专利名称：3－烷氧基吡啶－2－酰胺酯,它们的制备及药用的制作方法
技术领域：
本发明涉及3-烷氧基吡啶-2-酰胺酯，它们的制备及用于抑制胶原蛋白的生物合成和作为药物用于治疗纤维变性疾病。
抑制脯氨酰羟化酶和赖氨酰羟化酶的化合物可以通过影响胶原蛋白特有的羟化反应高度选择性地抑制胶原蛋白的生物合成。在这个生物合成方法中，蛋白键合的脯氨酸或赖氨酸被脯氨酰-或赖氨酰羟化酶羟基化。如果这个反应被抑制剂所抑制，会导致产生功能丧失的，欠羟基化的胶原蛋白分子，只有很少量的这种分子能被细胞释放到细胞外间隙。欠羟基化的胶原蛋白还无法与胶原蛋白的基质整合而且容易发生蛋白降解反应。这些因素会导致细胞外沉积的总的胶原蛋白的数量减少。
因此，脯氨酰羟化酶的抑制剂对于治疗某些疾病是一种比较合适的物质，在这些疾病中沉积的胶原蛋白对临床表现起决定性的作用。这些疾病包括，肺，肝脏和皮肤的纤维化(烧伤，损伤和外科手术后的硬皮病和瘢痕)和动脉粥样硬化。
众所周知，吡啶-2,4-和-2,5-二羧酸可以有效地抑制脯氨酰羟化酶(K.Majamaa等，欧洲生物化学杂志(Eur.J.Biochem.).138(1984)239-245)。然而，在细胞培养时，这些化合物只有在很高浓度的条件下才有抑制活性(Tschank,G.等，生物化学杂志.238(1987)625-633)。
专利EP-A-0 590 520和DE-A-42 38 506和EP-A-0 562512中报道的前药吡啶-2,4(5)-二羧酸酯也已为大家所熟知。
药物化学杂志.1992,35,2652-2658(Cunliffe等)和EP-A-0457 163中报道的N-草酰甘氨酸是脯氨酰-4-羟化酶的抑制剂。
此外，有机化学杂志.31,636-638(1966)中报道了3-羟基吡啶-2-羧酸(甘氨酸乙酯)酰胺。
因此我们的目标是提供特征为在体内和/或体外，尤其是当它们全身和/或局部应用时具有非常高的活性的化合物。
令人惊讶的是，现已发现分子式Ⅰ所示的3-烷氧基吡啶-2-酰胺酯是胶原蛋白生物合成的强抑制剂。本发明中的化合物是从EP-A-0650 960中报道的化合物中挑选出来的。与此欧洲专利申请中提到的化合物相比较，它们的特点是在体内和体外，尤其是在全身和/或局部应用时对纤维变性疾病有非常高的活性。这些疾病包括，例如，肺，肝，肾，心脏，眼和皮肤的纤维化和动脉粥样硬化。
分子式Ⅰ所示的化合物在很多不同种类的细胞中(如正常人皮肤纤维细胞，大鼠肝脏中的初级储脂细胞，大鼠肝脏上皮细胞和颅盖的器官培养)都表现为对胶原蛋白生物合成的强列抑制。
它们尤其适用于作为胶原蛋白生物合成的抑制剂，作为抗纤维化的活性化合物来进行局部应用，以及局部应用于由于结缔组织(胶原蛋白)的增多引起的疾病。因此，分子式Ⅰ所示的化合物适用于，例如，局部用于防止/减少术后人体产生的瘢痕以及局部用于治疗术后的眼部疾病，如青光眼术后的处理和放射或化疗引起的纤维样变性，尤其是应用于肺部。
本发明涉及的化合物是分子式Ⅰ所示的相应羧酸的酯类前药，其中B为羧基。
分子式Ⅰ所示的化合物在活体内(体内实验)和细胞培养(体外实验)中裂解给出B为羧基的分子式Ⅰ所示的化合物或它的盐。
在用分子式Ⅰ所示的化合物给药之后，在体内和体外都可以观察到它们可以抑制胶原蛋白的生物合成，形成了B为羧基的分子式Ⅰ所示的化合物或它的盐。这些化合物抑制脯氨酰-4-羟化酶并因此抑制了胶原蛋白的生物合成。
本发明涉及的化合物的结构如分子式(Ⅰ)所示
其中R1,R2和R3为H,R4为(C1-C6)-烷基，A为-CH2-基团，其中一个氢原子可以被甲基替代，而B为-CO2G，其中G为醇GOH的残基，包括具有生理活性的盐。
