本申请要求于2016年6月6日提交的序号为62/346,148的美国临时申请的优先权，其全部公开内容通过出于任何目的的引用而结合在本文中。本发明涉及制备糖基化甜菊醇糖苷组合物的改进方法、由此获得的糖基化甜菊醇糖苷组合物、甜味剂和包含这类糖基化甜菊醇糖苷组合物的共混物、以及这类糖基化甜菊醇糖苷在可食用产品如食品和饮料中作为甜味剂和风味调节剂的用途。
背景技术：
：：近年来，人们对基于天然产物的高强度甜味剂的开发有着相当大的兴趣。这类甜味剂能取代食品和饮料产品中的糖，从而潜在地减少糖并且也可能降低这些产品的热含量。从甜叶菊植物的叶子中提取和分离的甜菊醇糖苷已成为重要研究和商业关注的主题，因为大多数这类化合物都比糖(蔗糖)甜许多倍。较老的甜叶菊植物品种含有作为主要甜菊醇糖苷成分的甜菊甙和较小量的瑞鲍迪甙a以及其他次要甜菊醇糖苷。虽然甜菊甙比蔗糖甜大约100-300倍，但其味质被视为明显低于瑞鲍迪甙a的味质。因此，开发了新的具有高得多含量的瑞鲍迪苷a的甜叶菊植物品种以及新的处理甜叶菊叶得到高纯(95％+)瑞鲍迪甙a的方式。然而，即使是高纯度瑞鲍迪甙a的味道特征也不是完全接近于蔗糖的味道特征，因此，单独使用纯化的瑞鲍迪甙a来配制低糖食品和饮料依然极具挑战性。甜菊醇糖苷的特征在于具有连接在中心甜菊醇(萜类化合物)部分上的葡萄糖分子。在不久前，人们发现通过使α-葡糖基转移酶与含有一种或多种甜菊醇糖苷和淀粉或环糊精等葡萄糖供体的水溶液反应，据此将一个或多个葡萄糖单元从葡萄糖供体转移至甜菊醇糖苷，从而可以对天然存在的甜菊醇糖苷如甜菊甙和瑞鲍迪甙a进行改性。由此获得的反应产物通常称为糖基化甜菊醇糖苷，这些反应产物与起始甜菊醇糖苷相比可以具有改进的/改善的感官特性。在美国专利第4,219,571号和美国专利第2007/0082102号中皆对此类可认为涉及糖基化或转糖基作用的反应的实例有描述。然而，仍期望进一步改进甜菊醇糖苷糖基化技术。例如，在此类反应中获得的糖基化甜菊醇糖苷的产率都偏低。此外，使用已知方法制备的糖基化甜菊醇糖苷的风味和口感虽然或许会比起始甜菊醇糖苷的好，但可能仍不完全理想，因为它们与蔗糖具有的感官特性明显地不同。技术实现要素：本发明的各非限制性示例性方面可概括如下：第1方面：一种制糖基化甜菊醇糖苷组合物的方法，包括(或主要由其组成或由其组成)：使起始甜菊醇糖苷组合物、葡萄糖供体和环糊精糖基转移酶在ph大于7.5至不超过10的水性介质中接触有效至生成糖基化甜菊醇糖苷组合物的时间。第2方面：根据第1方面所述的方法，其中所述起始甜菊醇糖苷组合物包含(或主要由其组成或由其组成)一种或多种选自由以下项组成的群组中的甜菊醇糖苷：瑞鲍迪甙a、瑞鲍迪甙b、瑞鲍迪甙c、瑞鲍迪甙d、瑞鲍迪甙f、瑞鲍迪甙m(x)、甜菊甙、甜菊双糖甙、甜茶苷和杜尔可甙a。第3方面：根据第1方面所述的方法，其中所述起始甜菊醇糖苷组合物以干重计包含至少约50％的瑞鲍迪甙b。第4方面：根据第1方面所述的方法，其中所述起始甜菊醇糖苷组合物以干重计包含至少约50％的瑞鲍迪甙a。第5方面：根据第1方面所述的方法，其中所述起始甜菊醇糖苷组合物以干重计包含至少约50％的甜菊甙。第6方面：根据第1方面所述的方法，其中所述起始甜菊醇糖苷组合物以干重计包含至少约10％的甜菊双糖甙。第7方面：根据第1-6方面中任一项所述的方法，其中所述葡萄糖供体选自由寡糖、环糊精和多糖组成的群组。第8方面：根据第1-6方面中任一项所述的方法，其中所述葡萄糖供体选自由淀粉、糊精、液化淀粉及其组合所组成的群组。第9方面：根据第1-8方面中任一项所述的方法，其中所述ph为大约8至大约9之间。第10方面：根据第1-9方面中任一项所述的方法，其中所述环糊精糖基转移酶是取自或产自嗜热脂肪芽孢杆菌、浸麻芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、嗜盐芽孢杆菌、热厌氧杆菌属菌株或嗜热厌氧杆菌属菌株的环糊精糖基转移酶。第11方面，根据第1-9方面中任一项所述的方法，其中所述环糊精糖基转移酶是取自或产自热厌氧杆菌的环糊精糖基转移酶。第12方面，根据第1-9方面中任一项所述的方法，其中所述环糊精糖基转移酶是非嗜碱性环糊精糖基转移酶。第13方面，根据第1-12方面中任一项所述的方法，其中所述接触是在约20℃至约95℃之间的温度下进行的。第14方面，根据第1-13方面中任一项所述的方法，其中所述接触进行的时间为约1小时至约250小时。第15方面，根据第1-14方面中任一项所述的方法，其中所述水性介质是缓冲水性介质。第16方面，根据第1-15方面中任一项所述的方法，包括使所述糖基化甜菊醇糖苷组合物与至少一种能够裂解葡萄糖-葡萄糖键的酶接触的附加步骤。第17方面：根据第1至第16方面中任一项所述的方法，其中所述接触步骤在有效使得所述起始甜菊醇糖苷组合物中存在的甜菊醇糖苷到糖基化甜菊醇糖苷的转化率达到60-85％或65％-80％的条件下进行。第18方面：一种制糖基化甜菊醇糖苷组合物的方法，包括(或主要由其组成或由其组成)：a)使起始甜菊醇糖苷组合物与碱性水性介质或碱性树脂接触，得到碱处理的甜菊醇糖苷组合物；和b)使所述碱处理的甜菊醇糖苷组合物、葡萄糖供体和环糊精糖基转移酶在水性介质中接触有效至生成糖基化甜菊醇糖苷组合物的时间。第19方面：根据第18方面所述的方法，其中使所述起始甜菊醇糖苷组合物与ph为7.5-14的碱性水性介质接触。第20方面：根据第18或19方面所述的方法，其中步骤a)在20℃-100℃的温度下进行。第21方面：根据第18-20方面中任一项所述的方法，其中步骤a)进行的时间为0.5-250小时或1-250小时。第22方面：根据第18-21方面中任一项所述的方法，其中所述起始甜菊醇糖苷组合物包含(或主要由其组成或由其组成)瑞鲍迪甙a或甜菊甙中的至少一种。第23方面：根据第22方面所述的方法，其中步骤a)在以下条件下进行，所述条件有效使得，如果存在瑞鲍迪甙a则使瑞鲍迪甙a的至少一部分转化为瑞鲍迪甙b，和使得如果存在甜菊甙则使甜菊甙的至少一部分转化为甜菊双糖甙。第24方面：根据第18至23方面中任一项所述的方法，包括使所述糖基化甜菊醇糖苷组合物与至少一种能够裂解葡萄糖-葡萄糖键的酶接触的附加步骤。第25方面：一种改善糖基化甜菊醇糖苷组合物的一种或多种感官特性的方法，包括(或主要由其组成或由其组成)：使所述糖基化甜菊醇糖苷组合物与碱性含水性介质或碱性树脂接触。第26方面：根据第25方面所述的方法，其中所述糖基化甜菊醇糖苷组合物与碱性水性介质接触，且该碱性水性介质的ph为7.5-14或8-14。第27方面：根据第25或26方面所述的方法，其中所述接触步骤在20℃-100℃的温度下进行。第28方面：根据第25-27方面中任一项所述的方法，其中所述糖基化甜菊醇糖苷组合物包含(或主要由其组成或由其组成)糖基化瑞鲍迪甙a或糖基化甜菊甙中的至少一种。第29方面：根据第28方面所述的方法，其中所述接触步骤在以下条件下进行，所述条件有效使得，如果存在瑞鲍迪甙a则使瑞鲍迪甙a的至少一部分转化为瑞鲍迪甙b，和使得如果存在甜菊甙则使甜菊甙的至少一部分转化为甜菊双糖甙。第30方面：一种通过根据第1-29方面中任一项的所述的方法获得的糖基化甜菊醇糖苷组合物。第31方面：一种甜味剂组合物，包含(或主要由其组成或由其组成)：a)糖基化甜菊醇糖苷组合物；和b)基于a)和b的总干重，2-8重量％的瑞鲍迪甙b。第32方面：根据第31方面所述的甜味剂组合物，其中所述糖基化甜菊醇糖苷组合物是根据根据第1-29方面中任一项所述的方法获得的。第33方面：一种甜味剂组合物，包含(或主要由其组成或由其组成)：a)第一糖基化甜菊醇糖苷组合物；和b)通过根据第18-24方面中任一项所述的方法获得的第二糖基化甜菊醇糖苷组合物。第34方面：根据第33方面所述的甜味剂组合物，其中所述第一糖基化甜菊醇糖苷组合物是通过根据权利要求1-17中任一项所述的方法获得的。第35方面：根据第33或34方面所述的甜味剂组合物，包含(或主要由其组成或由其组成)：基于a)和b的总干重，a)65-95重量％的第一甜菊醇糖苷组合物；和b)5-35重量％的第二糖基化甜菊醇糖苷组合物。第36方面：一种甜味剂组合物，包含(或主要由其组成或由其组成)：a)第一糖基化甜菊醇糖苷组合物；或b)通过根据第25-28方面中任一项所述的方法获得的第二糖基化甜菊醇糖苷组合物。第37方面：根据第36方面所述的甜味剂组合物，其中所述第一糖基化甜菊醇糖苷组合物是通过第1-17方面中任一项所述的方法获得的。第38方面：根据第36或37方面所述的甜味剂组合物，包含(或主要由其组成或由其组成)：基于a)和b的总干重)，a)50-95重量％的第一糖基化甜菊醇糖苷组合物；和b)5-50重量％的第二糖基化甜菊醇糖苷组合物。第39方面：一种糖基化甜菊醇糖苷组合物，其中糖基化瑞鲍迪甙b，糖基化甜菊双糖甙和瑞鲍迪甙b每个都存在，且以干重计，共同组成所述糖基化甜菊醇糖苷组合物的5-50％或10-25％。第40方面：一种糖基化甜菊醇糖苷组合物，其中糖基化瑞鲍迪甙b和糖基化甜菊双糖甙都存在，且以干重计，共同组成所述糖基化甜菊醇糖苷组合物的2-25％或5-15％。