一种利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体的方法与流程

本发明属于中药活性成分富集分离技术领域，特别涉及一种从玛咖超临界co2提取物中分离玛咖酰胺单体的方法。

背景技术：

玛咖(lepidiummeyeniiwalp.)为十字花科独荇菜属一年或两年生草本植物。玛咖因其独特的抗疲劳、改善性功能及提高生育能力等功效，引起了国内外广泛关注。我国自2002年开始引种，且种植规模越来越大。但目前我国对玛咖的研究存在提取工艺落后、物质基础及药效研究薄弱、标准品数量极少等问题，严重影响了玛咖产业的发展。玛咖中主要活性成分包括玛咖酰胺、玛咖烯、芥子油苷及其分解产物，玛咖酰胺是玛咖中特有的活性成分，有研究表明玛咖酰胺具有很强的生物活性，对于玛咖酰胺类成分来说存在分离过程繁琐复杂，有机溶剂用量大等问题，导致目前玛咖酰胺类成分标准品数量较少且昂贵，这严重限制玛咖的物质基础研究及其相关产品质量控制，影响玛咖进一步的研究开发。因而开发一种简单、快速可分离纯化高纯度玛咖酰胺类成分的方法是当前研究的重点。

单体活性成分分离纯化是中药材研究的最主要内容之一，为药材开展研究的前期基础也是影响研究速度的关键环节，传统分离纯化方法和技术有很多，包括有机溶剂萃取法、重结晶法、升华法、沉淀法和色谱法等，以上方法均存在有机溶剂用量大，制备过程繁琐，生产周期长，制备单体纯度不高及难以工业化推广等不足。

目前公开的关于玛咖酰胺提取方法可得到纯度相对较高的玛咖酰胺混合物，如申请号cn201310247199.3公开的从玛咖中提取玛咖酰胺的工艺方法、申请号cn201410230461.8公开的一种玛咖酰胺的精制方法、申请号cn201410450542.9公开的一种玛咖酰胺的制备方法。针对玛咖酰胺单体分离纯化方法的专利包括申请号cn201601270385.2提出的一种提取玛咖酰胺类化合物的方法(制备出3种玛咖酰胺单体化合物)、申请号为cn201610044901.x提出了一种从玛咖中高效制备玛咖酰胺单体的方法(制备出4种玛咖酰胺单体化合物)、申请号为cn201510568193.5提出了从玛咖中提取纯化玛咖酰胺单体化合物的方法(制备出6种玛咖酰胺单体化合物)，然而这些工艺存在分离过程无法实现实时在线监测，分离过程盲目，灵敏度低，难以保证得到的玛咖酰胺单体的纯度，无法得到低含量的玛咖酰胺单体成分，且无法一次性制备出8种玛咖酰胺单体。

技术实现要素：

为了解决单体活性成分分离纯化的现有技术存在有机溶剂用量大，制备过程繁琐，生产周期长，制备单体纯度不高及难以工业化推广等不足，本发明提供一种利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体的方法。

本发明的目的通过以下技术方案实现：一种利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体的方法，包括以下过程：

步骤一，样品液制备：取玛咖提取物，加入有机溶剂将其溶解并配制成一定浓度的样品液，将样品液过滤，备用；

步骤二，分离纯化：将上述步骤一中制备好的样品液，按一定进样量注入动态轴向压缩工业色谱中，有机溶剂洗脱，用紫外在线检测器检测样品液分离情况，根据每一种玛咖酰胺成分出峰时间及色谱峰的高度，确定所制玛咖酰胺单体的洗脱液收集起止时间，并将洗脱液减压浓缩，真空干燥，得到玛咖酰胺单体。

优选的，所述的一种利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体的方法，所述步骤一中，玛咖提取物中玛咖酰胺含量为5-80％(质量)。

优选的，所述的一种利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体的方法，所述步骤一中，有机溶剂为乙醇溶液、甲醇或乙腈，乙醇溶液的体积分数为70-100％。

优选的，所述的一种利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体的方法，所述步骤一中，样品液配制浓度为50～200mg/ml。

优选的，所述的一种利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体的方法，所述步骤二中，工业色谱填料为c18-100aa、unipsn30-300、nm100中的一种。

优选的，所述的一种利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体的方法，所述步骤二中，紫外在线检测器的检测波长210nm。

优选的，所述的一种利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体的方法，所述步骤二中，有机溶剂为乙醇水溶液、甲醇水溶液体系或乙腈水溶液中的一种。

