萃取结合大孔树脂吸附分离提取萝芙木中利血平的方法
【专利摘要】本发明公开了一种超临界CO2萃取结合大孔树脂吸附分离提取萝芙木中利血平的方法。技术方案如下：首先将萝芙木根皮粉碎，粉末置于超临界萃取釜中，在一定温度和压力下进行超临界提取，乙醇为夹带剂，收集萃取物，用酸性水溶液溶解，上非极性大孔树脂柱，收集含利血平组分的洗脱液，浓缩成固体后，再加丙酮溶解，加入甲醇结晶，最后重结晶得到纯品。该方法工艺过程简单，可操作性强，提取效率高，制备的利血平纯度高，适合工业化生产。
【专利说明】一种超临界CO2萃取结合大孔树脂吸附分离提取萝芙木中利血平的方法
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明属于药用活性成分提取分离【技术领域】，具体地说，涉及萝芙木中利血平的提取分离方法。
【背景技术】
[0003]萝芙木是夹竹桃科萝芙木属植物，生长在热带和亚热带地区，我国广东、广西、云南有生长。萝芙木的干燥根及茎，具有清风热，降肝火，消肿解毒的功效，可用于治疗感冒发热、咽喉肿痛及蛇伤、跌打损伤等症。萝芙木中含有多种生物碱，已分离出的达上百种。其中，利血平是具有明确降压效果的重要原料药。
[0004]目前已公开的从萝芙木中提取分离利血平的方法不多，早期采用苯萃取，目前主要是酸水提取法和酸醇提取法。专利CN 101491560 A公开了一种分离重要总生物碱的方法，未涉及分离纯化利血平的工艺；专利CN 102627641 A公开了用含酸乙醇提取、非极性大孔树脂吸附分离、弱酸性阳离子交换树脂吸附分离、C18反相柱纯化、结晶的工艺来分离纯化利血平，工艺复杂步骤多，产品收率低，吸附剂成本高，不利于工业化生产；专利CN101475570 A公开了一种冰醋酸甲醇溶液渗滤提取、浸膏用氯仿萃取、再结晶的工艺分离纯化利血平的方法，工艺当中过多使用有毒试剂，溶剂易残留，影响产品品质。
[0005]本发明采用绿色溶剂超临界CO2高效、快速提取萝芙木中的利血平，经过大孔树脂吸附富集，结晶、重结晶纯化，最终得到高纯度利血平。
【发明内容】
[0006]本发明要解决的技术问题是提供一种简单、操作性强、适合工业化生产的从萝芙木中提取分离纯化得到高纯度积利血平的方法。
[0007]本发明的技术方案如下:
一种提取萝芙木中利血平的方法，包括如下步骤:
1)将萝芙木根皮粉碎至10目，置于超临界0)2萃取釜中，萃取釜温度35~60°C，萃取釜压力12~40MPa，分离釜I压力8~15 MPa，分离釜I温度45~65°C，分离釜II压力5~8 MPa,分离釜II温度35~40°C，加入95%(v/v)的乙醇为夹带剂，萃取时间为2~4 h，收集萃取釜1、II中萃取物；
2)萃取物用5~20%乙酸(v/v)溶解，过滤后上大孔树脂柱，先水洗至中性，再用10~20%和30~70%乙醇(v/v)洗脱树脂柱，收集富含利血平组分的洗脱液；
3)将洗脱液浓缩至浸膏后，用丙酮溶解，加入甲醇，低温结晶；粗晶再经丙酮-甲醇重结晶，真空干燥后，得到利血平纯品。
[0008]上述制备方法中: 步骤I)中，所述95%乙醇(v/v)的加入量，按每10g生药5~200ml计，优选10~50mlo
[0009]步骤2)中，所述大孔树脂为非极性或弱极性树脂，优选型号HZ818、HP-20、SIP1-101、AB-8、HPD100、D101 或 D130。
[0010]步骤2)中，所述大孔树脂量(L)为萝芙木根粉(kg)干重的5~15%。
[0011]步骤2)中，洗脱水用量为树脂柱体积的3~5倍，10-20%乙醇(v/v)的用量为树脂柱体积的2~5倍，30~70%乙醇(v/v)的用量为树脂柱体积的3~6倍。
