或者用途的任何实施方案的一个方面中，给予受试对象组合物导致受试对象中血清转化或者提高了受试对象群体中的血清转换率。在一个方面中，给予受试对象组合物减少血清HBsAg或者造成受试对象中血清HBsAg丢失或者提高受试对象群体中血清HBsAg丢失率。在一个方面中，给予受试对象组合物减少血清HBeAg或者造成受试对象中血清HBeAg丢失或者提高受试对象群体中血清HBeAg丢失率。在一个方面中，给予受试对象组合物减少受试对象中的HBV病毒负荷或者提高受试对象群体中HBV病毒负荷的减少率。在一个方面中，给予受试对象组合物造成受试对象感染细胞内不能检测到HBV DNA，或者造成受试对象群体中HBV DNA阴性率更高。在一个方面中，给予受试对象组合物减少了受试对象中的肝损伤或提高了肝功，或者减少了受试对象群体中的肝损伤率或提高了肝功好转率。在一个方面中，给予受试对象组合物提高了受试对象或者受试对象群体中的ALT正常化。 [0100]在任何涉及本文描述的HBV抗原、融合蛋白、免疫治疗组合物，或者任何使用本文描述的HBV抗原、融合蛋白、免疫治疗组合物的方法的实施方案中，在一个方面中，组合物还包含至少一个生物反应调节剂，或者与之联用。在一个方面中，组合物还包含一或多个其他可用于治疗HBV感染或缓解症状的化合物，或者与之联用。在一个方面中，组合物还包含至少一个抗病毒化合物，或者与之联用。在一个方面中，抗病毒是核苷酸类似物逆转录酶抑制剂。抗病毒化合物可以包括，但不限于替诺福韦、拉米夫定、恩替卡韦、替比夫定、恩替卡韦以及它们的组合。在一个方面中，抗病毒化合物是替诺福韦。在一个方面中，抗病毒化合物是恩替卡韦。在一个方面中，组合物还包含至少一个干扰素，或者与之联用。在一个方面中，干扰素是干扰素α。在一个方面中，干扰素是聚乙二醇干扰素a2a。在一个方面中，干扰素是干扰素入。
[0101]附图简述
[0102]图1的示意图显示了乙型肝炎病毒基因组排列。
[0103]图2的示意图显示了编码用于本发明基于酵母的免疫治疗组合物的HBV表面抗原/core融合蛋白的重组核酸分子基本结构。
[0104]图3的示意图显示了编码用于本发明基于酵母的免疫治疗组合物的HBV表面抗原/聚合酶/core/X融合蛋白的重组核酸分子基本结构。
[0105]图4的示意图显示了编码用于本发明基于酵母的免疫治疗组合物的HBV聚合酶/core融合蛋白的重组核酸分子基本结构。
[0106]图5的示意图显示了编码用于本发明基于酵母的免疫治疗组合物的HBV X/core融合蛋白的重组核酸分子基本结构。
[0107]图6的示意图显示了编码用于本发明基于酵母的免疫治疗组合物的HBV聚合酶融合蛋白的重组核酸分子基本结构。
[0108]图7的示意图显示了编码用于本发明基于酵母的免疫治疗组合物的HBV表面抗原/聚合酶/core融合蛋白的重组核酸分子基本结构。
[0109]图8的示意图显示了编码用于本发明基于酵母的免疫治疗组合物的HBV表面抗原/core/聚合酶融合蛋白的重组核酸分子基本结构。
[0110]图9的示意图显示了编码用于本发明基于酵母的免疫治疗组合物的HBV表面抗原/core/X融合蛋白的重组核酸分子基本结构。
[0111]图10的示意图显示了编码用于本发明基于酵母的免疫治疗组合物的HBV表面抗原/core/聚合酶/X融合蛋白的重组核酸分子基本结构。
[0112]图11的示意图显示了编码用于本发明基于酵母的免疫治疗组合物的HBV表面抗原/core/聚合酶融合蛋白的重组核酸分子基本结构。
[0113]图12的示意图显示了编码用于本发明基于酵母的免疫治疗组合物的HBV聚合酶/表面抗原/core融合蛋白的重组核酸分子基本结构。[0114]图13的示意图显示了编码用于本发明基于酵母的免疫治疗组合物的HBV X/表面抗原/core融合蛋白的重组核酸分子基本结构。
[0115]图14的示意图显示了编码用于本发明基于酵母的免疫治疗组合物的HBV聚合酶/X/表面抗原/core融合蛋白的重组核酸分子基本结构。
[0116]图15的示意图显示了编码用于本发明基于酵母的免疫治疗组合物的HBV X/聚合酶/表面抗原/core融合蛋白的重组核酸分子基本结构。
[0117]图16的Western印迹数码图像显示了表达HBV表面抗原/Core融合蛋白的多个基于酵母的免疫治疗组合物的表达情况(热灭活的完整酵母)。
[0118]图17的Western印迹数码图像显示了表达HBV表面抗原/Core融合蛋白的多个基于酵母的免疫治疗组合物的表达情况(活的完整酵母)。
[0119]图18的Western印迹数码图像显示了表达HBV表面抗原/聚合酶/Core/X融合蛋白的多个基于酵母的免疫治疗组合物的表达情况。
[0120]图19的Western印迹数码图像显示了表达HBV表面抗原/聚合酶/Core/X融合蛋白的多个基于酵母的免疫治疗组合物的表达情况。
[0121]图20的Western印迹数码图像显示了多个基于酵母的免疫治疗组合物的表达情况，其表达包含表面-core融合蛋白(Sc)或表面-聚合酶_core_X融合蛋白(Sp)的HBV抗原。
[0122]图21的Western印迹数码图像显示了 HBV抗原的表达情况,所述抗原来自培养在UL2培养基中的基于酵母的HBV免疫治疗组合物。
[0123]图22的条形图显示了 HBV抗原的平均表达情况，所述抗原来自培养在UL2培养基或U2培养基中的多个基于酵母的HBV免疫治疗组合物(误差条带是标准差)。
[0124]图23的图形显示了脾⑶4+T细胞应答S/Core抗原混合物或者II型MHC SAg模拟表位(mimetope)肽的增殖情况(误差条带是标准差)，所述T细胞来自用表达HBV表面-Core抗原(SCORE)的基于酵母的免疫治疗产物免疫的小鼠。
[0125]图24的图形显示了淋巴结T细胞应答S/Core抗原混合物或者II型MHCSag模拟表位肽的增殖情况(误差条带是标准差)，所述T细胞来自用表达HBV表面-Core抗原(SCORE)的基于酵母的免疫治疗产物免疫的小鼠。
[0126]图25的图形显示了淋巴结T细胞应答S/Core抗原混合物或者II型MHC SAg模拟表位肽的干扰素Y (IFN- Y) ELISpot反应，所述T细胞来自用表达HBV表面-Core抗原(SCORE)的基于酵母的免疫治疗产物免疫的小鼠。
[0127]图26的图显示了脾⑶4+T细胞应答S/Core抗原混合物或者II型MHCSAg模拟表位肽的增殖情况(误差条带是标准差)，所述T细胞来自用表达HBV表面-Pol-Core-X抗原(以Spex表示)的基于酵母的免疫治疗产物免疫的小鼠。
[0128] 图27的图显示了脾细胞中的IL-1 β产生情况，所述脾细胞来自用下述免疫的小鼠:(a)基于酵母的免疫治疗产物，其表达HBV表面-Pol-E/Core-X抗原(以Sp表示)，左栏；或者(b)基于酵母的免疫治疗产物，其表达HBV表面-Core抗原(以Sc表示)(误差条带是标准差)。
[0129]图28的图显示了脾细胞中的IL_12p70产生情况，所述脾细胞来自用下述免疫的小鼠:(a)基于酵母的免疫治疗产物，其表达HBV表面-Pol-Core-X抗原(以Sp表示)，左栏；或者(b)基于酵母的免疫治疗产物，其表达HBV表面-Core抗原(以Sc表示)(误差条带是标准差)。
