本发明涉及一种生物工程技术，尤其涉及一种花生蛋白多肽及其应用。
背景技术：
花生中的蛋白质含量约为25％-36％，高于芝麻和油菜，仅次于大豆。花生蛋白是一种营养价值很高的完全蛋白，属于食用植物蛋白质，其生物价(bv)为58，效率值为117，含有人体所需的8种必需氨基酸,尤其富含精氨酸(9％)，而精氨酸具有免疫促进功能，对维护人体健康和幼儿发育具有重要作用。研究发现,蛋白质经水解制得的肽有比蛋白质更好的营养性能,实验证实肽的吸收率比氨基酸高，比氨基酸更易、更快通过小肠黏膜被人体吸收利用。花生蛋白活性多肽在营养保健领域具有多种卓越的生理功能，一是多肽可由肠道不经降解直接吸收，吸收速度和吸收率比蛋白质和氨基酸都高，因而可作为肠道营养剂和流质食物的形式提供给处于特殊身体状况下的人群；二是它不仅提供人体必须的蛋白营养，还能有效降低血液中胆固醇和甘油三脂的含量，加快体内耗能，燃烧脂肪，抵抗肥胖；三是花生蛋白活性多肽能够为人体提供丰富的氨基酸，促进蛋白质合成，抑制核糖核酸酶活性下降，清除人体内的自由基与重金属，改善细胞代谢，为免疫系统制备对抗细菌和感染的抗体，提高人体免疫功能。
花生本身药用价值高，高蛋白，是一种潜在的植物蛋白资源，但是目前对花生蛋白的研究主要集中在花生蛋白抗氧化性能、免疫功能等方面，而对具有降脂功能的花生蛋白的研究却报道尚少。因此利用现代食品生物技术对花生降脂蛋白进行深度开发，制备出具有保健作用的功能食品，不仅可提高现有资源的利用率，为花生蛋白的深度研究提供一条新的途径，增加农民的经济效益；而且可增强花生种植和食品加工企业的科技含量和市场竞争力，对提高我国水产品现代化综合加工技术水平和发展保健食品工业具有重要的社会意义和经济效益。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成己为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现要素：
为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种花生蛋白多肽。通过改进花生蛋白多肽的酶解工艺与技术，采用超波辅助酶解技术，制备具有降脂活性的多肽，本发明制备的花生降脂肽的肽得率高，纯度高。
本发明的目的之二在于一种花生蛋白多肽在复方花生蛋白多肽酒中的应用。本发明的复方花生蛋白多肽以花生蛋白多肽为主要添加的降脂成分，山楂为辅助添加的降脂成分，两者配合使用，能够起到协同增效的作用。
本发明的目的之一采用如下技术方案实现：
一种花生蛋白多肽，为分子量介于3000-6000da的花生降脂肽，该花生降脂肽釆用微波辅助酶解技术制备而得，该制备方法包括如下步骤：
前处理的步骤：
将花生加水润湿，在121℃下蒸煮15min，冷却，粉碎搅拌，制成花生泥；
蛋白质改性的步骤：
称取花生泥，按照固液比1:10加入碱液，然后调ph值至8.2-8.5，在45-55℃下，微波处理10分钟，之后保温20min，ph值保持在8.5以下，离心，取上层清液，加入酸液，调ph值至4-4.5，微波处理10分钟，之后保温20min，ph值保持在4.5以下，离心，取下层沉淀，溶解，得到改性花生蛋白溶液；
一次酶解的步骤：
以改性花生蛋白溶为底物，用盐酸调ph值至7.5，按照底物质量百分比为0.5-0.8％加入自制蛋白酶拌匀，然后在55℃下，微波处理20分钟，ph值保持在7.5以下；
二次酶解的步骤：
经过第一次酶解处理后，将第一次酶解液降至常温，再次调节ph值至7.5，按照底物质量百分比为0.8-1.2％加入自制蛋白酶拌匀，在55℃下，微波处理20分钟，ph值保持在7.5以下，酶解结束；
灭酶的步骤：
酶解结束后再次启动微波加温至90℃，维持10min，得到灭酶水解液；
分离纯化的步骤：
