本发明涉及医学检验技术领域。特别地，本发明涉及一种用于检测甘油三酯的试剂盒和方法。
背景技术：
甘油三酯(Triglyceride，TG)是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，是人体内含量最多的脂类，大部分组织均可以利用TG分解产物供给能量，同时肝脏、脂肪等组织还可以进行TG的合成，在脂肪组织中贮存。
甘油三酯也是血脂的主要组成部分，是机体重要的供能物质。食物中的甘油三酯在肠道经胰脂酶消化分解，吸收后重新酯化为甘油三酯，经淋巴系统进入血液。在病理条件下，各种组织细胞合成和贮存的甘油三酯显著增加。定量检测血液和组织细胞中甘油三酯含量，是临床、临床基础、基础医学生物学研究常用的生化指标。
甘油三酯的升高可见于家族性高甘油三酯血病、糖尿病、糖原累积症、甲状腺功能不足、肾病综合征、高血压、脑血管病、冠心病、肥胖等。甘油三酯减低可见于甲状腺功能亢进，肾上腺皮质机能减退，肝功能严重低下，癌症晚期等。
甘油三酯的升高可见于家族性高甘油三酯血病、糖尿病、糖原累积症、甲状腺功能不足、肾病综合征、高血压、脑血管病、冠心病、肥胖等。甘油三酯减低可见于甲状腺功能亢进，肾上腺皮质机能减退，肝功能严重低下，癌症晚期等。
甘油三酯测定的决定性方法为放射性核素稀释-质谱法；参考方法为二氯甲烷抽提，变色酸显色法；常规方法为酶法(GPO-PAP法)。酶法测定特异性强，测定准确度及灵敏度较高，操作简便，试剂无腐蚀性，可全自动操作，性价比高，是目前国内外推荐使用的临床常规的测定方法。目前市售的试剂盒绝大多数采用此法。
该法主要原理：脂蛋白脂肪酶(LPL)水解TG生成甘油和脂肪酸；水解后的甘油与三磷酸腺苷(ATP)在甘油激酶(GK)和磷酸甘油氧化酶(GPO)的催化下生成H2O2，H2O2偶联Trinder反应呈色，即H2O2与4-氨基安替比林(4-AAP)和色原在过氧化物酶(POD)的作用下生成醌亚胺，其生成量与样本中的TG含量成正比。
已有文献报道某些药物(例如羟苯磺酸钙和酚磺乙胺)会对基于Trinder反应的试剂产生负干扰，从而得到不正确的结果，影响临床医生做出判断，最终延误患者治疗，或采用不合理治疗措施导致患者伤亡。例如，参见程涌江等，“酚磺乙胺对部分生化检验项目干扰的相关研究，《国际检验医学杂志》，2011年第11期。
羟苯磺酸钙(calcium dobesilate)(又称多贝斯(doxium))是毛细血管保护剂，主要用于治疗微血管病、静脉曲张综合症以及与微循环障碍伴发额静脉功能不全，还用于静脉剥离和静脉硬化法的辅助治疗，用于预防术后综合症，水肿及组织浸润。
酚磺乙胺(又名止血敏)的化学名称为2,5-二羟基苯磺酸二乙胺盐。其能使血小板数量增加，并增强血小板的凝集和黏附力，促进凝血活性物质的释放，从而产生止血作用。酚磺乙胺在临床上主要用于预防和治疗外科手术出血过多，血小板减少性紫癜或过敏性紫癜以及其他原因引起的出血。
羟苯磺酸钙和酚磺乙胺对酶法检测甘油三酯的干扰对被施用这两种药物的患者造成很大的不便。例如，对于糖尿病患者而言，常伴冠心病、血管动脉硬化等，而所施用的羟苯磺酸钙对酶法检测甘油三酯的干扰可能造成糖尿病患者的甘油三酯水平无法得到正确评估，掩盖并延误病情。而对于手术患者，所施用的酚磺乙胺对酶法检测甘油三酯的干扰可能使得不能正确评估其甘油三酯水平，造成术后并发症，影响患者的预后。
目前，市场上出售的酶法检测试剂盒普遍存在无法有效抵抗羟苯磺酸钙和酚磺乙胺干扰的缺陷。
本领域中需要满足以下一种或多种特性的甘油三酯测定试剂盒：能够抵抗羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对酶法检测甘油三酯的干扰；具有良好的重复性以及宽的线性范围。
技术实现要素：
一方面，本发明提供了一种甘油三酯测定试剂盒，其利用酶法检测甘油三酯。