第41方面：一种食品、饮品、化妆品或医药品，包含(或主要由其组成或由其组成)：i)a)通过根据第1-29方面中任一项所述的方法获得的糖基化甜菊醇糖苷组合物、b)根据第31-38方面中任一项所述的的甜味剂组成物或c)根据第39或40方面所述的糖基化甜菊醇糖苷组合物中至少一种；和ii)至少一种附加的食品、饮料、化妆品或药物成分。第42方面：一种制食品、饮品、化妆品或医药品的方法，包括(或主要由其组成或由其组成)：将i)a)通过根据第1-29方面中任一项所述的方法获得的糖基化甜菊醇糖苷组合物、b)根据第31-38方面中任一项所述的的甜味剂组成物或c)根据第39或40方面所述的糖基化甜菊醇糖苷组合物中至少一种与ii)至少一种附加的食品、饮料、化妆品或药物成分相组合。第43方面：a)通过根据第1-29方面中任一项所述的方法获得的糖基化甜菊醇糖苷组合物、b)根据第31-38方面中任一项所述的的甜味剂组成物或c)根据第39或40方面所述的糖基化甜菊醇糖苷组合物中至少一种在食品、饮品、化妆品或医药品中的应用。附图说明图1为示意性地示出了根据本发明的各种方法以及它们可以怎样彼此结合来实施的流程图。图2-8为各种甜菊醇糖苷和糖基化甜菊醇糖苷组合物的lc-ms色谱图，其将在实施例中进一步说明。图9为与获得特定试验性能数据联合使用的试样评估表的格式图，其将在实施例中描述。具体实施方式如在本文中所使用的术语“甜菊醇糖苷”指的是甜叶菊植物中存在的甜菊醇糖苷化合物(甜菊醇的糖苷)，比如瑞鲍迪甙a、瑞鲍迪甙b、瑞鲍迪甙c、瑞鲍迪甙d、瑞鲍迪甙e、瑞鲍迪甙f、瑞鲍迪甙m(有时也称为瑞鲍迪甙x)、甜茶苷或甜菊甙。在天然存在的甜菊醇糖苷中，甜菊醇主链上的葡萄糖单元以β构型连接。如在本文中所使用的术语“糖基化甜菊醇糖苷”指的是在一个或多个位置被糖基化的甜菊醇糖苷(例如，通过共价糖苷键在甜菊醇糖苷上加成了一个、两个、三个或多个葡萄糖部分)。具体而言，糖基化甜菊醇糖苷为在甜菊醇糖苷母体分子上通过1-4键引入一个或多个葡萄糖部分或α1-4键合的葡萄糖化合物(例如，麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖)到该母体甜菊醇糖苷上的糖部分的甜菊醇糖苷。在糖基化甜菊醇糖苷中，通过酶促糖基化反应加成的葡萄糖单元以α构型连接。因此，糖基化甜菊醇糖苷具有不同于天然存在的甜菊醇糖苷的结构。如在本文中使用的术语“糖基化甜菊醇糖苷组合物”是用来表示包括一种或多种糖基化甜菊醇糖苷，但也可包括一种或多种除糖基化甜菊醇糖苷之外的物质(比如，举例来说，未反应的甜菊醇糖苷和/或未反应的葡萄糖供体和/或从葡萄糖供体获得的糖类产物)的组合物。本发明涵盖对应于至少三个主要实施方式的方法，这些主要实施方式通常称为实施方式a、实施方式b和实施方式c，将在下文更详细地描述。这些主要实施方式可单独实施或彼此结合起来实施。实施方式a实施方式a涉及一种制糖基化甜菊醇糖苷组合物的方法，其中该方法包括使起始甜菊醇糖苷组合物、葡萄糖供体和环糊精糖基转移酶在ph大于7.5至不超过10的水性介质中接触有效至生成糖基化甜菊醇糖苷组合物的时间。已经发现，同在较低ph值下环糊精糖基转移酶催化的糖基化相比，在这些条件下进行糖基化具有一种或多种以下优势：提高了糖基化甜菊醇糖苷的产率，改善了糖基化甜菊醇糖苷组合物的口感和/或增强了糖基化甜菊醇糖苷组合物的甜味。起始甜菊醇糖苷组合物起始甜菊醇糖苷组合物可包含一种或多种甜菊醇糖苷，其可为天然甜菊醇糖苷(即自然界中甜叶菊植物叶中存在的甜菊醇糖苷)和/或非天然的甜菊醇糖苷(即不存在于甜叶菊叶或其他自然资源中的甜菊醇糖苷)。起始甜菊醇糖苷组合物可描述为具有确定为需要改善的一种或多种属性，具体为一种或多种感官特性的组合物。例如，需要改善的属性可选自由苦味、甜后味、甜度、甘草味、涩味及其组合所组成的群组。起始甜菊醇糖苷组合物可包含一种或多种除甜菊醇糖苷之外的物质，具体为与甜菊醇糖苷一起存在于甜叶菊植物物料中的非甜菊醇糖苷物质、从甜叶菊植物物料获得或制备的提取物或通过合成制备的甜菊醇糖苷组合物中的一种或多种。然而，在本发明的各种有利实施方式中，以干固体计，起始甜菊醇糖苷组合物包含全部、至少50重量％、至少60重量％、至少70重量％、至少80重量％、至少90重量％、至少95重量％或至少99重量％的甜菊醇糖苷。适合用于起始甜菊醇糖苷组合物中的示例性甜菊醇糖苷可选自由甜菊甙、瑞鲍迪甙a、瑞鲍迪甙b、瑞鲍迪甙c、瑞鲍迪甙d、瑞鲍迪甙e、瑞鲍迪甙f、瑞鲍迪甙x(m)、瑞鲍迪甙n、瑞鲍迪甙o、杜尔可甙a、甜菊双糖甙、甜茶苷及其组合所组成的群组。起始甜菊醇糖苷组合物中的可为来自甜叶菊植物叶的甜菊醇糖苷的提取物，其中甜叶菊植物叶包括任何已知的甜叶菊植物品种(天然或杂交的)。此类提取物一般是不同甜菊醇糖苷的混合物，其中甜菊甙和瑞鲍迪甙a通常是最大量存在的甜菊醇糖苷(取决于获得提取物的甜叶菊植物品种)。在一种实施方式中，起始甜菊醇糖苷组合物可包含以干重计10-70％的甜菊甙和20-70％的瑞鲍迪甙a，其中甜菊甙和瑞鲍迪甙a的总量以干重计不少于70％，同时任选地存在其他甜菊醇糖苷以使得总甜菊醇糖苷含量以干重计不少于90％或不少于95％。例如，起始甜菊醇糖苷组合物可以是包含(以干重计)以下组分的提取物：28-30％的甜菊甙、50-55％的瑞鲍迪甙a、9-12％的瑞鲍迪甙c、1-3％的瑞鲍迪甙f以及其他的使得总计达到至少90％或至少95％的总甜菊醇糖苷含量的甜菊醇糖苷。在另一种实施方式中，起始甜菊醇糖苷组合物可以是包含(以干重计)以下组分的提取物：25-30％的甜菊甙、55-65％的瑞鲍迪甙a以及其他的使得总计达到至少95％的总甜菊醇糖苷含量的甜菊醇糖苷。在又另一种实施方式中，起始甜菊醇糖苷组合物可以是包含(以干重计)55-65％的瑞鲍迪甙a、20-30％的甜菊甙和总共3-8％的瑞鲍迪甙c和杜尔可甙a、具有至少90％的总甜菊醇糖苷含量的提取物。可选地，可采用具有不同比例的的甜菊醇糖苷以及高纯度(例如至少80％、至少85％、至少90％或至少95％纯度)甜菊醇糖苷(比如甜菊甙、瑞鲍迪甙a、瑞鲍迪甙b、瑞鲍迪甙c、瑞鲍迪甙d、瑞鲍迪甙e、瑞鲍迪甙f、瑞鲍迪甙x(m)、瑞鲍迪甙n、瑞鲍迪甙o、杜尔可甙a、甜菊双糖甙或甜茶苷)的甜叶菊提取物。例如，起始甜菊醇糖苷组合物可包含以干重计至少约50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的瑞鲍迪甙b。在其他实施方式中，起始甜菊醇糖苷组合物可包含以干重计至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的瑞鲍迪甙a。在更进一步的实施方式中，起始甜菊醇糖苷组合物可包含以干重计至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的甜菊甙。根据另外的实施方式，起始甜菊醇糖苷组合物可包含以干重计至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的甜菊双糖甙。根据本发明的实施方式b，经过碱处理的甜菊醇糖苷组合物也适合用作起始甜菊醇糖苷组合物。葡萄糖供体适合用于本发明中的葡萄糖供体包括任何能够在环糊精糖基转移酶的作用下进行反应以便从实际效果上切除一个或多个转移至起始甜菊醇糖苷组合物中存在的甜菊醇糖苷分子上的葡萄糖单元的寡聚、多聚和环状的葡萄糖形式。适宜的葡萄糖供体包括例如但不限于淀粉(包括不同来源的淀粉，比如源自小麦、玉米、土豆、木薯和西米)、液化淀粉(包括进行了例如酸和/或像淀粉酶之类的酶催化的部分水解的淀粉)、糊精(包括麦芽糊精)、环糊精等等以及它们的组合。在一个有利实施方式中，葡萄糖供体为具有约0.5至约10的葡萄糖当量(de)值的麦芽糊精。在本发明的一种实施方式中，是通过用淀粉酶和环糊精糖基转移酶在有效至液化多糖的条件下处理淀粉或其他适宜的多糖来制备适宜的葡萄糖供体组合物。例如，淀粉和水可以结合以形成淀粉悬浮液，将α-淀粉酶和环糊精糖基转移酶加入淀粉悬浮液中。然后，可在适宜的温度(例如约50℃至约90℃或约70℃至约90℃)下对得到的混合物温育有效至液化淀粉(结果是降低其分子量和提高其de值)的一段时间(例如约0.2至约6小时)。然和，可通过任何适宜的方法如低ph热处理将淀粉酶灭活，以产生葡萄糖供体组合物，其随后与起始甜菊醇糖苷组合物和补充部分的环糊精糖基转移酶相结合并处于糖基化条件下。在本发明的各种实施方式中，在糖基化反应中使用有效使得葡萄糖供体与甜菊醇糖苷的重量比(以干重计)为约0.5:1至约2:1的量的葡萄糖供体。在其他实施方式中，葡萄糖供体与甜菊醇糖苷的重量比可为1:1至2:1或1.5:1至2:1。环糊精糖基转移酶环糊精糖基转移酶(cgt酶)可为任何本领域已知的能够催化葡萄糖单元到甜菊醇糖苷上的加成反应的酶。可以使用不同cgt酶的组合。环糊精糖基转移酶可通过嗜中温芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌以及嗜盐芽孢杆菌制得。可由芽孢杆菌种类如嗜热脂肪芽孢杆菌、浸麻芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌和/或嗜盐芽孢杆菌以及从热厌氧杆菌属或嗜热厌氧杆菌属菌株例如培养出或产出适宜的cgt酶。