本发明涉及一种亚硝酸盐降解菌的培养方法。
背景技术：
目前污水中，都会含有亚硝酸盐，但是在污水中对亚硝酸盐如何清洁有效的去除，尚处于研究阶段。经检索并非发现相关文献。
技术实现要素：
为克服现有技术的缺陷，本发明提供一种亚硝酸盐降解菌的培养方法，本发明的技术方案是：
一种亚硝酸盐降解菌的培养方法，包括以下步骤：
(1)制备营养琼脂培养基，具体制备方法如下：称取蛋白胨10份，牛肉膏粉5份，琼脂粉18份，氯化钠5份，按照配比进行混合，混合后在微波炉中加热，加热时间：1-2min，加热温度：70-80℃，至琼脂粉完全融化为止，放入高压灭菌锅进行灭菌，灭菌温度121℃，时间30min，然后在生物安全柜内倒入已灭菌的干燥培养皿内，每个培养皿倒入15ml，将倒好培养基的培养皿放在安全柜内至冷却，冷却时间：4-5h，冷却温度：室温25℃，冷却后可放入冰箱冷藏备用；
(2)将亚硝酸盐降解菌活化在营养肉汤培养基中，所述营养肉汤培养基的制备方法如下：称取蛋白胨10份，牛肉膏粉3份，氯化钠5份，然后混合，混合后放入30℃的恒温培养箱培养2天，然后在超净工作台内对肉汤培养基中已活化并生长好的亚硝酸盐降解菌进行平板涂布，同时将亚硝酸盐降解菌溶液浓度进行梯度稀释，分别稀释到10的-2次方，10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。
(3)用移液枪取稀释好的亚硝酸盐降解菌溶液分别200微升，分别注入在培养皿内的营养琼脂培养基上，用涂布棒将亚硝酸盐降解菌溶液涂布均匀，并用记号笔在培养皿的底部进行标注，然后放入35℃的恒温培养箱中，进行培养，1-2天后，观察营养琼脂培养基上亚硝酸盐降解菌的生长情况，用记号笔分别划出培养基上生长的不同形态的亚硝酸盐降解菌，并标注序号，然后对标注的亚硝酸盐降解菌进行平板划线；
(4)将划好的平板放入恒温培养箱，35℃，培养1-2天，观察平板上亚硝酸盐降解菌的生长，并对生长好的亚硝酸盐降解菌进行染色镜检，记录其形态特征，重复该操作，直至显微镜下观察的亚硝酸盐降解菌形态完全纯化为止，将纯化的亚硝酸盐降解菌进行在试管斜面培养基中进行斜面划线保藏。
所述的步骤(2)中具体稀释方法为：用注射器取10ml蒸馏水放入试管中，将蒸馏水进行灭菌，在生物安全柜内，用移液枪取100微升的菌株溶液，注入到无菌蒸馏水的试管中，此时，该试管中的菌株溶液浓度为10的-2次方，同样方法，将菌株溶液分别稀释到10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。
所述的步骤(3)平板划线方法如下：在生物安全柜内，点燃酒精灯，用接种环顶部轻触标序号的亚硝酸盐降解菌，划在营养琼脂培养基上，每一序号的亚硝酸盐降解菌在培养基上划四区，每划一区将接种环放在酒精灯上燃烧，重复操作。
所述的步骤(4)试管斜面培养基的制备方法：称取蛋白胨10份，牛肉膏粉5份，琼脂粉18份，氯化钠5份，按照配比进行混合，混合后在微波炉中加热，加热时间：1-2min，加热温度：70-80℃，至琼脂粉完全融化为止，用10ml的注射器取5ml注入试管中，将试管放入2l的烧杯进行包扎，然后放入高压灭菌锅进行灭菌，灭菌121℃，时间30min，灭菌后，将试管取出摆斜面，斜面的摆放标准是斜面上营养琼脂培养基的长度不超过整个试管长度的2/3，静置8h，待冷凝后，放入冰箱冷藏即可。