在一些实施方式中，本发明提供甘油三酯测定试剂盒，其包含试剂组1(R1)和试剂组2(R2)，所述试剂组1包含镁盐、三磷酸腺苷、甘油激酶、甘油磷酸氧化酶、过氧化物酶和色原，所述试剂组2包含脂蛋白脂肪酶和4-氨基安替比林，其中，所述色原是N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺(DAOS)或者包含DAOS。
本发明人出乎意料地发现，在利用酶法检测甘油三酯时，使用特定用量的DAOS或包含DAOS的色原能够降低样品中存在的羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对甘油三酯检测所造成的干扰。尤其是根据本发明的组合物能够降低样品中存在的100mg/L及以下的羟苯磺酸钙和/或250mg/L及以下的酚磺乙胺对甘油三酯检测所造成的干扰。
在一些实施方式中，本文中所描述的试剂盒或试剂组1还可以包含抗坏血酸氧化酶。在一些实施方式中，抗坏血酸氧化酶的量在0.5-8KU/L，优选1-5KU/L的范围内。抗坏血酸氧化酶的量在上述范围内时可以有效地降低羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对甘油三酯测定所造成的干扰。在一些实施方式中，所述试剂盒中抗坏血酸氧化酶的量可以为0.5KU/L、0.6KU/L、0.7KU/L、0.8KU/L、0.9KU/L、1KU/L、1.2KU/L、1.4KU/L、1.5KU/L、2KU/L、2.5KU/L、3KU/L、3.5KU/L、4KU/L、4.5KU/L、5KU/L、6KU/L、7KU/L或8KU/L。
在一些实施方式中，DAOS或色原的量可以在0.2-40mmol/L，优选0.3-20mmol/L的范围内，例如，DAOS或色原的量可以为0.2mmol/L、0.4mmol/L、0.5mmol/L、0.8mmol/L、1mmol/L、3mmol/L、5mmol/L、8mmol/L、10mmol/L、12mmol/L、15mmol/L、20mmol/L、30mmol/L、35mmol/L、40mmol/L或45mmol/L。色原的量在上述范围内时可以有效地降低羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对甘油三酯测定所造成的干扰。
在一些实施方式中，所述4-氨基安替比林的量在0.1-20g/L、优选0.2-10g/L的范围内。4-AAP的量在上述范围内时可以有效地降低羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对甘油三酯测定所造成的干扰。在一些实施方式中，所述试剂盒中4-AAP的量可以为0.15g/L、0.2g/L、0.3g/L、0.4g/L、0.5g/L、0.6g/L、0.8g/L、1g/L、1.2g/L、1.4g/L、1.5g/L、2g/L、3g/L、4g/L、5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L、15g/L或20g/L。在一些实施方式中，所述4-氨基安替比林的量也可以在1-50g/L，例如可以是1g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L或50g/L。
在一些实施方式中，所述镁盐的量为0.5-40mmol/L，优选1-30mmol/L。在一些实施方式中，镁盐的量可以为0.5mmol/L、0.8mmol/L、1mmol/L、1.5mmol/L、2mmol/L、3mmol/L、4mmol/L、5mmol/L、8mmol/L、10mmol/L、12mmol/L、15mmol/L、18mmol/L、20mmol/L、22mmol/L、25mmol/L、28mmol/L、30mmol/L、35mmol/L或40mmol/L。
在一些实施方式中，镁盐可以是水溶性镁盐，例如氯化镁、硫酸镁。
在一些实施方式中，三磷酸腺苷的量为0.3-8.0mmol/L，优选0.5-5.0mmol/L。在一些实施方式中，三磷酸腺苷的量可以为0.3mmol/L、0.5mmol/L、0.7mmol/L、1mmol/L、1.2mmol/L、1.5mmol/L、1.8mmol/L、2mmol/L、2.5mmol/L、3mmol/L、3.5mmol/L、4mmol/L、4.5mmol/L、5mmol/L、6mmol/L、7mmol/L或8mmol/L。
