本发明涉及一种用于生产果蔬酵素的微生态制剂的制备方法，属于果蔬酵素制备技术领域。
背景技术：
酵素（enzyme），是“酶”的旧译，是一种由氨基酸组成的具有特殊生物活性的生物大分子物质，它存在于所有活的动植物体内，是维持机体正常功能，消化食物，修复组织等生命活动的一种必需物质，几乎参与所有的生命活动：思考问题，运动，睡眠，呼吸，愤怒，哭泣或者分泌荷尔蒙等都是以酵素为中心的活动结果。酵素催化剂样的催化作用催动着机体的生化反应，催动着生命现象的进行。若没有酵素，生化反应将无法进行，五大营养素（碳水化合物、类脂质、蛋白质、维生素、矿物质）都将变的对机体毫无用处，生命现象将会停止。因此，酵素对生命的重要性不言而喻，甚至很多人将它称为“活着的物质”，“掌握所有生命活动的物质”。在生物化学上，酵素分为酸化还原酵素、转移酵素、加水分解酵素、脱离酵素、异性化酵素和合成酵素等六大类。酵素具有氧化作用、分解作用、新陈代谢作用、热能作用、净化血液作用和抗菌防御作用。果蔬酵素是植物综合酵素的一种，是酵素制品中通过水果蔬菜等植物原材料发酵获取的酵素制品。酵素，又称植物综合活性酶。酵素就是“酶”的俗称；在日本和台湾地区叫酵素，在中国叫酶。
现在市面上的酵素产品或家庭自制酵素在原料处理时大多没有经过灭菌，原料中即含有益菌也含有害菌，利用原料本身带的微生物进行密闭发酵，会导致酵素产品质量不稳定，且含有乙醇及其它杂醇，严重时，自然发酵过程中产生的甲醇等可能还会导致人体中毒。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题：针对现在市面上的酵素产品在原料处理时大多没有经过灭菌，原料中即含有益菌也含有害菌，利用原料本身带的微生物进行密闭发酵，会导致酵素产品质量不稳定的问题，本发明首先将酵母浸膏、蛋白胨等物质进行混合后，加入猴头菇、新鲜葡萄皮，对其进行发酵，并取离心后的上清液，得到混合菌液，将其接种至自制的筛选培养基中，进行培养，收集菌丝，置于无菌水中，得到菌液，接着将新鲜竹筒进行处理后，浸于葡萄糖和氯化钠混合的浸渍液中，取出风干后，作为载体吸附菌液中的有益菌种，将其进行冷冻粉碎，即可得到用于生产果蔬酵素的微生态制剂，本发明制备的生产果蔬酵素的微生态制剂应用于果蔬酵素原料的发酵过程中，可除去原料本身带有的有害菌，提高果蔬酵素的质量。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
（1）按重量份数计，取42～46份酵母浸膏、32～34份蛋白胨、16～17份蔗糖及3～6份血粉，搅拌均匀，得发酵营养物，将发酵营养物与其质量7.2～8.4％猴头菇、其质量8.2～9.6％新鲜葡萄皮，搅拌均匀，得混合物，并将其加入发酵罐中，加入量为发酵罐容积的48～52％，设定温度为24～32℃，以130rpm搅拌发酵2～3天；
（2）在上述发酵结束后，将发酵罐中的发酵混合物放入离心机中，以5000r/min离心14～16min，收集上清液，得混合菌液，按重量份数计，取42～44份蔗糖、32～36份蛋白胨、26～28份牛肉膏、7～9份谷氨酸、1～2份链霉素、5～8乙酸钠及2～4份柠檬酸铵，搅拌均匀，并杀菌消毒，得筛选培养基，按接种量14～16％，将混合菌液接种至筛选培养基；
（3）将上述接种后的筛选培养基移至恒温摇床培养箱中，设定温度为26～32℃，以130rpm振荡培养23～26h，再放入微波炉中，在500W下微波处理14～16min，随后收集筛选培养基表面的菌丝，放入其质量120～160倍的无菌水中，静置18～22min得菌液，备用；
