技术领域：
本发明涉及一种枸杞多糖提取物、提取方法及其在制备降血脂药物中的应用，属于天然产物提取
技术领域：
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背景技术：
：枸杞是我国传统的名贵中药材，素有“红宝”美称，富含植物多糖、蛋白质、维生素等营养成分。枸杞的主要功效为滋补肝肾，益精明目；用于虚痨精亏、腰膝酸痛；眩晕耳鸣、内热肖渴、血虚萎黄，目昏不明。枸杞多糖是从枸杞中提取而得的一种水溶性多糖。已明确该多糖系蛋白多糖，分子量为22～25kD，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖成分组成，详细的结构分析尚在进行之中。经研究表明，枸杞多糖是枸杞子调节免疫、延缓衰老的主要活性成分，其对恶性肿瘤、艾滋病的预防与治疗也能起到积极作用。另外其可改善老年人易疲劳、食欲不振和视力模糊等症状，并具有降血脂、抗脂肪肝、抗肿瘤、抗衰老等作用。CN104231097A公开一种植物多糖的制备方法，包括以下步骤：（1）将枸杞筛选除杂后进行热风干燥脱水，经粗颗粒粉机破碎后三级筛分离出果肉粉和枸杞籽；（2）将果肉粉过20目筛后装料进行超临界CO2萃取；（3）在提取罐中加入纯水加热浸提，浸提后期将温度降到45℃时加入果胶酶和纤维素酶保温，进行离心分离；（4）将分离后的汁液用电渗析脱盐，然后进行四级超滤处理，反渗透浓缩，再进行冷冻升华干燥，低温粉碎，经包装后即为成品枸杞多糖。CN104558229A一种枸杞多糖的分离纯化方法，该方法使用新型温敏嵌段共聚物聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷与无机盐形成双水相体系，去除枸杞多糖中的蛋白质，色素等小分子杂质。使用透析法去除下相中的无机盐，乙醇沉淀得到多糖成品。但是上述的多糖存在着提取率不高，活性低的问题。技术实现要素：本发明的目的是：解决常规的枸杞提取物的多糖活性不高、纯度低的问题，提供了一种新的枸杞多糖提取物，也提供了该提取物的提取方法以及其在制备降血脂药物中的应用。技术方案是：一种枸杞多糖提取物，其中多糖纯度是56～62%，重均分子量Mw范围是18000～32000。上述的枸杞多糖提取物的提取方法，包括如下步骤：第1步，按重量份计，取200～220份已干燥的枸杞，加入至石油醚100～120份中，搅拌均匀后，静置10～20min，抽滤，将固体物在减压干燥箱中干燥1～3h，得到第一枸杞粉末；第2步，将第一枸杞粉末在20～40℃的范围下进行高压处理，得到第二枸杞粉末；第3步，第二枸杞粉末加入蒸馏水中，控制料液比为1g/30～35ml，再在料液中加入0.1～0.2%的酶，进行酶解并提取，抽滤后收集提取液；第4步，提取液中加入乙醇，使乙醇体积浓度大于80%，静置2～3h，收集沉淀，再用乙醇和丙酮的混合溶液洗涤沉淀，得到粗提物；第5步，将粗提物加水溶解，将料液用纳滤膜进行浓缩，得到的浓缩液喷雾干燥后，得到枸杞多糖提取物。所述的第1步中，减压干燥温度范围40～60℃。所述的第2步中，高压范围是指压力0.5～1Mpa。所述的第3步中，酶解并提取的温度范围是60～70℃，时间是2～4h。所述的第3步中，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比2：3：2：0.5的混合物。所述的第5步中，加水重量是粗提物重量的20～35倍，所述的纳滤膜的截留分子量范围是500～800Da。枸杞多糖提取物在制备治疗高血脂药物中的应用。枸杞多糖提取物在制备降解哺乳动物血清中总胆固醇、甘油三酯或者高密度脂蛋白胆固醇药物中的应用。有益效果本发明提供了一种新的枸杞多糖提取物，可以解决常规的枸杞提取物的多糖活性不高、纯度低的问题，枸杞多糖提取物具有较好的降血脂应用效果。具体实施方式本发明中所称的百分比在无特别说明情况下是指质量百分比。