在一些实施方式中，所述甘油激酶的量为0.1-12KU/L、优选0.3-10KU/L。在一些实施方式中，甘油激酶的量可以为0.1KU/L、0.2KU/L、0.3KU/L、0.4KU/L、0.5KU/L、0.6KU/L、0.8KU/L、1KU/L、1.2KU/L、1.4KU/L、1.5KU/L、2KU/L、3KU/L、4KU/L、5KU/L、6KU/L、7KU/L、8KU/L、9KU/L、10KU/L、11KU/L、12KU/L、13KU/L、14KU/L、15KU/L、16KU/L、18KU/L或20KU/L。
在一些实施方式中，甘油磷酸氧化酶的量为0.5-30KU/L，优选1-20KU/L。在一些实施方式中，甘油磷酸氧化酶的量可以为0.5KU/L、0.8KU/L、1KU/L、2KU/L、5KU/L、8KU/L、10KU/L、12KU/L、15KU/L、18KU/L、20KU/L、25KU/L或30KU/L。
在一些实施方式中，过氧化物酶的量为0.5-30KU/L，优选1-20KU/L。在一些实施方式中，过氧化物酶的量可以为0.5KU/L、0.8KU/L、1KU/L、2KU/L、5KU/L、8KU/L、10KU/L、12KU/L、15KU/L、18KU/L、20KU/L、25KU/L或30KU/L。
在一些实施方式中，脂蛋白脂肪酶的量为0.5-25KU/L，优选1-20KU/L。在一些实施方式中，脂蛋白脂肪酶的量可以为0.5KU/L、0.8KU/L、1KU/L、2KU/L、5KU/L、8KU/L、10KU/L、12KU/L、15KU/L、18KU/L、20KU/L或25KU/L。
在一些实施方式中，使用根据本发明的试剂盒、方法或用途测得的样品中的甘油三酯值与对对照样品测得的甘油三酯值相比偏差小于10％，优选小于8％，更优选小于5.5％，最优选小于4％，其中所述对照样品为除不含羟苯磺酸钙和酚磺乙胺之外，其他均与所述样品相同的样品。
在阅读了本申请的内容的基础上，本领域技术人员能够合理地确定各组分的用量比例。例如，在一些实施方式中，所述色原与所述4-氨基安替比林的摩尔比为0.2:1-50:1，优选0.5:1-20:1，更优选1:1-15:1，最优选1.2:1-11:1。在一些实施方式中，所述试剂盒中色原与4-氨基安替比林的摩尔比可以为0.2:1、0.5:1、0.7:1、0.8:1、0.9:1、1.0:1、1.1:1、1.2:1、1.5:1、2.0:1、2.6:1、3.0:1、3.2:1、3.5:1、3.8:1、4.0:1、4.2:1、4.5:1、4.8:1、5.0:1、5.5:1、6.0:1、6.5:1、7.0:1、7.5:1、8.0:1、8.5:1、9.0:1、9.5:1、10.0:1、10.5:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、20:1、30:1、40:1或者50:1。
在一些实施方式中，试剂组1与试剂组2的体积比在6:1-2:1，优选5:1-3:1范围内，最优选地为4:1。在一些实施方式中，所述试剂盒中试剂组1与试剂组2的体积比可以为6:1、5:1、4:1、3:1、2:1。
为了进一步提高试剂盒的抗干扰性，可以组合使用上述各组分的优选方式。组合的方式可以是任何合适的方式，例如将各组分分成两组用于双试剂型试剂盒中。
在本发明的一些优选实施方式中，所述试剂盒包含0.3-20mmol/L的DAOS或包含DAOS的色原；0.2-10g/L的4-氨基安替比林。优选地，试剂盒还包含如下的一种或多种：1-5KU/L的抗坏血酸氧化酶、1-30mmol/L的镁盐、0.5-5.0mmol/L的三磷酸腺苷、0.3-10KU/L的甘油激酶、0.5-20KU/L的甘油磷酸氧化酶、1-20KU/L的过氧化物酶、1-20KU/L的脂蛋白脂肪酶、0.2-10g/L的4-氨基安替比林。在这些实施方式中，测得的样品中的甘油三酯值与对对照样品测得的甘油三酯酯值相比，偏差小于10％，优选小于8％，更优选小于6％，甚至更优选小于4％，其中所述对照样品为除不含羟苯磺酸钙和酚磺乙胺之外，其他均与所述样品相同的样品。