优选的，所述的一种利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体的方法，所述步骤二中，有机溶剂的体积分数为50-100％。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明将玛咖提取物直接通过动态轴向压缩工业色谱进行分离纯化，得到8种玛咖酰胺单体且纯度可达95％以上，其中8种玛咖酰胺单体为n-(间甲氧基苄基)-亚麻酰胺、n-苄基-亚麻酰胺、n-苄基-亚油酰胺、n-苄基-十五烷酰胺、n-(间甲氧基苄基)-十六烷酰胺、玛咖酰胺b(n-苄基-十六烷酰胺)、n-(间甲氧基苄基)-十八烷酰胺及n-苄基-十八烷酰胺。

本发明利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体，其可实现分离过程实时在线监测，且具有重复性好、操作简单、制备时间短，有机溶剂用量少、分离出玛咖酰胺单体纯度高等优点，并且可以大批量工业化生产，其是目前从多组分复杂体系同时可分离纯化多种玛咖酰胺单体最有效的方法之一。

附图说明

图1为本发明利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体的工艺流程；

图2为实施例1中玛咖超临界co2萃取物动态轴向压缩工业色谱图。

图2中：1n-(间甲氧基苄基)-亚麻酰胺；2n-苄基-亚麻酰胺；3n-苄基-亚油酰胺；4n-苄基-十五烷酰胺；5n-(3-甲氧基苄基)-十六烷酰胺；6玛咖酰胺b；7n-(3-甲氧基苄基)-十八烷酰胺；8n-苄基-十八烷酰胺。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面将通过实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体的方法，包括样品液制备和分离纯化，工艺流程图如1所示，其具体步骤如下：

步骤一，样品液制备：取玛咖超临界co2提取物，其中玛咖超临界co2提取物中玛咖酰胺含量为12％(质量)，加入甲醇将其溶解并配制成200mg/ml浓度样品液，将样品液过滤，备用。

步骤二，分离纯化：将步骤一中制备好的样品液，注入动态轴向压缩工业色谱中，工艺色谱填料为c18-100aa，乙腈-水(体积比95:5)溶液为洗脱剂，紫外检测波长210nm检测各组分的分离情况(如图2)，根据每一种玛咖酰胺成分出峰时间及色谱峰的高度，确定所制玛咖酰胺单体的洗脱液收集起止时间，并将每一种玛咖酰胺洗脱液在60℃减压浓缩至干，回收有机溶剂后40℃真空干燥12h，得到8个纯度大于95％的玛咖酰胺单体化学成分。

实施例2

一种利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体的方法，包括样品液制备和分离纯化，工艺流程图如1所示，其具体步骤如下：

步骤一，样品液制备：取玛咖超临界提取物，其中玛咖超临界提取物中玛咖酰胺含量为8％(质量)，加入甲醇将其溶解并配制成50mg/ml浓度样品液，将样品液过滤，备用。

步骤二，分离纯化：将步骤一制备好的样品液，注入动态轴向压缩工业色谱中，工艺色谱填料nm100，乙腈为洗脱剂，紫外检测波长210nm检测样品分离情况，根据每一种玛咖酰胺成分出峰时间及色谱峰的高度，确定所制玛咖酰胺单体的洗脱液收集起止时间，并将每一种玛咖酰胺洗脱液在60℃减压浓缩至干，回收有机溶剂后40℃真空干燥12h，得到8个纯度大于95％的玛咖酰胺单体化学成分。

实施例3

一种利用动态轴向压缩工业色谱制备玛咖酰胺单体的方法，包括样品液制备和分离纯化，工艺流程图如1所示，其具体步骤如下：

步骤一，样品液制备：取玛咖超临界co2提取物，并过大孔吸附树脂富集，其中玛咖超临界co2提取物中玛咖酰胺含量为42％(质量)，加入甲醇将其溶解并配制成100mg/ml浓度样品液，将样品液过滤，备用。

步骤二，分离纯化：将步骤一制备好的样品液，注入动态轴向压缩工业色谱中，工艺色谱填料unipsn30-300，乙醇-水(体积比85:15)为洗脱剂，紫外检测波长210nm检测样品分离情况，根据每一种玛咖酰胺成分出峰时间及色谱峰的高度，确定所制玛咖酰胺单体的洗脱液收集起止时间，并将每一种玛咖酰胺洗脱液在60℃减压浓缩至干，回收有机溶剂后40℃真空干燥12h，得到8个纯度大于95％的玛咖酰胺单体化学成分。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。