α-氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯、制备方法及应用的制作方法
【专利摘要】α-氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯、制备方法及应用，属于基质辅助激光解吸电离质谱（MALDI）【技术领域】。是在室温搅拌下，向反应溶剂中加入哌啶，再加入氰基乙酸丙酯和4-羟基苯甲醛，待药品溶解后再加入甲苯，升温回流除水后停止反应，然后冷却至室温后，旋蒸得含α-氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯的浓缩液；产物纯化：将所得浓缩液倒入大量去离子水中，立即有固体析出，抽滤得滤饼；再将滤饼用乙醇重结晶1～5次，得微黄色产物，即α-氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯。采用本发明的质谱分析方法检测各类样品，灵敏度与检测限与传统基质（α-氰基-4-羟基肉桂酸）相比，具有更好的测试效果。
【专利说明】α -氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯、制备方法及应用
【技术领域】
[0001]本发明属于基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI)【技术领域】，具体涉及α-氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯、制备方法及在作为MALDI的基质方面的应用。
【背景技术】
[0002]基质辅助激光解吸电离(MALDI)质谱技术自1988年Tanaka等人报道以来，就备受各国研究者的青睐。基质在MALDI分析中充当十分重要的角色，它们不仅能吸收和传递激光能量，同时也能将待测物分子分离开防止它们聚集成簇免遭强烈激光照射使待测物分子发生碎裂。一个“好的”基质需要满足几个条件，包括其要在所用激光波长处有较强的吸收能力，并且能够与待测物互溶从而能够很好的共同均匀结晶。事实上，一种基质可能不同时具备满足一个样品中各种各样的待测物的要求，因此经常使用混合基质即在基质的溶液中加入适当的辅助基质。然而因为缺乏严格的指导性规则，在MALDI中找到一种适合作为基质或是辅助基质的化合物是一个需要大量的劳动和时间的工作。幸运的是，近年来在生物样品MALDI分析中基质添加物或是新基质的研究取得很大进展。
[0003]因为每种基质都有其特定的“能力阀值”，而电离不同类型的样品需要不同的能量。同时，在检测过程中要保持样品的稳定性，太“热”(能量传递太高、太快)的基质会导致样品不可预测的解离，因此在MALDI的使用中，不同类型的样品要用不同的基质。在选用好适用于待测样品的基质后便可以使用MALDI MS进行样品制备分析，其流程主要包括:(I)选择适合样品类型的基质后，将样品与基质按照适当的比例均匀的混合，一般为混合溶液。
(2)用微量移液枪取约0.5ul上述的混合溶液使其自由滴落在靶板上。(3)使液滴自然结晶。(4)打开质谱仪取下靶板，将样品靶放进质谱仪，此时质谱仪处于高真空工作状态。(5)待质谱仪显示准备好后，点击样品点的不同位置，用激光照射样品，产生离子。MALDI产生的离子基本上均带一个电荷，为准分子离子。
[0004]MALDI质谱技术常用的基质，如α -氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)、2，5_ 二羟基苯甲醛(DHB)和芥子酸(SA)等测试样品时往往遇到以下问题:(I)质量范围与样品类型不广:CHCA 一般只适用于分子量500~1000ODa, DHB 一般适用于分子量小于5000的多肽,多糖和糖肽；而SA —般适用于分子量大于10000的蛋白。(2)待分析的样品，尤其是生物样品如蛋白组学研究的实际样品，往往存在大量的杂质和其他非蛋白成分，这使得质谱检测灵敏度大大降低，且严重抑制样品信号，因此需要加入额外的除盐步骤和除杂质操作，导致样品大量损失，而低的样品含量给后续质谱分析和检测带来困难。(3) CHCA在合成制备上不易得到纯品，商业化产品价格高。因此，开发一些同时具有CHCA、DHB和SA三种传统基质优良性能，且相对灵敏度更高，应用范围更广，易获取的基质材料是对当前基于MALDI的质谱分析的重要和有力补充，具有良好的实用价值和应用前景。
【发明内容】
[0005]本发明的一个目的是提供α -氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯、制备方法及在作为MALDI的基质方面的应用。
[0006]本发明所述的α-氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯的结构式如式(I)所示:
[0007]
【权利要求】
1.α -氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯，其结构式如式(I)所示:
。(1)
2.权利要求1所述的α-氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯的制备方法，其步骤如下: 1)室温搅拌下，向反应溶剂中加入哌啶，再加入氰基乙酸丙酯和4-羟基苯甲醛，待药品溶解后再加入甲苯，升温回流除水后停止反应，冷却至室温后，旋蒸得含α -氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯的浓缩液； 2)产物纯化:将上面步骤所得浓缩液倒入到大量去离子水中，抽滤得滤饼；再将滤饼用乙醇重结晶I~5次，得微黄色产物，即α -氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯。
3.如权利要求2所述的α-氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯的制备方法，其特征在于:步骤I)中哌啶的加入量为4-羟基苯甲醛摩尔数的1%~10%。
4.如权利要求2所述的α-氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯的制备方法，其特征在于:步骤I)中氰基乙酸丙酯与4-羟基苯甲醛的摩尔比为1:0.5~5。
5.如权利要求2所述的α-氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯的制备方法，其特征在于:步骤I)中反应溶剂为乙醇，氰基乙酸丙酯与乙醇的摩尔比为1:1~1000 ;乙醇与甲苯的摩尔比为1:0.5~10。
6.如权利要求2所述的α-氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯的制备方法，其特征在于:步骤I)中反应温度为40~1 50摄氏度，反应时间为0.5~24小时。
7.如权利要求2所述的α-氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯的制备方法，其特征在于:步骤2)中浓缩液与去离子水的体积比为1:10~1000，滤饼与乙醇质量比为1:10~1000。
8.权利要求1所述的α-氰基-4-羟基肉桂酸正丙酯在作为MALDI的基质方面的应用。
【文档编号】C07C253/30GK103483223SQ201310414668
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年9月12日 优先权日:2013年9月12日
【发明者】国新华, 肖朝辉, 刘超, 王晟 申请人:吉林大学