（4）取新鲜竹筒使用水将其表面冲洗干净，使用氮气对竹筒进行充压，在竹筒表面出现裂纹后，保持压力15～17min，得预处理竹筒，按固液比1:4，取葡萄糖和质量分数为0.6％氯化钠溶液，混合均匀，得浸渍液，将预处理竹筒浸泡于浸渍液中，静置50～60min；
（5）在上述静置结束后，将浸泡后的预处理竹筒放入风干机中风干，随后将步骤（3）备用菌液倒入风干后的预处理竹筒内填充其内部容积，随后静置4～6h，将预处理竹筒内的混合物倒出，再在4～5℃下冷冻处理40～50min后进行粉碎，过100目筛，收集过筛颗粒，即可得到用于生产果蔬酵素的微生态制剂。
本发明的应用方法：首先选取1～2个西红柿，1～3个苹果和50～60g枸杞，将其用清水冲洗干净后，沥干，并置于粉碎机中粉碎成浆料，将粉碎的浆料置于紫外灯下进行灭菌20～30min后，置于发酵罐中，并向发酵罐中加入灭菌浆料质量25～35％的上述制备的用于生产果蔬酵素的微生态制剂，搅拌均匀后，对其进行密封发酵6～7天，并控制温度为27～32℃，待发酵完成后，取上清液，即可得到果蔬酵素，经检测，本发明制备的果蔬酵素中不含有有害菌，且制备的酵素质量稳定，益生菌活菌总数到2.2×108CFU/mL以上，蛋白酶活为49.35U/mL以上，脂肪酶活为23.8U/mL以上，对羟自由基清除率达到75％以上，DPPH·自由基清除率达到98.2％以上。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）利用本发明制备的用于生产果蔬酵素的微生态制剂制备出的果蔬酵素中不含有害菌，使得其在发酵时产品质量稳定，益生菌活菌总数到2.2×108CFU/mL以上；
（2）本发明制备的用于生产果蔬酵素的微生态制剂在自然发酵过程中不会产生甲醇等会导致人体中毒的物质，满足国家食品卫生安全的要求；
（3）本发明制备步骤简单，所需成本低。
具体实施方式
首先按重量份数计，取42～46份酵母浸膏、32～34份蛋白胨、16～17份蔗糖及3～6份血粉，搅拌均匀，得发酵营养物，将发酵营养物与其质量7.2～8.4％猴头菇、其质量8.2～9.6％新鲜葡萄皮，搅拌均匀，得混合物，并将其加入发酵罐中，加入量为发酵罐容积的48～52％，设定温度为24～32℃，以130rpm搅拌发酵2～3天；在上述发酵结束后，将发酵罐中的发酵混合物放入离心机中，以5000r/min离心14～16min，收集上清液，得混合菌液，按重量份数计，取42～44份蔗糖、32～36份蛋白胨、26～28份牛肉膏、7～9份谷氨酸、1～2份链霉素、5～8乙酸钠及2～4份柠檬酸铵，搅拌均匀，并杀菌消毒，得筛选培养基，按接种量14～16％，将混合菌液接种至筛选培养基；再将上述接种后的筛选培养基移至恒温摇床培养箱中，设定温度为26～32℃，以130rpm振荡培养23～26h，再放入微波炉中，在500W下微波处理14～16min，随后收集筛选培养基表面的菌丝，放入其质量120～160倍的无菌水中，静置18～22min得菌液，备用；接着取新鲜竹筒使用水将其表面冲洗干净，使用氮气对竹筒进行充压，在竹筒表面出现裂纹后，保持压力15～17min，得预处理竹筒，按固液比1:4，取葡萄糖和质量分数为0.6％氯化钠溶液，混合均匀，得浸渍液，将预处理竹筒浸泡于浸渍液中，静置50～60min；在上述静置结束后，将浸泡后的预处理竹筒放入风干机中风干，随后将备用菌液倒入风干后的预处理竹筒内填充其内部容积，随后静置4～6h，将预处理竹筒内的混合物倒出，再在4～5℃下冷冻处理40～50min后进行粉碎，过100目筛，收集过筛颗粒，即可得到用于生产果蔬酵素的微生态制剂。
