通过基于链侵入的扩增的核酸检测的制作方法

文档序号:11141494阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种在至少一种能够与单链DNA结合的蛋白的存在下检测样品中靶核酸序列的方法,包括使所述样品与至少一种包含荧光团、猝灭剂和与所述靶核酸序列互补的区域的寡核苷酸探针接触,其中所述寡核苷酸探针的序列包含至少20%的RNA核苷酸、经修饰的核苷酸和/或PNA核苷酸。

2.权利要求1的方法,其包括扩增所述靶核酸序列,任选地在促进所述靶核酸序列扩增的等温条件下。

3.权利要求1或2的方法,其包括使所述样品与至少一种上游引物和至少一种下游引物接触,所述上游引物和下游引物均包含与所述靶核酸序列互补的区域。

4.前述权利要求中任一项的方法,其包括使所述样品与链侵入寡核苷酸接触,所述链侵入寡核苷酸包含与所述靶核酸序列互补的区域。

5.权利要求3或4的方法,其中所述寡核苷酸探针能够引发所述靶核酸序列的扩增并且作为所述至少一种上游引物或下游引物而发挥作用。

6.前述权利要求中任一项的方法,其中所述能够结合单链DNA的蛋白是重组酶或重组酶辅助蛋白或辅因子蛋白。

7.权利要求6的方法,其中所述重组酶选自UvsX或RecA或所述重组酶辅助蛋白选自UvsY或gp32。

8.前述权利要求中任一项的方法,其中所述寡核苷酸探针中存在的经修饰的RNA核苷酸包括至少一种2’-氟核糖核苷酸、2’-O-甲基核糖核苷酸或LNA核糖核苷酸。

9.前述权利要求中任一项的方法,其包括使所述样品与RNase H接触。

10.前述权利要求中任一项的方法,其中所述寡核苷酸探针包含SEQ ID NO:24、25或30或其任一种的变体的序列。

11.一种试剂盒,其包括寡核苷酸探针,所述寡核苷酸探针包含荧光剂、猝灭剂和与靶核酸序列互补的区域,其中所述寡核苷酸探针的序列包含至少20%的RNA核苷酸、经修饰的RNA核苷酸和/或PNA核苷酸,所述试剂盒还包括:

(i)包含与所述靶核酸序列互补的区域的链侵入寡核苷酸;和/或

(ii)至少一种能够与单链DNA结合的蛋白。

12.权利要求11的试剂盒,其中(i)所述试剂盒还包括上游引物和/或下游引物,所述上游引物和/或下游引物包含与所述靶核酸序列互补的区域;或(ii)所述寡核苷酸探针能够引发所述靶核酸序列的扩增并且作为所述上游引物或所述下游引物而发挥作用。

13.一种在受试者中诊断疾病的方法,包括在来自所述受试者的样品中实施如权利要求1至12中任一项中所定义的方法以检测与所述疾病相关的靶核酸序列。

14.一种寡核苷酸探针,其长度为8至25个核苷酸并包含荧光团、猝灭剂和与靶核酸序列互补的区域,其中所述寡核苷酸探针的序列包含至少20%的RNA核苷酸、经修饰的RNA核苷酸和/或PNA核苷酸。

15.权利要求14的寡核苷酸探针,其中(i)所述探针包含经修饰的RNA核苷酸,其包括至少一种2’-氟核糖核苷酸、2’-O-甲基核糖核苷酸或LNA核糖核苷酸;或(ii)所述探针的序列由RNA核苷酸、经修饰的RNA核苷酸和/或PNA核苷酸组成。

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