[0130]图29A和29B的图显示了脾细胞中的干扰素Y (IFN- Y )产生情况，所述脾细胞来自用下述免疫的小鼠:(图29A)基于酵母的免疫治疗产物，其表达HBV表面-Core抗原(以Sc表示)或者(图29B)基于酵母的免疫治疗产物，其表达HBV表面-Pol-Core-X抗原(以Sp表不)(误差条带是标准差)。
[0131]图30A-D 的图显示了脾细胞中 IL-1 β (图 30A)、IL_6(图 30B)、IL_13(图 30C)和IL-12p70(图30D)的产生情况，所述脾细胞来自用下述免疫的小鼠:(a)基于酵母的免疫治疗产物，其表达HBV表面-Pol-Core-X抗原(以Sp表示)，左栏；或者(b)基于酵母的免疫治疗产物，其表达HBV表面-Core抗原(以Sc表示)。
[0132]图31的条形图显示了用G1-13002或者G1-13002+抗CD40抗体，但没有YVEC免疫的小鼠，引发了与用表达HBV抗原的EL4肿瘤攻击时相当的保护(误差条带是标准差)。
[0133]图32的条形图显示了 IFN-Y ELISpot检测结果，该检测比较了相对YVEC，用G1-13008 (SOTRE-C)和G1-13013 (SPEXv2)免疫的小鼠用各种HBV肽和抗原的T细胞反应(误差条带是标准差)。
[0134]图33的条形图显示了对用G1-13002进行的刺激的IFN-YELISpot反应，所述G1-13002来自用预防性HBV疫苗免疫前和免疫后，以及给予强化剂后的人类受试对象。
[0135]图34的条形图显示了淋巴结细胞的HBV抗原特异性IFN-Y ELISpot反应，所述淋巴结细胞分离自用G1-13009 (SCORE-D)或G1-13020 (X-SCORE)免疫的HLA-A2转基因小鼠，相对用酵母对照(YVEC)免疫的小鼠(误差条带是标准差)。
[0136]图35的条形图显示了 脾细胞的HBV抗原特异性IFN-Y ELISpot反应，所述脾细胞分离自用G1-13009 (SCORE-D)免疫的HLA-A2转基因小鼠，相对用酵母对照(YVEC)免疫的小鼠(误差条带是标准误差)。
[0137]图36的条形图显示了淋巴结细胞的HBV抗原特异性IFN-Y ELISpot反应，所述淋巴结细胞分离自用G1-13009 (SCORE-D)或G1-13020 (X-SCORE)免疫的C57BL/6小鼠，相对用酵母对照(YVEC)免疫的小鼠或者初次试验小鼠(误差条带是标准差)。
[0138]图37的线形图显示了 C57BL/6小鼠中对I型MHC限制性HBV肽的HBV抗原特异性CD8+T细胞反应，所述小鼠用G1-13009 (SCORE-D)或G1-13020 (X-SCORE)免疫，相对用酵母对照(YVEC)或基于酵母的免疫治疗表达卵清白蛋白(OVAX)免疫的小鼠。
[0139]图38的条形图显示了 C57BL/6小鼠中对II型MHC限制性HBV肽的HBV抗原特异性CD4+T细胞反应，所述小鼠用G1-13009 (SCORE-D)或G1-13020 (X-SCORE)免疫，相对用酵母对照(YVEC)或基于酵母的免疫治疗表达卵清白蛋白(OVAX)免疫的小鼠。
[0140]发明详述
[0141]本发明一般地涉及用于防止和/或治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染的组合物和方法。发明包括基于酵母的免疫治疗组合物(又被称为“基于酵母的HBV免疫疗法”)，其包含酵母媒介物和HBV抗原，经过设计能够在个体中引发抗HBV感染的预防性和/或治疗性免疫反应；以及所述组合物在防止和/或治疗HBV感染及其相关症状中的用途。发明还包括用于发明所述的基于酵母的组合物中的重组核酸分子，以及它们编码的蛋白和融合蛋白在HBV感染的任何免疫治疗组合物和/或任何治疗性或预防性方案中的用途，包括任何结合了本发明的基于酵母的HBV特异性组合物和任何一种或多种其他HBV感染的治疗性或预防性组合物、试剂、药物、化合物和/或方案的治疗性或预防性方案。
[0142]在各种免疫疗法中，基于酵母的HBV特异性免疫治疗组合物的独特之处在于本发明的这些组合物能够诱发特异性靶向HBV的先天性免疫反应，以及适应性免疫反应，包括⑶4依赖性TH17和THlT细胞反应和抗原特异性⑶8+T细胞反应。基于酵母的HBV特异性免疫疗法所引发的免疫反应的广度很适合靶向HBV。首先，据信HBV能够通过“藏起来”，不诱发先天性反应，因此在感染早期可以躲避先天性免疫反应，而不是直接抵消先天免疫(Wieland and Chisari, 2005, J.Virol.15:9369-9380;ffieland, et al., 2004, PNASUSAlOl:6669-6674)。相应地，可以预期如果通过另一种机制，即本发明的基于酵母的免疫治疗组合物激活，HBV会对先天性免疫反应敏感。第二，HBV在被感染的宿主细胞中产生高水平的抗原表达，预计适应性免疫反应可以察觉到(Guidotti, et al.，1999，Science284:825-829; Thimme et al., 2003，J.Virol.77:68-76)，急性感染的清除与强力的 CD4.和CD8+T 细胞反应相关(Maini et al., 1999, Gastroenterol.117:1386-1396; Rehermann etal.，1995，J.Exp.Med.181:1047-1058;Thimme et al.，2003，J.Virol.77:68-76;ffielandand Chisari,2005,J.Virol.15:9369-9380)。因此，预期基于酵母的HBV免疫疗法通过激活适应性免疫反应能够有效地靶向HBV感染的细胞进行破坏和/或有效地增强病毒清除。而且，基于酵母的免疫疗法所产生的免疫反应被认为既有干扰素独立性也有干扰素依赖性(Tamburini et al., 2012, J.1mmunother.35 (I): 14-22);相应地，个体对HBV 治疗标准之一的基于干扰素的疗法有或没有响应的能力相信不会直接影响受试对象对本发明基于酵母的免疫疗法的响应能力。此外，本文描述的基于酵母的HBV免疫疗法组合物经设计可以靶向HBV的免疫原性和保守性区域、多个CTL表位并且包括HBV中那些可能用于靶向规避的区域(允许根据需要对组合物进行改进以靶向这类规避突变)，使它成为一种能够优化抗该病毒的有效免疫反应的高度适应性HBV疗法。
[0143]此外，尽管不被理论所约束，相信基于酵母的HBV免疫疗法所诱导的免疫反应不仅能够特异性地针对基于酵母的免疫治疗产物所携带的靶抗原，还能发展成可以针对病毒上的其他免疫表位(即，酵母-抗 原组合物带有的那些之外的表位)。换句话说，对基于酵母的免疫治疗组合物所含抗原和/或表位的初级细胞免疫反应会导致次级细胞免疫反应，所述次级细胞免疫反应针对的抗原和/或表位是被治疗受试对象的感染细胞中存在的，而基于酵母的免疫治疗组合物中没有的。这样就发展出对每个被治疗受试对象来说特有的复合体和无法预计的免疫反应特性。这些次级免疫反应对每个被治疗受试对象的HBV感染分子谱是特异的。与其他治疗方式，包括其他免疫治疗平台相比，基于酵母的免疫治疗组合物可能以独特的方式推动这些下游效应。这种现象还可以大概地称为“表位扩展”，代表着使用基于酵母的HBV免疫疗法的一个优点，因为抗特定HBV抗原或者甚至抗特定HBV基因型的免疫反应的诱导(例如，通过在酵母免疫治疗组合物中提供抗原)预计会导致免疫系统级联靶向多种额外的HBV抗原，从而产生有效的免疫反应，能够对抗基于酵母的免疫治疗组合物中代表的那些抗原之外的来自不同HBV基因型或病毒株的抗原。