将灭酶活的水解液降至室温，采用sephadexg-15凝胶过滤色谱分离纯化灭酶活的水解液；
高压蒸汽灭菌的步骤：
经分离纯化的水解液在温度为121℃，压力为0.1mpa的条件下高压蒸汽灭菌15min；
浓缩干燥的步骤：
将高压蒸汽灭菌后的水解液调ph值至7.0，进行浓缩低温真空干燥，即得花生降脂肽。
进一步地，在蛋白质改性的步骤中，所述碱液为3mol/lnaoh；所述酸液为3mol/l柠檬酸。
进一步地，在一、二次酶解的步骤中，所述自制蛋白酶为由花生粕作为基础培养基诱导米曲霉分泌的复合蛋白酶。
进一步地，在一、二次酶解的步骤中，所述复合蛋白酶的制作过程如下：过80目筛的麸皮20g，过80目花生粕粉8.0g，面粉2.5g、氯化钙0.028g混入30g纯净水中，装入三角瓶，加塞扎口后于湿热灭菌锅中在121℃下灭菌30min，取出后趁热摇散培养基熟料，自然冷却至室温；然后从米曲霉试管菌种中接种到三角瓶培养基中，30℃恒温培养，每天摇瓶一次，54h结束培养；采用ph值为7.0的0.2m磷酸盐缓冲液在40℃下搅拌1h提取蛋白酶；4℃下离心30min，收集上清液，浓缩冷冻干燥后即得复合蛋白酶。
进一步地，在一、二次酶解的步骤中，所述自制蛋白酶的活力为4.5×105u/g。
进一步地，在蛋白质改性的步骤、一次酶解的步骤、二次酶解的步骤中所述微波的频率为1800mhz，功率为10kw。
进一步地，所述分离纯化的步骤具体如下：用去离子水平衡凝胶层析柱，柱子尺寸为1.6cm×70cm，填料为葡聚糖凝胶树脂sephadexg-15，流速为1.0ml/min；将灭酶活的水解液溶于去离子水配置成20mg/ml的溶液，2ml上柱，用去离子水进行洗脱，洗脱流速为2ml/min，并用分步收集器收集洗脱液，4ml/管，于214nm下检测吸光值，将属于同一峰的收集液混合，然后进行浓缩。
本发明的目的之二采用如下技术方案实现：
一种复方花生蛋白多肽酒的制备方法，由如上所述的花生蛋白多肽酿制而成。包括如下步骤：
辅料中药浸提液的步骤：
取山楂，加入10倍量80℃的纯净水浸泡1h，煮沸1.5h，过滤，滤渣加入8倍量纯净水再次煮沸1h，用旋转蒸发仪减压浓缩至稠膏，备用；
勾兑的步骤：
以浓度为35％米酒为基液，加入40-45％基酒重量的所述花生蛋白多肽以及5-8％基酒重量的山楂稠膏，搅拌均匀，并密封储存2个月；
双频超波陈化的步骤：
在两种超波频率条件下进行轮流超波陈化处理，第一种超波条件：300w、35khz的超波15min；第二种超波条件：300w、45khz的超波15min；共超声2h；
调配检验的步骤：
调整酒精浓度和糖度，储藏，确保酒体清亮透明；然后检验合格后灌装，即得复方花生蛋白多肽酒。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
(1)通过改进花生蛋白多肽的酶解工艺与技术，采用超波辅助酶解技术，制备具有降脂活性的多肽，本发明制备的花生降脂肽的肽得率高，纯度高，可以作为添加剂或活性药物添加至到人类食品、医药、保健品等多种行业和领域，无疑对延长泥鳅产业链，全面提高泥鳅产业综合效益，实现农业增效农民增收农村繁荣，对推动一带一路建设有重大意义。
(2)本发明整个工艺流程短、时间短，能耗低、污染少、不使用有毒试剂、无污染物排放，达到清洁生产目标。
(3)在控制酶解过程中酶的选择是关键，它不仅影响最后产品的生理功能、原料利用率、反应速度，而且也直接影响产品的风味和物理化学特性。酶的选择、酶解过程的控制是酶解法制备活性肽的关键技术。本发明采用由花生粕作为基础培养基诱导米曲霉分泌的复合蛋白酶进行酶解同时配合微波进行辅助酶解，使花生水解产物的水解度和肽得率都较高，而且酶解得到的花生多肽的分子量介于3000-6000da，具有降脂作用。