此类cgt酶的实例包括例如产自上述微生物种类的天然的或重组的酶。例如，cgt酶可以通过如下过程来制备：用适宜的芽孢杆菌种类接种无菌培养基，然后在约20℃至约90℃的温度下培养接种的培养基约12-48小时的一段时间，优选同时进行通气和搅拌，对获得的培养肉汤进行过滤以分离芽孢杆菌细胞，以及使用例如超滤法进一步浓缩无细胞渗透液。此类酶还可以与一种或多种淀粉酶一起用于液化淀粉以生成适合用于糖基化反应中的葡萄糖供体。cgt酶可以是无细胞培养肉汤、浓缩的液态无细胞培养肉汤、喷雾干燥或冷冻干燥的无细胞培养肉汤或高纯度蛋白质的形式。游离以及固定化酶制剂都可使用。在本发明的一种实施方式中，cgt酶固定在适宜的载体上(例如通过凝胶包埋、吸附或共价键合)。适宜的cgt酶也可以根据如下过程制得：将来自选取的微生物(例如热厌氧杆菌属种类或菌株)的cgt酶基因分离并克隆到表达cgt酶的适宜的宿主微生物如大肠杆菌中。适宜的cgt酶可从商业资源处(比如，举例来说，诺维信和安满能)获得。在本发明的一种实施方式中，cgt酶是由非嗜碱性生物体(即非嗜碱性生物体的生物体，将嗜碱性生物体理解为表示在ph为9或更高时呈现最佳生长的生物体)培养出或产出的。相应地，本发明优选实施方式中的cgt酶是由在ph小于9时呈现最佳生长的生物体培养出或产出的。在具体实施方式中，cgt酶是由热厌氧杆菌属菌株比如热厌氧杆菌atcc53627培养出或产出的。相应地，在本发明的糖基化反应中优选采用热厌氧杆菌属cgt酶，比如诺维信以商标名称3.0l出售的cgt酶。在本发明的特定实施例中，使用cgt酶来进行起始甜菊醇糖苷组合物的糖基化，该cgt酶的氨基酸序列与基因库登录号为z35484的cgt酶的氨基酸序列至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％乃至100％相同(参见joergensen等人,“cloningandnucleotidesequenceofathermostablecyclodextringlycosyltransferasegenefromthermoanaerobactersp.atcc53627anditsexpressioninescherichiacoli(来自thermoanaerobactersp.atcc53627的热稳定环糊精糖基转移酶基因的克隆和核苷酸序列及其在大肠杆菌中的表达)”biotechnol.lett.19,1027-1031(1997))。以前公开的关于使用热厌氧杆菌属cgt酶糖基化甜菊甙的文献清楚地指出糖基化的最佳ph为约5.5，同时当ph提高至7时，转化的甜菊甙的百分比明显下降(李某等人，“transglycosylationofsteviosidetoimprovetheedulcorantqualitybylowersubstitutionusingcornstarchhydrolyzateandcgtase(使用玉米淀粉水解物和cgt酶通过较低取代来改善甜味剂质量的甜菊糖转糖基化)”foodchem.138,20132064-2069)。如在“regioselectiveglycosylationofhydroquinonetoα-arbutinbycyclodextringlucanotransferasefromthermoanaerobactersp.biochem.eng.j.79,2013,187-193”中报道的，mathew等人也发现了类似的最佳ph，其指出对于多种具有这种酶的底物来说，5.5左右的ph是最佳的。此外，当用于以淀粉制取环糊精时，发现3.0l的最佳操作ph为5，同时当ph从ph6提高至10时，其活性降低。因此，对于广泛的包括甜菊醇糖苷的糖基化在内的反应来说，已经证实了对于cgt酶如3.0来说，期望的最佳ph在5-6的范围内。本发明人等发现，通过在ph大于7.5至不超过10的水性介质中在cgt酶如3.0l的作用下进行甜菊醇糖苷组合物的糖基化，实际上会获得一定的益处，并且不期望且基于本领域先验知识不可能合理地预测葡萄糖供体。这些益处可包括但不限于改善产率(即在预定时间段内提高糖基化甜菊醇糖苷的产率)、味质(即获得的糖基化甜菊醇糖苷具有更好的感官性能)和/或糖基化程度(即生成具有更多数目的加成到起始甜菊醇糖苷上的葡萄糖部分的糖基化甜菊醇糖苷)。在本发明的各种实施方式中，在糖基化反应中使用的cgt酶的量可为每克葡萄糖供体约0.02至约10个单位的cgt酶(以固体计)。糖基化条件如前所述，起始甜菊醇糖苷组合物的糖基化是通过在水性介质中在至少一种cgt酶的作用下使起始甜菊醇糖苷组合物与葡萄糖供体相接触而进行的。已经发现，通过使水性介质的ph偏碱性，例如大约7.5但不超过10的ph、8-10之间的ph、8-9之间的ph或约8.5的ph，从而可显著提高24小时内获得的糖基化产物的产率。这个结果是令人惊讶，因为在以前，常规上是在呈微酸性(例如ph5.5-6.5)的ph值下，具体是当使用的cgt酶是非嗜碱性cgt酶如3.0l时来进行cgt酶催化的甜菊醇糖苷的糖基化。可以使用任何适宜的碱或适宜的碱的组合将水性介质的ph调节至期望的值，适宜的碱可包括弱碱以及强碱。碱可为无机碱(例如碱金属氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)或有机碱(例如有机胺、有机酸的共轭碱)。在一种实施方式中，碱溶解于水性介质中。水性介质可为在选取的碱性ph下的缓冲或非缓冲介质。在本发明的一种实施方式中，赋予水性介质期望的ph所需的碱的至少一部分是利用通过根据如本文别处所述的本发明的实施方式b对起初甜菊醇糖苷组合物进行碱处理获得的反应产物中存在的碱来提供的。也就是说，经过碱处理的甜菊醇糖苷组合物可以用作本发明实施方式a中的起始甜菊醇糖苷组合物。水性介质包含水，但水性介质也可能另外包含一种或多种除水之外的溶剂。通常，这些附加的溶剂(如果存在的话)应能与水混入，以相对于水的量相对小的量存在(例如除水之外的溶剂的量以水和溶剂的总重量计可小于20重量％、小于10重量％或小于5重量％)。在某些实施方式中，水性介质不含任何除水之外的溶剂。进行糖基化反应的温度被认为不是关键的，但通常糖基化是在室温(例如20℃)至约95℃的温度范围内进行的。在一种实施方式中，糖基化反应温度是在约45℃至约70℃之间。在另一种实施方式中，糖基化反应温度是在约45℃至约55℃之间。进行反应物接触一段有效至实现期望的起始甜菊醇糖苷至糖基化甜菊醇糖苷的转化率的时间。例如，在本发明的某些实施方式中，实现60％-85％或65％-80％的起始甜菊醇糖苷的转化，转化的程度可通过高效液相色谱和/或液相色谱-质谱联用分析方法容易地监测。糖基化甜菊醇糖苷组合物(作为糖基化反应产物所获得的)中糖基化甜菊醇糖苷的含量和未反应的甜菊醇糖苷的含量可通过日本厚生劳动省在2009年出版的日本食品添加物公定书第八版中第257-258页中描述的程序来测定。一般而言，取决于温度、cgt酶的活性、起始甜菊醇糖苷组合物的组成、酶浓度和其他因素的不同，1-250小时或1-168小时之间的反应时间是适宜的。在一种实施方式中，反应时间在约12至约24小时之间。其中，起始甜菊醇糖苷组合物包括甜菊甙，例如，所获得的反应混合物可为13-o-槐糖基部分的19-o-葡糖基单元和末端葡糖基单元两者都经单糖基化、双糖基化、三糖基化或更多糖基化的产物的相对复杂组合物。根据某些实施方式，在有效至仅实现起始物料中存在的甜菊醇糖苷的部分转化的条件下进行糖基化反应。例如，糖基化反应可在约60-85％的起始甜菊醇糖苷发生反应(即已经用一个或多个葡萄糖部分进行糖基化)时停止，在反应混合物中留下约15-40％未反应的起始甜菊醇糖苷(其中糖基化甜菊醇糖苷+未反应的甜菊醇糖苷的总量＝100％)。根据另一些实施方式，进行糖基化直至约65-80％的起始甜菊醇糖苷发生反应(即已经用一个或多个葡萄糖部分进行糖基化)，在反应混合物中留下约20-35％未反应的起始甜菊醇糖苷(其中糖基化甜菊醇糖苷的总量+未反应的甜菊醇糖苷＝100％)。在本发明的各种实施方式中，可以使用约4重量％至约6重量％的起始甜菊醇糖苷组合物和约8重量％至约12重量％的糊精(糊精与起始甜菊醇糖苷的重量比为约1.5:1至约2.5:1)在水中(初始ph为约8至约8.4)来进行糖基化反应。该混合物在约40℃至约60℃下用cgt酶温育约0.5至约30小时，以获得含有期望的糖基化甜菊醇糖苷的反应产物。然后灭活酶，用吸附树脂、碳过滤和离子交换纯化反应产物。一旦达到了期望的转化程度(其可使用标准高效液相色谱(hplc)或液相色谱-质谱(lc-mc)联用技术来测定)，反应产物可以进一步处理或加工。例如，可以对cgt酶进行灭活(例如，通过热处理，其中将反应产物加热到有效至使得cgt酶相对于其催化进一步糖基化的能力失活的温度下)。在其他实施方式中，可以根据如本文所述的实施方式c用碱进一步处理反应产物。在另一种实施方式中，糖基化甜菊醇糖苷组合物可以用另外的不同类型的酶来处理，具体用能够裂解葡萄糖-葡萄糖键的淀粉酶或其他酶(例如，麦芽淀粉酶，比如产自枯草芽孢杆菌的麦芽淀粉酶)。