[0144]正如以上讨论过的，变成慢性HBV感染的患者倾向具有较弱的(或没有)和更狭隘的HBV特异性的T细胞介导的免疫。相应地，本发明的基于酵母的HBV免疫治疗组合物致力于解决治疗活跃感染HBV的患者(包括慢性感染患者)所需要的治疗组合物,并进一步提供了防止HBV感染的再一种疫苗，其具有产生持久性记忆免疫反应的优点。的确，本发明的基于酵母的HBV免疫治疗组合物预期能够促进抗HBV的持久性记忆T细胞反应(可以预防感染)，并且提供了保护慢性感染患者不发生病毒再激活的长期益处。基于酵母的HBV免疫治疗组合物作为单一疗法或者与其他用于治疗HBV的治疗方法联用(例如与抗病毒化合物联用)预期可以提高慢性感染患者中的下述百分比:实现清除HBsAg和HBeAg的患者、实现完全血清转化的患者和/或实现在治疗结束后保持病毒清除至少6个月的患者。
[0145]相应地，为了将个体中的病毒负荷降低到免疫系统能更有效地处理的水平，可以将基于酵母的HBV免疫疗法与抗病毒药物和/或干扰素疗法，和/或其他HBV疗法联用。HBV病毒效价一般非常高(可能有多达IO11肝细胞被感染)，因此可能战胜个体发起有效CTL反应的能力；相应地，利用抗病毒药物减少病毒负荷结合利用基于酵母的免疫疗法减少HBV特异性CTL活性预计对被感染个体是有益的。此外，通过使用抗病毒药物减少病毒负荷可能还可以减少在大量被感染肝细胞被靶向破坏的情况下免疫激活的任何副作用。基于酵母的HBV免疫疗法预计还在减少和/或消除潜伏病毒感染的区室化中发挥作用。例如，通过PCR显示有许多组织是HBV阳性的，这些组织被认为是潜在的HBV再活化的庇护所。HBVDNA可以整合到宿主基因组中，使HBV能够以休眠态持续存在，cccDNA是超卷曲的HBV基因组的主要形式，也对休眠有贡献。不受到理论的约束，发明人相信本文描述的基于酵母的HBV免疫疗法在消除所有这些类型的可能造成了目前抗病毒方法中看到的无病治愈率低的HBV “庇护所”中都有作用。
[0146]在另一种情形中，单独使用或者与抗病毒或其他HBV疗法联合使用本发明的基于酵母的HBV免疫治疗组合物，如果足够实现完全清除HBsAg，但不能实现抗HB产生，可以随后使用或者进一步联用已有的预防性亚基疫苗来实现完全的血清转化。替代地，本文描述的任何一个融合蛋白还可以作为亚基疫苗单独地或者与本发明的基于酵母的HBV免疫治疗组合物联用，从而实现完全的血清转化，或者保护受试对象免于HBV感染。最后，本发明的免疫治疗组合物非常适于改造和/或与其他免疫治疗组合物(包括本文描述的任何免疫治疗组合物)联用，用于治疗抗病毒药物处理引起的HBV的规避突变。
[0147]基于酵母的免疫治疗组合物以生物学或药学上可接受的组合物给予。相应地，如本文描述的完整酵母媒介物必须适合，并且配制成适合对患者给药，而不是将酵母作为抗原生产系统，然后从酵母中纯化抗原。相反，现有的商品HBV疫苗以及许多开发中的HBV疫苗，包含在酿酒酵母中产生的随后通过破坏和纯化从酵母释放的重组HBV蛋白(例如，HBsAg蛋白)，因此最终的结合了佐剂(例如羟基磷酸铝硫酸盐或氢氧化铝)的疫苗不含可检测得到的酵母DNA，并且含有不超过1-5%的酵母蛋白。而本发明的基于酵母的HBV免疫治疗组合物含有很容易检测到的酵母DNA，并且含有远远大于5%的酵母蛋白；通常本发明的基于酵母的免疫治疗剂含有70%以上、80%以上或者一般是90%以上的酵母蛋白。
[0148]为了治疗和/或预防目的，将基于酵母的免疫治疗组合物给予患者以便对患者进行免疫。在发明的一个实施方案中，基于酵母的组合物被配制成在药学上可接受的赋形剂或制剂中给药。在一个方面中，组合物应当配制成适合给予人类受试对象(例如，生产条件应当适合在人体中使用，用于完成组合物和/或制备免疫治疗剂的给药剂量的任何赋形剂或配方应当适合在人体中使用)。在发明的一个方面中，基于酵母的免疫治疗组合物被配制成通过比如胃肠外途径注射(例如通过皮下、腹腔内、肌内或皮内注射，或者另一种合适的胃肠外途径)给予患者或受试对象。
[0149]在一个实施方案中，酵母表达抗原(例如,通过Western印迹可以检测到的)，并且抗原不会在酵母中凝聚，抗原不会在酵母中形成内涵体，和/或不会在酵母中形成很大的颗粒(VLPs)或其他大的抗原颗粒。在一个实施方案中，产生的抗原在酵母中是可溶性蛋白，和/或不从酵母中分泌出来，或者基本或主要不从酵母中分泌出来。在另一个实施方案中，不被理论约束，本发明人相信本文中详细描述的HBV融合蛋白中抗原(包括表面抗原和core抗原)的特定组合，可能还有抗原的排列会在表达抗原的酵母中形成VLPs或发生一定程度的凝聚。结果，酵母表达的抗原具有似乎与其整体结构和形式有关的免疫原性特性，这与抗原内带有的免疫表位(例如，T细胞表位)的免疫原性特性是分开的特征。当本发明的基于酵母的HBV免疫治疗剂中提供了表达这种融合蛋白的酵母时，免疫治疗组合物获得了激活先天性免疫系统的性能，这不仅是如以上讨论的来自酵母媒介物(象本文描述的所有基于酵母的免疫治疗剂)，部分还来自融合蛋白的抗原结构(例如，在酵母中表达的表面-core融合蛋白也具有类似佐剂的属性)；此外，正如本文描述的所有基于酵母的免疫治疗剂，免疫治疗组合物由于融合蛋白(通过提供各种T细胞表位)获得了以抗原特异性的方式激活适应性免疫系统的性能。这种特定的性能组合似乎是基于酵母的免疫治疗剂特有的，其中所述免疫治疗剂表达如文中所述的来自HBV的特定表面-core融合蛋白。但是，在本文描述的发明所有实施方案中，为了引发有效的抗HBV免疫反应，基于酵母的免疫治疗剂应当很容易被免疫系统的树突状细胞吞噬，酵母和抗原容易被这些树突状细胞加工。
[0150]本发明的组合物
[0151]本发明的一个实施方案涉及基于酵母的免疫治疗组合物，其可以被用于防止和/或治疗HBV感染和/或缓解HBV感染导致的至少一个症状。所述组合物包含:(a)酵母媒介物；和(b) 一或多个包含HBV蛋白和/或其免疫原性结构域的抗原。在联合酵母媒介物的情况下，HBV蛋白最一般是由酵母媒介物(例如，由完整的酵母或酵母原生质体酵母原生质球，任选进一步加工为酵母胞质体、酵母空胞(yeast ghost)或者酵母膜提取物或其组分)表达为重组蛋白，虽然本发明 的实施方案包括如文中所述将一或多个这种HBV蛋白加载到酵母媒介物中或者以其他方式与酵母媒介物一起复合化、附着、混合或者给药以形成本发明的组合物。根据本发明，在与本发明的酵母媒介物相关提到“异源”蛋白或“异源”抗原，包括异源融合蛋白时，意味着所述蛋白或抗原不是酵母天然表达的蛋白或抗原，虽然包含异源抗原或异源蛋白的融合蛋白可能也包含酵母天然表达的酵母序列或蛋白或者它们的组分(例如，如本文描述的α因子前原序列)。
