本发明涉及菌种的保藏技术领域，具体涉及一种金针菇的木屑保藏方法。
背景技术：
对于食用菌工厂化周期生产来说，菌种工作必然是重中之重，菌种的纯度和质量决定着后期出菇的产量和质量，而一株优良的菌种如何保藏下来延长使用周期则是菌种工作中必不可缺的一项工作。目前金针菇的菌种保藏方法有斜面低温保藏法，麦粒保藏法，斜面生理盐水保藏法，石蜡封口斜面低温保藏法(此法是在斜面低温保藏法的基础上用石蜡封住试管口，待石蜡凝固即可)等；斜面低温保藏法和石蜡封口保藏法保藏周期不长，一般半年左右，时间长，培养基干固，菌丝变黄老化变异；麦粒保藏法制作工艺复杂，麦粒浸泡时间不好掌握，易产生粉孢子；斜面生理盐水保藏操作简单，但存放时间长了斜面易脱壁，斜面培养基漂浮出水面，造成露出部分干固，菌种老化，容易变异，活化时易产生粉孢子影响出菇产量和质量。
技术实现要素：
为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种金针菇的木屑保藏方法，保藏时间长，不易产生孢子，同时能够避免因生长环境改变所引起的金针菇菌种基因性状改变而导致产量、质量的下降。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种金针菇的木屑保藏方法，包括以下步骤：
(1)配料：分别配置斜面培养基和木屑培养基；
(2)制备斜面菌种：将金针菇菌种接种到所述步骤(1)制备的斜面培养基进行斜面培养，得到斜面菌种；
(3)制备木屑菌种：将所述步骤(2)得到的斜面菌种接种到所述步骤(1)制备的木屑培养基进行培养，得到木屑菌种；
(4)保藏：将所述步骤(3)得到的木屑菌种在0-4℃温度下保藏。
本发明通过采用斜面培养，相对于平面培养，斜面为金针菇菌种的繁殖提供更大的繁殖面积，能有效地提高了金针菇菌种的培养效率和培养效果。
本发明金针菇菌种的保藏方法操作简单，成本低，可行性高，保藏金针菇菌种的时间长，且在保藏过程中，金针菇菌种不易产生粉孢子，保持原菌种优良基因稳定，不易变异退化，对于优良菌种的保藏有着重大的作用。
金针菇是木腐菌，本发明通过用木屑作为主料保藏金针菇菌种更能保持菌种的优良基因不突变，同时使金针菇菌丝球保持着菌种的生理活性和细胞形态，能够避免因生长环境改变所引起基因性状改变而导致产量质量下降。
优选的，所述步骤(1)中，每1.5升斜面培养基的原料包括：马铃薯100-300g、葡萄糖10-30g、琼脂10-30g、硫酸镁0.2-1g、磷酸氢二钾0.5-2g、豆粕3-10g、蛋白胨3-10g和酵母粉1-5g。
优选的，所述斜面培养基的制备方法包括如下步骤：取马铃薯100-300g加入1.5l的水煮熟，然后过滤，得到滤液，将滤液分别加入葡萄糖10-30g、琼脂10-30g、硫酸镁0.2-1g、磷酸氢二钾0.5-2g、豆粕3-10g、蛋白胨3-10g和酵母粉1-5g加热至溶解，并补水至1.5l，将得到的培养液在115-130℃温度下灭菌20-40min，待培养液冷却到50-70℃时摆成斜面，然后冷却至20-30℃，即得到斜面培养基。另一优选的，所述步骤(1)中，斜面培养基的制备方法包括如下步骤：取马铃薯200g加入1.5l的水煮熟，然后过滤，得到滤液，将滤液分别加入葡萄糖20g、琼脂20g、硫酸镁0.5g、磷酸氢二钾1g、豆粕5g、蛋白胨5g和酵母粉2g加热至溶解，并补水至1.5l，将得到的培养液在124℃温度下灭菌30min，待装有培养液的试管冷却到60℃时摆成斜面，然后冷却至23℃后即得到斜面培养基。
本发明采用pda培养基原料制备斜面菌种，能够使得金针菇菌种的能极大的培养效率和培养效果。