优选分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3为H,R4为(C1-C6)-烷基，A为-CH2-基团，其中一个氢原子可以被甲基替代，而B为-CO2G，其中G为支链或非支链的或环状(C1-C20)-烷基，或者为支链或非支链的或环状(C2-C20)-链烯基，及相应的(C2-C20)-炔基，相应的(C4-C20)-烯炔基或视黄基，其中各基团可包含一个或多个多价键，或者为苯烷基，上述基团优选包含一个或多个如下取代基羟基，卤素，氰基，三氟甲基，羧基，(C1-C12)-烷基，(C3-C8)-环烷基，(C5-C8)-环烯基，(C1-C12)-烷氧基，(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷基，(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基，苯基-(C1-C4)-烷氧基，(C1-C8)-羟烷基，(C1-C12)-烷基羰氧基，(C3-C8)-环烷基羰氧基，苯甲酸基，苯基-(C1-C4)-烷基羰氧基，包括具有生理活性的盐。
此外，还优选分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3为H,R4为(C1-C4)-烷基，A为-CH2-基团，其中一个氢原子可以被甲基替代，而B为-CO2G，其中G为支链或非支链的或环状脂肪族(C1-C18)-烷基，(C3-C8)-环烷基-(C1-C8)-烷基，支链或非支链的(C2-C18)-链烯基，例如，牦牛儿基，法呢基或视黄基，或相应的(C2-C18)-炔基，苄基，苯乙基，苯丙基或苯丁基，
上述基团可包括一个如下取代基羟基，(C1-C4)-烷氧基，(C1-C6)-烷基羰氧基，(C3-C8)-环烷基羰氧基，苯甲酸基或苯基-(C1-C4)-烷基羰氧基，包括具有生理活性的盐。
特优选分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3为H,R4为(C1-C4)-烷基，A为-CH2-基团，其中一个氢原子可以被甲基替代，而B为-CO2G，其中G为支链或非支链的或环状脂肪族(C1-C18)-烷基，(C3-C8)-环烷基-(C1-C4)-烷基，支链或非支链的(C2-C18)-链烯基，苄基，苯乙基，苯丙基或苯丁基，包括具有生理活性的盐。
此外，特优选分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3为H,R4为甲基，A为-CH2-基团，其中一个氢原子可以被甲基替代，而B为-CO2G，其中G为支链或非支链的(C1-C18)-烷基或(C2-C8)-链烯基，包括具有生理活性的盐。
此外，特别优选分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3为H,R4为甲基，A为-CH2-基团，而B为-CO2G，其中G为支链或非支链的(C1-C18)-烷基或(C2-C18)-链烯基，包括具有生理活性的盐。
特别地，优选分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3为H,R4为甲基，A为-CH2-基团B为-CO2G，其中G为线性的(C1-C18)-烷基，包括具有生理活性的盐。
最优选分子式Ⅰ所示的化合物，其中G为线性的(C1-C16)-烷基，包括具有生理活性的盐。
本发明还包括分子式Ⅰ所示的化合物的盐。
吡啶环上的N原子可以与酸性试剂成盐。
所用的试剂有，例如，甲苯磺酸，甲磺酸，盐酸，硫酸，磷酸和含有酸性基团的药物。
本发明涉及的分子式Ⅰ所示的化合物和它的生理相容的盐用于抑制胶原蛋白的生物合成，尤其用于不同种类的细胞。
本发明涉及的分子式Ⅰ所示的化合物和它的生理相容的盐用于在体内和体外抑制脯氨酰-4-羟化酶。
此外，本发明涉及的分子式Ⅰ所示的化合物和它的生理相容的盐用于肺，肝，肾，心脏，眼和皮肤的纤维化疾病。化合物也可应用于动脉粥样硬化。在此可使用全身和/或局部用药。
本发明涉及的分子式Ⅰ所示的化合物和它的生理相容的盐特别适用于局部用药，尤其是作为胶原蛋白生物合成的抑制剂，作为抗纤维化的活性化合物来进行应用，以及应用于由于结缔组织(胶原蛋白)的增多引起的疾病。包括用于防止/减少术后人体产生的瘢痕以及用于眼部手术的术后处理，如青光眼术后的处理和放射或化疗引起的纤维变性，尤其是应用于肺部。
最后，本发明涉及分子式Ⅰ所示的化合物的药用。
本发明涉及的分子式Ⅰ所示的化合物特别适用于局部用于皮肤，肺和眼部的纤维样变性，特别用于青光眼的术后处理。
本发明还涉及分子式Ⅰ所示的化合物的制备方法。