例如，α-淀粉酶可以与糖基化反应产物相结合，所得混合物在约55℃至约95℃下温育约6-24小时，然后灭活α-淀粉酶(例如采用在低ph下加热)。在另一种实施方式中，将淀粉酶如麦芽淀粉酶与糖基化反应产物结合，所得混合物在约25℃至约40℃下温育约12至约36小时。这种进一步的酶处理用于改变糖基化甜菊醇糖苷组合物的组成特征，从而可能导致该组合物的味道特征的更多的改善。糖基化甜菊醇糖苷组合物也可以或可选地进行一个或多个在本文中(例如，在标题为“糖基化甜菊醇糖苷组合物的纯化”部分中)所描述的进一步加工步骤。实施方式b本发明的实施方式b提供了一种制糖基化甜菊醇糖苷组合物的方法，包括：a)使起始甜菊醇糖苷组合物与碱性水性介质或碱性树脂接触，得到碱处理的甜菊醇糖苷组合物；和b)使所述碱处理的甜菊醇糖苷组合物、葡萄糖供体和环糊精糖基转移酶在水性介质中接触有效至生成糖基化甜菊醇糖苷组合物的时间。实施方式b可以结合实施方式a和实施方式c其中之一或两者来实施，但可选地可由自身或与糖基化甜菊醇糖苷技术中已知的其他加工步骤组合来进行。经由以本文所述的方式对起始甜菊醇糖苷组合物进行碱处理，通过减少异味、苦味、绵长后味等等(从而使糖基化甜菊醇糖苷组合物的口感更像蔗糖)和/或通过提高糖基化甜菊醇糖苷组合物的甜度，可以增强由甜菊醇糖苷组合物获得的糖基化甜菊醇糖苷组合物的口感。该起始甜菊醇糖苷组合物可对应于任何前面结合实施方式a所述的起始甜菊醇糖苷物组合物。然而，在实施方式b的某些方面，起始甜菊醇糖苷组合物含有瑞鲍迪甙a和甜菊甙中的至少一种或瑞鲍迪甙a和甜菊甙两者。瑞鲍迪甙a和甜菊甙其中之一或两者中的一种或两种可以是主要的(＞50重量％，>60重量％，>70重量％，＞80重量％，＞90重量％)存在于起始甜菊醇糖苷组合物的甜菊醇糖苷。例如，瑞鲍迪甙a和甜菊甙可以共同组成＞50重量％，>60重量％，>70重量％，＞80重量％，＞90重量％的存在于起始甜菊醇糖苷组合物中的甜菊醇糖苷。在本发明的各种实施方式中，碱性水性介质的ph可以是大于7.5、至少8或至少9且不超过14。例如，碱性水性介质的可具有8-14、9-14或约10至约14的ph.可以使用任何适宜的碱或适宜的碱的组合将水性介质的ph调节至期望的值，适宜的碱可包括弱碱以及强碱。碱可以是无机碱(例如，碱金属氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)或有机碱。在一种实施方式中，碱溶解于水性介质中。水性介质可为在选取的碱性ph下的缓冲或非缓冲介质。在本发明的起始甜菊醇糖苷组合物与碱性树脂接触的实施方式中，碱性树脂例如可以是具有与其连接的碱性官能团(比如伯、仲和/或叔氨基或季铵基团)的弱碱性或(优选的)强碱性聚合物树脂(例如，交联聚苯乙烯)。其中的磺酸基含有季铵阳离子如三甲基铵的交联聚苯乙烯磺酸盐(例如，与二乙烯基苯交联并磺化的聚苯乙烯)构成一种类型的强碱性树脂。聚乙烯胺是适宜的弱碱性树脂的实例。起始甜菊醇糖苷组合物可在与碱性树脂接触时溶解在水性介质中。进行起始甜菊醇糖苷组合物的碱处理的温度被认为不是关键的，但通常该处理是在室温(例如20℃)至约100℃的温度范围内执行的。例如，碱处理的温度可以在约40℃至约60℃之间。进行碱处理一段有效至实现期望的起始甜菊醇糖苷的转化率的时间，该碱处理被认为可能涉及从单独的甜菊醇糖苷中除去一个或多个葡萄糖单元(具体而言，除去c-19位置上的葡萄糖单元)，从而至少部分地将它们转化为其他甜菊醇糖苷。例如，如果瑞鲍迪甙a存在于起始甜菊醇糖苷组合物中，则该瑞鲍迪甙a的至少一部分可被转化为瑞鲍迪甙b，且如果存在甜菊甙，则该甜菊甙的至少一部分可被转化为甜菊双糖甙。据报道，瑞鲍迪甙b和甜菊双糖甙的甜度分别低于瑞鲍迪甙a和甜菊甙的甜度，其中将甜菊双糖甙描述为具有特别差的味道特征和低甜味效价。然而，已经出乎意料地发现这些化合物(瑞鲍迪甙b和甜菊双糖甙)的糖基化产物比通过糖基化相应的“母体”甜菊醇糖苷(瑞鲍迪甙a和甜菊甙)获得的糖基化产物更甜。一般而言，取决于温度、ph、碱浓度、碱的同一性以及其他因素的不同，1-168小时之间的反应时间是适宜的。在本发明的某些实施方式中，采用氢氧化钠将水性介质的ph调节到约13至约14，在约40℃至约60℃加热该混合物约18至约30小时。随后，使由此获得的碱处理的甜菊醇糖苷组合物通过在cgt酶的作用下与适宜的葡萄糖供体反应而进行糖基化。在糖基化之前，该碱处理的甜菊醇糖苷组合物可任选地进行一种或多种加工或纯化步骤，比如中和/酸化、沉淀等等。适宜的葡萄糖供体和cgt酶可以是任何先前结合实施方式a所描述的那些。糖基化条件也可以与前述相同。在本发明的各个方面中，水性介质的ph可以大于7.5(根据实施方式a)。然而，在其他方面，水性介质的ph不超过7.5(例如，5.5-7.5或5.5-6.5)。随后，由此得到的作为反应产物的糖基化甜菊醇糖苷组合物可进行一个或多个如本文别处所述的或本领域中已知的进一步加工和/或纯化步骤，以得到适合用作供消耗组合物中的成分的最终产物。实施方式c本发明还提供一种改善糖基化甜菊醇糖苷组合物的一种或多种感官特性的方法，包括使糖基化甜菊醇糖苷组合物与碱性水性介质或碱性树脂接触。可以采用任何糖基化甜菊醇糖苷组合物即通过使甜菊醇糖苷组合物发生糖基化反应而获得的任何组合物来实施该方法。例如，糖基化甜菊醇糖苷组合物可以是根据实施方式a制取的糖基化甜菊醇糖苷组合物或通过糖基化根据本发明的实施方式b制取的碱处理的甜菊醇糖苷组合物而制取的糖基化甜菊醇糖苷组合物。可选地，可以使用本领域已知的任何其他糖基化方法制备待碱处理的糖基化甜菊醇糖苷组合物。经由以本文所述的方式进行加工，通过减少异味、苦味、绵长后味等等(从而使糖基化甜菊醇糖苷组合物的口感更像蔗糖)和/或通过提高糖基化甜菊醇糖苷组合物的甜度，可以增强糖基化甜菊醇糖苷组合物的口感。在本发明的各种实施方式中，碱性水性介质的ph可以是大于7.5、至少8或至少9或至少10且不超过14。例如，碱性水性介质的可具有8-14、8.5-12或9-11或约10的ph。可以使用任何适宜的碱或适宜的碱的组合将水性介质的ph调节至期望的值，适宜的碱可包括弱碱以及强碱。碱可以是无机碱(例如，碱金属氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)或有机碱。在一种实施方式中，碱溶解于水性介质中。水性介质可为在选取的碱性ph下的缓冲或非缓冲介质。在本发明的糖基化甜菊醇糖苷组合物与碱性树脂接触的实施方式中，碱性树脂例如可以是具有与其连接的碱性官能团(比如伯、仲和/或叔氨基或季铵基团)的弱碱性或强碱性聚合物树脂(例如，交联聚苯乙烯)。其中的磺酸基含有季铵阳离子如三甲基铵的交联聚苯乙烯磺酸盐(例如，与二乙烯基苯交联并磺化的聚苯乙烯)构成一种类型的强碱性树脂。聚乙烯胺是适宜的弱碱性树脂的实例。糖基化甜菊醇糖苷组合物可在与碱性树脂接触时溶解在水性介质中。进行糖基化甜菊醇糖苷组合物的碱处理的温度被认为不是关键的，但通常该处理是在室温(例如20℃)至约100℃的温度范围内执行的。例如，该温度可以在约40℃至约60℃之间或约50°。进行碱处理一段有效至实现期望的起始糖基化甜菊醇糖苷的转化率的时间，该碱处理被认为可能涉及糖基化瑞鲍迪甙a或糖基化甜菊甙分别转化成糖基化瑞鲍迪甙b或糖基化甜菊双糖甙和/或缩短在糖基化甜菊醇糖苷产物上加成的葡萄糖链。一般而言，取决于温度、ph、碱浓度、碱的同一性以及其他因素的不同，1-168小时之间的反应时间是适宜的(例如，约12至约36小时或约18至约30小时)。例如，当氢氧化钠用作碱且水性介质具有约9至约11之间的ph时，反应温度可以是在约40℃至约60℃之间，反应时间可以在约18至约30小时之间。随后，由此得到的作为反应产物的糖基化甜菊醇糖苷组合物可进行一个或多个如本文别处所述的或本领域中已知的进一步加工和/或纯化步骤，以得到适合用作供消耗组合物中的成分的最终产物。糖基化甜菊醇糖苷组合物的纯化根据本发明的任何实施方式制备的糖基化甜菊醇糖苷组合物可在加入或作为成分用于食品、饮品、化妆品和医药品中之前进一步加工和/或纯化，其将在随后进一步详细描述。适宜的纯化/加工技术包括但不限于酶灭活、中和或其他ph调节、过滤、灭菌、脱色、脱盐，经层析等分离、干燥、浓缩、沉淀、结晶、用吸附剂(例如，聚合物吸附剂如大孔吸附剂和疏水树脂、活性碳)进行处理、用离子交换树脂等进行处理以及它们的组合。如果糖基化甜菊醇糖苷组合物是以水溶液(例如，糖浆)的形式获得的，则其可如此使用或任选地转化成干燥形式，比如通过喷雾干燥。糖基化甜菊醇糖苷组合物可在干燥之前或之后与一种或多种其他组分(例如，甜味剂或其他风味调节剂)组合。在本发明的某些实施方式中，使用一种或多种上述方法处理和/或纯化糖基化甜菊醇糖苷组合物，使得以干重计，其甜菊醇糖苷(包括未反应的起始甜菊醇糖苷(如果有的话)以及起始甜菊醇糖苷的糖基化产物两者)的含量为至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％。可通过使用高效液相色谱法测定起始甜菊醇糖苷的量的减少来量化所产生的糖基化甜菊醇糖苷的量。取决于采用的进一步加工/纯化条件的不同，所获得的糖基化甜菊醇糖苷组合物可含有一定量的残余葡萄糖供体和/或从葡萄糖供体(比如麦芽糊精，其中葡萄糖供体为淀粉)中获得的糖类产物。