[0012]步骤3)中，所述加入甲醇的量为丙酮溶剂的1.5-4倍(v/v)。
[0013]步骤3)中，所述结晶与重结晶的条件为，温度0~5°C，放置10~20h。
[0014]上述方法中所述的浓缩干燥均为采用现有的制备利血平方法中相同的操作。
[0015]本发明以萝芙木为起始原料，采用超临界CO2提取一大孔树脂吸附分离纯化一结晶一重结晶的工艺路线，实现高纯度利血平的制备。本发明具有如下优点:
1、应用超临界CO2提取，避免了大量有毒有机溶剂的使用，同时超临界CO2传质效率高，缩短了生产周期；
2、以大孔树脂为吸附剂，乙醇水溶液梯度淋洗，成本低，可回收利用；
2、通过结晶、重结晶的方式纯化产品，能耗小，成本低；
3、工艺过程简单，可操作性强，适合工业化生产。
【专利附图】
【附图说明】
[0016]图1是超临界CO2萃取结合大孔树脂吸附分离提取萝芙木中利血平的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0017]实施例1:
利血平提取物的制备:将200g萝芙木根皮粉碎，过10目筛后，根粉置于超临界萃取釜中进行超临界提取，萃取釜温度60°C，萃取釜压力35 MPa，分离釜I温度45°C，分离釜I压力8 MPa，分离釜II温度35°C，分离釜II压力5 MPa，加入95%乙醇40ml为夹带剂，萃取时间为2h ；
将从分离釜I和分离釜II得到的萃取物合并后，用10%乙酸(v/v) 50ml溶解，过滤后上HP-20树脂柱，水洗3个床层至中性，再用3个床层体积15%乙醇(v/v)和4个床层体积50%乙醇(v/v)洗脱，收集50%乙醇(v/v)洗脱液，减压浓缩至干；
固体用15 ml丙酮溶解，再加入30 ml甲醇，搅拌I h，4°C放置15 h，抽滤得粗晶，粗晶加8 ml丙酮溶解，再加25 ml甲醇，4°C放置20 h，得重结晶，所得晶体放入45°C烘箱干燥4h得，得利血平0.056g。
[0018]经HPLC分析检测，利血平纯度为98.78%。
[0019]实施例2:
利血平提取物的制备:将200g萝芙木根皮粉碎，过10目筛后，根粉置于超临界萃取釜中进行超临界提取，萃取釜温度60°C，萃取釜压力35 MPa，分离釜I温度45°C，分离釜I压力8 MPa，分离釜II温度35°C，分离釜II压力5 MPa，加入95%乙醇40ml为夹带剂，萃取时间为2h ； 将从分离釜I和分离釜II得到的萃取物合并后，用10%乙酸(v/v)溶解，过滤后上AB-8树脂柱，水洗3个床层至中性，再用3个床层体积20%乙醇(v/v)和5个床层体积60%乙醇(v/v)洗脱，收集60%乙醇(v/v)洗脱液，减压浓缩至干；
固体用12 ml丙酮溶解，再加入35 ml甲醇，搅拌I h，4°C放置15 h，抽滤得粗晶，粗晶加5 ml丙酮溶解，再加20 ml甲醇，4°C放置20 h，得重结晶，所得晶体放入45°C烘箱干燥4h得，得利血平0.048g。
[0020]经HPLC分析检测，利血平纯度为98.35%。
[0021]实施例3:
利血平提取物的制备:将200g萝芙木根皮粉碎，过10目筛后，根粉置于超临界萃取釜中进行超临界提取，萃取釜温度60°C，萃取釜压力30 MPa，分离釜I温度45°C，分离釜I压力10 MPa，分离釜II温度35°C，分离釜II压力5 MPa，加入95%乙醇50ml为夹带剂，萃取时间为2h ；