实例1
首先按重量份数计，取44份酵母浸膏、33份蛋白胨、16份蔗糖及3份血粉，搅拌均匀，得发酵营养物，将发酵营养物与其质量7.5％猴头菇、其质量8.3％新鲜葡萄皮，搅拌均匀，得混合物，并将其加入发酵罐中，加入量为发酵罐容积的50％，设定温度为30℃，以130rpm搅拌发酵2天；在上述发酵结束后，将发酵罐中的发酵混合物放入离心机中，以5000r/min离心15min，收集上清液，得混合菌液，按重量份数计，取43份蔗糖、33份蛋白胨、27份牛肉膏、8份谷氨酸、1份链霉素、7乙酸钠及3份柠檬酸铵，搅拌均匀，并杀菌消毒，得筛选培养基，按接种量15％，将混合菌液接种至筛选培养基；再将上述接种后的筛选培养基移至恒温摇床培养箱中，设定温度为30℃，以130rpm振荡培养24h，再放入微波炉中，在500W下微波处理15min，随后收集筛选培养基表面的菌丝，放入其质量140倍的无菌水中，静置20min得菌液，备用；接着取新鲜竹筒使用水将其表面冲洗干净，使用氮气对竹筒进行充压，在竹筒表面出现裂纹后，保持压力16min，得预处理竹筒，按固液比1:4，取葡萄糖和质量分数为0.6％氯化钠溶液，混合均匀，得浸渍液，将预处理竹筒浸泡于浸渍液中，静置55min；在上述静置结束后，将浸泡后的预处理竹筒放入风干机中风干，随后将备用菌液倒入风干后的预处理竹筒内填充其内部容积，随后静置5h，将预处理竹筒内的混合物倒出，再在5℃下冷冻处理45min后进行粉碎，过100目筛，收集过筛颗粒，即可得到用于生产果蔬酵素的微生态制剂。
首先选取2个西红柿，3个苹果和60g枸杞，将其用清水冲洗干净后，沥干，并置于粉碎机中粉碎成浆料，将粉碎的浆料置于紫外灯下进行灭菌30min后，置于发酵罐中，并向发酵罐中加入灭菌浆料质量35％的上述制备的用于生产果蔬酵素的微生态制剂，搅拌均匀后，对其进行密封发酵7天，并控制温度为32℃，待发酵完成后，取上清液，即可得到果蔬酵素，经检测，本发明制备的果蔬酵素中不含有有害菌，且制备的酵素质量稳定，益生菌活菌总数到2.3×108CFU/mL，蛋白酶活为49.45U/mL，脂肪酶活为24.8U/mL，对羟自由基清除率达到75.6％，DPPH·自由基清除率达到98.5％。
实例2
首先按重量份数计，取46份酵母浸膏、34份蛋白胨、17份蔗糖及6份血粉，搅拌均匀，得发酵营养物，将发酵营养物与其质量8.4％猴头菇、其质量9.6％新鲜葡萄皮，搅拌均匀，得混合物，并将其加入发酵罐中，加入量为发酵罐容积的52％，设定温度为32℃，以130rpm搅拌发酵3天；在上述发酵结束后，将发酵罐中的发酵混合物放入离心机中，以5000r/min离心16min，收集上清液，得混合菌液，按重量份数计，取44份蔗糖、36份蛋白胨、28份牛肉膏、9份谷氨酸、2份链霉素、8乙酸钠及4份柠檬酸铵，搅拌均匀，并杀菌消毒，得筛选培养基，按接种量16％，将混合菌液接种至筛选培养基；再将上述接种后的筛选培养基移至恒温摇床培养箱中，设定温度为32℃，以130rpm振荡培养26h，再放入微波炉中，在500W下微波处理16min，随后收集筛选培养基表面的菌丝，放入其质量160倍的无菌水中，静置22min得菌液，备用；接着