该组合物还可以或可选地含有存在于起始甜菊醇糖苷组合物中的甜菊醇糖苷的一部分(例如，未反应的甜菊醇糖苷)。在本发明的各种实施方式中，加工和/或纯化糖基化甜菊醇糖苷组合物以得到用于或适合于作为甜味剂和/或调味剂用作供消耗物品(例如，食品或饮品)中的成分的组合物。例如，这种糖基化甜菊醇糖苷组合物可包含以干固体计15重量％-40重量％的未反应的甜菊醇糖苷和60重量％-85重量％的糖基化甜菊醇糖苷，其中未反应的甜菊醇糖苷和糖基化甜菊醇糖苷的总重量以干重计至少是糖基化甜菊醇糖苷组合物的总重量的90％。在其他实施方式中，提供一种糖基化甜菊醇糖苷组合物，其以干固体计包含20重量％-35重量％未反应的甜菊醇糖苷和65重量％-80重量％的糖基化甜菊醇糖苷，其中未反应的甜菊醇糖苷和糖基化甜菊醇糖苷的总重量以干重计至少是糖基化甜菊醇糖苷组合物的总重量的95％。根据某些实施方式，提供一种糖基化甜菊醇糖苷组合物，其含有糖基化瑞鲍迪甙b、糖基化甜菊双糖甙、甜菊双糖甙和瑞鲍迪甙b。这些组分可以共同组成以干重计例如5-50％或10-25％的糖基化甜菊醇糖苷组合物。糖基化甜菊醇糖苷组合物的余量可以主要或完全包含一种或多种甜菊醇糖苷和除糖基化瑞鲍迪甙b、糖基化甜菊双糖甙、甜菊双糖甙和瑞鲍迪甙b之外的糖基化甜菊醇糖苷(例如，瑞鲍迪甙a、瑞鲍迪甙c、瑞鲍迪甙d、瑞鲍迪甙e、瑞鲍迪甙f、瑞鲍迪甙i、瑞鲍迪甙h、瑞鲍迪甙l、瑞鲍迪甙k，瑞鲍迪甙j，瑞鲍迪甙m(也称为瑞鲍迪甙x)、瑞鲍迪甙n、瑞鲍迪甙o、杜尔可甙a、杜尔可甙b、甜茶苷、甜菊甙及其糖基化衍生物)。例如，糖基化甜菊醇糖苷组合物中的甜菊醇糖苷和糖基化甜菊醇糖苷的总量可以干重计至少是糖基化甜菊醇糖苷组合物的85％、90％或95％。除上述糖基化甜菊醇糖苷和甜菊醇糖苷之外，糖基化甜菊醇糖苷组合物还可包含相对少量的残余葡萄糖供体和/或从葡萄糖供体中获得的糖类产物(例如，以干重计，总计高达5％或高达10％的残余葡萄糖供体和/或从葡萄糖供体中获得的糖类产物)。已经发现如上所述的糖基化甜菊醇糖苷组合物具有特别有利的感官性能。根据更进一步的实施方式，提供一种糖基化甜菊醇糖苷组合物，其含有糖基化瑞鲍迪甙b和糖基化甜菊双糖甙。这些组分可以共同组成以干重计例如2-25％或5-15％的糖基化甜菊醇糖苷组合物。糖基化甜菊醇糖苷组合物的余量可以主要或完全包含一种或多种甜菊醇糖苷和除糖基化瑞鲍迪甙b和糖基化甜菊双糖甙之外的糖基化甜菊醇糖苷(例如，瑞鲍迪甙a、瑞鲍迪甙b、瑞鲍迪甙c、瑞鲍迪甙d、瑞鲍迪甙e、瑞鲍迪甙f、瑞鲍迪甙i、瑞鲍迪甙h、瑞鲍迪甙l、瑞鲍迪甙k，瑞鲍迪甙j，瑞鲍迪甙m(也称为瑞鲍迪甙x)、瑞鲍迪甙n、瑞鲍迪甙o、杜尔可甙a、杜尔可甙b、甜茶苷、甜菊双糖甙、甜菊甙以及它们的除糖基化瑞鲍迪甙b和糖基化甜菊双糖甙之外的糖基化衍生物)。例如，糖基化甜菊醇糖苷组合物中的甜菊醇糖苷和糖基化甜菊醇糖苷的总量可以干重计至少是糖基化甜菊醇糖苷组合物的85％、90％或95％。除上述糖基化甜菊醇糖苷和甜菊醇糖苷之外，糖基化甜菊醇糖苷组合物还可包含相对少量的残余葡萄糖供体和/或从葡萄糖供体中获得的糖类产物(例如，以干重计，总计高达5％或高达10％的残余葡萄糖供体和/或从葡萄糖供体中获得的糖类产物)。已经发现如上所述的糖基化甜菊醇糖苷组合物具有特别有利的感官性能。示例性工艺步骤的进一步说明本发明各方面可通过参考图1作进一步说明，图1以示意性形式示出了一系列加工步骤，这些步骤可以顺序执行以将起始甜菊醇糖苷组合物转化为适合(例如，作为甜味剂或调味剂)用于供消耗产品(比如食品、饮品、化妆品或医药品)中的糖基化甜菊醇糖苷组合物。图1中的各个步骤的编号仅用于参考目的，并非意在暗示这些步骤要以数值顺序执行或所有提到的步骤都一定要执行。然而，根据本发明，执行步骤1(实施方式b)、步骤3(实施方式a)或步骤8(实施方式c)至少其中之一。在步骤1中，根据本发明的实施方式b，可任选地对起始甜菊醇糖苷组合物进行碱处理。然后，可在有效使碱处理的甜菊醇糖苷组合物中存在的甜菊醇糖苷的至少一部分糖基化的条件下将碱处理的甜菊醇糖苷组合物在cgt酶的作用下与葡萄糖供体接触(步骤3和4)。已经发现这样的碱处理至少在起始甜菊醇糖苷组合物中存在某些类型的甜菊醇糖苷时有助于改善最终获得的糖基化甜菊醇糖苷组合物的一个或多个感官特性。可选地(图1中未示出)，可以使用未用碱根据实施方式b处理过的起始甜菊醇糖苷组合物来进行糖基化反应。在步骤3中，对应于本发明的实施方式a，使用ph大于7.5的水性介质(例如，ph至少为8)来进行糖基化。已经发现在这样的较高ph条件下进行糖基化会带来产率、味质和/或糖基化程度的改善。可选地，如步骤4所示，可以采用常规的ph条件(例如，ph＝5.5-7.5)。在步骤3或4中使用的葡萄糖供体可以是未改性的或未处理的寡糖或多糖如糊精或淀粉。然而，如步骤2所示，有利的做法是，通过对葡萄糖供体进行液化步骤来预处理该葡萄糖供体，在该液化步骤中，将葡萄糖供体与淀粉酶和cgt酶的混合物接触，然后灭活淀粉酶(例如，通过低ph热处理)。一旦步骤3或4的糖基化反应已经进行到期望的起始甜菊醇糖苷组合物的转化程度(一旦确立了规范，其可以通过hplc和/或lc-ms来监测，该规范利用所获得的产品的感官分析来确定)，cgt酶可通过热处理或其他适宜的方式来灭活(步骤5)。然后，可直接对由此获得的反应产物进行纯化(步骤9)，以得到适用于如本文别处所描述的消费品中的糖基化甜菊醇糖苷组合物。可选地，如步骤8所示，可以在纯化步骤9之前根据本发明的实施方式c对反应产物进行碱处理。在更进一步的变型(步骤6)中，可在有效引起糖基化甜菊醇糖苷中存在的至少某些葡萄糖-葡萄糖键断裂的条件下使含糖基化甜菊醇糖苷的反应产物与淀粉酶或其他葡萄糖-葡萄糖键裂解酶接触，从而改变反应产物中存在的单独的糖基化甜菊醇糖苷的类型和/或相对量。随后，可在进一步纯化反应产物(步骤9)之前将淀粉酶或其他酶灭活(步骤7)。本文所述的加工步骤可以组合并根据以下示例性工艺流程来进行：i).碱处理起始甜菊醇糖苷组合物(如果实施iii或vii，其是任选的)。ii).用淀粉酶和cgt酶(任选的)处理糊精或其他葡萄糖供体。iii).在ph>；7.5的条件下使起始甜菊醇糖苷组合物(其可进行或不进行碱处理)与cgt酶和葡萄糖供体接触(如果实施i或vii，其也可以在ph<；7.5的条件下进行)。iv).灭活cgt酶(例如，通过热处理)。v).使糖基化甜菊醇糖苷组合物与淀粉酶或其他葡萄糖-葡萄糖键裂解酶接触(任选的)。vi).灭活淀粉酶或其他酶(例如，通过加热)。vii).碱处理糖基化甜菊醇糖苷组合物(如果实施i或iii，其是任选的)。viii).纯化糖基化甜菊醇糖苷组合物(通过用活性碳、离子交换树脂和/或疏水性树脂和/或其他方法进行处理，以除去杂质)。糖基化甜菊醇糖苷组合物的用途根据本发明的方法制备的糖基化甜菊醇糖苷组合物可用作用于消耗的产品(包括例如食品、饮品、化妆用(个人护理)品和医药品的成分或组分。糖基化甜菊醇糖苷组合物例如作为甜味剂和/或风味调节剂或增强剂，即可以作为唯一的甜化或风味调节成分，又可以与其他甜味剂和/或风味调节剂组合。适宜的可与根据本发明制备的糖基化甜菊醇糖苷组合物结合使用的甜味剂包括天然甜味剂以及合成甜味剂、营养性甜味剂和非营养性甜味剂以及高甜度甜味剂和低甜度甜味剂。甜味剂可以选自但不限于由以下项组成的群组：蔗糖、甘油醛、二羟基丙酮、赤藓糖、苏阿糖、赤藓酮糖、来苏糖、核糖、木糖、核酮糖、木酮糖、阿洛糖、阿卓糖、半乳糖、葡萄糖、古洛糖、艾杜糖、甘露糖、塔罗糖、果糖、阿卢糖(阿洛酮糖)、山梨糖、塔格糖、甘露庚酮糖、景天庚酮糖、辛酮糖、岩藻糖、鼠李糖、树胶醛醣、松二糖、唾液糖、瑞鲍迪甙a、瑞鲍迪甙b、瑞鲍迪甙c、瑞鲍迪甙d、瑞鲍迪甙e、瑞鲍迪甙f、瑞鲍迪甙i、瑞鲍迪甙h、瑞鲍迪甙l、瑞鲍迪甙k、瑞鲍迪甙j、瑞鲍迪甙m(也称为瑞鲍迪甙x)、瑞鲍迪甙n、瑞鲍迪甙o、杜尔可甙a、杜尔可甙b、甜茶苷、甜叶菊提取物、甜菊甙、罗汉果甜甙iv、罗汉果甜甙v、罗汉果提取物、赛门甙、莫那甜及其盐(莫那甜ss、rr、rs、sr)、仙茅甜蛋白、甘草酸及其盐、奇异果甜蛋白、应乐果甜蛋白、马槟榔甜蛋白、布那珍、甜蜜素、叶甜素、菝葜甙、根皮甙、三叶甙、拜乌诺苷、欧亚水龙骨甜素、聚婆朵苷a、皮提罗苷a、皮提罗苷b、木库罗苷、费米索苷i、巴西甘草甜素i、阿布鲁索苷a、甜菊双糖甙和青钱柳甙i、糖醇如赤藓糖醇、三氯蔗糖、丁磺氨钾、安塞蜜酸及其盐、阿斯巴甜、阿力甜、糖精及其盐、新橙皮甙二氢查尔酮、环己氨基磺酸盐、环拉酸及其盐、纽甜、爱德万甜、通过除本文所述的那些以外的方法制备的糖化甜菊醇糖苷(gsg)以及它们的组合。根据本发明的实施方式，将糖基化的甜菊醇糖苷组合物与可有效改善糖基化甜菊醇糖苷组合物的口味和风味特性的量的瑞鲍迪甙b相结合。糖基化甜菊醇糖苷组合物可根据本文所述的任何过程制备，但也可以是利用本领域已知的任何其他的使起始甜菊醇糖苷组合物发生糖基化反应的方法而获得的糖基化甜菊醇糖苷组合物。在某些实施方式中，糖基化甜菊醇糖苷组合物可包含以干固体计约15重量％至约40重量％(例如，以干固体计约20重量％至约35重量％)的未反应的甜菊醇糖苷，余量完全或主要(例如，以干固体计，至少80重量％、至少85重量％或至少90重量％)是糖基化甜菊醇糖苷。