斜面培养基的制备方法具体操作过程为，按上述质量称取取马铃薯、葡糖糖、琼脂、硫酸镁、磷酸氢二钾、豆粕5g、蛋白胨和酵母粉，先将马铃薯切成小方块，加入1.5l的水煮熟而保持不烂，然后用纱布过滤，虑后的滤液与称好的其它原料一起煮，至全部药品溶解，混合均匀为准，最后分装到每一支试管内塞好棉花塞，每支试管分装约10ml；将分装好的试管分每7支一扎放在高压蒸汽灭菌锅中在115-130℃，灭菌20-40min，灭菌结束后，待高压炉中的试管冷却到60摄氏度左右时将试管摆成斜面，尽量让斜面占试管的2/3，摆好后用毛巾盖好，待冷却后使用，即得到斜面培养基。
优选的，所述步骤(1)中，所述木屑培养基包括以下原料：每100ml水中加入木屑200-240g、麸皮35-50g和米糠20-40g。
优选的，所述木屑培养基的制备方法包括如下步骤：取木屑200-240g、麸皮35-50g和米糠20-40g加入100ml水中，混合搅拌均匀，并调节ph值为6.6-6.8，然后在115-135℃温度下灭菌50-80min，然后冷却至20-30℃，即得到木屑培养基。另一优选，所述木屑培养基的制备方法包括如下步骤：取木屑222g、麸皮42g和米糠30g加入100ml水中，混合搅拌均匀，并调节ph值为6.6-6.8，然后在124℃温度下灭菌60min，然后冷却至23℃以下，即得到木屑培养基。
所述木屑培养基的具体制备方法包括如下步骤：称取上述原料加入100ml水，混合搅拌均匀，适量加入轻钙调节ph值在6.6-6.8，搅拌均匀后分装在试管中，边装边用玻璃棒适当压结实，每只试管装1/3-1/2，装好后用毛巾擦干净试管口及周围，塞上硅胶塞，按7支试管一扎用牛皮纸包扎好，橡皮筋扎紧。
优选的，所述步骤(1)中，木屑过50-70目筛，木屑培养基的含水量为68％-72％。另一优选的额，木屑过60目筛。
本发明通过将木屑过50-70筛后，使制成的木屑培养基成分均匀，将木屑培养基的水分控制在68％-72％，更适合适合金针菇菌种的生长，通过以上处理，使得金针菇菌种在保藏过程中能够保持原菌种优良基因稳定，不易变异退化，对于优良菌种的保藏有着重大的作用。
优选的，述步骤(2)中，培养温度为15-23℃，培养时间为7-9d。
斜面培养基的具体接种方式为：在冷却好的斜面培养基内接入金针菇菌种块，每个斜面培养基的接种量为1-2块2mm*2mm需要保藏的金针菇菌种块，在本发明中斜面培养基为试管培养，一共接种8-12支试管，然后将接种完的斜面培养基放入恒温培养箱中，在15-23℃温度下培养7-9d。
优选的，所述步骤(3)中，培养温度为15-23℃，培养时间为6-8d。
优选的，所述步骤(3)中，将斜面菌种接种至木屑培养基中前，将木屑培养基的料面松动0.8-1.5cm的高度。
木屑培养基的具体接种方式为：在超净工作台上用消毒过的接种针把挑选好的斜面菌种切成2mm*2mm的小块到木屑培养基中，接种前先将木屑培养基用接种针把料面松动0.8-1.5cm的高度，然后再接入斜面菌种，接好后稍微摇匀，使菌种块在料面下。
优选的，所述步骤(4)中，保藏的具体步骤为：将步骤(3)中的木屑菌种培养至菌丝延伸2-3cm时挑出菌丝浓密，粗壮，无其它异常的金针菇菌种在0-4℃温度下保藏。
保藏的具体接种方法为：接好菌种的木屑培养基放入生化培养箱中15-23℃培养，培养过程观察菌丝生长情况，将长势异常，菌丝偏弱，有粉孢子或气生菌丝旺盛的试管挑出淘汰，培养5-7d，待菌丝延伸2-3cm时挑出菌丝浓密，粗壮，无其它异常的木屑培养基用polifilm封口，在0-4℃温度下进行保藏。
本发明的有益效果在于：本发明通过采用斜面培养，相对于平面培养，斜面为金针菇菌种的繁殖提供更大的繁殖面积，能有效地提高了金针菇菌种的培养效率和培养效果。
本发明金针菇菌种的保藏方法操作简单，成本低，可行性高，保藏金针菇菌种的时间长，且在保藏过程中，金针菇菌种不易产生粉孢子，保持原菌种优良基因稳定，不易变异退化，对于优良菌种的保藏有着重大的作用。