所述试剂组1和/或试剂组2还可以包含以下试剂中的一种或更多种：缓冲溶液、稳定剂、防腐剂和表面活性剂。
缓冲溶液可以为本领域中常规使用的缓冲溶液。在一些实施方式中，所述缓冲溶液可以各自独立地为MOPS、good's缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液以及其任意组合。在一些实施方式中，所述缓冲液的量在10-800mmol/L、优选30-500mmol/L、更优选地50-200mmol/L的范围内，例如80mmol/L、100mmol/L、150mmol/L、180mmol/L。所述缓冲液的pH可以在6.0-8.5、优选6.5-8.0、更优选地7.0-8.0的范围内，例如7.4和7.8。
稳定剂可以为蔗糖、BSA、木糖醇、山梨醇等或其任意组合，其量可以为0.2-100g/L，优选0.5-50g/L。例如，稳定剂的量可以为0.2g/L、0.3g/L、0.5g/L、0.7g/L、1g/L、2g/L、5g/L、8g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、70g/L、80g/L或100g/L。
防腐剂可以为二氯乙酰胺、咪唑烷基脲、山梨酸钾、苯甲酸钠、亚硝酸钠、尼泊金酯、PC系列、NaN3等或其任意组合，其量可以为0.05-12g/L、优选0.1-10g/L。例如，防腐剂的量可以为0.05g/L、0.1g/L、0.2g/L、0.3g/L、0.4g/L、0.5g/L、0.6g/L、0.8g/L、1g/L、1.2g/L、1.4g/L、1.5g/L、2g/L、3g/L、4g/L、5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L、11g/L或12g/L。
表面活性剂可以为TWEEN、SPAN、TRITON、EMULGEN系列表面活性剂、胆酸钠、聚氧乙烯衍生物、月桂醇聚氧乙烯醚、十二烷基磺酸钠等，其量可以为0.05-30g/L、优选0.1-20.0g/L。例如，表面活性剂的量可以为0.05g/L、0.1g/L、0.2g/L、0.3g/L、0.5g/L、0.8g/L、1g/L、1.2g/L、1.5g/L、2g/L、3g/L、4g/L、5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L、12g/L、15g/L、18g/L、20g/L、25g/L或30g/L。
本发明试剂盒中的各试剂可以各自独立地为液体形式或冻干粉形式。同一试剂组中的试剂可以放置在同一容器中或单独放置。
本发明的试剂盒可以采用本领域技术人员熟知的方法配制。例如，可以通过将同一试剂组中的试剂混合均匀来配制本发明试剂盒。
本发明的试剂盒特别适合用于检测正在接受或已经接受羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺治疗的患者的样品中的甘油三酯，所述患者例如正在接受或已经接受羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺治疗的微血管病、静脉曲张综合症以及与微循环障碍伴发额静脉功能不全、外科手术出血过多，血小板减少性紫癜或过敏性紫癜以及其他原因引起的出血的患者，所述样品可以例如是血液。
另一方面，本发明提供了一种使用上文所述试剂盒检测样品中的甘油三酯含量的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)将样品和校准品分别与所述试剂组1混合并孵育所得的混合物，测定所得混合物的吸光度A1，
(b)将所述试剂组2与经孵育的步骤(a)的混合物混合并孵育，测定所得混合物的吸光度A2，
