一种氢氯噻嗪半抗原和完全抗原及其制备方法
【专利摘要】一种氢氯噻嗪半抗原和完全抗原及其制备方法，属于生物化工【技术领域】。本发明将氢氯噻嗪溶解于甲醇，加入碳酸钾后，与6-溴已酸乙酯反应，萃取分离得氢氯噻嗪半抗原。将氢氯噻嗪半抗原上的羧基与载体蛋白上的氨基进行偶联，得到氢氯噻嗪完全抗原。实验结果表明，用本发明的氢氯噻嗪完全抗原免疫动物得到的抗血清效价可达81000，检测限为0.01ng/mL，半抑制浓度0.1ng/mL。产生的抗体特异性高、灵敏度高。本发明的抗原或抗体具有广阔的应用前景。
【专利说明】-种氨氯唾睫半抗原和完全抗原及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种氨氯喔嗦半抗原和完全抗原及其制备方法，属于生物化工技术领 域。
【背景技术】
[0002] 氨氯喔嗦为利尿药、抗高血压药，其结构如化学式I所示。主要适用于也原性水 肿、肝原性水肿和肾性水肿；如肾病综合征、急性肾小球肾炎、慢性肾功能衰竭W及肾上腺 皮质激素与雌激素过多引起的水肿；高血压；尿崩症。在降压类药物、保健食品中非法添加 氨氯喔嗦，造成化学药品的用法用量无法控制，容易造成药物滥用带来的不良反应，甚至造 成药害，国家明令禁止在中成药和保健食品中添加化学成分。患者在不知情的情况下服用， 也会影响医生正确指导患者用药。
[0003]
【权利要求】
1. 一种氢氯噻嗪半抗原，其特征在于结构简式如下：
2. 用权利要求1所述氢氯噻嗪半抗原制备的完全抗原，其特征在于：将氢氯噻嗪半抗 原化合物与载体蛋白偶联后得到氢氯噻嗪完全抗原； 所述载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、匙孔血蓝蛋白KLH、血蓝蛋白LPH、鸡卵清白蛋白OVA或人血清白蛋白HAS中的一种。
3. 权利要求1所述氢氯噻嗪半抗原的制备方法，其特征在于步骤为：取氢氯噻嗪 0· 24mmol，溶解于20mL二甲基甲酰胺DMF中，加入碳酸钾0· 48mmol，混勻，再加入6-溴已酸 乙酯0. 48mmol，60°C回流反应12h，再加入20mL超纯水和20mL乙酸乙酯，分离有机相；用旋 转蒸发仪除去乙酸乙酯，得氢氯噻嗪半抗原。
4. 权利要求2所述氢氯噻嗪完全抗原的制备方法，其特征在于步骤为： (1) 氢氯噻嗪半抗原的活化：将氢氯噻嗪半抗原用DMF溶解，加入NHS、EDC，其中氢氯噻 嗪半抗原：NHS:EDC的摩尔比为1 : 1.5 : 1.5,在4°C下搅拌反应6h，再在室温下反应 12h； (2) 载体蛋白的溶解：取载体蛋白，其中氢氯噻嗪半抗原：载体蛋白的摩尔比为80 : 1，用0.IMpH9. 6碳酸盐缓冲液溶解，其中溶解后的载体蛋白浓度大于3mg/mL，且碳酸盐缓 冲液与DMF的体积比例为5 : 1 ; (3) 氢氯噻嗪完全抗原的制备：将步骤（1)所得活化的氢氯噻嗪半抗原溶液慢速滴加 到步骤（2)所得载体蛋白溶液中；室温下反应24h，用PBS缓冲液透析2天，期间换水4次， 即得到氢氯噻嗪完全抗原。
5. 权利要求2所述氢氯噻嗪完全抗原的另一种制备方法，其特征在于步骤为： (1) 氢氯噻嗪半抗原的活化：将氢氯噻嗪半抗原用DMF溶解，(TC预冷30min，(TC下加 入三正丁胺和氯甲酸异丁酯，其中氢氯噻嗪半抗原：三正丁胺：氯甲酸异丁酯的摩尔比为 1 : 2 : 2,在(TC搅拌反应Ih; (2) 载体蛋白的溶解：取载体蛋白，其中氢氯噻嗪半抗原：载体蛋白的摩尔比80 : 1， 用0.IMpH7. 4磷酸盐缓冲液溶解，(TC预冷30min，其中溶解后的载体蛋白浓度大于3mg/ mL； (3) 氢氯噻嗪完全抗原的制备：在0°C条件下，将步骤（1)所得活化的氢氯噻嗪半抗原 溶液在〇°C条件下慢速滴加到步骤（2)所得载体蛋白溶液中，(TC条件下反应lh，然后室温 下反应24h;用PBS缓冲液透析2天，期间换水4次，即得到氢氯噻嗪完全抗原。
6. 权利要求2所述氢氯噻嗪完全抗原的应用，其特征在于：将氢氯噻嗪完全抗原免疫 动物得到多克隆抗体和/或单克隆抗体，用于检测氢氯噻嗪。
【文档编号】C07K14/765GK104447619SQ201410573669
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年10月24日 优先权日:2014年10月24日
【发明者】匡华, 彭双, 胥传来, 徐丽广, 马伟, 刘丽强, 宋珊珊, 吴晓玲 申请人:江南大学