[0152]发明的一个实施方案涉及各种HBV融合蛋白。在一个方面中，这种HBV融合蛋白可以用于本发明的基于酵母的免疫治疗组合物中。这种融合蛋白，和/或编码该蛋白的重组核酸分子还可以用于与不是基于酵母的免疫治疗组合物联用，或者用于产生不是基于酵母的免疫治疗组合物，所述组合物包括，但不限于DNA疫苗、蛋白亚基疫苗、重组的基于病毒的免疫治疗组合物、杀死的或灭活的病原体疫苗，和/或树突状细胞疫苗。在另一个实施方案中，这种融合蛋白可以用于HBV的诊断检测和/或用于生成抗HBV的抗体。本文描述的示范性HBV融合蛋白提供了 HBV抗原选中的部分，例如聚合酶的选中部分和/或改造的聚合酶；表面抗原的选中部分和/或改造的表面抗原；核心的选中部分和/或改造的核心(包括e抗原的至少一部分或者大部分)；X抗原的选中部分和/或改造的X抗原；以及任何一、二、三或全部四种抗原(表面抗原、核心、X和聚合酶)的选中部分和/或排列，比如，但不限于表面抗原和核心(包括e抗原的至少一部分或者大部分)的选中部分和/或排列；表面抗原、核心(包括e抗原的至少一部分或者大部分)、聚合酶和X抗原的选中部分和/或排列；表面抗原、核心(包括e抗原的至少一部分或者大部分)和聚合酶的选中部分和/或排列；以及表面抗原、核心(包括e抗原的至少一部分或者大部分)和X抗原的选中部分和/或排列。
[0153]在一个实施方案中，本文描述的HBV抗原(包括全长蛋白的免疫原性结构域)被融合到宿主蛋白上，所述宿主蛋白在HBV感染的宿主细胞中过表达，而在未感染的细胞中没有过表达。在一个实施方案中，本文描述的HBV抗原(包括全长蛋白的免疫原性结构域)被融合到蛋白R2上，所述R2是HBV复制所需要的宿主因子，在一个实施方案中，在肝细胞中表达。R2是核糖核苷酸还原酶(RNR)的一个蛋白成分，对于HBV的生命周期非常关键(参见例如Cohen et al.，2010，Hepatol.51 (5): 1538-1546)。参照本文提供的公开，发明的其他实施方案是显而易见的。
[0154]乙肝病毒、基因和蛋白。乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝病毒家族的成员，在人和大猩猩类人猿中导致暂时和慢性肝脏感染。感染哺乳动物的嗜肝病毒具有相似的DNA序列和基因组安排，被划分在正嗜肝病毒(Orthohepadnavirus)属。乙型肝炎病毒颗粒的外被膜含有脂类和被称为HBsAg的表面抗原。含有核心蛋白(HBcAg)的核壳体core包围着病毒DNA和具有逆转录酶活性的DNA聚合酶。正如Seeger and Mason, 2000, Microbiol.Mol.Biol.Rev.64(1):51-68中综述的，HBV具有一个3.2kb的部分双链松弛环形DNA(rcDNA)基因组，当病毒基因组被递送到感染肝细胞的细胞核时，被转化为共价闭合的环形双链DNA(cccDNA)分子。宿主细胞RNA聚合酶II由cccDNA转录出四个病毒RNAs，转运到宿主细胞细胞质。所述病毒RNAs包括转录后产生病毒核心和被膜结构蛋白以及前核心、聚合酶和X非结构病毒蛋白的mRNAs。被翻译产生core和聚合酶的RNA还作为前基因组RNA (pgRNA)，是逆转录的模板。PgRNA和聚合酶被核心蛋白包裹，产生病毒核壳体，pgRNA在此被逆转录为rcDNA。然后含有rcDNA的 核壳体被被膜蛋白封闭，从宿主细胞分泌出来成为成熟的病毒粒子或者被运输到细胞核以便扩增病毒cccDNA。
[0155]表1中显示了 HBV基因组产生的结构和非结构蛋白。部分双链的HBV基因组含有被称为C、X、P和S的四个基因(也可参见图1)。
[0156]表1.HBV基因和基因产物
[0157]基因蛋白___
核心蛋白(HBcAg) 形成病毒衣壳，包围着病毒pgRNA和聚合酶_
__E抗原(HBeAg)__功能未知；可能是适应性免疫反应的HBV特异性免疫抑制因子

病毒DNA复制的聚合酶

结构域1:末端蛋白(TP)结构域，包装PgRNA并引导负链DNA的
P聚合酶

合成
___结构域2:逆转录酶(RT)结构域，RNase H；降解pgRNA_
S HBsAg (表面抗原；小)被膜蛋白，形成表面抗原颗粒；可能抑制免疫功能_
M HBsAg (表面抗原；中
, 被膜蛋白，与S—起形成表面抗原颗粒；可能抑制免疫功能S=前 S2 + S)__
L HBsAg (表面抗原；大被膜蛋白与S—起形成表面抗原颗粒；前SI结构域在病毒被膜的组
__=前SI+前S2 + S) 装过程中提供核心颗粒的配体；肝细胞受体；可能抑制免疫功能

转录反式激活 ；DNA修复途径的调控；提高胞浆的钙水平；蛋白
XJf (HBx)降解途径的调制；在宿主细胞中的细胞周期进展和细胞增殖途径的
__调制；HBV复制的刺激_
[0158]基因C编码两个密切相关的抗原:一个21-kDa，被称为“核心蛋白”或“core抗原”(HBcAg)的蛋白，它能形成病毒衣壳；和17-kDa，被称为e抗原(HBeAg)的蛋白，它能形成二聚体，但不会组装成衣壳。全长核心蛋白是一个大概183个氨基酸的蛋白质，包含除了 N端10个氨基酸的整个e抗原，并在C端含有大约34个额外的氨基酸，这34个氨基酸在产生e抗原时被蛋白水解切割掉。换句话说，核心蛋白和e抗原有149个共有的氨基酸残基(这个区段有时被称为肝炎core抗原)，但N端和C端区域不同。前核心蛋白是一个前体蛋白，包含的氨基酸序列含有来自core和e抗原的序列，由该蛋白经过蛋白水解加工产生e抗原。细胞内的HBeAg包含前核心残基_29到-1 (本发明书中的残基编号是按照前核心蛋白内的核心蛋白的第一个氨基酸残基定义为位点“I”提供的)，这个区段含有信号序列，能够引导蛋白进入内质网，氨基酸-29到-11在此被切割；位于氨基酸149和150之间的另一个蛋白水解切割去除了前核心的C端部分(存在于全长核心蛋白中)，然后剩下的HBeAg(由前核心的氨基酸-10到-1加上HBcAg或core的氨基酸 1-149 构成)被分泌为 e 抗原(Standing et al., 1988, PNAS USA85:8405-8409; Ou etal., 1986, PNAS USA83:1578-1582;Bruss and Gerlich, 1988, Virologyl63:268-275;Takahashi et al.，1983，J.1mmunol.130:2903-2907)。在人血清中还发现了由整个前核心区域构成的 HBeAg(Takahashi et al.，1992，J.1mmunol.147:3156-3160)。正如提过的，HBcAg (core)形成二聚体组装成病毒衣壳,含有聚合酶和病毒DNA或pgRNA。HBeAg (e抗原)的功能未知，但它不是HBV复制或感染所必需的，被认为是保护HBV对抗免疫系统攻击的免疫抑制因子(Milich et al., 1990, PNAS USA87:6599-6603; Che et al.，2004，PNASUSA101:14913-14918;Wieland and Chisari, 2005, J.Virol.79:9369-9380) ? 为了清楚起见，在本文描述的HBV序列中(例如，见表3)，提供了来自代表性HBV基因型的前核心的序列，并在前核心序列中标识了核心蛋白和e抗原的位点，其中前核心的第一个氨基酸被指定为位点I。
[0159]基因P编码HBV DNA聚合酶(Pol)，该酶由两个通过间隔区连接的主要结构域构成。聚合酶的N端结构域(又被称为“末端蛋白”或TP)参与pgRNA的包装和无义链DNA的合成引导。C端结构域是具有RNase H(RH)活性的逆转录酶(RT)。