(c)根据下式计算甘油三酯浓度，
样品中甘油三酯浓度＝(A2U-A1U)/(A2C-A1C)*CC
上式中，A2U和A1U分别表示样品的吸光度A2和A1；A2C和A1C分别表示校准品的吸光度A2和A1；CC表示校准品的浓度。
所述“校准品”指的是已知浓度的甘油三酯的溶液，已知浓度的甘油三酯可以商购获得，可以将其配置为合适的浓度，例如3-10mmol/L。
在上述方法中，步骤(a)和步骤(b)中的孵育时间可由本领域技术人员常规地确定。例如，孵育时间可以为2-30分钟，例如5分钟、10分钟或20分钟。
在一些实施方式中，所述方法中所检测的样品来自正在接受或已经接受羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺治疗的患者。
在一些实施方式中，所述方法中使用的样品与试剂组1、试剂组2的量的比例为样品：试剂组1：试剂组2＝1:80:20。例如，样品、试剂组1和试剂组2的用量可以分别为2μl、160μl和40μl，或者3μl、240μl和60μl。
在另一方面，本发明提供了DAOS或者包含DAOS的组合物或试剂盒用于降低在利用酶法进行的甘油三酯检测中由样品中存在的羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺所造成的干扰的用途。
在另外一个方面，本发明提供了DAOS或包含DAOS的组合物用于制备抗羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺干扰的甘油三酯测定试剂盒的用途。优选地，所述甘油三酯测定试剂盒是根据本发明所述的甘油三酯测定试剂盒。
在一些实施方式中，根据本发明的组合物或试剂盒还可以包含抗坏血酸氧化酶。在一些实施方式中，抗坏血酸氧化酶的量在0.5-8KU/L，优选1-5KU/L的范围内。抗坏血酸氧化酶的量在上述范围内时可以有效地降低羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对甘油三酯测定所造成的干扰。在一些实施方式中，色原的量在0.1-40mmol/L，优选0.3-20mmol/L的范围内。在一些实施方式中，4-氨基安替比林的量在0.1-20g/L，优选0.2-10g/L的范围内。当采用具有上述优选范围内的各组分时，可以更有效地降低羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对甘油三酯测定所造成的干扰。
在一些实施方式中，在根据本发明的方法和用途中，使用本文中所述的试剂盒。
发明人惊奇地发现，与使用其他色原的现有技术相比，当使用DAOS或含DAOS的色原来检测甘油三酯时，能够降低羟苯磺酸钙和酚磺乙胺对甘油三酯检测的干扰。尤其是当DAOS量可以在0.3-20mmol/L的范围内时，羟苯磺酸钙和酚磺乙胺的干扰得到明显降低。
本发明包括但不限于如下的实施方式：
实施方式1.一种甘油三酯测定试剂盒，其包含试剂组1和试剂组2，所述试剂组1包含镁盐、三磷酸腺苷、甘油激酶、甘油磷酸氧化酶、过氧化物酶和色原，所述试剂组2包含脂蛋白脂肪酶和4-氨基安替比林，其中，所述色原是或者包含N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺，其中所述色原的量为0.2-40mmol/L，优选0.3-20mmol/L。
实施方式2.根据实施方式1所述的甘油三酯测定试剂盒，其中所述4-氨基安替比林的量为0.1-20g/L，优选0.2-10g/L。
实施方式3.根据实施方式1或2所述的甘油三酯测定试剂盒，其中所述试剂组1还包含抗坏血酸氧化酶，并且抗坏血酸氧化酶的量在0.5-8KU/L，优选1-5KU/L的范围内。
实施方式4.根据前述实施方式中任一项所述的甘油三酯测定试剂盒，其中所述甘油激酶的量为0.1-12KU/L，优选0.3-10KU/L。
实施方式5.根据前述实施方式中任一项所述的甘油三酯测定试剂盒，其中所述镁盐的量为0.5-40mmol/L，优选1-30mmol/L。