实施例1枸杞多糖提取物的提取方法，包括如下步骤：第1步，按重量份计，取200份已干燥的枸杞，加入至石油醚100份中，搅拌均匀后，静置10min，抽滤，将固体物在40℃减压干燥箱中干燥1h，得到第一枸杞粉末；第2步，将第一枸杞粉末在20℃的范围下进行0.5Mpa高压处理，得到第二枸杞粉末；第3步，第二枸杞粉末加入蒸馏水中，控制料液比为1g/30ml，再在料液中加入0.1%的酶，进行酶解并提取，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比2：3：2：0.5的混合物，酶解并60℃提取的温度范围是，时间是2h，抽滤后收集提取液；第4步，提取液中加入乙醇，使乙醇体积浓度80%，静置2h，收集沉淀，再用乙醇和丙酮的混合溶液洗涤沉淀，得到粗提物；第5步，将粗提物加水溶解，加水重量是粗提物重量的20倍，将料液用截留分子量500Da纳滤膜进行浓缩，得到的浓缩液喷雾干燥后，得到枸杞多糖提取物。上述得到的枸杞多糖提取物，其中多糖纯度是58.2%，重均分子量Mw是22125。实施例2枸杞多糖提取物的提取方法，包括如下步骤：第1步，按重量份计，取220份已干燥的枸杞，加入至石油醚120份中，搅拌均匀后，静置20min，抽滤，将固体物在60℃减压干燥箱中干燥3h，得到第一枸杞粉末；第2步，将第一枸杞粉末在40℃的范围下进行1Mpa高压处理，得到第二枸杞粉末；第3步，第二枸杞粉末加入蒸馏水中，控制料液比为1g/35ml，再在料液中加入0.2%的酶，进行酶解并提取，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比2：3：2：0.5的混合物，酶解并70℃提取的温度范围是，时间是4h，抽滤后收集提取液；第4步，提取液中加入乙醇，使乙醇体积浓度80%，静置3h，收集沉淀，再用乙醇和丙酮的混合溶液洗涤沉淀，得到粗提物；第5步，将粗提物加水溶解，加水重量是粗提物重量的35倍，将料液用截留分子量800Da纳滤膜进行浓缩，得到的浓缩液喷雾干燥后，得到枸杞多糖提取物。上述得到的枸杞多糖提取物，其中多糖纯度是61.2%，重均分子量Mw是28479。实施例3枸杞多糖提取物的提取方法，包括如下步骤：第1步，按重量份计，取210份已干燥的枸杞，加入至石油醚110份中，搅拌均匀后，静置15min，抽滤，将固体物在45℃减压干燥箱中干燥2h，得到第一枸杞粉末；第2步，将第一枸杞粉末在30℃的范围下进行0.8Mpa高压处理，得到第二枸杞粉末；第3步，第二枸杞粉末加入蒸馏水中，控制料液比为1g/32ml，再在料液中加入0.15%的酶，进行酶解并提取，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比2：3：2：0.5的混合物，酶解并65℃提取的温度范围是，时间是3h，抽滤后收集提取液；第4步，提取液中加入乙醇，使乙醇体积浓度80%，静置3h，收集沉淀，再用乙醇和丙酮的混合溶液洗涤沉淀，得到粗提物；第5步，将粗提物加水溶解，加水重量是粗提物重量的30倍，将料液用截留分子量700Da纳滤膜进行浓缩，得到的浓缩液喷雾干燥后，得到枸杞多糖提取物。上述得到的枸杞多糖提取物，其中多糖纯度是58.4%，重均分子量Mw是29647。对照例1与实施例3的区别在于：未对枸杞进行第1步的石油醚萃取操作。枸杞多糖提取物的提取方法，包括如下步骤：第1步，按重量份计，取210份已干燥的枸杞，在45℃减压干燥箱中干燥2h，得到第一枸杞粉末；第2步，将第一枸杞粉末在30℃的范围下进行0.8Mpa高压处理，得到第二枸杞粉末；第3步，第二枸杞粉末加入蒸馏水中，控制料液比为1g/32ml，再在料液中加入0.15%的酶，进行酶解并提取，所述的酶选自碱性果胶酸裂解酶、碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比2：3：2：0.5的混合物，酶解并65℃提取的温度范围是，时间是3h，抽滤后收集提取液；第4步，提取液中加入乙醇，使乙醇体积浓度80%，静置3h，收集沉淀，再用乙醇和丙酮的混合溶液洗涤沉淀，得到粗提物；第5步，将粗提物加水溶解，加水重量是粗提物重量的30倍，将料液用截留分子量700Da纳滤膜进行浓缩，得到的浓缩液喷雾干燥后，得到枸杞多糖提取物。