分子式Ⅰ所示的化合物，其中A为-CH2-基团，其中一个氢原子可以被甲基替代而B为CO2G，按如下方法制备ⅰ1.)分子式Ⅱ(R5=H)所示的吡啶-2-羧酸与分子式Ⅲ所示的氨基酯或它的盐反应得到分子式Ⅰ所示的酰胺酯；或者ⅰ2.)分子式Ⅱ(R5=C1-C16-烷基)所示的吡啶-2-羧酸酯在氨解条件下反应得到分子式Ⅰ所示的化合物；或者ⅱ)分子式Ⅳ所示的化合物用醇GOH酯化，或者ⅲ)分子式Ⅴ所示的化合物用R4X烷基化，其中X为离去基团，优选卤素，甲磺酰基，苯磺酰基等。
流程
图1
比较适用的形成酰胺的方法(反应ⅰ1)是羰基活化方法和大家熟知的肽化学中缩合反应。
活化羧酸的试剂可选用本领域专业人员熟知的试剂，如亚硫酰氯，草酰氯，三甲基乙酰氯，氯甲酸酯衍生物或N,N’-羰基二咪唑。制成后分子式Ⅱ所示化合物的活化衍生物立即与分子式Ⅲ所示的酰胺衍生物反应。
合适的缩合剂有，例如，N,N’-二环己基碳化二亚胺/N-羟基-1H-苯并三唑和N-乙基吗啉的混合物。
合适的溶剂有，二氯甲烷，四氯化碳，乙酸丁酯，乙酸乙酯，甲苯，四氢呋喃，二甲氧基乙烷，1,4-二氧六环，乙腈，N,N-二甲基甲酰胺，N,N-二甲基乙酰胺，二甲基亚砜，硝基甲烷和/或吡啶。
本发明涉及的分子式Ⅰ所示的化合物具有重要的药理学性质并且特别表现出抗纤维化活性。
可以通过如下动物模型检测抗纤维化活性Unemori,E.N.等，皮肤学研究杂志(J.Invest.Dermatol.),101:280-5,1993中报道的皮下植入的渗透性微泵周围结缔组织囊的形成，Boyle,E.,Mangan,F.R.,Br.J.Ep.Pathnol.61:351-60,1980中报道的皮下植入的“棉球”或聚乙烯海绵球的胶原蛋白含量；以及Ward,H.E.等，研究(Res.),136,15-21,1993,和Santana,A.等，美国呼吸学细胞分子生物学杂志(Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.)13:34-44,1995中报道的放射或化学引起的纤维样变性后肺的胶原蛋白含量。
细胞培养中抑制脯氨酰-4-羟化酶正常人皮肤纤维细胞(NHDF)，大鼠肝脏上皮细胞(文献1)和肝脏储脂细胞(文献2)可作为检测化合物的细胞模型。检测时，在抑制剂存在的条件下培养细胞。同时，将其间新合成的胶原蛋白用4-3H-L-脯氨酸和14C-脯氨酸来代谢标记。被检测的物质对胶原蛋白羟化程度的影响可以按Chojkier等人提出的方法检测(文献3)。对照物质选用2,2’-二吡啶。(1．:Schrode,W.,Mecke,D.,Gebhard,R.1990.在门静脉周肝细胞内通过与肝上皮细胞系联合培养诱导谷氨酰胺合成酶。欧洲细胞生物杂志.53:35-41,2．:Blomhoff,R.,Berg T.1990.分离和培养大鼠肝脏星状细胞.Methods Enzymol.190:59-71和3．:Chojkier,M.Peterkofsky,B.,Bateman,J.1980.一种新的通过测量胶原蛋白酶消化方法中[4-3H]∶[14C]脯氨酸比例的变化来检测脯氨酸羟基化程度的方法。生物化学分析.108:385-393)。
生物化学杂志(1994)300,525-300中介绍的在体外(鸡胚胎颅盖)抑制脯氨酰-4-羟化酶的方法1．代谢标记从15天大小的鸡胚胎上剥下颅盖并在37℃用Hank′s平衡盐溶液最低必要介质伊格尔(HMEM,BioWhittaker,Walkersville,MD,USA)洗3分钟。4个颅盖分别在玻璃器皿中用1.5mlHMEM在37℃孵育2.5小时并加入2mM谷氨酰胺和1μCi[U-14C]脯氨酸和不同浓度的抑制剂。将样品池放入冰中以中止孵育。移出介质后用1ml双蒸水快速洗涤颅盖。然后用3ml0.5M乙酸和18μg苯甲磺酰氟处理并萃取16个小时。萃取液在4℃用0.5M乙酸渗析除去游离的[U-14C]脯氨酸然后等分并冷冻干燥。