(4)由本发明sephadexg-15凝胶层析过滤色谱分离纯化得到的花生蛋白多肽的分子量介于3000-6000da，该花生蛋白多肽组分降脂作用强，研究发现，并非肽分子量越小或越大其降脂活性越强，肽的活性也受其氨基酸的组成、排序或肽的空间结构等因素的影响，由本发明纯化得到的分子量介于3000-6000da花生蛋白多肽其降脂活性最强。另外，本发明的分离条件温和、样品回收率高、实验结果重现性高、设备简便经济。
具体实施方式
下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
一种花生蛋白多肽，为分子量介于3000-6000da的花生降脂肽，该花生降脂肽釆用微波辅助酶解技术制备而得，该制备方法包括如下步骤：
前处理的步骤：
将花生加水润湿，在121℃下蒸煮15min，冷却，粉碎搅拌，制成花生泥；
蛋白质改性的步骤：
称取花生泥，按照固液比1:10加入碱液，然后调ph值至8.2-8.5，在45-55℃下，微波处理10分钟，之后保温20min，ph值保持在8.5以下，离心，取上层清液，加入酸液，调ph值至4-4.5，微波处理10分钟，之后保温20min，ph值保持在4.5以下，离心，取下层沉淀，溶解，得到改性花生蛋白溶液；碱液为3mol/lnaoh；酸液为3mol/l柠檬酸。微波的频率为1800mhz，功率为10kw。
一次酶解的步骤：
以改性花生蛋白溶为底物，用盐酸调ph值至7.5，按照底物质量百分比为0.5-0.8％加入自制蛋白酶拌匀，然后在55℃下，微波处理20分钟，ph值保持在7.5以下；微波的频率为1800mhz，功率为10kw。
二次酶解的步骤：
经过第一次酶解处理后，将第一次酶解液降至常温，再次调节ph值至7.5，按照底物质量百分比为0.8-1.2％加入自制蛋白酶拌匀，在55℃下，微波处理20分钟，ph值保持在7.5以下，酶解结束；微波的频率为1800mhz，功率为10kw。
在一、二次酶解的步骤中，自制蛋白酶为由花生粕作为基础培养基诱导米曲霉分泌的复合蛋白酶。自制蛋白酶的活力为4.5×105u/g。复合蛋白酶的制作过程如下：过80目筛的麸皮20g，过80目花生粕粉8.0g，面粉2.5g、氯化钙0.028g混入30g纯净水中，装入三角瓶，加塞扎口后于湿热灭菌锅中在121℃下灭菌30min，取出后趁热摇散培养基熟料，自然冷却至室温；然后从米曲霉试管菌种中接种到三角瓶培养基中，30℃恒温培养，每天摇瓶一次，54h结束培养；采用ph值为7.0的0.2m磷酸盐缓冲液在40℃下搅拌1h提取蛋白酶；4℃下离心30min，收集上清液，浓缩冷冻干燥后即得复合蛋白酶。
蛋白质酶解是指蛋白质在蛋白酶的作用下降解成肽或者氨基酸的过程。酶解是改造蛋白质，提高蛋白质价值的最有效途径之一。但不同的蛋白酶作用相同的蛋白源，获得的蛋白酶解液产物的特性相差甚远，这是因为不同的蛋白酶具有不同的催化机制和蛋白酶功能基团。
花生含有大量的碳水化合物，其中有部分水溶性多糖，这些多糖会与花生蛋白发生蛋白-多糖接枝反应，生成聚合物，降低蛋白酶与蛋白质的接触机率，降低酶解效率；同时水不溶性纤维容易吸收膨胀，减少水解体系中的溶剂，增加黏度，除了会降低蛋白酶与蛋白质的接触几率，还会因黏度过高而降低体系中的氧含量，增加感染微生物的可能，从而影响酶解效果。
本发明在制备自制蛋白酶的过程中，花生粕作为氮源促进米曲霉的生长，米曲霉不能直接利用花生粕中的蛋白质，必须分泌出蛋白酶将蛋白质降解成小分子肽或氨基酸才能吸收利用，在米曲霉生长过程中，为了从培养基中获取营养，米曲霉除了会分泌蛋白酶外，还会分泌一系列其他的酶，如糖化酶和纤维素酶。