已经发现，将瑞鲍迪甙b与糖基化甜菊醇糖苷组合物(例如，根据本发明而获得的甜菊醇糖苷组合物)相结合能够显著改善糖基化甜菊醇糖苷组合物的愉悦性能。优选地，糖基化甜菊醇糖苷组合物是根据实施方式a(在本发明的这个方面中，使起始甜菊醇糖苷组合物、葡萄糖供体和环糊精糖基转移酶在ph大于7.5至不超过10的水性介质中接触)制得的。在本发明的有利实施方式中，提供一种甜味剂组合物，其包含(或主要由其组成或由其组成)：糖基化甜菊醇糖苷组合物；以及以糖基化甜菊醇糖苷组合物和瑞鲍迪甙b的总干重计，至少1重量％、至少2重量％或至少3重量％的瑞鲍迪甙b。该糖基化甜菊醇糖苷组合物可含有以干重计小于2％、小于1％或小于0.5％乃至0％的瑞鲍迪甙b。在各种实施方式中，以糖基化甜菊醇糖苷组合物和瑞鲍迪甙b的总干重计，该甜味剂组合物可含有不超过10重量％、不超过9重量％、不超过8重量％、不超过7重量％、不超过6重量％或不超过5重量％的瑞鲍迪甙b。例如，以糖基化甜菊醇糖苷组合物和瑞鲍迪甙b的总重量计，该甜味剂组合物可含有1-10重量％、2-8重量％、3-6重量％或约4重量％的瑞鲍迪甙b。还可以通过结合根据本发明的不同方面制得的糖基化甜菊醇糖苷组合物来获得有利地改善后的甜味剂组合物。例如，通过使起始甜菊醇糖苷组合物、葡萄糖供体和环糊精糖基转移酶在ph大于7.5至不超过10的水性介质中接触但在糖基化之前或之后不对起始甜菊醇糖苷组合物进行碱处理来得到糖基化甜菊醇糖苷组合物(a类gsg组合物)，该糖基化甜菊醇糖苷组合物的感官性能可通过将此组合物与通过以下过程制得的糖基化甜菊醇糖苷组合物结合来增强：a)使起始甜菊醇糖苷组合物与碱性水性介质或碱性树脂接触，得到碱处理的甜菊醇糖苷组合物；和b)使该碱处理的甜菊醇糖苷组合物、葡萄糖供体和环糊精糖基转移酶在水性介质(其具有任何适宜的ph，例如，约5至约10；在偏碱性的ph下(例如，ph为约8至约9)可获得更高的糖基化甜菊醇糖苷组合物产率)中接触(b类gsg组合物)。这些共混物的益处在供消耗产品中的甜味剂组合物的浓度相对较高时尤为明显(例如，至少1000ppm的总糖基化甜菊醇糖苷)。以a类gsg组合物和b类gsg组合物的总干重计，该甜味剂组合物中的b类gsg组合物的量可以是至少5重量％且不超过50重量％(或不超过35重量％)。相应地，以a类gsg组合物和b类gsg组合物的总干重计，该甜味剂组合物中的a类gsg组合物的量可以是至少50重量％且不超过95重量％(或不超过65重量％)。在另一个实施例中，通过使起始甜菊醇糖苷组合物、葡萄糖供体和环糊精糖基转移酶在ph大于7.5至不超过10的水性介质中接触但在糖基化之前或之后不对起始甜菊醇糖苷组合物进行碱处理来得到糖基化甜菊醇糖苷组合物(a类gsg组合物)，该糖基化甜菊醇糖苷组合物的感官性能可通过将此组合物与通过使糖基化甜菊醇糖苷组合物与碱性水性介质或碱性树脂接触而制得的糖基化甜菊醇糖苷组合物(c类gsg组合物)结合来增强。这些共混物的益处在供消耗产品中的甜味剂组合物的浓度相对较高时尤为明显(例如，至少1000ppm的总糖基化甜菊醇糖苷)。以a类gsg组合物和c类gsg组合物的总干重计，该甜味剂组合物中的c类gsg组合物的量可以是至少5重量％且不超过50重量％。相应地，以a类gsg组合物和c类gsg组合物的总干重计，该甜味剂组合物中的a类gsg组合物的量可以是至少50重量％且不超过95重量％。根据本发明进一步的实施方式，提供一种甜味剂组合物，其包含(或主要由其组成或由其组成)：a)以干固体计，约10重量％至约25重量％(或约15重量％至约20重量％)的根据本发明的实施方式c制备的碱处理的糖基化甜菊醇糖苷组合物，其中通过糖基化包含(以干重计)25-30％的甜菊甙、55-65％的瑞鲍迪甙a以及其他的使得总计达到至少95％的总甜菊醇糖苷含量的甜菊醇糖苷的起始甜菊醇糖苷组合物或者糖基化包含(以干重计)55-65％的瑞鲍迪甙a、20-30％的甜菊甙以及总共3-8％的瑞鲍迪甙c和杜尔可甙a、具有至少90％的总甜菊醇糖苷含量的起始甜菊醇糖苷组合物，从而获得了该糖基化甜菊醇糖苷组合物；b)以干固体计，约65重量％至约90重量％(或约70重量％至约85重量％)的根据本发明的实施方式c未经过碱处理的糖基化甜菊醇糖苷组合物，其中通过糖基化包含(以干重计)25-30％的甜菊甙、55-65％的瑞鲍迪甙a以及其他的使得总计达到至少95％的总甜菊醇糖苷含量的甜菊醇糖苷的起始甜菊醇糖苷组合物或者糖基化包含(以干重计)55-65％的瑞鲍迪甙a、20-30％的甜菊甙以及总共3-8％的瑞鲍迪甙c和杜尔可甙a、具有至少90％的总甜菊醇糖苷含量的起始甜菊醇糖苷组合物，从而获得了该糖基化甜菊醇糖苷组合物；和c)以干固体计，总共0至约10重量％(或0至约5重量％)的残余葡萄糖供体和/或从葡萄糖供体中获得的糖类产物。在本发明的另一种实施方式中，提供一种甜味剂组合物，其包含(或主要由其组成或由其组成)：a)以干固体计，约10重量％至约25重量％(或约15重量％至约20重量％)的根据本发明的实施方式a制备的糖基化甜菊醇糖苷组合物，其中通过碱处理包含(以干重计)25-30％的甜菊甙、55-65％的瑞鲍迪甙a以及其他的使得总计达到至少95％的总甜菊醇糖苷含量的甜菊醇糖苷的起始甜菊醇糖苷组合物或者碱处理包含(以干重计)55-65％的瑞鲍迪甙a、20-30％的甜菊甙以及总共3-8％的瑞鲍迪甙c和杜尔可甙a、具有至少90％的总甜菊醇糖苷含量的起始甜菊醇糖苷组合物，以获得碱处理的起始甜菊醇糖苷组合物，然后糖基化该碱处理的起始甜菊醇糖苷组合物，从而获得了该糖基化甜菊醇糖苷组合物；b)以干固体计，约65重量％至约90重量％(或约70重量％至约85重量％)的糖基化甜菊醇糖苷组合物，其是通过如下过程获得的：糖基化包含(以干重计)25-30％的甜菊甙、55-65％的瑞鲍迪甙a以及其他的使得总计达到至少95％的总甜菊醇糖苷含量的甜菊醇糖苷的起始甜菊醇糖苷组合物或者糖基化包含(以干重计)55-65％的瑞鲍迪甙a、20-30％的甜菊甙以及总共3-8％的瑞鲍迪甙c和杜尔可甙a、具有至少90％的总甜菊醇糖苷含量的起始甜菊醇糖苷组合物，其中该起始甜菊醇糖苷组合物在糖基化之前未经过碱处理；和c)以干固体计，总共0至约10重量％(或0至约5重量％)的残余葡萄糖供体和/或从葡萄糖供体中获得的糖类产物。本发明的一个方面提供一种食品，其包含根据本发明制备的糖基化甜菊醇糖苷组合物或此类糖基化甜菊醇糖苷组合物的组合，通常是与至少一种附加的食品成分相结合。任选地，可以将一种或多种单独的甜菊醇糖苷(特别地包括瑞鲍迪甙b)与此类糖基化甜菊醇糖苷组合物结合使用。例如，除此类糖基化甜菊醇糖苷组合物之外，以瑞鲍迪甙b和糖基化甜菊醇糖苷组合物的总干重计，该食品还可包含1-10重量％、2-8重量％、3-6重量％或约4重量％的瑞鲍迪甙b。可以根据需要改变糖基化甜菊醇糖苷组合物的量，以便实现特定的所期望的结果，比如，举例来说，甜味增强和/或风味改善。例如，该食品可包含亚甜化量或甜化量的糖基化甜菊醇糖苷组合物。以干重计，该食品中糖基化甜菊醇糖苷组合物的浓度可以是5-2000ppm。在其他实施方式中，食品含有赋予该食品至少7、至少8、至少9或至少10或至少11但通常不超过20或15的sev的有效量的糖基化甜菊醇糖苷组合物，其中该食品可以另外含有一种或多种也与sev有关的其他甜味剂。可以使食品的sev提高至至少7、至少8、至少9、至少10或至少11的有效量将糖基化甜菊醇糖苷组合物添加到还含有一种或多种其他甜味剂的食品中，从而得到具有预定的期望的甜味的食品。因此，在本发明的各种实施方式中，食品可具有1-20、5-15或7-13的sev。食品的非限制性实例包括糖食产品(包括但不限于果冻糖、硬糖和口香糖)、甜点产品，比如酸奶酪(包括但不限于全脂、减脂和脱脂酸奶制品以及非乳制品和无乳糖酸奶酪和所有这些的冷冻品)、冷冻甜点(包括但不限于冷冻奶甜点，比如冰淇淋(包括普通冰淇淋、软冰淇淋、所有其他类型的冰淇淋)，和非乳制冷冻甜点，比如非乳制冰淇淋、果汁冰糕等等)、甜味烘焙产品(包括但不限于饼干、蛋糕、面包卷、馅饼、油酥糕点和曲奇)、用于制备甜味烘焙产品的预制甜味烘焙调拌料、饼馅(包括但不限于水果饼馅和像山核桃饼馅那样的坚果饼馅)、谷物制品，比如加糖的早餐谷物(包括但不限于挤压的早餐谷物、薄片状的早餐谷物和膨化的早餐谷物)、谷物包衣组合物、包括面包产品在内的焙烤制品(包括但不限于膨松和非膨松面包、像苏打面包那样的发酵和未发酵面包、包含任何类型的小麦粉的面包、包含任何类型的非小麦粉(比如土豆、大米或黑麦粉)的面包、无麸质面包)、用于制备面包产品的预制面包调拌料、冷冻奶制品、肉类、奶制品、调味品、点心棒(包括但不限于谷物、坚果、籽类和/或水果棒)、汤、调料、调拌料、预制食品、婴儿食品、节食配餐、糖浆、食品包衣、干果、调味酱、调味汁、涂抹酱(包括但不限于果酱/果冻、黄油和其他可涂抹的果酱、蜜饯等等)。在本发明的背景下还可以想到未在此提及但按照惯例包括一种或多种营养性甜味剂的其他类型的食品，尤其是那些减糖或低糖产品。食品可以是动物饲料产品，比如宠物食品。