金针菇是木腐菌，本发明通过用木屑作为主料保藏金针菇菌种更能保持菌种的优良基因不突变，同时使金针菇菌丝球保持着菌种的生理活性和细胞形态，能够避免因生长环境改变所引起基因性状改变而导致产量质量下降。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
实施例1
一种金针菇的木屑保藏方法，包括以下步骤：
(1)配料：分别配置斜面培养基和木屑培养基；
(2)制备斜面菌种：将金针菇菌种接种到所述步骤(1)制备的斜面培养基进行斜面培养，得到斜面菌种；
(3)制备木屑菌种：将所述步骤(2)得到的斜面菌种接种到所述步骤(1)制备的木屑培养基进行培养，得到木屑菌种；
(4)保藏：将所述步骤(3)得到的木屑菌种接种进行保藏。
所述步骤(1)中，斜面培养基的制备方法包括如下步骤：取马铃薯100g，切成小方块，加入1.5l的水煮熟而保持不烂，然后用纱布过滤，得到滤液，向滤液中分别加入葡糖糖10g、琼脂10g、硫酸镁0.2g、磷酸氢二钾0.5g、豆粕3g、蛋白胨3g和酵母粉1g加热至溶解并混合均匀，并补水至1.5l，最后分装到每一支试管内塞好棉花塞，每支试管分装约10ml；将分装好的试管分每7支一扎放在高压蒸汽灭菌锅中在115℃温度下灭菌20min，灭菌结束后，待高压炉中的试管冷却到50℃时将试管摆成斜面，尽量让斜面占试管的2/3，摆好后用毛巾盖好，然后冷却至20℃以下，即得到斜面培养基。
所述步骤(1)中，木屑培养基的制备方法包括如下步骤：取木屑200g、麸皮35g和米糠20g加入100ml水中，混合搅拌均匀，适量加入轻钙调节ph值为6.6，搅拌均匀后分装在试管中，边装边用玻璃棒适当压结实，每只试管装1/3-1/2，装好后用毛巾擦干净试管口及周围，塞上硅胶塞，按7支试管一扎用牛皮纸包扎好，橡皮筋扎紧,然后在115℃温度下灭菌50min，然后冷却至20℃以下，即得到木屑培养基。
所述步骤(1)中，木屑过50目筛，木屑培养基的含水量为68％。
所述步骤(2)中，培养温度为15℃，培养时间为7d。
所述步骤(3)中，培养温度为15℃，培养时间为5d。
所述步骤(3)中，将斜面菌种接种至木屑培养基中前，将木屑培养基的料面松动0.8cm的高度,然后再接入斜面菌种，接好后稍微摇匀，使菌种块在料面下。
所述步骤(4)中，保藏的具体步骤为：接好菌种的木屑培养基放入生化培养箱中15℃培养，培养过程观察菌丝生长情况，将长势异常，菌丝偏弱，有粉孢子或气生菌丝旺盛的试管挑出淘汰，培养5d，待菌丝延伸2cm时挑出菌丝浓密，粗壮，无其它异常的木屑培养基用polifilm封口，在0℃温度下进行保藏。
实施例2
一种金针菇的木屑保藏方法，包括以下步骤：
(2)配料：分别配置斜面培养基和木屑培养基；
(2)制备斜面菌种：将金针菇菌种接种到所述步骤(1)制备的斜面培养基进行斜面培养，得到斜面菌种；
(3)制备木屑菌种：将所述步骤(2)得到的斜面菌种接种到所述步骤(1)制备的木屑培养基进行培养，得到木屑菌种；
(4)保藏：将所述步骤(3)得到的木屑菌种接种进行保藏。
所述步骤(1)中，斜面培养基的制备方法包括如下步骤：取马铃薯200g，切成小方块，加入1.5l的水煮熟而保持不烂，然后用纱布过滤，得到滤液，向滤液中分别加入葡糖糖20g、琼脂20g、硫酸镁0.5g、磷酸氢二钾1g、豆粕5g、蛋白胨5g和酵母粉2g加热至溶解并混合均匀，并补水至1.5l，最后分装到每一支试管内塞好棉花塞，每支试管分装约10ml；将分装好的试管分每7支一扎放在高压蒸汽灭菌锅中在124℃温度下灭菌30min，灭菌结束后，待高压炉中的试管冷却到60℃时将试管摆成斜面，尽量让斜面占试管的2/3，摆好后用毛巾盖好，然后冷却至23℃以下，即得到斜面培养基。