在花生水解的过程中，蛋白酶、糖化酶和纤维素酶会将结合在蛋白上面的多糖水解成寡糖或单糖，从蛋白质中分离开来，还会将体系中的纤维素水解成多糖或寡糖，降低体系的黏度，加速蛋白质水解的进行。可见，本发明采用由花生粕作为基础培养基诱导米曲霉分泌的复合蛋白酶进行酶解同时配合微波进行辅助酶解，使花生水解产物的水解度和肽得率都较高，而且酶解得到的花生多肽的分子量介于3000-6000da，具有降脂作用。
灭酶的步骤：
酶解结束后再次启动微波加温至90℃，维持10min，得到灭酶水解液；
分离纯化的步骤：
将灭酶活的水解液降至室温，采用sephadexg-15凝胶过滤色谱分离纯化灭酶活的水解液；分离纯化的步骤具体如下：用去离子水平衡凝胶层析柱，柱子尺寸为1.6cm×70cm，填料为葡聚糖凝胶树脂sephadexg-15，流速为1.0ml/min；将灭酶活的水解液溶于去离子水配置成20mg/ml的溶液，2ml上柱，用去离子水进行洗脱，洗脱流速为2ml/min，并用分步收集器收集洗脱液，4ml/管，于214nm下检测吸光值，将属于同一峰的收集液混合，然后进行浓缩。
凝胶过滤色谱是利用具网状结构的凝胶的分子筛作用，据被分离物的分子量大小不同来进行分离。当混合肽溶液通过凝胶柱时，由于凝胶含有大量微孔，只允许缓冲液和相对分子质量较小的肽进入其中，而相对分子质量较大的肽却被排阻在凝胶颗粒外部，在填料间隙中流动，比相对分子质量较小的肽更早地被洗脱下来，待分离的肽组分就按不同相对分子质量被筛分开来。
由本发明sephadexg-15凝胶层析过滤色谱分离纯化得到的花生蛋白多肽的分子量介于3000-6000da，该花生蛋白多肽组分降脂作用强，研究发现，并非肽分子量越小或越大其降脂活性越强，肽的活性也受其氨基酸的组成、排序或肽的空间结构等因素的影响，由本发明纯化得到的分子量介于3000-6000da花生蛋白多肽其降脂活性最强。另外，本发明的分离条件温和、样品回收率高、实验结果重现性高、设备简便经济。
高压蒸汽灭菌的步骤：
经分离纯化的水解液在温度为121℃，压力为0.1mpa的条件下高压蒸汽灭菌15min；杀菌处理是肽类物质在加工过程中的关键环节，恰当的杀菌工艺不仅能杀灭微生物、钝化酶的活性，延长肽类物质的保质时间，另外，还能生成一些特殊的活性物质，对降脂作用有一定辅助作用。
浓缩干燥的步骤：
将高压蒸汽灭菌后的水解液调ph值至7.0，进行浓缩低温真空干燥，即得花生降脂肽。
一种复方花生蛋白多肽酒的制备方法，由如上的花生蛋白多肽酿制而成。包括如下步骤：
辅料中药浸提液的步骤：
取山楂，加入10倍量80℃的纯净水浸泡1h，煮沸1.5h，过滤，滤渣加入8倍量纯净水再次煮沸1h，用旋转蒸发仪减压浓缩至稠膏，备用；
勾兑的步骤：
以浓度为35％米酒为基液，加入40-45％基酒重量的花生蛋白多肽以及5-8％基酒重量的山楂稠膏，搅拌均匀，并密封储存2个月；
双频超波陈化的步骤：
在两种超波频率条件下进行轮流超波陈化处理，第一种超波条件：300w、35khz的超波15min；第二种超波条件：300w、45khz的超波15min；共超声2h；
调配检验的步骤：
调整酒精浓度和糖度，储藏，确保酒体清亮透明；然后检验合格后灌装，即得复方花生蛋白多肽酒。
本发明的多肽酒的检测指标包括企标感官与理化指标，如表1-2：
表1感官要求
表2检验理化指标
山楂为蔷薇科植物山楂的干燥成熟果实。味酸甘，性微温。山楂果实含山楂酸、苹果酸、枸橼酸、咖啡酸、内脂、脂肪、金丝桃苷、解脂酶、鞣质、蛋白质、槲皮素、核黄素、胡萝卜素、糖类及维生素类等多种成分。经临床研究证实，山楂能够显著地降低血脂和胆固醇、抗脂质过氧化，有效地防治动脉粥样硬化。花生蛋白多肽与山楂均有降脂的作用，本发明以花生蛋白多肽为主要添加的降脂成分，山楂为辅助添加的降脂成分，两者配合使用，能够起到协同增效的作用。
