一种以聚丙烯腈微球为载体固定化酪氨酸酶的方法及应用与流程

文档序号:12056376阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种以聚丙烯腈微球为载体固定化酪氨酸酶的方法,其特征在于:首先制备聚丙烯腈微球,然后进行微球表面改性形成席夫碱并引入醛基,将酪氨酸酶固定在聚丙烯腈微球表面。

2.根据权利要求1所述的一种以聚丙烯腈微球为载体固定化酪氨酸酶的方法,其特征在于:其包括以下步骤:

1)将聚丙烯腈溶于N-N 二甲基甲酰胺中形成均相溶液,采用相转化法利用蠕动泵制备聚丙烯腈微球;

2)在45-50°C下,将聚丙烯腈微球浸泡于8-10wt%的氢氧化钠溶液中1-1.5h,然后取出聚丙烯腈微球并用蒸馏水浸泡洗涤,接着在室温下用0.1M盐酸浸泡2-2.5h羧化聚丙烯腈微球,然后将部分羧化的聚丙烯腈微球浸泡于8-10wt%的乙二胺溶液中1-1.5h使其酰胺化,得到改性后的聚丙烯腈微球;

3)将上述改性后的聚丙烯腈微球与8-10wt%的戊二醛溶液在4°C下避光接触1h;

4)最后将聚丙烯腈微球与酪氨酸酶-磷酸缓冲液接触反应进行固定化,得到固定于聚丙烯腈微球上的固定化酪氨酸酶。

3.根据权利要求2所述的一种以聚丙烯腈微球为载体固定化酪氨酸酶的方法,其特征在于:所述步骤1),聚丙烯腈与N-N 二甲基甲酰胺的质量比为1:4。

4.根据权利要求2所述的一种以聚丙烯腈微球为载体固定化酪氨酸酶的方法,其特征在于:所述步骤2),酰胺化反应的温度为20-40℃。

5.根据权利要求2所述的一种以聚丙烯腈微球为载体固定化酪氨酸酶的方法,其特征在于:所述步骤4)的酪氨酸酶-磷酸缓冲液的pH=8。

6.根据权利要求2所述的一种以聚丙烯腈微球为载体固定化酪氨酸酶的方法,其特征在于:所述步骤4)的固定化时间为8-24h,固定化温度为20-40°C。

7.根据权利要求6所述的一种以聚丙烯腈微球为载体固定化酪氨酸酶的方法,其特征在于:所述步骤4)的固定化时间为16h,固定化温度为25°C。

8.根据权利要求6所述的一种以聚丙烯腈微球为载体固定化酪氨酸酶的方法,其特征在于:所述步骤4)的固定化过程,控制反应体系的pH为4-9。

9.根据权利要求2所述的一种以聚丙烯腈微球为载体固定化酪氨酸酶的方法,其特征在于:所述步骤4),通过控制固定化时间和固定化温度,调节固定化酪氨酸酶的浓度为0.5-5mg/ml。

10.如权利要求1-9之一所述的固定化酪氨酸酶的应用,其特征在于:所述固定化酪氨酸酶用于降解酚类化合物,在氧气作用下,利用固定于聚丙烯腈微球上的酪氨酸酶催化酚类化合物形成不溶于水的高聚物,从而去除酚类物质。

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