本发明的食品可包含作为在产品表面上形成的包衣或糖霜的甜味剂组合物。该包衣可改善食品的风味以及它的货架期。本发明的糖基化甜菊醇糖苷组合物还可以用于医疗食品(专门配制并用于具有单靠正常饮食无法满足的独特的营养需求的疾病的膳食管理的食品)中。本发明的另一方面提供了一种饮品，其包含根据本发明的糖基化甜菊醇糖苷组合物或根据本发明的糖基化甜菊醇糖苷组合物的组合，任选地用一种或多种单独的甜菊醇糖苷如瑞鲍迪甙b进行调节。例如，除此类糖基化甜菊醇糖苷组合物之外，以瑞鲍迪甙b和糖基化甜菊醇糖苷组合物的总重量计，该饮品还可包含1-10重量％、2-8重量％、3-6重量％或约4重量％的瑞鲍迪甙b。可以根据需要改变糖基化甜菊醇糖苷组合物的量，以便实现特定的所期望的结果，比如，举例来说，甜味增强和/或风味改善。例如，该饮品可包含亚甜化量或甜化量的糖基化甜菊醇糖苷组合物。该饮品中糖基化甜菊醇糖苷组合物的浓度(以干固体计)可以是5-2000ppm。在一种实施方式中，饮品包含800-1800ppm(干)的糖基化甜菊醇糖苷组合物。在其他实施方式中，饮品含有赋予该饮品至少7、至少8、至少9或至少10或至少11但通常不超过20或15的sev的有效量的糖基化甜菊醇糖苷组合物，其中该饮品可以另外含有一种或多种也与sev有关的其他甜味剂。可以使饮品的sev提高至至少7、至少8、至少9、至少10或至少11的有效量将糖基化甜菊醇糖苷组合物添加到还含有一种或多种其他甜味剂的饮品中，从而得到具有预定的期望的甜味的饮品。例如，非膳食软饮料通常在每100ml水中含有12g蔗糖，也就是含12％的蔗糖。因此，可以用足以是sev达到12的量的糖基化甜菊醇糖苷组合物来配置相同甜味的膳食软饮料。因此，在本发明的各种实施方式中，饮品可具有1-20、5-15或7-13的sev。饮品的非限制性实例包括碳酸饮料(包括但不限于软性碳酸饮料)、非碳酸饮料(包括但不限于软性非碳酸饮料，比如加味水和甜茶或咖啡类饮料)、水果味饮料、果汁、茶、牛奶、咖啡，尤其是那些减糖或低糖产品。还明确地想到了冷冻饮品(有时也称作冰沙)。在本发明的背景下还可以想到未在此提及但按照惯例包括一种或多种营养性甜味剂的其他类型的饮品，尤其是那些减糖或低糖产品。本发明的又一个方面提供一种餐桌甜味剂，其包含至少一种根据本发明的糖基化甜菊醇糖苷组合物。本发明的餐桌甜味剂可以任选地包括一种或多种选自由以下项组成的群组的另外的成分：膨胀剂(比如麦芽糊精、聚葡萄糖、像黄原胶或瓜尔胶那样的胶、可溶性玉米纤维(scf)、淀粉和多元醇)、天然和/或人造香味剂、风味增强剂、天然和/或人造色素、纤维、酸化剂、维生素、抗氧化剂、防腐剂、淀粉水解物等等。在一种实施方式中，该餐桌甜味剂包含至少一种根据本发明的糖基化甜菊醇糖苷组合物和至少一种像瑞鲍迪甙b那样的单独的甜菊醇糖苷两者。根据实施方式，该餐桌甜味剂是干性餐桌甜味剂。例如，其可以采用片剂、颗粒剂或粉剂的形式。还可以想到液体餐桌甜味剂，其通常采用组分的水溶液的形式。根据实施方式，该餐桌甜味剂可以进一步包含一种或多种营养性甜味剂。该营养性甜味剂可以选自由以下项组成的群组：蔗糖、葡萄糖、葡萄糖浆、异构葡萄糖、果糖、果葡糖浆、麦芽糖、乳糖、玉米糖浆、高果糖玉米糖浆、转化糖、糖蜜、蜂蜜和龙舌兰。在一个优选实施方式中，该营养性甜味剂是蔗糖。其中，该餐桌产品包括营养性甜味剂，以餐桌甜味剂的总重量计，所述营养性甜味剂可以高达约30重量％的量存在。例如，以餐桌甜味剂的总重量计，该营养性甜味剂可以约26重量％的量存在。根据实施方式，该营养性甜味剂可以进一步包含一种或多种选自由高甜度甜味剂和糖醇组成的群组的联合甜味剂。也可以使用各种合成的高效能甜味剂作为所述的一种或多种联合甜味剂。具体实例包括三氯蔗糖、阿斯巴甜和丁磺氨钾(acek)。还可以使用各种糖醇作为本发明的所述的一种或多种联合甜味剂。具体实例包括麦芽糖醇、木糖醇和赤藓糖醇。根据本发明的餐桌甜味剂通常可以用于增加饮料尤其是茶和咖啡等热饮料的甜味。本发明的另一个方面提供一种膨胀剂，其包含根据本发明的糖基化甜菊醇糖苷组合物。本发明的又一个方面提供一种包衣剂，其包含根据本发明的糖基化甜菊醇糖苷组合物。本发明的单独方面提供一种医药品，其包含根据本发明的糖基化甜菊醇糖苷组合物和至少一种其他药物成分，比如活性成分或赋形剂。示例性的医药品包括止咳糖浆、咀嚼片、糖锭、维生素制剂等等。本发明的另一个方面提供一种营养品或体育用品，其包含根据本发明的糖基化甜菊醇糖苷组合物。本发明的另一个方面提供一种化妆用(个人护理)品，其包含根据本发明的糖基化甜菊醇糖苷组合物和至少一种化妆品成分。示例性的化妆品包括牙膏、漱口剂等等。应当理解，在食品、饮品、医药品、营养品、体育用品或化妆品中存在的根据本发明获得的糖基化甜菊醇糖苷组合物的量将取决于糖基化甜菊醇糖苷组合物的甜味、口感、风味和其他感官属性，和产品中存在的其他甜味剂和/或风味调节剂的类型和量，和期望的产品的甜味或其他风味特性以及期望的产品热焓等其他因素。糖基化甜菊醇糖苷组合物可以作为风味增强剂以低于其甜味检测限(糖基化甜菊醇糖苷组合物赋予产品可感知的甜味的最低浓度)的浓度用在产品中。本发明的可选方面提供了本发明的甜味剂组合物在食品、饮品、医药品、营养品、体育用品或化妆品中作为膨胀剂或作为包衣剂的用途。根据本发明制备的糖基化甜菊醇糖苷组合物可以任何可摄入形式配制，例如，作为糖浆，以粉剂形式、片剂形式，作为颗粒剂，为溶液或以任何其他适宜的形式，包括饮品和食品。实施例实施例1在本实施例中，使用甜菊醇糖苷(包括瑞鲍迪甙a作为主要组分)的高纯度组合作为起始物料并对其进行第一次糖基化。然后用碱处理所得的糖基化甜菊醇糖苷组合物。物料1)麦芽糊精(葡萄糖当量＝1)。2)环糊精糖基转移酶(cgt酶)。3)麦芽淀粉酶。4)来源于glg生命科技集团sg95甜菊醇糖苷混合物(存在于甜叶菊叶中9种甜味甜菊醇糖苷的高纯度组合，其中瑞鲍迪甙a占混合物的约60重量％，甜菊甙占混合物的约30重量％)。5)颗粒活性碳，已再生。6)强碱性阴离子树脂和强酸性阳离子树脂，以强碱性阴离子树脂与强酸性阳离子树脂的重量比为60:40混合。7)大孔吸附树脂(具有大网络结构和大表面积的非离子型脂肪族丙烯酸类聚合物，呈珠粒形式)。反应该过程在500ml发酵罐中进行。各反应的三个样品(见表1)采用如下过程并行制备：1)在1000ml烧杯中将20g的sg95甜菊醇糖苷悬浮在340ml热水中。2)向悬浮液中加入40g麦芽糊精(de＝1)，并混合至浸没物料。3)用氢氧化钠调节ph至8.2。4)向溶液中加入2ml的cgt酶。5)在50℃下温育24小时，同时以200rpm搅拌。6)转移至烧瓶中并在沸水(约95℃)中加热反应混合物30分钟，使cgt酶变性，然后冷却至室温。7)将混合物返回到发酵罐烧杯中，用去离子水冲洗烧瓶以保证物料全部从烧瓶转移到烧杯中，并使混合物的总体积为约500ml。8)向溶液中加入5ml(1％)的麦芽淀粉酶。9)在30℃下温育24小时，同时以150rpm搅拌10)在沸水(约95℃)中加热反应混合物30分钟，以灭活麦芽淀粉酶，然后冷却至室温。11)在布氏漏斗上过滤溶液，以除去未反应的固体/糊精。12)用去离子水冲洗活性碳以去除细颗粒。用颗粒活性碳充填1#15x300mm夹套柱。碳柱预热至50℃，继续用1.5l的去离子水冲洗以除去细颗粒。13)通过用去离子水冲洗29.95g强碱性阴离子树脂和20.00g强酸性阳离子树脂制备混合床树脂。用混合床树脂充填1#15x300mm夹套柱。将该夹套柱预热至25℃并继续用1.5l的去离子水冲洗。14)以1.5ml/min的流速依次通过碳柱和混合床树脂柱过滤反应溶液。用水冲洗柱。15)用1500g脱气去离子水冲洗大孔吸附柱。16)通过大孔吸附柱过滤反应溶液。17)用1500g脱气去离子水冲洗大孔吸附柱。18)用1500g的50％乙醇溶液(758.68g脱气去离子水和750.63g的190标准酒精度的乙醇)冲洗大孔吸附柱。19)收集乙醇冲洗溶液，从溶液中蒸发出乙醇。20)将溶液(740.11g)转移到2l玻璃烧杯中。测定ph(4.24)，并用氢氧化钠将最终ph调节为10.03。将溶液加热至50℃，并以350rpm搅拌24小时。21)冷却溶液，并用7％w/w盐酸将ph从8.20调节到5.00。22)将溶液放置在冷冻干燥器上。23)收集干燥后的物料(共24.17g)并提交供分析测试。样品sg95水麦芽糊精初始ph最终ph样品120.04340.0340.245.498.17样品220.13340.0240.335.548.19样品319.99340.0040.085.518.17表1.使用实际重量。结果对这些样品所采用的主要分析技术是lc-ms。质谱仪(ms)上报液相色谱(lc)出峰的分子量(其除以通常为1的电荷数)。甜菊醇糖苷预期具有如下表所示的分子量。最常见的加成到甜菊醇核心上的糖残基为葡萄糖、鼠李糖、木糖、6-脱氧葡萄糖和果糖。从质量角度来看，葡萄糖＝果糖，鼠李糖＝6-脱氧葡萄糖。质谱分析法的另一个现象是加合物能够在离子化过程中形成。这些反应产物相对于期望的质荷比增加了质量。对于这个实验来说，图2中所示的m/z687对应于具有富马酸加合物的甜茶苷。这个m/z峰也可见于包含甜茶苷的甜菊醇糖苷标准物。