[0160]基因S含有多个起始密码子，编码三个以S、M和L表示的被膜蛋白(文中还一般地称为“表面蛋白”或“表面抗原”)，它们均是感染性病毒颗粒的成分，又被称为Dane颗粒。S本身还与M和L 一起形成表面抗原颗粒(HBsAg)，该表面抗原颗粒会从被感染细胞大量分泌(Seeger and Mason, 2000, Microbiol.Mol.Biol.Rev.64 (I): 51-68; Beck, (2007),^Hepatitis B virus replication^, World Journal of Gastroenterology:WJG13(I):48 - 64)。M和L的密码子分别位于S的起始密码子上游大约165 (M)和489 (L)个核苷酸处。S或“小”表面抗原是表面抗原中最小和最丰富的一种。产生的抗该抗原的抗体代表被感染个体中的血清转化。M或“中”表面抗原与S相比含有一个额外的蛋白结构域，被称为前S2，而L或“large”表面抗原特有的蛋白结构域被称为前SI (因此L也含有前S2和属于M和S的其他序列)。前SI含有大概位于前SI的氨基酸位点21和47之间的病毒肝细胞受体结构域(肝细胞受体结合位点)。前SI中的表位可以激发中和病毒的抗体。此外，前SI结构域提供了病毒被膜组装过程中核心颗粒的配体。表面抗原颗粒(HBsAg)可能还通过作为高剂量耐受原抑制免疫系统对感染细胞的清除(Reignat et al., 2002, J.Exp.Med.195:1089-1101;ffebster et al.，2004，J.Virol.78:5707—5719)。
[0161]基因X编码的X抗原(HBx)(还称为“X蛋白”)参与转录反式激活、DNA修复途径的调控、提高胞浆的钙水平、蛋白降解途径的调制、在宿主细胞中的细胞周期进展和细胞增殖途径的调制(Gearhart et al.，2010，J.Virol.)，这增强了对HBV复制的刺激。HBx 还与肝癌的进展相关(Kim et al., Naturel991, 351:317-320; Terradillos etal., 0ncogenel997, 14:395-404)。
[0162]HBV是发现的四种主要血清型(adr、adw、ayr、ayw)之一,这些血清型的确定是根据病毒被膜蛋白内的抗原表位。根据基因组中的核苷酸序列变异共有八个不同的HBV基因型(A-H)。表 2 显示了基因型的地理分布(Kramvis et al., 2005, Vaccine23 (19): 2409-2423;Magnius and Norder, 19 95, Intervirology38(1-2):24-34;Sakamoto et al., 2006, J.Gen.Virol.87:1873-1882; Lim et al.，2006，Int.J.Med.Sc1.3:14-20)。
[0163]表2
[0164]
HBV基因型j流行地理分布
HBV/A 美洲、欧洲、非洲、东南亚
HBV基因型流行地理分布
HBV/B亚洲(中国、日本、东南亚)、美国
HBV/C亚洲(中国、日本、东南亚)、美国
HBV/D 美国、地中海、中东和印度
HBV/E 撒哈拉以南非洲国家和西非
【权利要求】
1.免疫治疗组合物，其包含: a)酵母媒介物；和 b)包含多个HBV抗原的融合蛋白，其中所述多个HBV抗原由以下组成: (i)具有与全长HBV X抗原第52至126位至少80%相同的氨基酸序列的HBV X抗原； (?)具有与全长HBV大表面抗原(L)的氨基酸序列至少95%相同的氨基酸序列的HBV表面抗原，和； (iii)具有与全长HBV核心蛋白的氨基酸序列至少95%相同的氨基酸序列的HBV核心抗原； 其中所述组合物引发HBV特异性的免疫应答。
2.权利要求1的免疫治疗组合物，其中所述HBVX抗原的氨基酸序列与选自以下的氨基酸序列为至少95%相同:SEQ ID NO: 130的第1-60位、SEQ ID NO: 110的第630-689位、SEQ ID NO: 122 的第 582-641 位、SEQ ID NO: 107 的第 630-689 位、SEQ ID NO: 108 的第630-689 位、SEQ ID NO: 109 的第 630-689 位、SEQ ID NO:4 的第 52-68 位接着是第 84-126位、SEQ ID NO:8的第52-68位接着是第84-126位、SEQ ID NO: 12的第52-68位接着是第84-126 位、SEQ ID NO: 16 的第 52-68 位接着是第 84-126 位、SEQ ID NO:20 的第 52-68 位接着是第84-126位、SEQ ID NO:24的第52-68位接着是第84-126位、SEQ ID NO:28的第52-68位接着是第84-126位、SEQ ID NO:32的第52-68位接着是第84-126位、SEQ IDNO: 100、SEQ ID NO: 101 的第 719-778 位、SEQ ID NO: 102 的第 635-694 位、SEQ ID NO: 124的第 810-869 位、SEQ ID NO: 126 的第 582-641 位、SEQ ID NO: 132 的第 229-288 位、SEQ IDNO: 134的第1-60位、或来自不同HBV株的相应序列。
3.权利要求1的免疫治疗组合物，其中所述HBVX抗原的氨基酸序列选自:SEQ IDNO: 130 的第 1-60 位、SEQ ID NO: 110 的第 630-689 位、SEQ ID NO: 122 的第 582-641 位、SEQID NO: 109 的第 630-689 位、SEQ ID NO: 108 的第 630-689 位、SEQ ID NO: 107 的第 630-689位、SEQ ID NO: 100、或来自不同HBV株的相应序列。
4.权利要求1-3中任一项的免疫治疗组合物，其中所述HBV表面抗原的氨基酸序列与选自以下的氨基酸序列为至少95%相同:SEQ ID NO: 130的第63-461位、SEQ ID NO: 118的第 1-399 位、SEQ ID NO: 122 的第 1-399 位、SEQ ID NO: 34 的第 9-407 位、SEQ ID NO: 112 的第 1-399位、SEQ ID NO: 114 的第 1-399 位、SEQ ID NO: 116 的第 1-399 位、SEQ ID NO: 3、SEQID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQID NO:31、SEQ ID NO:93 的第 90-488 位、SEQ ID NO: 120 的第 1-399 位、SEQ ID NO: 124 的第 1-399 位、SEQ ID NO: 126 的第 1-399 位、SEQ ID NO: 128 的第 231-629 位、SEQ ID NO: 132的第289-687位、SEQ ID NO: 134的第289-687位、或来自不同HBV株的相应序列。
5.权利要求1-4中任一项的免疫治疗组合物，其中所述HBV表面抗原的氨基酸序列选自:SEQ ID NO: 130 的第 63-461 位、SEQ ID NO: 118 的第 1-399 位、SEQ ID NO: 122 的第1-399 位、SEQ ID NO:34 的第 9-407 位、SEQ ID NO: 112 的第 1-399 位、SEQ ID NO: 114 的第1-399位、SEQ ID NO: 116的第1-399位、或来自不同HBV株的相应序列。
