一种从竹叶中制备竹叶多酚的方法与流程

本发明涉及竹叶萃取物，具体涉及一种从竹叶中制备竹叶多酚的方法。

背景技术：

竹子在我国分布广泛，其叶不仅具有观赏价值，还有重要的药用价值，是中医常用的一味清热解毒中药。多酚类化合物竹叶多酚是竹叶中重要的活性成分，主要由酚酸类化合物和黄酮类化合物等组成。竹叶中的酚酸常见的有绿原酸、咖啡酸、对香豆酸和阿魏酸等，不仅具有清除体内自由基、消除疲劳、调节机体免疫力、抗衰老、保护肝脏、调节血脂、防治心血管病等功效，还具有抑菌消炎、促进表皮细胞增殖、修复皮肤损伤、抑制黑色素合成和消斑美白的活性。竹叶中的黄酮主要包括异荭草苷和荭草苷等，不仅具有抗氧化、抗病毒和抗肿瘤等功效，还具有治疗肠道疾病和预防治疗糖尿病的作用。因此，对竹叶中的酚酸和黄酮进行同时分离，制备两者含量都很高的竹叶多酚，在食品添加剂和保健品等领域具有重要意义。

竹叶多酚的分离方法中，目前最常见的是树脂吸附法，但是由于竹叶中酚酸类化合物和黄酮类化合物的极性相差较大，对于某一吸附树脂分离得到的竹叶多酚，存在黄酮含量很高而酚酸很低的问题，或者相反。目前尚无方法可以从竹叶提取物中同时分离出酚酸和黄酮含量都很高的竹叶多酚，限制了该产品的使用。因此，急需发展一种能够从竹叶中同时提取分离酚酸和黄酮的制备竹叶多酚的方法。

技术实现要素：

针对现有技术中存在的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种从竹叶中制备竹叶多酚的方法，该方法制备的竹叶多酚不但其得率较高，而且其中的竹叶酚酸和竹叶黄酮含量均较高，该方法还具有操作简便、环保的优点。

本发明解决上述技术问题的方案是：

一种从竹叶中制备竹叶多酚的方法，该方法由以下步骤组成：

(1)取竹叶粉末，按1g∶10～20ml的固液比加入体积浓度为30％～70％的乙醇溶液，超声提取，提取液经滤膜过滤，得到粗提液；

(2)按1ml粗提液加入0.2～0.5g氧化锆的比例往粗提液中加入氧化锆，摇床振荡1～4小时，离心分离出液体，收集氧化锆；

其中，所述的氧化锆为单斜晶系和立方相的混合物，其红外光谱数据(kbr)为：500-850，1200-1460，1460-1680(cm^-1)；

上述氧化锆由以下方法制得：

a)将zrocl2·8h2o溶于去离子h2o，配制成zrocl2的浓度为0.2～0.6mol/l的溶液，搅拌下缓慢加入28％wt的氨水，直到ph为10；得到的白色悬浊液继续搅拌，直至完全析出白色沉淀；

b)将白色沉淀物用去离子水洗涤至ph＝7，放入烘箱中110℃下烘干，再置于马弗炉中300～600℃煅烧2小时，即得白色的氧化锆；

(3)将所收集的氧化锆用乙醇洗涤后，按0.1g∶1ml的固液比往洗涤后的氧化锆中加入体积比为醋酸︰去离子水＝1︰1～9︰1的醋酸水溶液，摇床振荡1～4小时，离心分离得到脱附液，滤膜过滤，滤液冷冻干燥，即得竹叶多酚。

本发明所述从竹叶中制备竹叶多酚的方法中，所述的超声提取的功率与物料体积比为2.5～5w∶1ml，超声提取的时间为40～80分钟。

本发明所述从竹叶中制备竹叶多酚的方法中，步骤(2)和(3)中所述的摇床震荡的工作温度均为37℃，转速均为150rpm。

本发明所述的从竹叶中制备竹叶多酚的方法使用竹叶为原料，在乙醇溶液中超声提取后，选择氧化锆为吸附剂，经过吸附、洗涤、脱附和冻干，可制备纯度大于80％的竹叶多酚，其中酚酸类化合物含量大于45％，黄酮类化合物含量大于35％，并且得率也达到0.80％以上。

本发明所述的方法除乙醇和醋酸外，没有使用其他任何有机试剂，是一种环境友好型的分离方法。本发明方法操作简单、无需投入昂贵的生产设施、产品成本低，适于工业化生产。

附图说明

图1为本发明实施例1中制备的氧化锆的红外光谱图。

图2为本发明实施例1中制备的氧化锆的x-射线晶体衍射图。

图3为本发明实施例1中制得的竹叶多酚的hplc图谱与标准品hplc图谱对比图。

具体实施方式

实施例1

一、氧化锆的制备

1、固体zrocl2·8h2o(12.89g，0.04mol)溶于94ml的去离子水后(zrocl2浓度为0.4mol/l)，逐滴加入28％wt的氨水，直到ph＝10，得到的白色悬浊液继续在室温下搅拌1小时；