2．羟基脯氨酸-分析1份冷干后的样品溶于2ml 6N的盐酸中在105℃水解24小时。蒸除盐酸。残余物再悬浮于300μl双蒸水中，转移至Eppendorf容器中再次干燥。残余的氢氯化物加入到60μl乙醇/水/三乙胺2∶2∶1(v∶v∶v)溶液中并再次干燥进行中和。氨基酸于室温下在乙醇/三乙胺/苯异硫氰酸酯/水7∶1∶1∶1(v∶v∶v∶v)溶液中衍生化20分钟后再次干燥。用高效液相色谱进行分析，样品溶于150μl磷酸盐缓冲液(5mM磷酸氢二钠，pH7.4/乙腈95∶5(v∶v)中并在10000g离心5分钟。取50μl用于分析。高效液相色谱使用碳18反相柱Ultrasphere ODS3μm 4.6nim×7.5cm(Beckman)，在50℃下选用如下分级系统时间缓冲液A缓冲液B0分钟 100％0-9分钟 100-90％ 0-10％9-11分钟90-0％ 10-100％11-12分钟 0％100％12-14分钟 0-100％100％14-19分钟 100％溶液A:70mM乙酸钠pH6.14/0.1％乙腈溶液B乙腈/甲醇/水45∶15∶40(v∶v∶v)3．SDS-聚丙烯酰胺-凝胶电泳从1.中得到的1份冷干的样品溶于10mM三羟甲基氨基甲烷/盐酸，pH8/1mM EDTA/1％SDS和5％巯基乙醇，95℃变性5分钟，用于SDS聚丙烯酰胺-凝胶电泳。线性梯度胶(5-15％)电泳。在甲醇/冰醋酸/水3∶1∶6(v∶v∶v)中固定后干燥，然后在Kodak X-Omat胶片于-70℃曝光。
如下表所示，通过在大鼠肝细胞中进行的抑制脯氨酰-4-羟化酶(胶原蛋白生物合成)的对照实验可以看出本发明涉及的化合物与EP-A-0650 960报道的化合物相比具有显著的优点表1
<p>表2
表3
对照实验表明该选择本发明的本发明涉及的化合物与EP-A-0650 960报道的化合物相比，在相当低的浓度下(≤10μM，依实验模型)都显示出高抑制率(-50％)。
化学式Ⅰ的化合物可用作制药制剂形式的药物，该制剂含有式Ⅰ的化合物及任选的制药相容的载体。化合物可用作治疗剂，例如，以制药制剂的形式，将这些化合物与药用，有机或无机赋形剂如，水，阿拉伯树胶，明胶，乳糖，淀粉，硬脂酸镁，滑石，菜油，聚二醇，凡士林等等，制成可适用于肠胃，透皮或肠外给药，或吸入给药的混合物。
为此，可以口服给药，剂量为0.1至25毫克/公斤/天，优选1至5毫克/公斤/天，或肠外给药，剂量为0.01至5毫克/公斤/天，优选0.01至2.5毫克/公斤/天，特优选0.5至1.0毫克/公斤/天。在病情严重时，可加大剂量。然而，在许多病例中，低剂量已足够了。这些数据以成人近似体重75公斤为基准。
有机化学杂志.36,2002(1971)E.V.Brown,M.B.Shambhu报道了3-甲氧基吡啶-2-羧酸。(参见分子式Ⅱ；R1-R3=H,R4=Me,R5=H)。
此外，斯堪的纳维亚化学学报(Acta Chem.Scand.)23,1791(1969)中报道了3-甲氧基吡啶-2-羧酸甲酯(参见分子式Ⅱ,R5=CH3)。
在下述的实施例中用作起始原料的3-甲氧基吡啶-2-羧酸是由4-氯-3-甲氧基-2-甲基吡啶制得，而4-氯-3-甲氧基-2-甲基吡啶由麦芽酚制得(参见EP-A-0 208 452和EP-A-0 304732)。
在下述的实施例中，本发明涉及的分子式Ⅰ所示的化合物命名为取代的吡啶-2-羧酸(甘氨酰酯)酰胺。
这种命名可以理解为取代的吡啶-2-羧酸N-((烷氧羰基)甲基)酰胺。
按取代的N-(吡啶基-2-羰基)甘氨酸进行分类更为可行。实施例1N-(((1-丁氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺a)3-甲氧基吡啶-2-羧酸盐酸盐a1.)4-氯-3-甲氧基-2-甲基吡啶-1-氧化物11.2克(80.5毫摩尔)3-甲氧基-2-甲基-4(1H)-吡啶酮在100毫升氧氯化磷中加热回流10小时。随后将混合物浓缩，每次取2毫升与30毫升甲苯混合并再次浓缩，残余物溶于150毫升水中，用碳酸钾调pH至11后用二氯甲烷萃取，有机相用水洗，干燥后除去溶剂。得到浅棕色油状物(9克)，在二氯甲烷中用间氯过氧苯甲酸在标准条件下处理，得到8克产物，熔点88-89℃(从石油醚中)。a2.)4-氯-2-羟甲基-3-甲氧基吡啶30克(173毫摩尔)4-氯-3-甲氧基-2-甲基吡啶N-氧化物溶于100毫升冰醋酸中，在搅拌下于80℃逐滴加入到150毫升醋酐中，混合物在110℃搅拌2小时后冷至80℃，逐滴加入200毫升甲醇，混合物加热至沸，15分钟后冷却，减压浓缩，残余物溶于甲醇中注入到300毫升1.5N的氢氧化钠甲醇溶液中，在20℃搅拌30分钟后减压浓缩，残余物溶于水后用二氯甲烷萃取三次，有机相干燥后浓缩，残余物用石油醚结晶。