6.权利要求1-5中任一项的免疫治疗组合物，其中所述HBV核心抗原的氨基酸序列与选自以下的氨基酸序列至少95%相同:SEQ ID NO: 130的第462-643位、SEQ ID NO:118的第400-581 位、SEQ ID NO: 122 的第 400-581 位、SEQ ID NO: 34 的第 408-589 位、SEQ ID NO: 112的第 400-581 位、SEQ ID NO: 114 的第 400-581 位、SEQ ID NO: 116 的第 400-581 位、SEQ IDNO:1 的第 31-212 位、SEQ ID NO: 5 的第 31-212 位、SEQ ID NO:9 的第 31-212 位、SEQ IDNO: 13 的第 31-212 位、SEQ ID NO: 17 的第 31-212 位、SEQ ID NO: 21 的第 31-212 位、SEQ IDNO: 25 的第 14-194 位、SEQ ID NO: 29 的第 31-212 位、SEQ ID NO: 36 的第 605-786 位、SEQID NO: 38 的第 352-533 位、SEQ ID NO: 39 的第 160-341 位、SEQ ID NO:41 的第 605-786 位、SEQ ID NO:92 的第 691-872 位、SEQ ID NO:95 的第 90-271 位、SEQ ID NO: 105 的第 2-183位、SEQ ID NO: 105 的第 184-395 位、SEQ ID NO: 105 的第 396-578 位、SEQ ID NO: 105 的第579-761 位、SEQ ID NO: 106 的第 2-183 位、SEQ ID NO: 106 的第 338-520 位、SEQ ID NO: 120的第 400-581 位、SEQ ID NO: 124 的第 400-581 位、SEQ ID NO: 126 的第 400-581 位、SEQ IDNO: 128 的第 630-811 位、SEQ ID NO: 132 的第 688-869 位、SEQ ID NO: 134 的第 688-869 位、或来自不同HBV株的相应序列。
7.权利要求1-6中任一项的免疫治疗组合物，其中所述HBV核心抗原的氨基酸序列选自:SEQ ID NO: 130 的第 462-643 位、SEQ ID NO: 118 的第 400-581 位、SEQ ID NO: 122 的第 400-581 位、SEQ ID NO:34 的第 408-589 位、SEQ ID NO: 116 的第 400-581 位、SEQ IDNO: 112的第400-581位、SEQ ID NO: 114的第400-581位、或来自不同HBV株的相应序列。
8.权利要求1-7中任一项的免疫治疗组合物，其中所述融合蛋白包含SEQID NO: 37的N末端氨基酸序列。
9.权利要求1-8中任一项的免疫治疗组合物，其中所述多个HBV抗原在所述融合蛋白中从N末端至C末端按下列次序排列:HBV X抗原、HBV表面抗原、HBV核心抗原。
10.权利要 求1-8中任一项的免疫治疗组合物，其中所述融合蛋白包含与选自SE10.QID NO: 130、SEQ ID NO: 150或SEQ ID NO: 122的氨基酸序列至少95%相同的氨基酸序列。
11.权利要求1-8中任一项的免疫治疗组合物，其中所述融合蛋白包含选自SEQIDNO: 130、SEQ ID NO: 150 或 SEQ ID NO: 122 的氨基酸序列。
12.免疫治疗组合物，其包含: a)酵母媒介物；和 b)包含多个HBV抗原的融合蛋白，其中所述多个HBV抗原由以下组成: (i)具有与全长HBV大表面抗原(L)的氨基酸序列至少95%相同的氨基酸序列的HBV表面抗原，和； (?)具有与全长HBV核心蛋白的氨基酸序列至少95%相同的氨基酸序列的HBV核心抗原； 其中所述组合物引发HBV特异性的免疫应答。
13.权利要求12的免疫治疗组合物，其中所述HBV抗原由以下组成:包含至少95%的全长HBV大表面抗原(L)的氨基酸序列与包含至少95%的全长HBV核心蛋白的氨基酸序列的N末端融合。
14.权利要求12或权利要求13的免疫治疗组合物，其中所述HBV表面抗原的氨基酸序列与选自以下的氨基酸序列至少95%相同:SEQ ID NO: 118的第1-399位、SEQ ID NO:34的第9-407位、SEQ ID NO: 116 的第 1-399位、SEQ ID NO: 112 的第 1-399位、SEQ ID NO: 114 的第 1-399 位、SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:7,SEQ ID NO:1USEQ ID NO: 15,SEQ ID NO: 19,SEQID NO:23,SEQ ID NO:27,SEQ ID NO:31,SEQ ID NO:93 的第 90-488 位、SEQ ID NO: 120 的第 1-399 位、SEQ ID NO: 122 的第 1-399 位、SEQ ID NO: 124 的第 1-399 位、SEQ ID NO: 126的第 1-399 位、SEQ ID NO: 128 的第 231-629 位、SEQ ID NO: 130 的第 63-461 位、SEQ IDNO: 132的第289-687位、SEQ ID NO: 134的第289-687位、或来自不同HBV株的相应序列。
15.权利要求12-14中任一项的免疫治疗组合物，其中所述HBV表面抗原的氨基酸序列选自:SEQ ID NO: 118 的第 1-399 位、SEQ ID NO:34 的第 9-407 位、SEQ ID NO: 112 的第1-399 位、SEQ ID NO: 114 的第 1-399 位、SEQ ID NO: 116 的第 1-399 位、或来自不同 HBV 株的相应序列。
16.权利要求12-15中任一项的免疫治疗组合物，其中所述HBV核心抗原的氨基酸序列与选自以下的氨基酸序列至少95%相同:SEQ ID NO: 118的第400-581位、SEQ ID NO:34的第 408-589 位、SEQ ID NO: 116 的第 400-581 位、SEQ ID NO: 112 的第 400-581 位、SEQ IDNO: 114 的第 400-581 位、SEQ ID NO:1 的第 31-212 位、SEQ ID NO: 5 的第 31-212 位、SEQ IDNO:9 的第 31-212 位、SEQ ID NO: 13 的第 31-212 位、SEQ ID NO: 17 的第 31-212 位、SEQ IDNO:21 的第 31-212 位、SEQ ID NO:25 的第 14-194 位、SEQ ID NO:29 的第 31-212 位、SEQID NO: 36 的第 605-786 位、SEQ ID NO: 38 的第 352-533 位、SEQ ID NO: 39 的第 160-341 位、SEQ ID NO:41 的第 605-786 位、SEQ ID NO:92 的第 691-872 位、SEQ ID NO:95 的第 90-271位、SEQ ID NO: 105 的第 2-183 位、SEQ ID NO: 105 的第 184-395 位、SEQ ID NO: 105 的第396-578 位、SEQ ID NO: 105 的第 579-761 位、SEQ ID NO: 106 的第 2-183 位、SEQ ID NO: 106的第 338-520 位、SEQ ID NO: 120 的第 400-581 位、SEQ ID NO: 122 的第 400-581 位、SEQID NO: 124 的第 400-581 位、SEQ ID NO: 126 的第 400-581 位、SEQ ID NO: 128 的第 630-811位、SEQ ID NO: 130 的第 462-643 位、SEQ ID NO: 132 的第 688-869 位、SEQ ID NO: 134 的第688-869位、或来自不同HBV株的相应序列。