上述得到的枸杞多糖提取物，其中多糖纯度是51.9%，重均分子量Mw是45771。对照例2与实施例3的区别在于：在第3步的酶解中碱性果胶酸裂解酶未加入，其重量被碱性木聚糖酶所替代。枸杞多糖提取物的提取方法，包括如下步骤：第1步，按重量份计，取210份已干燥的枸杞，加入至石油醚110份中，搅拌均匀后，静置15min，抽滤，将固体物在45℃减压干燥箱中干燥2h，得到第一枸杞粉末；第2步，将第一枸杞粉末在30℃的范围下进行0.8Mpa高压处理，得到第二枸杞粉末；第3步，第二枸杞粉末加入蒸馏水中，控制料液比为1g/32ml，再在料液中加入0.15%的酶，进行酶解并提取，所述的酶选自碱性纤维素酶、碱性木聚糖酶和漆酶的按照重量比2：3：4：0.5的混合物，酶解并65℃提取的温度范围是，时间是3h，抽滤后收集提取液；第4步，提取液中加入乙醇，使乙醇体积浓度80%，静置3h，收集沉淀，再用乙醇和丙酮的混合溶液洗涤沉淀，得到粗提物；第5步，将粗提物加水溶解，加水重量是粗提物重量的30倍，将料液用截留分子量700Da纳滤膜进行浓缩，得到的浓缩液喷雾干燥后，得到枸杞多糖提取物。上述得到的枸杞多糖提取物，其中多糖纯度是51.5%，重均分子量Mw是56227。用高胆固醇和脂类饲料喂养动物并辅以脂肪乳灌胃可快速稳定的形成脂代谢紊乱动物模型，给予动物本发明以上实施例1～3、对照例1～2的枸杞多糖提取物，以检测枸杞多糖提取物对高血脂症的影响。实验材料药品：实施例1～3、对照例1～2的枸杞多糖提取物。实验动物种系：SD大鼠。级别：SPF级。性别和数量：80只，雌雄各半。动物体重：50～80g。饲养条件：为便于观察动物每日饮水量和进食量，实验动物单笼饲养，室温20～25℃，相对湿度为40～70%，照明时间12小时。定时定量添加饲料，食用鼠专用颗粒饲料，饮自来水，每日更换垫料。其他试剂和药品阳性药：辛伐他汀片。高脂饲料：10%蛋黄粉、10%猪油、1%胆固醇、0.2%胆盐和78.8%基础饲料。脂肪乳剂：10%胆固醇、20%猪油、2%胆酸钠、1%甲基硫氧嘧啶。实验仪器：全自动生化分析仪实验方法脂肪乳剂的配制参照文献，取猪油20g置于500ml烧杯中，在电炉上加热融化，加入10g胆固醇溶化，再加入2g胆酸钠和1g甲基硫氧嘧啶，充分搅匀；然后放入20ml吐温80、20ml丙二醇及30ml蒸馏水，不断搅拌。待甲基硫氧嘧啶溶解后，冷却至室温，再加蒸馏水至100ml，并充分混匀，即成10％胆固醇、20％猪油、2％胆酸钠、1％甲基硫氧嘧啶的脂肪乳剂。冰箱保存，使用时先于37℃水浴中融化。实验分组及造模方法SD大鼠80只，适应饲养一周后称重，实验环境下，正常组给予正常大鼠饲料饲喂。其余各组大鼠均饲喂高脂饲料，同时每天按1ml/100g剂量灌胃脂肪乳剂，连续15天后禁食16小时，取血，测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平，根据血清总胆固醇(TC)水平选择造模成功的实验动物，随机分成8组：正常对照组、模型组、阳性对照组、实施例1～3组、对照例1～2组，每组各10只。在继续给予高脂饲料和脂肪乳剂的同时，分别给予不同受试物。于给药开始后第15天禁食16小时后，采血，测血清TC、TG、HDL-C水平。观察指标及检测方法：一般情况观察每天上午观察记录一次动物的一般表现、行为、中毒表现和死亡情况。根据每周测定的体重及食物摄入量，根据计算结果调整各组动物给药量，以保证各组动物受试物需要量。针对普洱茶饮用组，根据每周测定的饮水量均值，计算每周平均给药量。出现异常时，每天至少观察两次。对严重中毒的动物密切观察记录。生化指标检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平，全自动生化分析仪检测。数据统计：各组数据均采用SPSS方差分析进行统计分析，方差不齐者采用数据转换，如转换后仍不齐则采用非参数统计。