得到23克产品，熔点64至66℃。a3.)4-氯-3-甲氧基吡啶-2-羧酸在20℃将52.2克(0.3摩尔)上述醇加入到24克氢氧化钾溶于900毫升水的溶液中，于50至60℃下将70克(0.44摩尔)高锰酸钾分步地加入到此混合物中，直至颜色褪去。在50℃搅拌1小时后，将混合物热抽滤，滤饼用热水洗涤三次，滤液减压浓缩至300毫升，冷却后用浓盐酸调至pH1。抽滤并干燥得到50克产品，熔点121℃(不分解)。a4.)29克(0.15摩尔)上述4-氯吡啶羧酸在500毫升甲醇/四氢呋喃(1∶1)中在氢化装置内用Pd/C(10％)氢化。吸收3.1升氢气后，抽滤除去催化剂，滤液浓缩后用乙酸乙酯处理结晶状残余物，抽滤后干燥，得29克产品，熔点170℃(分解)。b)3.8克(20毫摩尔)3-甲氧基吡啶-2-羧酸盐酸盐悬浮于500毫升无水二氯甲烷中，于20℃搅拌下加入6.1克(20毫摩尔)甘氨酸1-丁酯甲苯磺酸酯(由甘氨酸，1-丁醇，对甲苯磺酸在分水器中用甲苯分水制得)，然后加入7.5毫升(60毫摩尔)N-乙基吗啉，3克(22.5毫摩尔)1-羟基-1H-苯并三唑和8.5克(20毫摩尔)N-环己基-N’-(2-吗啉乙基)碳化二亚胺甲基对甲苯磺酸酯(CMC)，在20℃搅拌24小时。抽滤除去不溶物，滤液依次用碳酸氢钠水溶液，1N盐酸和水萃取。有机相干燥后减压浓缩，残余的油状物研磨结晶，得到1.76克无色的目的物。熔点60至62℃。实施例2N-(((1-辛氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺2.5克(13毫摩尔)3-甲氧基吡啶-2-羧酸盐酸盐，5.5毫升(45毫摩尔)N-乙基吗啉，2克(15毫摩尔)1-羟基-1H-苯并三唑，4.7克(13毫摩尔)甘氨酸辛酯甲苯磺酸酯(由甘氨酸，1-辛醇，对甲苯磺酸在分水器中用甲苯分水制得)，和6.3克(15毫摩尔)CMC(参看实施例1)在350无水二氯甲烷中搅拌48小时。在按实施例1)中所述的操作处理完毕后，粗产品用硅胶柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷(在洗脱方法中加入达2.5％的甲醇)。得到3.6克无色油状目的物，1H-NMR(CDCl3):δ=4.26(双峰，CH2-甘氨酸)。实施例3N-(((1-十二烷氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺如实施例1中所述的方法，2.8克(15毫摩尔)3-甲氧基吡啶-2-羧酸盐酸盐，在400毫升无水二氯甲烷中于20℃与6.2克(15毫摩尔)甘氨酸1-十二烷基酯甲苯磺酸酯(由38克(0.5摩尔)甘氨酸，93.2克(0.5摩尔)1-十二醇和115克(0.6摩尔)对甲苯磺酸在分水器中用甲苯分水制得；140克产品用乙醚结晶，熔点约106℃,80℃熔结)，8.2毫升(60毫摩尔)N-乙基吗啉，2克(15毫摩尔)1-羟基-1H-苯并三唑和6.3克(15毫摩尔)CMC搅拌24小时。由于发生强烈的乳化，搅拌后，与实施例1)类似，减压蒸除二氯甲烷后残余物溶于乙醚。有机相用硫酸镁干燥后减压浓缩，得到的4.7克的黄色的油用硅胶柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯。得到的4.克浅黄色的油放置两天后用玻璃钉研磨结晶。分离得到3.6克无色目的化合物，熔点47至49℃。