2、3500rpm离心得到的白色沉淀用去离子水洗涤至ph＝7，在烘箱中110℃加热12h，再于马弗炉中400℃煅烧2小时，即得白色氧化锆。

二、氧化锆的表征

1、步骤一制备的氧化锆使用红外光谱仪检测后，其红外光谱(kbr)如附图1所示，其红外光谱数据(kbr)为：500-850，1200-1460，1460-1680(cm^-1)；

2、步骤一制备的氧化锆使用x晶体衍射仪检测后，其xrd图谱如附图2所示：本方法制备的氧化锆为单斜晶系和立方相的混合物。

三、竹叶多酚的制备

1、取过40目筛的毛竹叶粉末1g，加入体积浓度为70％的乙醇溶液10ml，在50w/45khz下超声提取60分钟；提取液经0.45μm滤膜过滤后，得到粗提液。

2、按1ml粗提液加入0.4g步骤一得到的氧化锆，在37℃/150rpm的条件下，于震荡摇床上振荡吸附1小时；4000rpm离心1分钟，收集分离出的氧化锆。

3、将收集的氧化锆用4ml乙醇洗涤2次，然后按0.1g∶1ml的固液比往洗涤后的氧化锆中加入体积浓度为70％的醋酸去离子水溶液，在37℃/150rpm条件下，于震荡摇床上振荡脱附1小时；4000rpm离心1分钟后，得到的脱附液用0.22μm滤膜过滤，滤液经冷冻干燥后得到浅黄色粉末状的竹叶多酚13.5mg。

四、竹叶多酚的纯度检测：

将步骤三得到的竹叶多酚溶于0.8％(体积分数)的醋酸水溶液中，使用高效液相色谱仪对样品纯度进行分析。色谱条件如下：色谱柱为安捷伦hc-c18(250×4.6mm，5μm)；流动相a为乙腈，流动相b为0.8％(体积分数)的醋酸水溶液；0～10分钟，流动相a由5％梯度增加到15％；10～20分钟，流动相a保持15％不变，20～25分钟，流动相a由15％梯度增加到20％；25～35分钟，流动相a保持20％不变；35～40分钟，流动相a由20％梯度增加到40％；40～45分钟，流动相a保持40％不变；45～50分钟，流动相由40％梯度减小到5％；50～55分钟，流动相a保持5％不变；检测波长为330nm，流速为1ml/分钟。

检测结果(与新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异荭草苷和荭草苷的标准品hplc图谱的对照图)如附图3所示，表明本实施例制得的浅黄色粉末中竹叶多酚的含量为87％，其中多酚酸类化合物含量为48％，黄酮类含量为39％，竹叶多酚的得率为1.17％。

其中，所述竹叶多酚的得率(％)＝(竹叶多酚冻干粉质量×冻干粉中总多酚的百分含量)/竹叶干重×100(1)

所述竹叶多酚包括竹叶酚酸和竹叶黄酮，其含量分别按以下公式计算：

竹叶多酚含量(％)＝竹叶多酚色谱峰面积/所有色谱峰面积×100(2)

竹叶酚酸含量(％)＝竹叶酚酸色谱峰面积/所有色谱峰面积×100(3)

所述竹叶酚酸包括新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸3种主要酚酸类化合物。

竹叶黄酮含量(％)＝竹叶黄酮色谱峰面积/所有色谱峰面积×100(4)

所述竹叶黄酮包括异荭草苷和荭草苷2种主要黄酮类化合物。

实施例2

一、氧化锆的制备：

本实例中氧化锆的制备方法与实施例1的不同之处在于：zrocl2的浓度为0.6mol/l，氧化锆的煅烧温度为500度，其余步骤与实施例1相同。

二、竹叶多酚的制备：

1、取过40目筛的淡竹叶粉末1g，加入体积浓度为50％的乙醇溶液20ml，在50w/45khz下超声提取40分钟；提取液经0.45μm滤膜过滤后，得到粗提液。

2、按1ml粗提液加入0.2g氧化锆的比例往粗提液中加入步骤一得到的氧化锆，在37℃/150rpm的条件下，于震荡摇床上振荡吸附2小时；4000rpm离心1分钟，收集分离出的氧化锆。

3、将收集的氧化锆用4ml乙醇洗涤2次，然后按0.1g∶1ml的固液比往洗涤后的氧化锆中加入体积浓度为90％的醋酸去离子水溶液，在37℃/150rpm条件下，于震荡摇床上振荡脱附2小时；4000rpm离心1分钟后，得到的脱附液用0.22μm滤膜过滤，滤液经冷冻干燥后得到浅黄色粉末状竹叶多酚10.2mg。

采用实施例1同样的方法进行含量检测，结果显示，所得到的浅黄色粉末中竹叶多酚的含量为83％，其中多酚类化合物含量为47％，黄酮类含量为36％，竹叶多酚的得率为0.85％。