本发明的优点是：经过本发明培养的亚硝酸盐降解菌，能够有效的去除亚硝酸盐，而且不会污染环境。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
本发明涉及一种亚硝酸盐降解菌的培养方法，包括以下步骤：
(1)制备营养琼脂培养基，具体制备方法如下：称取蛋白胨10g/l，牛肉膏粉5g/l，琼脂粉18g/l，氯化钠5g/l，按照配比进行混合，混合后在微波炉中加热，加热时间：1-2min，加热温度：70-80℃，至琼脂粉完全融化为止，放入高压灭菌锅进行灭菌，灭菌温度121℃，时间30min，然后在生物安全柜内倒入已灭菌的干燥培养皿内，每个培养皿倒入15ml，将倒好培养基的培养皿放在安全柜内至冷却，冷却时间：4-5h，冷却温度：室温25℃，冷却后可放入冰箱冷藏备用；
(2)将亚硝酸盐降解菌活化在营养肉汤培养基中，所述营养肉汤培养基的制备方法如下：称取蛋白胨10份，牛肉膏粉3份，氯化钠5份，然后混合，混合后放入30℃的恒温培养箱培养2天，然后在超净工作台内对肉汤培养基中已活化并生长好的亚硝酸盐降解菌进行平板涂布，同时将亚硝酸盐降解菌溶液浓度进行梯度稀释，分别稀释到10的-2次方，10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。
(3)用移液枪取稀释好的亚硝酸盐降解菌溶液分别200微升，分别注入在营养琼脂培养基上，用涂布棒将亚硝酸盐降解菌溶液涂布均匀，并用记号笔在培养皿的底部进行标注(标注温度、日期等)，然后放入35℃的恒温培养箱中，进行培养，1-2天后，观察培养基上亚硝酸盐降解菌的生长情况，用记号笔分别划出培养基上生长的不同形态的亚硝酸盐降解菌，并标注序号，然后对标注的亚硝酸盐降解菌进行平板划线；
(4)将划好的平板放入恒温培养箱，35℃，培养1-2天，观察平板上亚硝酸盐降解菌的生长，并对生长好的亚硝酸盐降解菌进行染色镜检，记录其形态特征，重复该操作，直至显微镜下观察的亚硝酸盐降解菌形态完全纯化为止，将纯化的亚硝酸盐降解菌进行在试管斜面培养基中进行斜面划线保藏。
所述的步骤(2)中具体稀释方法为：用注射器取10ml蒸馏水放入试管中，将蒸馏水进行灭菌，在生物安全柜内，用移液枪取100微升的菌株溶液，注入到无菌蒸馏水的试管中，此时，该试管中的菌株溶液浓度为10的-2次方，同样方法，将菌株溶液分别稀释到10的-4次方、10的-6次方以及10的-8次方。
所述的步骤(3)平板划线方法如下：在生物安全柜内，点燃酒精灯，用接种环顶部轻触标序号的亚硝酸盐降解菌，划在营养琼脂培养基上，每一序号的亚硝酸盐降解菌在培养基上划四区，每划一区将接种环放在酒精灯上燃烧，重复操作。
所述的步骤(4)试管斜面培养基的制备方法：称取蛋白胨10份，牛肉膏粉5份，琼脂粉18份，氯化钠5份，按照配比进行混合，混合后在微波炉中加热，加热时间：1-2min，加热温度：70-80℃，至琼脂粉完全融化为止，用10ml的注射器取5ml注入试管中，将试管放入2l的烧杯进行包扎，然后放入高压灭菌锅进行灭菌，灭菌121℃，时间30min，灭菌后，将试管取出摆斜面，斜面的摆放标准是斜面上营养琼脂培养基的长度不超过整个试管长度的2/3，静置8h，待冷凝后，放入冰箱冷藏即可。
实施例：取带有1l亚硝酸盐的溶液，其中，亚硝酸盐的含量为0.138g，接入该亚硝酸盐降解菌1ml后，亚硝酸盐的含量为0.011g/l，推算得知，本方法培养的纯化后的亚硝酸盐降解菌对亚硝酸盐的去除率达到90％以上。