将从分离釜I和分离釜II得到的萃取物合并后，用10%乙酸(v/v)溶解，过滤后上HP-20树脂柱，水洗3个床层至中性，再用3个床层体积15%乙醇(v/v)和4个床层体积50%乙醇(v/v)洗脱，收集50%乙醇(v/v)洗脱液，减压浓缩至干；
固体用17 ml丙酮溶解，再加入35 ml甲醇，搅拌I h，4°C放置15 h，抽滤得粗晶，粗晶加10 ml丙酮溶解，再加30 ml甲醇，4°C放置20 h，得重结晶，所得晶体放入45°C烘箱干燥4h得，得利血平0.076g。
[0022]经HPLC分析检测，利血平纯度为97.86%。
[0023]实施例4:
利血平提取物的制备:将500g萝芙木根皮粉碎，过10目筛后，根粉置于超临界萃取釜中进行超临界提取，萃取釜温度60°C，萃取釜压力35 MPa，分离釜I温度45°C，分离釜I压力8 MPa，分离釜II温度35°C，分离釜II压力5 MPa，加入95%乙醇10ml为夹带剂，萃取时间为2h ；
将从分离釜I和分离釜II得到的萃取物合并后，用10%乙醇(v/v)溶解，过滤后上HP-20树脂柱，水洗3个床层至中性，再用3个床层体积15%乙醇(v/v)和5个床层体积50%乙醇(v/v)洗脱，收集50%乙醇(v/v)洗脱液，减压浓缩至干；
固体用30 ml丙酮溶解，再加入60ml甲醇，搅拌I h，4°C放置15 h，抽滤得粗晶，粗晶加15 ml丙酮溶解，再加35 ml甲醇，4°C放置20 h，得重结晶，所得晶体放入45°C烘箱干燥4h得，得利血平0.128go
[0024]经HPLC分析检测，利血平纯度为97.65%。
[0025]实施例5:
利血平提取物的制备:将200g萝芙木根皮粉碎，过10目筛后，根粉置于超临界萃取釜中进行超临界提取，萃取釜温度50°C，萃取釜压力30 MPa，分离釜I温度45°C，分离釜I压力10 MPa，分离釜II温度32°C，分离釜II压力5 MPa，加入95%乙醇50ml为夹带剂，萃取时间为2h ；
将从分离釜I和分离釜II得到的萃取物合并后，用10%乙酸(v/v)60ml溶解，过滤后上HZ818树脂柱，水洗3个床层至中性，再用4个床层体积20%乙醇(v/v)和4个床层体积60%乙醇(v/v)洗脱，收集60%乙醇(v/v)洗脱液，减压浓缩至干； 固体用15 ml丙酮溶解，再加入30 ml甲醇，搅拌I h，4°C放置15 h，抽滤得粗晶，粗晶加10 ml丙酮溶解，再加35 ml甲醇，4°C放置20 h，得重结晶，所得晶体放入45°C烘箱干燥4h得，得利血平0.059g。
[0026]经HPLC分析检测，利血平纯度为98.56%。
[0027]实施例6:
利血平提取物的制备:将200g萝芙木根皮粉碎，过10目筛后，根粉置于超临界萃取釜中进行超临界提取，萃取釜温度50°C，萃取釜压力35 MPa，分离釜I温度42°C，分离釜I压力9 MPa，分离釜II温度37°C，分离釜II压力6 MPa，加入95%乙醇70ml为夹带剂，萃取时间为2h ；
将从分离釜I和分离釜II得到的萃取物合并后，用10%乙酸(v/v)溶解，过滤后上HPD100树脂柱，水洗3个床层至中性，再用4个床层体积体积20%乙醇(v/v)和5个柱体积50%乙醇(v/v)洗脱，收集50%乙醇(v/v)洗脱液，减压浓缩至干；
固体用10 ml丙酮溶解，再加入30 ml甲醇，搅拌I h，4°C放置15 h，抽滤得粗晶，粗晶加5 ml丙酮溶解，再加25 ml甲醇，4°C放置20 h，得重结晶，所得晶体放入45°C烘箱干燥4h得，得利血平0.043g。
[0028]经HPLC分析检测，利血平纯度为97.86%。
[0029]实施例7:
利血平提取物的制备:将500g萝芙木根皮粉碎，过10目筛后，根粉置于超临界萃取釜中进行超临界提取，萃取釜温度60°C，萃取釜压力35 MPa，分离釜I温度50°C，分离釜I压力10 MPa，分离釜II温度40°C，分离釜II压力7 MPa，加入95%乙醇150ml为夹带剂，萃取时间为2h ；
将从分离釜I和分离釜II得到的萃取物合并后，用10%乙醇(v/v)溶解，过滤后上DlOl树脂柱，水洗3个床层至中性，再用3个床层体积体积15%乙醇(v/v)和5个柱体积70%乙醇(v/v)洗脱，收集70%乙醇(v/v)洗脱液，减压浓缩至干；
固体用35 ml丙酮溶解，再加入75ml甲醇，搅拌I h，4°C放置15 h，抽滤得粗晶，粗晶加15 ml丙酮溶解，再加40 ml甲醇，4°C放置20 h，得重结晶，所得晶体放入45°C烘箱干燥4h得，得利血平0.139go
[0030]经HPLC分析检测，利血平纯度为97.43%。
【权利要求】
1.一种提取萝芙木中利血平的方法，其特征在于包括如下步骤: (1)将萝芙木根皮粉碎至10目，置于超临界CO2萃取釜中，萃取釜温度35~60°C，萃取釜压力12~40MPa，分离釜I压力8~15 MPa，分离釜I温度45~65°C，分离釜II压力5~8 MPa,分离釜II温度35~40°C，加入95%(v/v)的乙醇为夹带剂，萃取时间为2~4 h，收集萃取釜1、II中萃取物； (2)萃取物用5~20%乙酸(v/v)溶解，过滤后上大孔树脂柱，先水洗至中性，再用10~20%和30~70%乙醇(v/v)洗脱树脂柱，收集富含利血平组分的洗脱液； (3)将洗脱液浓缩至浸膏后，用丙酮溶解，加入甲醇，低温结晶；粗晶再经丙酮-甲醇重结晶，真空干燥后，得到利血平纯品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是:步骤(I)中，所述95%乙醇(v/v)的加入量，按每10g生药5~200ml计。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是:步骤(2)中，所述大孔树脂为非极性或弱极性树脂。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征是:步骤(2)中，所述大孔树脂的型号为HZ818、HP-20、SIP1-101、AB-8、HPD100,DlOl 或 D130。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征是:步骤(2)中，所述大孔树脂量(L)为萝芙木根粉(kg)干重的5~15%。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征是:步骤(2)中，洗脱水用量为树脂柱体积的3~5倍，10~20%乙醇(v/v)的用量为树脂柱体积的2~5倍，30~70%乙醇(v/v)的用量为树脂柱体积的3~6倍。
7.根据权利要求1所述的方法，步骤(3)中，所述加入甲醇的量为丙酮溶剂的1.5~4倍(v/v)。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征是:步骤(3)中，所述结晶与重结晶的条件为，温度 0~5°C，放置 10~20h。
【文档编号】C07D459/00GK104513236SQ201410834453
【公开日】2015年4月15日 申请日期:2014年12月30日 优先权日:2014年12月30日
【发明者】杨丽, 李宇, 段迪, 钟鸣, 傅玉萍, 袁诚, 李金华 申请人:广州白云山汉方现代药业有限公司