提取物自由饮用及灌胃降脂作用血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)检测结果见下表。枸杞多糖提取物对高脂血症动物血清总胆固醇(TC)的影响（单位mmol/L）组药剂量给药前第15天第30天正常组----2.58±0.682.51±0.382.26±0.25模型组----23.58±1.5123.11±1.5223.36±1.58阳性药组20.5mg/kg/日22.20±1.5818.22±1.3214.52±1.14**实施例1组0.50g/kg/日22.12±1.2517.25±1.25*12.33±1.15*实施例2组0.50g/kg/日22.25±1.8218.25±1.6214.52±1.18*实施例3组0.50g/kg/日22.05±1.5817.17±1.25*13.15±1.02*对照例1组0.50g/kg/日22.58±1.5419.01±1.58*▲16.59±1.42*▲对照例2组0.50g/kg/日22.58±1.6121.28±1.58*15.92±1.57**与模型组比较，P<0.05，**与模型组比较，P<0.01；▲与实施例3组相比，p<0.05；对高脂血症动物血清甘油三酯(TG)的影响（单位mmol/L）组药剂量给药前第15天第30天正常组----0.55±0.190.52±0.170.52±0.44模型组----0.67±0.451.15±0.571.54±0.95阳性药组20.5mg/kg/日0.62±0.641.14±0.94*1.08±0.64**实施例1组0.50g/kg/日0.63±0.631.17±0.51*1.11±0.52*实施例2组0.50g/kg/日0.63±0.751.15±0.74*1.08±0.47*实施例3组0.50g/kg/日0.64±0.251.14±0.51*1.11±0.42*对照例1组0.50g/kg/日0.65±0.561.45±0.63*1.65±0.67*对照例2组0.50g/kg/日0.66±0.461.24±0.37*▲1.54±0.85*▲*与模型组比较，P<0.05，**与模型组比较，P<0.01；▲与实施例3组相比，p<0.05；对高脂血症动物血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的影响（单位mmol/L）组药剂量给药前第15天第30天正常组----0.63±0.290.68±0.350.63±0.62模型组----3.63±0.523.22±0.755.02±1.58阳性药组20.5mg/kg/日3.33±0.472.33±0.64*2.33±1.25**实施例1组0.50g/kg/日3.22±0.462.54±0.64*2.51±1.08*实施例2组0.50g/kg/日3.23±0.592.59±0.74*2.42±1.18*实施例3组0.50g/kg/日3.18±0.622.39±0.58*2.32±1.22*对照例1组0.50g/kg/日3.21±0.472.92±0.54*2.64±1.51*对照例2组0.50g/kg/日3.11±0.752.68±0.81*▲2.72±1.33*▲*与模型组比较，P<0.05，**与模型组比较，P<0.01；▲与实施例3组相比，p<0.05；从上表中可以看出，本发明提供的枸杞多糖提取物具有较好的降低血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的作用，实施例3相对于对照例1来说，通过石油醚萃取操作可以有效地去除杂质，提高产物纯度，使药物的降胆固醇效果提高；实施例3相对于对照例2，通过采用碱性果胶酸裂解酶可以有效地促进多糖分解，提高降低甘油三酯的作用活性。当前第1页1 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