木糖甙木糖醇寡聚物的生产方法与流程

文档序号:12285369阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种生产木糖甙-木糖醇寡聚物(xylosyl-xylitol oligomer)的方法,所述方法包括:

a)提供宿主细胞,其包含:

-一种重组的木寡糖转运蛋白多肽,其中所述木寡糖转运蛋白多肽将木寡糖转运到宿主细胞中,

-一种包含木寡糖还原酶活性的重组木糖还原酶多肽;

b)在含有木寡糖的培养基中培养所述宿主细胞,所述的宿主细胞能利用木寡糖生产木糖甙-木糖醇寡聚物。

2.权利要求1的方法,其中所述宿主细胞是真菌宿主细胞。

3.权利要求2的方法,其中所述宿主细胞是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中所述重组木寡糖转运蛋白多肽包含与来自粗糙脉孢霉(Neurospora crassa)的CDT-2具有至少80%氨基酸一致性的氨基酸序列。

5.权利要求1-4中任一项的方法,其中所述重组木糖还原酶多肽包含与来自树干毕赤酵母(Scheffersomyces stipitis)的XYL1具有至少80%氨基酸一致性的氨基酸序列。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法,其中所述的一种或多种的木寡糖是木二糖或木三糖。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法,其中至少一种木糖甙-木糖醇寡聚物是木糖甙-木糖醇或木二糖甙-木糖醇。

8.权利要求1-7中任一项的方法,其中与相应的对照细胞相比,在宿主细胞中一种或多种β-木糖苷酶多肽的木糖甙-木糖醇水解酶活性降低。

9.根据权利要求8所述的方法,其中与相应的对照细胞相比,所述一种或多种β-木糖苷酶多肽的活性降低是由于所述一种或多种多肽的丰度降低。

10.权利要求9的方法,其中所述一种或多种β-木糖苷酶多肽的丰度由于所述一种或多种多肽的表达降低而降低。

11.权利要求10的方法,其中所述一种或多种β-木糖苷酶多肽的表达由于一种突变而降低。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法,其中与相应的对照细胞相比,所述宿主细胞中一种或多种木糖醇脱氢酶多肽的活性降低。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法,在b)之后还包括从所述培养基中初步纯化木糖甙-木糖醇寡聚物的步骤。

14.一种组合物,其包含根据权利要求13所述的方法纯化的木糖甙-木糖醇寡聚物。

15.一种生产木糖甙-木糖醇寡聚物的方法,所述方法包括:

a)提供宿主细胞,其包含:

-一种木寡糖转运蛋白多肽,其中所述木寡糖转运蛋白多肽将木寡糖转运到宿主细胞中,

-一种包含木寡糖还原酶活性的木糖还原酶多肽;

其中与相应的对照细胞相比,在宿主细胞中一种或多种β-木糖苷酶多肽的木糖甙-木糖醇水解酶活性降低。

b)在含有木寡糖的培养基中培养所述宿主细胞,所述的宿主细胞能利用木寡糖生产木糖甙-木糖醇寡聚物。

16.权利要求15的方法,其中所述宿主细胞是真菌宿主细胞。

17.权利要求16的方法,其中所述宿主细胞是粗糙脉孢霉(Neurospora crassa)。

18.根据权利要求15-17中任一项所述的方法,其中与相应的对照细胞相比,所述一种或多种β-木糖苷酶多肽的活性由于所述一种或多种多肽的丰度降低而降低。

19.权利要求18的方法,其中所述一种或多种β-木糖苷酶多肽的丰度由于所述一种或多种多肽的表达降低而降低。

20.权利要求19的方法,其中所述一种或多种β-木糖苷酶多肽的表达由于一种突变而降低。

21.根据权利要求15-20中任一项所述的方法,其中与相应的对照细胞相比,所述宿主细胞中一种或多种木糖醇脱氢酶多肽的活性降低。

22.根据权利要求15-21中任一项所述的方法,其中所述木寡糖中的一种或多种是木二糖或木三糖。

23.根据权利要求15-22中任一项所述的方法,其中至少一种木糖甙-木糖醇寡聚物是木糖甙-木糖醇或木二糖甙-木糖醇。

24.根据权利要求15-23中任一项所述的方法,在b)之后还包括从所述培养基初步纯化木糖甙-木糖醇寡聚物的步骤。

25.一种组合物,其包含根据权利要求24所述的方法纯化的木糖甙-木糖醇寡聚物。

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