1.用于检测猪肺炎支原体的荧光定量PCR引物对,其特征在于:所述引物对的核苷酸序列如下所示:
上游引物P1:5’- GWCAAAGTCAAAGTCAGCAAAC -3’;
下游引物P2:5’- AGCTGTTCAAATGCTTGTCC -3’。
2.一种检测猪肺炎支原体的Syto9荧光定量PCR-HRM方法,包括如下步骤:
(1)提取待测样品DNA;
(2)以步骤(1)提取的DNA为核酸模板,以Syto9为荧光染料,用权利要求1所述的用于检测猪肺炎支原体的荧光定量PCR引物对进行PCR扩增;
(3)将步骤(2)获得的PCR扩增产物进行高分辨率熔解曲线分析;
(4)结果判定:形成特异性的熔解曲线峰型为阳性,无特异的熔解曲线峰型为阴性。
3.根据权利要求2所述的检测猪肺炎支原体的Syto9荧光定量PCR-HRM方法,其特征在于:步骤(2)所述的PCR扩增反应的25 μL体系中含有2xTaq Plus Master Mix 12.5 μL,P1 和P2引物(100 pmol/μL)各1.0 μL,核酸模板2.0 μL,Syto9 1.0 μL,余量为去离子水。
4.根据权利要求2或3所述的检测猪肺炎支原体的Syto9荧光定量PCR-HRM方法,其特征在于:步骤(2)所述的PCR扩增反应程序为首先94℃ 5 min;随后94℃ 20 s、54.5℃ 20 s、72℃ 20 s,循环扩增45次;最后72℃延伸7 min。
5.根据权利要求2所述的检测猪肺炎支原体的Syto9荧光定量PCR-HRM方法,其特征在于:步骤(3)所述的高分辨率熔解曲线分析程序为98℃变性2min,40℃杂合2min,74℃~83℃以0.3℃/s的熔解速率运行。
6.一种猪肺炎支原体的荧光定量PCR检测试剂盒,其特征在于:含有权利要求1所述的用于检测猪肺炎支原体的荧光定量PCR引物对。