一种海洋石油污染降解用的微生物菌剂制备方法与流程

文档序号:12346197阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种海洋石油污染降解用的微生物菌剂制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)制备种子液

a、制备培养基:在950ml去离子水中加入胰蛋白胨10g、酵母提取物5g和氯化钠10g,摇动容器直至溶质溶解,用5mol/L的NaOH溶液调pH至7.0,再用去离子水定容至1L,在15psi高压下蒸汽灭菌21min;

b、在步骤a的培养基中接种海洋修复类菌种,并放置在摇床上培养至吸光度大于1.0,镜检无杂菌制得种子液;

(2)制备菌液

a、一级发酵:在一级发酵罐中,将胰蛋白胨450g、酵母浸粉120g、氯化钙1.4g、硫酸镁14g、氯化钠800g、硫酸亚铁4g和硫酸氢二钾100g加入到80L水中搅拌溶解后,调节pH至7.5,在121℃、1.5MPa条件下灭菌,降温至30℃,将种子液在无菌条件下接种至一级发酵罐;

b、二级发酵:在二级发酵罐中,将胰蛋白胨4800g、酵母浸粉1300g、氯化钙15g、硫酸镁140g、氯化钠8000g、硫酸亚铁40g和硫酸氢二钾1000g加入到800L水中搅拌溶解后,调节pH至7.5,在121℃、1.5MPa条件下灭菌,降温至30℃;当一级发酵罐中的的菌液吸光度大于1.0时,将发酵液在无菌条件下转移至二级发酵罐中,无菌过滤通风搅拌培养,多点无菌取样,监测至吸光度大于1.1,杂菌率控制在10wt%以下,完成二级发酵;

c、三级发酵:在三级发酵罐中,将胰蛋白胨25kg、酵母浸粉7kg、氯化钙80g、硫酸镁750g、氯化钠40kg、硫酸亚铁210g和硫酸氢二钾5kg加入到4000L水中搅拌溶解后,调节pH至7.5,在121℃、1.5MPa条件下灭菌,降温至30℃,将二级发酵罐中的发酵液转移至三级发酵罐,无菌过滤通风搅拌培养,多点无菌取样,监测至吸光度大于1.2,杂菌率控制在20wt%以下,完成三级发酵;

d、保存:将完成三级发酵的发酵菌液在4℃条件下冷藏储存在菌液上料罐中;

(3)吸附:将菌液上料罐中的菌液与沸石上料罐中的沸石按照重量比2:1加入搅拌罐Ⅰ中,进行旋转搅拌,混合吸附20min;

(4)控液:将步骤(3)吸附菌剂后的沸石输送到脱水筛上,通过振动将液体滤除,控液6min;

(5)包裹:将步骤(4)混合控液脱水后的产品与聚谷氨酸溶液罐中浓度7wt%的聚谷氨酸溶液同时加入搅拌罐Ⅱ中进行搅拌、混合、包裹10min;

(6)保存:将步骤(5)包裹后的菌剂装入吨袋中保存。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述的海洋修复类菌种为芽孢杆菌或海单胞菌。

3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(6)吨袋中的菌剂重量为1±0.1吨,有效活菌数≥1亿/克。

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