17.权利要求12-15中任一项的免疫治疗组合物，其中所述HBV核心抗原的氨基酸序列选自:SEQ ID NO: 118 的第 400-581 位、SEQ ID NO:34 的第 408-589 位、SEQ ID NO: 116 的第 400-581 位、SEQ ID NO : 112 的第 400-581 位、SEQ ID NO: 114 的第 400-581 位、或来自不同HBV株的相应序列。
18.权利要求12-17中任一项的免疫治疗组合物，其中所述多个HBV抗原由与选自以下的氨基酸序列至少95%相同的氨基酸序列组成:SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 116, SEQ IDNO: 34的第9-589位、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 114，或来自不同HBV株的相应序列。
19.权利要求12-18中任一项的组合物，其中所述融合蛋白包含SEQID NO:37的N末端氨基酸序列。
20.权利要求12-18中任一项的免疫治疗组合物，其中所述融合蛋白包含SEQIDNO:151或SEQ ID NO:34的氨基酸序列。
21.免疫治疗组合物，其包含: a)酵母媒介物；和 b)包含多个HBV抗原的融合蛋白，其中所述多个HBV抗原由以下组成: (i)由全长HBV大(L)、中(M)或小⑶表面抗原的至少一个免疫原性域组成的HBV表面抗原； (?)由全长HBV聚合酶的至少一个免疫原性域或HBV聚合酶的逆转录酶(RT)域的至少一个免疫原性域组成的HBV聚合酶抗原；(iii)由全长HBV核心蛋白或全长HBVe抗原的至少一个免疫原性域组成的HBV核心抗原；以及 (iv)由全长HBVX抗原的至少一个免疫原性域组成的HBV X抗原； 其中所述组合物引发HBV特异性的免疫应答。
22.权利要求21的免疫治疗组合物，其中所述HBV抗原由与选自以下的氨基酸序列至少 95% 相同的氨基酸序列组成:SEQ ID NO: 134,SEQ ID NO: 132,SEQ ID N0:36 的第 6-939位、SEQ ID NO:92 的第 92-1025 位、SEQ ID NO: 101 的第 90-778 位、SEQ ID NO: 102 的第7-694位、SEQ ID NO:107,SEQ ID NO:108,SEQ ID NO:109,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:124、SEQ ID NO: 126，或来自不同HBV株的相应序列。
23.免疫治疗组合物，其包含: a)酵母媒介物；和 b)包含多个HBV抗原的融合蛋白，其中所述多个HBV抗原由以下组成: (i)由HBV大表面抗原(L)的pre-Sl的肝细胞受体区的至少一个免疫原性域和HBV小表面抗原(S)的至少一个免疫原性域组成的HBV表面抗原； (?)由HBV聚合酶的逆转录酶域的至少一个免疫原性域组成的HBV聚合酶抗原；和 (iii)由HBV核心蛋白的至少一个免疫原性域组成的HBV核心抗原。 其中所述组合物引发HBV特异性的免疫应答。
24.权利要求23的免疫治疗组合物，其中所述HBV抗原由与选自以下的氨基酸序列至少 95% 相同的氨基酸序列组成:SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 41 的第 6-786位、或来自不同HBV株的相应序列。
25.免疫治疗组合物，其包含: a)酵母媒介物；和 b)包含多个HBV抗原的融合蛋白，其中所述多个HBV抗原由以下组成: (i)由HBV聚合酶的逆转录酶(RT)域的至少一个免疫原性域组成的HBV聚合酶抗原；和 (?)由HBV核心蛋白的至少一个免疫原性域组成的HBV核心抗原； 其中所述组合物引发HBV特异性的免疫应答。
26.权利要求25的免疫治疗组合物，其中所述融合蛋白具有与SEQID NO: 38的氨基酸序列或来自不同HBV株的相应序列至少95%相同的氨基酸序列。
27.免疫治疗组合物，其包含: a)酵母媒介物；和 b)包含多个HBV抗原的融合蛋白，其中所述多个HBV抗原由以下组成: (i)由HBV X抗原的至少一个免疫原性域组成的HBV X抗原；和 (?)由HBV核心蛋白的至少一个免疫原性域组成的HBV核心抗原； 其中所述组合物引发HBV特异性的免疫应答。
28.权利要求27的免疫治疗组合物，其中所述融合蛋白包含与SEQID NO: 39的氨基酸序列或来自不同HBV株的相应序列至少95%相同的氨基酸序列。
29.免疫治疗组合物，其包含: a)酵母媒介物；和b)包含多个HBV抗原的融合蛋白，其中所述多个HBV抗原选自下组: (i)由HBV大表面抗原(L)的至少一个免疫原性域组成的HBV表面抗原； (?)由HBV聚合酶的逆转录酶域的至少一个免疫原性域组成的HBV聚合酶抗原； (iii)由HBV核心蛋白的至少一个免疫原性域组成的HBV核心抗原；和 (iv)由全长HBVX抗原的至少一个免疫原性域组成的HBV X抗原； 其中所述组合物引发HBV特异性的免疫应答。
30.权利要求29的免疫治疗组合物，其中所述融合蛋白包含与以下氨基酸序列至少95% 相同的氨基酸序列:SEQ ID NO:93, SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:95、SEQID NO: 96、或来自不同HBV株的相应序列。
31.权利要求29的免疫治疗组合物，其包含免疫治疗组合物的(i)、(ii)、(iii)或(iv)项中任意两、三或四项。
32.免疫治疗组合物，其包含: a)酵母媒介物；和 b)包含多个HBV抗原的融合蛋白，其中所述多个HBV抗原由选自HBV表面抗原、HBV聚合酶抗原、HBV核心抗原或HBV X抗原的两种、三种或四种HBV抗原的至少一个免疫原性域组成，其中每种所述HBV抗原来 自不同的HBV基因型； 其中所述组合物引发HBV特异性的免疫应答。
33.权利要求32的免疫治疗组合物，其中所述HBV抗原由4种HBV核心抗原组成，且其中所述融合蛋白具有与SEQ ID NO: 105或来自不同HBV株的相应序列至少95%相同的氨基酸序列。