实施例4N-(((1-戊氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺实施例5N-(((1-己氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺实施例6N-(((1-庚氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺实施例7N-(((1-壬氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺实施例8N-(((1-癸氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺实施例9N-(((1-十四烷氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺实施例10N-(((1-十八烷氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺实施例11N-(((1-丙氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺实施例12N-(((2-丙氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺实施例13N-(((1-十三烷氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺实施例14N-(((1-十六烷氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺5.7克(30毫摩尔)4-氯-3-甲氧基吡啶-2-羧酸和14.2克(30毫摩尔)甘氨酸十六烷基酯甲苯磺酸酯(熔点约90℃，由甘氨酸，1-十六烷醇，对甲苯磺酸在分水器中用甲苯分水制得)在300毫升二氯甲烷中按照实施例1)中的方法与7.7(60毫摩尔)N-乙基吗啉，4.5克(33毫摩尔)1-羟基-1H-苯并三唑和12.8克(30毫摩尔)N-环己基-N’-(2-吗啉乙基)碳化二亚胺甲基对甲苯磺酸酯(CMC)混合并搅拌24小时。抽滤除去不溶物，滤液用碳酸氢钠水溶液，水和盐酸萃取，有机相浓缩后残余物(14克)溶于500毫升四氢呋喃/甲醇(1∶1)，与Pd/C(10％)混合后在氢化器中进行氢化。
氢化完结，抽滤除去催化剂，滤液浓缩，残余物用硅胶层析纯化，洗脱剂为乙酸乙酯。将适当的组分浓缩，残余物用二异丙醚结晶。得到2.1克无色的目的物，熔点63至65℃。实施例15N-(((乙氧羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺盐酸盐a)N-(((乙氧羰基)甲基)-4-氯-3-甲氧基吡啶-2-酰胺4.7克(25毫摩尔)4-氯-3-甲氧基吡啶-2-羧酸悬浮于200毫升无水二氯甲烷中，于20℃在搅拌下接连与3.5克(25毫摩尔)甘氨酸乙酯盐酸盐，6.4毫升(50毫摩尔)N-乙基吗啉，3.8克(28毫摩尔)1-羟基-(1H)-苯并三唑和5.15克(25毫摩尔)N,N’-二环己基碳化二亚胺混合并在20℃搅拌20小时。抽滤除去不溶物，有机相与饱和碳酸钠水溶液振摇，干燥后减压浓缩，残余物(6克油)用硅胶层析纯化，洗脱剂为乙酸乙酯。得到5.4克油状产品。b)将上述化合物用Pd/C(10％)在氢化器中氢化得到目的物，熔点141至142℃(产生气体，从乙醚中)。实施例16N-(((2-壬氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺外消旋体2.5克(10毫摩尔)N-(羧甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺盐酸盐(熔点157℃，产生气体)悬浮于100毫升无水四氢呋喃中并与1.6毫升(12毫摩尔)三乙胺混合，然后在搅拌下逐滴加入2.4克三甲基乙酰氯溶于少量四氢呋喃的溶液(温度升至35-40℃)。30分钟后，混合物减压浓缩，红色的残余物溶于100毫升无水四氢呋喃中与1.6毫升三乙胺混合，将混合物在20℃加入到2-壬醇钠的2-壬醇溶液(由30毫升2-壬醇和0.8克(20毫摩尔)氢化钠制得)。1小时后，混合物减压浓缩，残余物与二氯甲烷混合，用2N氯化铵水溶液萃取，有机相干燥后减压浓缩，残余物(9克)用硅胶层析纯化，洗脱剂为乙酸乙酯。得到1.1克无色油状目的化合物，1H-NMR(DMSO):δ=3.95(双峰，CH2-甘氨酸)。实施例17N-(((4-庚氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺
2.5克(10毫摩升)N-(羧甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺盐酸盐按实施例16的方法处理后在20℃加入到140毫升4-庚醇钠的4-庚醇溶液(由140毫升4-庚醇和0.6克(25毫摩尔)钠在超声仪中制得)。30分钟后，混合物在70至80℃加热1小时，冷却后减压浓缩，残余物溶于水，用二氯甲烷萃取，有机相减压浓缩并用油泵干燥。油状粗产品在约15小时后结晶，熔点75-78℃。实施例18N-(((3-戊氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺实施例19N-(((1-(顺式-9-十八烯基)氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺实施例20N-(((1-(反式-3-己烯基)氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺实施例21N-(((1-(3-甲丁基)氧基)羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺实施例22N-((甲氧羰基)甲基)-3-甲氧基吡啶-2-酰胺
权利要求
1．分子式Ⅰ所示的化合物
其中R1,R2和R3为H，R4为(C1-C6)-烷基，A为-CH2-基团，其中一个氢原子可以被甲基替代，而B为-CO2G，其中G为醇GOH的基团，包括具有生理活性的盐。
2．如权利要求1中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3为H,R4为(C1-C6)-烷基，A为-CH2-基团，其中一个氢原子可以被甲基替代，而B为-CO2G，其中G为支链或非支链的或环状(C1-C20)-烷基，或者为支链或非支链的或环状(C2-C20)-链烯基，及相应的(C2-C20)-炔基，相应的(C4-C20)-烯炔基或视黄基，其中基团可包含一个或多个多价键，或者为苯烷基，上述基团优选包含一个或多个如下取代基羟基，卤素，氰基，三氟甲基，羧基，(C1-C12)-烷基，(C3-C8)-环烷基，(C5-C8)-环烯基，(C1-C12)-烷氧基，(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷基，(C1-C12)-烷氧基-(C1-C12)-烷氧基，苯基-(C1-C4)-烷氧基，(C1-C8)-羟烷基，(C1-C12)-烷基羰氧基，(C3-C8)-环烷基羰氧基，苯甲酸基，苯基-(C1-C4)-烷基羰氧基，包括具有生理活性的盐。
3．如权利要求1或2中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3为H,R4为(C1-C4)-烷基，A为-CH2-基团，其中一个氢原子可以被甲基替代，而B为-CO2G，其中G为支链或非支链的或环状脂肪族(C1-C18)-烷基，(C3-C8)-环烷基-(C1-C8)-烷基，支链或非支链的(C2-C18)-链烯基，例如，牦牛儿基，法呢基或视黄基，或相应的(C2-C18)-炔基，苄基，苯乙基，苯丙基或苯丁基，上述基团可包括如下取代基羟基，(C1-C4)-烷氧基，(C1-C6)-烷基羰氧基，(C3-C8)-环烷基羰氧基，苯甲酸基或苯基-(C1-C4)-烷基羰氧基，包括具有生理活性的盐。
4．如权利要求1至3中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3为H,R4为(C1-C4)-烷基，A为-CH2-基团，其中一个氢原子可以被甲基替代，而B为-CO2G，其中G为支链或非支链的或环状脂肪族(C1-C18)-烷基，(C3-C8)-环烷基-(C1-C4)-烷基，支链或非支链的(C2-C18)-链烯基，苄基，苯乙基，苯丙基或苯丁基，包括具有生理活性的盐。
5．如权利要求1至4中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3为H,R4为甲基，A为-CH2-基团，其中一个氢原子可以被甲基替代，而B为-CO2G，其中G为支链或非支链的(C1-C18)-烷基或(C2-C8)-链烯基，包括具有生理活性的盐。