取新鲜竹筒使用水将其表面冲洗干净，使用氮气对竹筒进行充压，在竹筒表面出现裂纹后，保持压力17min，得预处理竹筒，按固液比1:4，取葡萄糖和质量分数为0.6％氯化钠溶液，混合均匀，得浸渍液，将预处理竹筒浸泡于浸渍液中，静置60min；在上述静置结束后，将浸泡后的预处理竹筒放入风干机中风干，随后将备用菌液倒入风干后的预处理竹筒内填充其内部容积，随后静置6h，将预处理竹筒内的混合物倒出，再在5℃下冷冻处理50min后进行粉碎，过100目筛，收集过筛颗粒，即可得到用于生产果蔬酵素的微生态制剂。
首先选取1个西红柿，1个苹果和50g枸杞，将其用清水冲洗干净后，沥干，并置于粉碎机中粉碎成浆料，将粉碎的浆料置于紫外灯下进行灭菌20min后，置于发酵罐中，并向发酵罐中加入灭菌浆料质量25％的上述制备的用于生产果蔬酵素的微生态制剂，搅拌均匀后，对其进行密封发酵6天，并控制温度为27℃，待发酵完成后，取上清液，即可得到果蔬酵素，经检测，本发明制备的果蔬酵素中不含有有害菌，且制备的酵素质量稳定，益生菌活菌总数到2.4×108CFU/mL，蛋白酶活为49.45U/mL以上，脂肪酶活为23.9U/mL，对羟自由基清除率达到75.8％，DPPH·自由基清除率达到98.4％。
实例3
首先按重量份数计，取42份酵母浸膏、32份蛋白胨、16份蔗糖及3份血粉，搅拌均匀，得发酵营养物，将发酵营养物与其质量7.2％猴头菇、其质量8.2％新鲜葡萄皮，搅拌均匀，得混合物，并将其加入发酵罐中，加入量为发酵罐容积的48％，设定温度为24℃，以130rpm搅拌发酵2天；在上述发酵结束后，将发酵罐中的发酵混合物放入离心机中，以5000r/min离心14min，收集上清液，得混合菌液，按重量份数计，取42份蔗糖、32份蛋白胨、26份牛肉膏、7份谷氨酸、1份链霉素、5乙酸钠及2份柠檬酸铵，搅拌均匀，并杀菌消毒，得筛选培养基，按接种量14％，将混合菌液接种至筛选培养基；再将上述接种后的筛选培养基移至恒温摇床培养箱中，设定温度为26℃，以130rpm振荡培养23h，再放入微波炉中，在500W下微波处理14min，随后收集筛选培养基表面的菌丝，放入其质量120倍的无菌水中，静置18min得菌液，备用；接着取新鲜竹筒使用水将其表面冲洗干净，使用氮气对竹筒进行充压，在竹筒表面出现裂纹后，保持压力15min，得预处理竹筒，按固液比1:4，取葡萄糖和质量分数为0.6％氯化钠溶液，混合均匀，得浸渍液，将预处理竹筒浸泡于浸渍液中，静置50min；在上述静置结束后，将浸泡后的预处理竹筒放入风干机中风干，随后将备用菌液倒入风干后的预处理竹筒内填充其内部容积，随后静置4h，将预处理竹筒内的混合物倒出，再在4℃下冷冻处理40min后进行粉碎，过100目筛，收集过筛颗粒，即可得到用于生产果蔬酵素的微生态制剂。
首先选取1个西红柿，3个苹果和55g枸杞，将其用清水冲洗干净后，沥干，并置于粉碎机中粉碎成浆料，将粉碎的浆料置于紫外灯下进行灭菌25min后，置于发酵罐中，并向发酵罐中加入灭菌浆料质量30％的上述制备的用于生产果蔬酵素的微生态制剂，搅拌均匀后，对其进行密封发酵6天，并控制温度为30℃，待发酵完成后，取上清液，即可得到果蔬酵素，经检测，本发明制备的果蔬酵素中不含有有害菌，且制备的酵素质量稳定，益生菌活菌总数到2.4×108CFU/mL，蛋白酶活为49.52U/mL，脂肪酶活为23.9U/mL，对羟自由基清除率达到75.9％，DPPH·自由基清除率达到98.5％。