另外，超波陈化采用双频条件下进行陈化，由于双频率的超声波使酒液内部出现两种波的加强点和减弱点，在两种不同波的减弱点处，由于其相对压力较小，因此容易形成不同微小的气泡，而当这些气泡运动到两种不同波的加强点时，由于压力较大，而使这些气泡破裂。在气泡的生成和破裂过程中产生了两种巨大的能量，加速了酒液中各成分分子健的断裂和生成，提高了分子间的有效碰撞率，增强了极性分子间的亲合力，不仅增强了酒精分子与水分子之间的缔合度，而且可能形成更大且牢固的极性分子间的缔合群，从而使酒液中醇类、醛类、酸类以及酯类获得巨大的能量，加速发生聚合、醛化、酸化、酯化以及裂解等一系列复杂反应，令体系中的酯类分子产生，某些酯类及酸类等成分也可能奉与这种缔合群，加速酒液的熟化，使酒在香气、口感上都能更加上乘。
实施例1
一种花生蛋白多肽，为分子量介于3000-6000da的花生降脂肽，该花生降脂肽釆用微波辅助酶解技术制备而得，该制备方法包括如下步骤：
前处理的步骤：
将花生加水润湿，在121℃下蒸煮15min，冷却，粉碎搅拌，制成花生泥；
蛋白质改性的步骤：
称取花生泥，按照固液比1:10加入碱液，然后调ph值至8.3，在45-55℃下，微波处理10分钟，之后保温20min，ph值保持在8.5以下，离心，取上层清液，加入酸液，调ph值至4.3，微波处理10分钟，之后保温20min，ph值保持在4.5以下，离心，取下层沉淀，溶解，得到改性花生蛋白溶液；碱液为3mol/lnaoh；酸液为3mol/l柠檬酸。微波的频率为1800mhz，功率为10kw。
一次酶解的步骤：
以改性花生蛋白溶为底物，用盐酸调ph值至7.5，按照底物质量百分比为0.5-0.8％加入自制蛋白酶拌匀，然后在55℃下，微波处理20分钟，ph值保持在7.5以下；微波的频率为1800mhz，功率为10kw。
二次酶解的步骤：
经过第一次酶解处理后，将第一次酶解液降至常温，再次调节ph值至7.5，按照底物质量百分比为0.8-1.2％加入自制蛋白酶拌匀，在55℃下，微波处理20分钟，ph值保持在7.5以下，酶解结束；微波的频率为1800mhz，功率为10kw。
在一、二次酶解的步骤中，自制蛋白酶为由花生粕作为基础培养基诱导米曲霉分泌的复合蛋白酶。自制蛋白酶的活力为4.5×105u/g。复合蛋白酶的制作过程如下：过80目筛的麸皮20g，过80目花生粕粉8.0g，面粉2.5g、氯化钙0.028g混入30g纯净水中，装入三角瓶，加塞扎口后于湿热灭菌锅中在121℃下灭菌30min，取出后趁热摇散培养基熟料，自然冷却至室温；然后从米曲霉试管菌种中接种到三角瓶培养基中，30℃恒温培养，每天摇瓶一次，54h结束培养；采用ph值为7.0的0.2m磷酸盐缓冲液在40℃下搅拌1h提取蛋白酶；4℃下离心30min，收集上清液，浓缩冷冻干燥后即得复合蛋白酶。
灭酶的步骤：
酶解结束后再次启动微波加温至90℃，维持10min，得到灭酶水解液；
分离纯化的步骤：
将灭酶活的水解液降至室温，采用sephadexg-15凝胶过滤色谱分离纯化灭酶活的水解液；分离纯化的步骤具体如下：用去离子水平衡凝胶层析柱，柱子尺寸为1.6cm×70cm，填料为葡聚糖凝胶树脂sephadexg-15，流速为1.0ml/min；将灭酶活的水解液溶于去离子水配置成20mg/ml的溶液，2ml上柱，用去离子水进行洗脱，洗脱流速为2ml/min，并用分步收集器收集洗脱液，4ml/管，于214nm下检测吸光值，将属于同一峰的收集液混合，然后进行浓缩。
高压蒸汽灭菌的步骤：
经分离纯化的水解液在温度为121℃，压力为0.1mpa的条件下高压蒸汽灭菌15min；
浓缩干燥的步骤：
将高压蒸汽灭菌后的水解液调ph值至7.0，进行浓缩低温真空干燥，即得花生降脂肽。
实施例2
一种花生蛋白多肽，为分子量介于3000-6000da的花生降脂肽，该花生降脂肽釆用微波辅助酶解技术制备而得，该制备方法包括如下步骤：
前处理的步骤：
将花生加水润湿，在121℃下蒸煮15min，冷却，粉碎搅拌，制成花生泥；