6．如权利要求1至5中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3为H,R4为甲基，A为-CH2-基团，而B为-CO2G，其中G为支链或非支链的(C1-C18)-烷基或(C2-C18)-链烯基，包括具有生理活性的盐。
7．如权利要求1至6中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，其中R1,R2和R3为H,R4为甲基，A为-CH2-基团B为-CO2G，其中G为线性的(C1-C18)-烷基，包括具有生理活性的盐。
8．一种用于制备如权利要求1至7中所述的分子式Ⅰ所示的化合物的方法，其中A为-CH2-基团，其中一个氢原子可以被甲基取代，而B为CO2G，此方法包括ⅰ1.)分子式Ⅱ(R5=H)所示的吡啶-2-羧酸与分子式Ⅲ所示的氨基酯或它的盐反应得到分子式Ⅰ所示的酰胺酯；或者ⅰ2.)分子式Ⅱ(R5=(C1-C16-烷基)所示的吡啶-2-羧酸酯在氨解条件下反应得到分子式Ⅰ所示的化合物；或者
ⅱ)分子式Ⅳ所示的化合物用醇GOH酯化，或者
ⅲ)分子式Ⅴ所示的化合物用R4X烷基化，其中X为离去基团，优选卤素，甲磺酸基，苯磺酰基等
9．如权利要求1至7中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，用于在体内抑制脯氨酰-4-羟化酶。
10．如权利要求1至7中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，用于抑制胶原蛋白的生物合成。
11．如权利要求1至7中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，用于防止/减少在人体器官疾病(纤维变性疾病)中结缔组织(胶原蛋白)的沉积。
12．如权利要求1至7中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，用于纤维变性疾病。
13．如权利要求12中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，用于肺部，肝脏，肾，心脏，眼部和皮肤的纤维变性疾病和动脉粥样硬化。
14．如权利要求12和13中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，用于局部和/或全身。
15．如权利要求14中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，局部用于防止/减少术后人体产生的瘢痕。
16．如权利要求9至14中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，局部用于皮肤结缔组织增生(纤维样变性)的病例中。
17．如权利要求9至14中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，局部用于(吸入)肺部结缔组织增生(纤维样变性)的病例中。
18．如权利要求9至14中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，局部用于眼部结缔组织增生(纤维样变性)的病例中。
19．如权利要求9至14中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，局部用于青光眼术后的眼部处理。
20．如权利要求9至14中所述的分子式Ⅰ所示的化合物，局部用于放射或化疗引起的纤维样变性，尤其是应用于肺部纤维样变性。
21．一种包含一种或多种如权利要求1至8中所述的分子式Ⅰ所示的化合物的药物。
22．化合物在抑制脯氨酰-4-羟化酶和纤维变性疾病中的应用。
全文摘要
如分子式(Ⅰ)所示的3－烷氧基吡啶－2－酰胺酯,其中R
文档编号C07D213/00GK1216981SQ96180274
公开日1999年5月19日 申请日期1996年4月30日 优先权日1996年4月30日
发明者K·维德曼, K－H·巴林哈斯, G·特斯查克, M·比克尔 申请人:赫彻斯特股份公司