实施方式6.一种使用前述实施方式中任一项所述的试剂盒检测样品中的甘油三酯的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)将样品和校准品分别与所述试剂组1混合并孵育所得的混合物，测定所得混合物的吸光度A1，
(b)将所述试剂组2与经孵育的步骤(a)的混合物混合并孵育，测定所得混合物的吸光度A2，
(c)根据下式计算甘油三酯浓度，
样品中甘油三酯浓度＝(A2U-A1U)/(A2C-A1C)*CC
式中，A2U和A1U分别表示样品的吸光度A2和A1；A2C和A1C分别表示校准品的吸光度A2和A1；CC表示校准品的浓度。
实施方式7.N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺用于降低在利用酶法进行的甘油三酯检测中由样品中存在的羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺所造成的干扰的用途，其中所述色原的量为0.2-40mmol/L，优选0.3-20mmol/L。
实施方式8.N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺用于制备抗羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺干扰的甘油三酯测定试剂盒的用途，其中所述色原的量为0.2-40mmol/L，优选0.3-20mmol/L。
实施方式9.根据实施方式7或8所述的用途，其中使用根据实施方式1-5中任意一项所述的甘油三酯测定试剂盒来检测甘油三酯。
实施方式10.根据实施方式7-9中任一项所述的用途，其中使用N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺测得的样品中的甘油三酯值与对对照样品测得的甘油三酯值相比偏差小于10％，优选小于8％，更优选小于5.5％，最优选小于4％，其中所述对照样品为除不含羟苯磺酸钙和酚磺乙胺之外，其他均与所述样品相同的样品。
在本发明中，对于一个方面所描述的特征、实施方案、优选实施方案同样适用于本发明的其他方面。
在本发明的一些实施方案中，组合物、试剂组、试剂盒以及方法用“包含”或“包括”描述。但本领域技术人员可以理解，所述组合物、试剂组、试剂盒以及方法也可以由基本上由相应化合物、试剂或步骤组成或由相应化合物、试剂或步骤组成。
除了与本发明的目的明显不相容的情况外，本发明的描述应理解为包括本发明的各种实施方式或要素的组合，以及它们的替代方式的组合。
具体实施方式
现将描述实施本发明的一些方面的一些说明性且非限制性的实施例以及对比例。
实验材料
使用下表1中所示的材料来制备试剂组1和2。
表1：
对比例1：甘油三酯测定试剂盒试剂配制
根据下表2和下表3中所示的组分和浓度，将各组分混合以分别制备试剂组1和2。
表2：R1配制
表3：R2配制
对比例2：甘油三酯测定试剂盒试剂配制
根据下表4和下表5中所示的组分和浓度，将各组分混合以分别制备试剂组1和2。
表4：R1配制
表5：R2配制
实施例1：甘油三酯测定试剂盒试剂配制
根据下表6和下表7中所示的组分和浓度，将各组分混合以分别制备试剂组1和2。
表6：R1配制
表7：R2配制
实施例2：甘油三酯测定试剂盒试剂配制
根据下表8和下表9中所示的组分和浓度，将各组分混合以分别制备试剂组1和2。
表8：R1配制
表9：R2配制
实施例3：甘油三酯测定试剂盒试剂配制
根据下表10和下表11中所示的组分和浓度，将各组分混合以分别制备试剂组1和2。
表10：R1配制
表11：R2配制
实施例4：甘油三酯测定试剂盒检测方法
1.仪器
具有波长为600nm的全自动生化分析仪或半自动生化分析仪。
2.参数设置及操作
方法：终点法 样本/试剂：1/100 主波长：600nm
反应温度：37℃ 反应时间：10min 副波长：700nm
样本测定具体操作方法如表12所示。
表12
单位：微升(μL)
3.计算公式
ΔA＝A2-A1