所述步骤(1)中，木屑培养基的制备方法包括如下步骤：取木屑220g、麸皮42g和米糠30g加入100ml水中，混合搅拌均匀，适量加入轻钙调节ph值为6.7，搅拌均匀后分装在试管中，边装边用玻璃棒适当压结实，每只试管装1/3-1/2，装好后用毛巾擦干净试管口及周围，塞上硅胶塞，按7支试管一扎用牛皮纸包扎好，橡皮筋扎紧,然后在124℃温度下灭菌60min，然后冷却至23℃以下，即得到木屑培养基。
所述步骤(1)中，木屑过60目筛，木屑培养基的含水量为70％。
所述步骤(2)中，培养温度为18℃，培养时间为8d。
所述步骤(3)中，培养温度为18℃，培养时间为6d。
所述步骤(3)中，将斜面菌种接种至木屑培养基中前，将木屑培养基的料面松动1cm的高度,然后再接入斜面菌种，接好后稍微摇匀，使菌种块在料面下。
所述步骤(4)中，保藏的具体步骤为：接好菌种的木屑培养基放入生化培养箱中18℃培养，培养过程观察菌丝生长情况，将长势异常，菌丝偏弱，有粉孢子或气生菌丝旺盛的试管挑出淘汰，培养6d，待菌丝延伸2.5cm时挑出菌丝浓密，粗壮，无其它异常的木屑培养基用polifilm封口，在2℃温度下进行保藏。
实施例3
一种金针菇的木屑保藏方法，包括以下步骤：
(3)配料：分别配置斜面培养基和木屑培养基；
(2)制备斜面菌种：将金针菇菌种接种到所述步骤(1)制备的斜面培养基进行斜面培养，得到斜面菌种；
(3)制备木屑菌种：将所述步骤(2)得到的斜面菌种接种到所述步骤(1)制备的木屑培养基进行培养，得到木屑菌种；
(4)保藏：将所述步骤(3)得到的木屑菌种接种进行保藏。
所述步骤(1)中，斜面培养基的制备方法包括如下步骤：取马铃薯300g，切成小方块，加入1.5l的水煮熟而保持不烂，然后用纱布过滤，得到滤液，向滤液中分别加入葡糖糖30g、琼脂30g、硫酸镁1g、磷酸氢二钾2g、豆粕10g、蛋白胨10g和酵母粉5g加热至溶解并混合均匀，并补水至1.5l，最后分装到每一支试管内塞好棉花塞，每支试管分装约10ml；将分装好的试管分每7支一扎放在高压蒸汽灭菌锅中在130℃温度下灭菌40min，灭菌结束后，待高压炉中的试管冷却到70℃时将试管摆成斜面，尽量让斜面占试管的2/3，摆好后用毛巾盖好，然后冷却至30℃后即得到斜面培养基。
所述步骤(1)中，木屑培养基的制备方法包括如下步骤：取木屑240g、麸皮50g和米糠40g加入100ml水中，混合搅拌均匀，适量加入轻钙调节ph值为6.8，搅拌均匀后分装在试管中，边装边用玻璃棒适当压结实，每只试管装1/3-1/2，装好后用毛巾擦干净试管口及周围，塞上硅胶塞，按7支试管一扎用牛皮纸包扎好，橡皮筋扎紧,然后在135℃温度下灭菌80min，即得到木屑培养基。
所述步骤(1)中，木屑过70目筛，木屑培养基的含水量为72％。
所述步骤(2)中，培养温度为23℃，培养时间为9d。
所述步骤(3)中，培养温度为23℃，培养时间为7d。
所述步骤(3)中，将斜面菌种接种至木屑培养基中前，将木屑培养基的料面松动1.5cm的高度,然后再接入斜面菌种，接好后稍微摇匀，使菌种块在料面下。
所述步骤(4)中，保藏的具体步骤为：接好菌种的木屑培养基放入生化培养箱中23℃培养，培养过程观察菌丝生长情况，将长势异常，菌丝偏弱，有粉孢子或气生菌丝旺盛的试管挑出淘汰，培养7d，待菌丝延伸3cm时挑出菌丝浓密，粗壮，无其它异常的木屑培养基用polifilm封口，在4℃温度下进行保藏。
实施例4
将保藏了12个月，18个月，24个月的木屑培养基各挑一个活化，2-4次提纯后进行出菇及保藏前的产量对照试验，每次试验随机挑取2筐，1筐16瓶，共32瓶，栽培瓶为1400ml，保藏前的产量共用一组数据。
根据三组的试验证明，木屑保藏2年后的出菇平均单产和最高产量基本维持不变，证明木屑保藏法能够保藏和遗传金针菇的菌种的优良品性，发生基因突变的机率小，且操作简单，可行性高。
上述实施例为本发明较佳的实现方案，除此之外，本发明还可以其它方式实现，在不脱离本发明构思的前提下任何显而易见的替换均在本发明的保护范围之内。