实施例3

一、氧化锆的制备：

本实例中氧化锆的制备方法与实施例1的不同之处在于：zrocl2的浓度为0.8mol/l，氧化锆的煅烧温度为300度，其余步骤与实施例1相同。

二、竹叶多酚的制备：

1、取过40目筛的淡竹叶粉末1g，加入体积浓度为70％的乙醇溶液15ml，在50w/45khz下超声提取50分钟；提取液经0.45μm滤膜过滤后，得到粗提液。

2、按1ml粗提液加入0.3g氧化锆的比例往粗提液中加入步骤一得到的氧化锆，在37℃/150rpm的条件下，于震荡摇床上振荡吸附4小时；4000rpm离心1分钟，收集分离出的氧化锆。

3、将收集的氧化锆用4ml乙醇洗涤2次，然后按0.1g∶1ml的固液比往洗涤后的氧化锆中加入体积浓度为50％的醋酸去离子水溶液，在37℃/150rpm条件下，于震荡摇床上振荡脱附4小时；4000rpm离心1分钟后，得到的脱附液用0.22μm滤膜过滤，滤液经冷冻干燥后得到浅黄色粉末状竹叶多酚11.3mg。

采用实施例1同样的方法进行含量检测，结果显示，所得到的浅黄色粉末中竹叶多酚的含量为86％，其中多酚类化合物含量为46％，黄酮类含量为40％，竹叶多酚的得率为0.97％。

实施例4

一、氧化锆的制备：

本实例中氧化锆的制备方法与实施例1的不同之处在于：zrocl2的浓度为0.6mol/l，氧化锆的煅烧温度为600度，其余步骤与实施例1相同。

二、竹叶多酚的制备：

1、取过40目筛的毛竹叶粉末1g，加入体积浓度为30％的乙醇溶液10ml，在50w/45khz下超声提取40分钟；提取液经0.45μm滤膜过滤后，得到粗提液。

2、按1ml粗提液加入0.3g氧化锆的比例往粗提液中加入步骤一得到的氧化锆，在37℃/150rpm的条件下，于震荡摇床上振荡吸附1小时；4000rpm离心1分钟，收集分离出的氧化锆。

3、将收集的氧化锆用4ml乙醇洗涤2次，然后按0.1g∶1ml的固液比往洗涤后的氧化锆中加入体积浓度为70％的醋酸去离子水溶液，在37℃/150rpm条件下，于震荡摇床上振荡脱附1小时；4000rpm离心1分钟后，得到的脱附液用0.22μm滤膜过滤，滤液经冷冻干燥后得到浅黄色粉末状竹叶多酚9.86mg。

采用实施例1同样的方法进行含量检测，结果显示，所得到的浅黄色粉末中竹叶多酚的含量为83％，其中多酚类化合物含量为46％，黄酮类含量为37％，竹叶多酚的得率为0.82％。

实施例5

一、氧化锆的制备：

本实例中氧化锆的制备方法与实施例1相同。

二、竹叶多酚的制备：

1、取过40目筛的毛竹叶粉末1g，加入体积浓度为70％的乙醇溶液10ml，在50w/45khz下超声提取60分钟；提取液经0.45μm滤膜过滤后，得到粗提液。

2、按1ml粗提液加入0.4g氧化锆的比例往粗提液中加入步骤一得到的氧化锆，在37℃/150rpm的条件下，于震荡摇床上振荡吸附1小时；4000rpm离心1分钟，收集分离出的氧化锆。

3、将收集的氧化锆用4ml乙醇洗涤2次，然后按0.1g∶1ml的固液比往洗涤后的氧化锆中加入体积浓度为90％的醋酸去离子水溶液，在37℃/150rpm条件下，于震荡摇床上振荡脱附1小时；4000rpm离心1分钟后，得到的脱附液用0.22μm滤膜过滤，滤液经冷冻干燥后得到浅黄色粉末状竹叶多酚12.1mg。

采用实施例1同样的方法进行含量检测，结果显示，所得到的浅黄色粉末中竹叶多酚的含量为85％，其中多酚类化合物含量为48％，黄酮类含量为37％，竹叶多酚的得率为1.03％。

实施例6

一、氧化锆的制备：

本实例中氧化锆的制备方法与实施例1的相同。

二、竹叶多酚的制备：

1、取过40目筛的毛竹叶粉末1g，加入体积浓度为70％的乙醇溶液20ml，在50w/45khz下超声提取80分钟；提取液经0.45μm滤膜过滤后，得到粗提液。

2、按1ml粗提液加入0.5g氧化锆的比例往粗提液中加入步骤一得到的氧化锆，在37℃/150rpm的条件下，于震荡摇床上振荡吸附1小时；4000rpm离心1分钟，收集分离出的氧化锆。

3、将收集的氧化锆用4ml乙醇洗涤2次，然后按0.1g∶1ml的固液比往洗涤后的氧化锆中加入体积浓度为50％的醋酸去离子水溶液，在37℃/150rpm条件下，于震荡摇床上振荡脱附1小时；4000rpm离心1分钟后，得到的脱附液用0.22μm滤膜过滤，滤液经冷冻干燥后得到浅黄色粉末状竹叶多酚10.5mg。

采用实施例1同样的方法进行含量检测，结果显示，所得到的浅黄色粉末中竹叶多酚的含量为82％，其中多酚类化合物含量为46％，黄酮类含量为36％，竹叶多酚的得率为0.86％。