用于捕获循环肿瘤细胞的微流控芯片及其捕获和鉴定方法与流程

文档序号:11936407阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于捕获循环肿瘤细胞的微流控芯片,其特征在于,包括样品细胞溶液进口,与样品细胞溶液进口相连通、将样品细胞溶液进行逐级分流的分流结构,与分流结构的出口相连通、将样品细胞溶液中的细胞进行聚焦的细胞聚焦结构,与细胞聚焦结构的出口相连通、将样品细胞溶液中的循环肿瘤细胞进行捕获的细胞栅栏结构,以及与细胞栅栏结构的出口相连通的废液出口。

2.如权利要求1所述的微流控芯片,其特征在于,所述细胞栅栏结构的出口和废液出口之间通过呈树杈状的汇流结构相连通,汇流结构将细胞栅栏结构流出的样品细胞废液逐级汇集至废液出口中。

3.如权利要求1所述的微流控芯片,其特征在于,所述细胞栅栏结构由正六棱柱或正三棱柱的微柱排列而成。

4.如权利要求1或2或3所述的微流控芯片,其特征在于,所述细胞栅栏结构包括内圈细胞栅栏结构和外圈细胞栅栏结构;所述外圈细胞栅栏结构包括与细胞聚焦结构的出口相连通的连通部以及和连通部相衔接的通道部,所述连通部沿着样品细胞溶液的流向呈喇叭状逐步扩大,通道部设置于内圈细胞栅栏结构的外围,内圈细胞栅栏结构的进口位于连通部内且与细胞聚焦结构的出口相对。

5.如权利要求4所述的微流控芯片,其特征在于,所述内圈细胞栅栏结构由1-3排平行间隔排列的微柱构成,微柱间的间隙为6-8μm。

6.如权利要求4所述的微流控芯片,其特征在于,所述外圈细胞栅栏结构由4-6个微柱组成的微柱列平行排列而成,微柱列与水平方向呈20°-40°夹角,微柱间的间隙为6-8μm。

7.如权利要求1所述的微流控芯片,其特征在于,所述分流结构由多级分流通道组成并呈树杈状分布,每级分流通道中的两分流通道之间的夹角为30-45°。

8.如权利要求1所述的微流控芯片,其特征在于,所述细胞聚焦结构呈蛇形波纹状。

9.一种捕获循环肿瘤细胞的方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)采用缓冲液冲洗权利要求1所述的微流控芯片,除去微流控芯片内部气泡;

(2)将Kolliphor P188的水溶液通入权利要求1所述的微流控芯片,包被2-10min;

(3)将测试液通入权利要求1所述的微流控芯片,进行循环肿瘤细胞捕获,循环肿瘤细胞和部分白细胞捕获至细胞栅栏结构,其他血液细胞从废液出口流出。

10.一种循环肿瘤细胞的免疫荧光染色鉴定方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)将固定液通入权利要求1所述的微流控芯片,进样后固定细胞10-30min;

(2)将缓冲液通入权利要求1所述的微流控芯片,替换微流控芯片中的固定液;

(3)将Triton X-100通入权利要求1所述的微流控芯片10-30min;

(4)将缓冲液通入权利要求1所述的微流控芯片,替换微流控芯片中的TritonX-100溶液;

(5)取CK18-FITC、CD45-PE和DAPI,加一抗稀释液,得稀释液,接着将稀释液通入权利要求1所述的微流控芯片,在4-37℃的条件下孵育2-12小时;

(6)将缓冲液通入权利要求1所述的微流控芯片,替换微流控芯片中未结合到细胞的抗体染色液,染色完毕,显微镜下进行鉴定。

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