蛋白质改性的步骤：
称取花生泥，按照固液比1:10加入碱液，然后调ph值至8.2，在45-55℃下，微波处理10分钟，之后保温20min，ph值保持在8.5以下，离心，取上层清液，加入酸液，调ph值至4，微波处理10分钟，之后保温20min，ph值保持在4.5以下，离心，取下层沉淀，溶解，得到改性花生蛋白溶液；
一次酶解的步骤：
以改性花生蛋白溶为底物，用盐酸调ph值至7.5，按照底物质量百分比为0.5-0.8％加入自制蛋白酶拌匀，然后在55℃下，微波处理20分钟，ph值保持在7.5以下；
二次酶解的步骤：
经过第一次酶解处理后，将第一次酶解液降至常温，再次调节ph值至7.5，按照底物质量百分比为0.8-1.2％加入自制蛋白酶拌匀，在55℃下，微波处理20分钟，ph值保持在7.5以下，酶解结束；
灭酶的步骤：
酶解结束后再次启动微波加温至90℃，维持10min，得到灭酶水解液；
分离纯化的步骤：
将灭酶活的水解液降至室温，调ph值至7.5，采用sephadexg-15凝胶过滤色谱分离纯化灭酶活的水解液；
高压蒸汽灭菌的步骤：
经分离纯化的水解液在温度为121℃，压力为0.1mpa的条件下高压蒸汽灭菌15min；
浓缩干燥的步骤：
将高压蒸汽灭菌后的水解液调ph值至7.0，进行浓缩低温真空干燥，即得花生降脂肽。
实施例3
一种花生蛋白多肽，为分子量介于3000-6000da的花生降脂肽，该花生降脂肽釆用微波辅助酶解技术制备而得，该制备方法包括如下步骤：
前处理的步骤：
将花生加水润湿，在121℃下蒸煮15min，冷却，粉碎搅拌，制成花生泥；
蛋白质改性的步骤：
称取花生泥，按照固液比1:10加入碱液，然后调ph值至8.5，在45-55℃下，微波处理10分钟，之后保温20min，ph值保持在8.5以下，离心，取上层清液，加入酸液，调ph值至4.5，微波处理10分钟，之后保温20min，ph值保持在4.5以下，离心，取下层沉淀，溶解，得到改性花生蛋白溶液；
一次酶解的步骤：
以改性花生蛋白溶为底物，用盐酸调ph值至7.5，按照底物质量百分比为0.5-0.8％加入自制蛋白酶拌匀，然后在55℃下，微波处理20分钟，ph值保持在7.5以下；
二次酶解的步骤：
经过第一次酶解处理后，将第一次酶解液降至常温，再次调节ph值至7.5，按照底物质量百分比为0.8-1.2％加入自制蛋白酶拌匀，在55℃下，微波处理20分钟，ph值保持在7.5以下，酶解结束；
灭酶的步骤：
酶解结束后再次启动微波加温至90℃，维持10min，得到灭酶水解液；
分离纯化的步骤：
将灭酶活的水解液降至室温，调ph值至8.0，采用sephadexg-15凝胶过滤色谱分离纯化灭酶活的水解液；
高压蒸汽灭菌的步骤：
经分离纯化的水解液在温度为121℃，压力为0.1mpa的条件下高压蒸汽灭菌15min；
浓缩干燥的步骤：
将高压蒸汽灭菌后的水解液调ph值至7.0，进行浓缩低温真空干燥，即得花生降脂肽。
对比例1
与实施例1的区别在于在一、二次酶解中，不采用本发明的自制蛋白酶，而选用现有的木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶的活力为4.5×105u/g。
对比例2
与实施例1的区别在于去除分离纯化的步骤，其余步骤与参数相同。
实施例4
一种复方花生蛋白多肽酒，由如下步骤制成：
辅料中药浸提液的步骤：
取山楂，加入10倍量80℃的纯净水浸泡1h，煮沸1.5h，过滤，滤渣加入8倍量纯净水再次煮沸1h，用旋转蒸发仪减压浓缩至稠膏，备用；
勾兑的步骤：
以浓度为35％米酒为基液，加入40-45％基酒重量的花生蛋白多肽以及5-8％基酒重量的山楂稠膏，搅拌均匀，并密封储存2个月；
双频超波陈化的步骤：