式中：
ΔAU――测定样本吸光度变化值；
ΔAC――校准品吸光度变化值；
CC――校准品浓度。
实施例5：甘油三酯测定试剂盒抗药物干扰实验
1.基础血清准备：收集健康体检人员无溶血、无脂浊、无黄疸的新鲜混合血清。
2.干扰样本配制：
1)将羟苯磺酸钙水溶液与基础血清按1：9比例配制成药物浓度为100mg/L的干扰样本；对照样本为生理盐水与基础血清按1：9比例配制；不同药物浓度干扰样本由100mg/L羟苯磺酸钙药物干扰样本与对照样本不同比例配制而得；
2)将酚磺乙胺水溶液与基础血清按1：9比例配制成药物浓度为250mg/L的干扰样本；对照样本为生理盐水与基础血清按1：9比例配制；不同药物浓度干扰样本由250mg/L酚磺乙胺药物干扰样本与对照样本不同比例配制而得。
3.甘油三酯测定试剂盒经校准后测定干扰样本，以对照样本±10％偏差为干扰判断标准，考察试剂盒抗药物干扰能力。
结果如下表13和14所示。
表13：不同的羟苯磺酸钙浓度对各对比例和实施例的效果的影响
表14：不同的酚磺乙胺浓度对各对比例和实施例的效果的影响
从以上结果可以看出，羟苯磺酸钙100mg/L、酚磺乙胺250mg/L对本发明甘油三酯测定试剂盒测定结果的干扰明显较低。
实施例6：实施例1-3甘油三酯测定试剂盒其他性能评价
1.准确度验证：
测定朗道质控品(HN1530，批号:918UN；HE1532，批号:764UE)，重复测定3次，计算测定值与靶值偏差，并看结果是否在质控范围内。
表15：朗道质控品(HN1530)
表16：朗道质控品(HN1532)
从以上结果可以看出，根据本发明的试剂盒得到的测定结果的平均值位于质控范围内，与靶值偏差＜5％，说明本发明试剂盒准确性好。
2.重复性实验：
以常规临床样本作为待测样品，用本发明实施例1-3试剂盒重复测定10次，计算变异系数CV％，结果如下表17所示。
表17：变异系数测试
由以上结果可见，本发明试剂盒变异系数CV为0.94％、1.00％、0.97％，均明显＜4％，符合《甘油三酯测定试剂盒(酶法法)行业标准》标准要求。以上结果说明：根据本发明的试剂盒具有非常好的重复性。
3.线性范围检测：
取甘油三酯浓度10.0mmol/L左右的线性样本，稀释成5个不同的浓度(xi)，用本发明试剂按照检测方法每个浓度测定3次，计算平均值(yi)。以xi为自变量，以yi为因变量求出线性回归方程，计算线性回归相关系数r；将xi代入线性回归方程，计算yi的估算值及yi与估算值的偏差。
表18：实施例1-3的线性范围检测
从以上结果可以看出，本发明的试剂盒具有非常优异的线性，实施例1-3分别获得了0.9998、0.9998和0.9999的线性相关系数r。中国医药行业标准《甘油三酯测定试剂盒(酶法)行业标准》中要求线性相关系数r不小于0.9900。以上结果说明：根据本发明的试剂盒的线性区间完全满足临床需求。
实施例7：与市售试剂盒的对比
在市售试剂盒中，其中试剂1包含100mmol/L的磷酸缓冲液(pH 7.5)、30KU/L的GK、30KU/L的GPO、20mmol/L的ATP、20mmol/L的MgSO4、10KU/L的抗坏血酸氧化酶、2KU/L的过氧化氢酶、30mmol/L的N-(2-羟基-3-磺丙基)-3 5-二甲氧基苯胺钠盐、5g/L的Triton X-100、8mmol/L的山梨醇、0.1ml/L的苯甲酸钠；试剂2包含100mmol/L的磷酸缓冲液(pH 6.5)、50KU/L的LPL、5mmol/L的4-氨基安替比林、10KU/L的过氧化物酶、50mmol/L的氟化钠、15mmol/L的丙二醇、0.1mL/L的苯甲酸钠。
按照前文所述方法测试羟苯磺酸钙和酚磺乙胺对该市售试剂盒效果的影响，结果如下表19-20所示：
表19：不同的羟苯磺酸钙浓度对试剂盒效果的影响
表20：不同的酚磺乙胺浓度对试剂盒效果的影响
上述结果表明，市售试剂盒无法抵抗羟苯磺酸钙和酚磺乙胺对甘油三酯检测的干扰。与本发明获得的结果比较，可以看出，本发明的试剂盒获得了非常好的抗干扰效果，本发明的这种抗干扰效果是本领域普通技术人员所预料不到的。