34.免疫治疗组合物，其包含: a)酵母媒介物；和 b)包含至少2种HBV核心蛋白和至少2种HBVX抗原的融合蛋白，其中所述每种HBV核心蛋白来自不同的HBV基因型，并且其中每种HBV X抗原来自不同的HBV基因型； 其中所述组合物引发HBV特异性的免疫应答。
35.权利要求34的免疫治疗组合物，其中所述融合蛋白具有与SEQID NO: 106或来自不同HBV株的相应序列至少95%相同的氨基酸序列。
36.权利要求1-35中任一项的免疫治疗组合物，其中所述融合蛋白由酵母媒介物表达。
37.权利要求1-36中任一项的免疫治疗组合物，其中所述酵母媒介物是全酵母。
38.权利要求37的免疫治疗组合物，其中所述全酵母被杀死。
39.权利要求37的免疫治疗组合物，其中所述全酵母被热灭活。
40.权利要求1-39中任一项的免疫治疗组合物，其中所述酵母媒介物来自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
41.权利要求1-40中任一项的免疫治疗组合物，其中所述组合物含有超过90%的酵母蛋白并且配制为通过注射来对患者施用。
42.免疫治疗组合物，其包含: a)来自酿酒酵母的加热灭活的全酵母；和 b)由所述酵母表达的HBV融合蛋白，其中所述融合蛋白包含SEQID NO: 130。
43.免疫治疗组合物，其包含: a)来自酿酒酵母的加热灭活的全酵母；和 b)由所述酵母表达的HBV融合蛋白，其中所述融合蛋白包含SEQID NO: 150。
44.免疫治疗组合物，其包含: a)来自酿酒酵母的加热灭活的全酵母；和 b)由所述酵母表达的HBV融合蛋白，其中所述融合蛋白包含SEQID NO: 118。
45.免疫治疗组合物，其包含: a)来自酿酒酵母的加热灭活的全酵母；和 b)由所述酵母表达的HBV融合蛋白，其中所述融合蛋白包含SEQID NO: 151。
46.免疫治疗组合物，其包含: a)来自酿酒酵母的加热灭活的全酵母；和 b)由所述酵母表达的HBV融合蛋白，其中所述融合蛋白包含SEQID NO: 34的氨基酸序列。
47.包含多个HBV抗原的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含一种与以下的氨基酸序列至少 95% 相同的氨基酸序列:SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 118, SEQ IDNO:151，SEQ ID NO:34， SEQ ID NO:120，SEQ ID NO:122，SEQ ID NO:124，SEQ ID NO:126，SEQID NO:128，SEQ ID NO:132，SEQ ID NO:134，SEQ ID NO:112，SEQ ID NO:114，SEQ IDNO:116，SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ IDNO:92，SEQ ID NO:93，SEQ ID NO:94，SEQ ID NO:95，SEQ ID NO:96，SEQ ID NO:97，SEQ IDNO:98, SEQ ID NO:99, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:102，SEQ ID NO:105，SEQID NO:106，SEQ ID NO:107，SEQ ID NO:108，SEQ ID NO:109 和 SEQ ID NO:110。
48.编码权利要求47的融合蛋白的重组核酸分子。
49.权利要求48的重组核酸分子，其中所述重组核酸分子包含选自以下的核酸序列:SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:111，SEQ ID NO:113，SEQID NO:115，SEQ ID NO:117，SEQ ID NO:119，SEQ ID NO:121，SEQ ID NO:123，SEQ IDNO:125，SEQ ID NO:127，SEQ ID NO:129，SEQ ID NO:131 或 SEQ ID NO:133。
50.用权利要求48或权利要求49的重组核酸分子转染的分离的细胞。
51.权利要求50的分离的细胞，其中所述细胞是酵母细胞。
52.包含权利要求47的融合蛋白的组合物。
53.包含权利要求48或权利要求49的重组核酸分子的组合物。
54.包含权利要求50或权利要求51的分离的细胞的组合物。
55.在受试者中治疗乙肝病毒(HBV)感染或至少一种起因于HBV感染的症状的方法，包括对已被HBV感染的受试者施用至少一种依照权利要求0-0或0-0中任一项的组合物，其中对所述受试者施用组合物减轻了受试者中的HBV感染或至少一种起因于HBV感染的症状。
56.权利要求55的方法，其中对所述受试者施用所述组合物导致所述受试者中的血清转化。
57.权利要求55的方法，其中对所述受试者施用所述组合物降低了所述受试者中的HBV病毒负载。
58.权利要求55的方法，其中对所述受试者施用所述组合物减少了所述受试者中的肝损伤。
59.权利要求55的方法，其还包括对所述受试者施用一种或多种另外的可用于治疗或减轻HBV感染症状的化合物。
60.权利要求59的方法，其中所述化合物为抗病毒化合物。
61.权利要求60的方法，其中所述抗病毒化合物是核苷酸类似物逆转录酶抑制剂。
62.权利要求60的方法，其中所述抗病毒化合物选自下组:替诺福韦(tenofovir)、拉米夫定(Iamivudine)、阿德福韦(adefovir)、替比夫定(telbivudine)、恩替卡韦(entecavir)及其组合。
63.权利要求60的方法，其中所述抗病毒化合物是替诺福韦。
64.权利要求59的方法，其中所述化合物是干扰素。
65.引发针对HBV抗原的抗原特异性的、细胞介导的免疫应答的方法，包括对受试者施用至少一种依照权利要求1-46或52-54中任一项的组合物。
66.在受试者中预防HBV感染的方法，包括对尚未被HBV感染的受试者施用至少一种依照权利要求1-46或52-54中任一项的组合物。
67.针对HBV使一群个体免疫的方法，包括对所述个体群体施用至少一种依照权利要求1-46或52-54中任一项的组 合物。
68.权利要求55-67中任一项的方法，其中所述方法包括施用至少两种依照权利要求1-46或52-54中任一项的组合物。
69.权利要求68的方法，其中同时对个体施用所述组合物。
70.权利要求68的方法，其中序贯地对个体施用所述组合物。
71.权利要求68的方法，其中通过注射到个体上的不同部位来施用所述每种组合物。
72.权利要求1-46或52-54中任一项的组合物，其用于治疗HBV感染或其症状。
73.权利要求1-46或52-54中任一项的组合物，其用于预防HBV感染或其症状。
74.权利要求1-46或52-54中任一项的组合物在制备用于治疗HBV感染的药物中的用途。
75.权利要求1-46或52-54中任一项的组合物在制备用于预防HBV感染的药物中的用途。
【文档编号】C07K14/02GK103476426SQ201280018222
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2012年2月9日 优先权日:2011年2月12日
【发明者】D.阿佩里安, T.H.金, 郭志敏, C.科伊肖特 申请人:全球免疫股份有限公司