在两种超波频率条件下进行轮流超波陈化处理，第一种超波条件：300w、35khz的超波15min；第二种超波条件：300w、45khz的超波15min；共超声2h；
调配检验的步骤：
调整酒精浓度和糖度，储藏，确保酒体清亮透明；然后检验合格后灌装，即得复方花生蛋白多肽酒。
对比例3
与实施例4的区别在于去除辅料中药浸提液的步骤，不添加山楂稠膏，其余步骤与参数相同。
对比例4
与实施例4的区别在于去除双频超波陈化的步骤，其余步骤与参数相同。
下面，对本发明制备的花生降脂肽的肽得率、纯度以及降脂作用进行测定与验证。
1、肽得率的测定
采用三氯乙酸(tca)沉淀法与甲醛滴定法相结合进行测定。取10ml酶解液加10ml20％(g/g)tca，搅匀静置半小时后在4800r/min下离心10min，所得的上清液记作上清液tca，分别用凯氏定氮法和甲醛滴定法测定上清液中的总氮含量和氨态氮含量，则肽氮量和肽得率按下式进行计算，结果如表3：
上清液总肽氮量＝上清液tca总氮量－上清液tca总氨态氮量，
肽得率＝上清液总肽氮含量/原料总蛋白氮含量×100％。
2、纯度的测定
以牛血清白蛋白(bsa)为标准品，制成不同浓度的bsa溶液。向7支试管中分别加入5ml考马斯亮蓝染色溶液染色5min。以第1支试管中的溶液为空白对照，测定其余6支试管中溶液在595nm处的吸光度。以蛋白质质量浓度(g·l-1)为横坐标，吸光度为纵坐标，进行线性回归分析。得到的线性回归方程为y＝8.714x+0.025(r＝0.998)，线性范围为0-100μg。结果表明，线性关系良好，可以用来进行蛋白质含量的测定。分别吸取实施例1-3所得的花生蛋白多肽作为供试品，在595nm处测定吸光度，并根据标准曲线计算蛋白质含量，计算蛋白质质量分数/％，结果如表3。
3、降脂作用的验证
胆固醇是人体血液中血脂的重要组成之一，以降胆固醇活性为指标，观察本发明花生降脂肽对三种胆酸盐的影响，对三种胆酸盐的抑制率越高，降胆固醇活性越高，结果如表3。
本实验采用糠醛显色法测定反应过程中花生降脂肽对胆酸盐的络合作用，以花生降脂肽对胆酸盐、脱氧胆酸盐以及牛磺胆酸盐三种胆酸盐的吸附能力为指标，评价花生降脂肽的降胆固醇活性。
采用糠醛显色法测定三种胆酸盐的含量，分别取三种胆酸盐标准溶液，加入40％硫酸溶液，振荡，加入1％糠醛溶液1ml，混匀，60℃温育40min，待温度降到室温后，于620nm波长处测吸光值，以浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制三条标准曲线。取实施例1-6的制品2ml，按照糠醛显色法测其吸光度，由标准曲线计算上清液中三种胆酸盐浓度。计算公式如下：
抑制率(％)＝(p1-p2)/p1×100％
式中：p1分别为三种胆酸盐溶液的初始质量浓度(mg/ml)
p2为吸附后三种胆酸盐溶液的质量浓度(mg/ml)
表3花生降脂肽的肽得率、纯度以及降脂效果
本发明实施例1-3制备的花生降脂肽的肽得率高，纯度高，可以作为添加剂或活性药物添加至到人类食品、医药、保健品等多种行业和领域，无疑对延长花生产业链，全面提高花生产业综合效益，实现农业增效农民增收农村繁荣，对推动一带一路建设有重大意义。而对比例1-2制备的花生降脂肽的肽得率与本发明相比具有较大差异，说明本发明的自制蛋白酶以及分离纯化的步骤对整个肽得率高，纯度高影响较大。
实施例4与5的数据说明，本发明花生蛋白多肽与山楂两者配合使用，能够起到协同增效的作用。不添加山楂，其抑制率会下降将近15％以上，也就是说其降脂效果也会下降；另外，实施例4与6的数据说明，本花生蛋白多肽与山楂两者的协同增效作用跟双频超波陈化的步骤有关，去除双频超波陈化的步骤，其降脂效果也会下降。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。