一种制备内源性逆转录病毒多克隆抗体的方法
【专利摘要】本发明公开了一种制备内源性逆转录病毒多克隆抗体的方法。步骤如下：首先将PCR扩增P15E基因与GEX-4T-1载体混合，其后进行T载体连接测序以及构件GST重组载体；所述重组载体后将其转化BL-21DE3宿主菌；其后进行IPTG的诱导表达；对P15E进行蛋白纯化；纯品蛋白与佐剂混合；其后对动物进行免疫注射；获取血清；Western-blot印迹法；最后进行Elisa检测。其中脱色液使用如下比例配制：甲醇：水：冰甲酸为20:15:6；脱色液中可以加入90ml超纯水。本发明的有益效果是，实验简单，费用较低，抗体的制备为将来检测临床器官和人工肝中的PERV的表达及传播具有重要意义。
【专利说明】一种制备内源性逆转录病毒多克隆抗体的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种实验方法，具体来说，一种制备内源性逆转录病毒多克隆抗体的方法。
【背景技术】
[0002]界种移植在治疗人类疾病方面提供了极为丰富的器官、组织和细胞來源。因为猪来源方便，易于繁育，与人体解剖和生现有很高的相似性，可选择合适大小的器官和丰富且功能以好肝细胞，成为了奸种移植和生物人工肝的首选。然而，对于异种移植和生物人工肝而言，作为异种来源的猪器官、组织和细胞，其内存在猪内源性逆转求病毒(porcineendogenous retrovirus, PERV), PERV是一种Y逆转录病毒,它整合于猪的染色体屮；根据诂种的不同，其PERV拷贝数和mRNA的表达贵岜有很大差异。抑制PERV表达的猪成纤维细胞均来源子只有高PERVmRNA表达背贵的德国人白猪，经RNA干扰技术行基W沉默后，111然其表达量下降，但足山于RNA [ 二扰技术存在“脱靶效应”，所以这种有PERV mRNA高表达背景的核供体细胞在-定程度上仍然ft有较高的潜在感染风险。
【发明内容】
[0003]为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案:
一种制备内源性逆转录病毒多克隆抗体的方法，步骤如下:首先将PCR扩增P15E基因与GEX-4T-1载体混合，其后进行T载体连接测序以及构件GST重组载体；所述重组载体后将其转化BL — 21DE3宿主菌；其后进行IPTG的诱导表达JfP15E进行蛋白纯化；纯品蛋白与佐剂混合；其后对动物进行免疫注射；获取血清；Western-blot印迹法；最后进行Elisa检测。
[0004]本发明中，其中脱色液使用如下比例配制:甲醇:水:冰甲酸为20:15:6。
[0005]本发明中，脱色液中可以加入90ml超纯水。
[0006]本发明的有益效果是，实验简单，费用较低，抗体的制备为将来检测临床器官和人工肝中的PERV的表达及传播具有重要意义。
【具体实施方式】
[0007]—种制备内源性逆转录病毒多克隆抗体的方法，步骤如下:首先将PCR扩增P15E基因与GEX-4T-1载体混合，其后进行T载体连接测序以及构件GST重组载体；所述重组载体后将其转化BL — 21DE3宿主菌；其后进行IPTG的诱导表达；对P15E进行蛋白纯化；纯品蛋白与佐剂混合；其后对动物进行免疫注射；获取血清；Western-blot印迹法；最后进行Elisa检测。
[0008]其中脱色液使用如下比例配制:甲醇:水:冰甲酸为20:15:6。
[0009]本发明中，脱色液中可以加入90ml超纯水。
[0010]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变， 都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种制备内源性逆转录病毒多克隆抗体的方法，其特征在于，步骤如下:首先将PCR扩增P15E基因与GEX-4T-1载体混合，其后进行T载体连接测序以及构件GST重组载体；所述重组载体后将其转化BL — 21DE3宿主菌；其后进行IPTG的诱导表达；对P15E进行蛋白纯化；纯品蛋白与佐剂混合；其后对动物进行免疫注射；获取血清；Western-bl0t印迹法；最后进行Elisa检测。
2.如权利要求1所述的一种制备内源性逆转录病毒多克隆抗体的方法，其特征在于，其中脱色液使用如下比例配制:甲醇冰:冰甲酸为20:15:6。
3.如权利要求1所述的一种制备内源性逆转录病毒多克隆抗体的方法，其特征在于，脱色液中可以加入90ml超纯水。
【文档编号】C07K16/06GK103601804SQ201310522218
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年10月30日 优先权日:2013年10月30日
【发明者】徐丽 申请人:徐丽