图2示出了大多数反应产物对应于单糖基化、双糖基化或三糖基化甜菊醇糖苷，其中965和803处的最高峰分别为瑞鲍迪甙a和甜菊甙。表2.质谱分析参考数据。如在上面表2中所示的，甜菊甙的m/z为803，瑞鲍迪甙a的m/z为965。在图2和图3中，这些对应于洗脱的保留时间为9-12分钟的较大峰。表3.本发明条件和常规条件下的反应进程。讨论这个过程的期望的主要产物是糖基化瑞鲍迪甙b和糖基化甜菊双糖甙，因为瑞鲍迪甙b和甜菊双糖甙是起始物料碱处理的主要产物。这些产物期望是在10分钟后出现在lc-ms中。一般而言，较高程度的糖基化与较少的保留时间相关，因此在7分钟前具有较大峰的产物期望含有大量的具有较大糖基化程度的甜菊醇糖苷。虽然这些产品中的一些是重新生成的，但这些似乎不比它们在更典型地制备的样品中更普遍(图4)。当图3与图4相比时，这些图之间的最显着的差别是在约7.5分钟处的1127和1451m/z峰的抑制。这些峰可能对应于双糖基化和三糖基化瑞鲍迪甙a和三糖基化甜菊甙。这两种过程似乎都相对于商用糖基化甜菊醇糖苷产品生成了较低丰度的高度糖基化的组分(图5)。实施例2本实施例说明了甜菊醇糖苷组合物的初始碱处理，随后是进行转糖基作用生成糖基化甜菊醇糖苷组合物。碱处理1)39.99g的甜菊醇糖苷混合物(sg95，glg生命科技集团)溶于360.00g的1.25n氢氧化钠溶液中。所得混合物的ph为13.6。2)将混合物加热至50℃并以360rpm搅拌24小时。3)然后在冰浴中冷却混合物。4)一旦冷却，用7％w/w盐酸将混合物的ph调整至5(初始ph13.60，最终ph4.99)。5)将所得物料离心三次(在50ml试管中，在25℃下，以4500rpm进行30分钟)。为甜菊醇糖苷的含量对沉淀进行，并将其用于转糖基作用步骤中。转糖基作用1)在1000ml烧杯中将20g的碱处理的sg95甜菊醇糖苷混合物悬浮在340ml的热水中。2)向悬浮液中加入40g麦芽糊精(de＝1)，并混合至浸没物料。3)将ph调节至8.2，将混合物保持在50℃下。4)向溶液中加入2ml的cgt酶。5)将混合物在50℃下温育24小时，同时以200rpm搅拌。6)然后将反应混合物转移到烧瓶中，并在沸热水(约95℃)中将其加热30分钟；然后使样品冷却至室温。7)将混合物返回到发酵罐中，用去离子水冲洗烧瓶以保证物料全部从烧瓶转移到烧杯中。混合物的总体积为约500ml。8)向溶液中加入5ml(1％)的麦芽淀粉酶。9)将混合物在30℃下温育24小时，同时以150rpm搅拌。10)然后将反应混合物转移到烧瓶中，并在沸热水(约95℃)中将其加热30分钟，然后使样品冷却至室温。11)然后通过过滤纸过滤混合物，以除去分散不匀的糊精。12)然后用去离子水冲洗颗粒活性碳并将其充填到15x300mm夹套柱中。然后碳柱预热至50℃并用1.5l的去离子水冲洗以除去细颗粒。13)然后使步骤11获得的滤液以1.5ml/min的流速通过碳柱。随后用水冲洗碳柱。14)用去离子水将24.13g强碱性阴离子树脂与16.10g强酸性阳离子树脂一起冲洗，并将它们充填到15×300mm夹套柱中。然后将混合床柱加热至25℃并用1.5l去离子水冲洗。15)使步骤13获得的滤液以1.5ml/min的流速通过混合床柱.然后用水冲洗混合床柱。16)用1500g脱气去离子水冲洗大孔吸附柱。17)然后使步骤15获得的滤液通过大孔吸附柱，接着用1500g脱气去离子水。18)用1500g的50％乙醇溶液(760.69g脱气去离子水和729.07g的190标准酒精度的乙醇)冲洗大孔吸附柱。19)收集乙醇馏分并经由旋转蒸发器和冻干机将其干燥。20)然后将干燥后的物料(20.07g)提交用于重金属、残余溶剂和糖苷分析的分析测试。结果在酶处理之前对碱处理的sg95甜菊醇糖苷混合物进行的lc-ms分析显示出了对应于瑞鲍迪甙b和甜菊双糖甙的峰(图6)。图7中示出了碱处理的物料的lc-ms色谱图。所有赋值的质量都对应于糖(葡萄糖)与甜菊醇核心的加成反应。期望甜菊醇糖甙具有如下在表4中所示的分子量(标号“xglc”指的是加成到甜菊醇核心上的葡萄糖单元的数目)：表4.质谱分析参考数据。在17分钟后洗脱的较大峰641和803是瑞鲍迪甙a和甜菊双糖甙。在m/z为787和773的这些之后的峰对应于杜尔可甙b和去糖基化的瑞鲍迪甙f，这些可以是杜尔可甙c和杜尔可甙f碱处理的期望产物。这些产物上的鼠李糖和木糖残基可能抑制它们的糖基化。sg95甜菊醇糖苷混合物的碱处理似乎如预期的那样生成了甜菊双糖甙和瑞鲍迪甙b。在采用高(碱性)ph和葡萄糖供体与甜菊醇糖苷之比(w/w)为2:1的糖基化条件下，预期瑞鲍迪甙b的大部分(且很可能甜菊双糖甙也一样)将保持未反应。与先前的用瑞鲍迪甙b获得的结果(图8)相比，图7中的6-11分钟之间的较小峰有些出乎意料，其中在微酸性ph和葡萄糖供体与甜菊醇糖苷之比为1:1(w/w)下进行糖基化。例如，图7中的色谱图显示了m/z为803的4个峰，这些只能是甜菊甙、单糖基化甜菊双糖甙和瑞鲍迪甙b。这意味着甜菊双糖甙可以在多个位置进行糖基化，或在色谱图中记录断裂峰。然而，图7相对于图8的相对复杂度强烈地意味着相对于瑞鲍迪甙b来说，甜菊双糖甙糖基化较复杂。甜菊双糖甙与瑞鲍迪甙b的结构差异为：瑞鲍迪甙b具有1-2、1-3键合的葡萄糖部分，而甜菊双糖甙仅具有1-2键合的部分。有可能空间位阻的降低使得甜菊双糖甙的葡萄糖残基能够被糖基化，同时强烈地抑制了瑞鲍迪甙b的这种可能性。实施例3评估各种甜菊醇糖苷组合物和糖基化甜菊醇糖苷组合物的味道性能。所评估的组合物描述如下：reba＝瑞鲍迪甙a，纯度97％。rebag＝糖基化瑞鲍迪甙a(在ph5.5-6.0、糊精与甜菊醇糖苷的重量比＝1:1下进行糖基化)。rebbg＝糖基化瑞鲍迪甙b(在ph5.5-6.0、糊精与甜菊醇糖苷的重量比＝1:1下进行糖基化)。sg95b-g＝糖基化sg95甜菊醇糖苷混合物(来源于glg生命科技集团，含有约60中重量％的瑞鲍迪甙a和约30重量％的甜菊甙)，其在糖基化(在ph约8.5、糊精与甜菊醇糖苷的重量比＝2:1下进行糖基化)之前进行碱处理。sg95g-b＝糖基化sg95甜菊醇糖苷混合物(来源于glg生命科技集团，含有约60中重量％的瑞鲍迪甙a和约30重量％的甜菊甙)，其在糖基化(在ph约8.5、糊精与甜菊醇糖苷的重量比＝2:1下进行糖基化)之后进行碱处理。steviosidg＝糖基化甜菊甙(在ph5.5-6.0、糊精与甜菊醇糖苷的重量比＝1:1下进行糖基化)。steviten＝商用糖基化甜菊醇糖苷产品，由daepyung公司以商品名“steviten”销售。通过使起始甜菊醇糖苷组合物和糊精在50℃下与cgt酶接触24小时来制备rebag、rebbg、sg95b-g、sg95g-b和steviosideg组合物。在热杀(酶灭活)步骤之后，通过在30℃下用淀粉酶处理24小时，从而使得到的组合物中的每一种的链缩短。在第二灭酶步骤之后，通过离子交换树脂、碳过滤和吸附树脂对组合物进行纯化。然后，采用冻干法对所有组合物进行干燥。各甜叶菊产物仅在一天的测试中以两个水平进行测试，以500ppm和1000ppm的使用速率进行测试。由于已知的携带效应，供应的产物的浓度递增，从而使得两数据点上的读数更清晰。溶液在室温下以2盎司舒芙蕾杯供应，舒芙蕾杯用三位数的代码进行编号。为鉴定人员准备反渗透水和未加盐的饼干，用于在测试之前和期间清洁他们的腭部。尽管由于排除需要(即，那些正处于哺乳期、妊娠期、在药物治疗中等等开始了这项研究但随后在过程中退出了的人员)有时仅有28名鉴定人员进行了测试，但每一日研究目标都是30人。这项研究被设计成使用中性ph水中的蔗糖溶液为参考锚定的量表的评级研究。在该研究中，鉴定人员收到一系列的贴有它们的sev当量的标签并以此标识的参考样品。范围超过了测试样品的期望甜味，鉴定人员就将该超过测试样品的期望甜味的甜味评为最大的15-pt。测试溶液的预先筛选表明大多数个体都会感知这些溶液为10sev或更小。因为在测试之前没有人能够预测所有个体的敏感性，所以使用更广泛的参考范围。具体地，sev参考如下(表5)：表5.2.5sev参考5.0sev参考7.5sev参考10.0sev参考12.5sev参考2.5％蔗糖溶液5.0％蔗糖溶液7.5％蔗糖溶液10.0％蔗糖溶液12.5％蔗糖溶液首先让鉴定人员自身熟悉各参考溶液的甜度及其对应的sev。接着，他们等待30秒，然后用水或饼干净化他们的腭部。然后，让鉴定人员品尝测试样品(其用随机的三位数的代码标识)。然后，指示他们在线性量表上拖拽标记，以相对于上文所述的参考匹配他们的测试样品的甜味，该量表的范围为0至15。在线性标度的右边的方框为鉴定人员显示他们正在拖拽的值，以确保他们不会混淆其正在评级的甜味当量。一旦完成，则采用图9所示的格式进行与测试样品的喜好、测试样品的味道与糖的相似性、任何异味的强度和任何异味的同一性有关的询问。用于喜好量表的值为1-7之间范围内的标准7-pt嗜好量表，相似性量表为1-5之间范围内的标准5-pt强度量表，以及异味量表为0-5之间范围内0-pt锚定的6-pt强度量表。对异味的描述是开放式的，使得鉴定人员能够将潜在的异味命名为任何他们想要的名称。所获得的味道性能数据概括在下表中(表6)。sev为蔗糖当量值(％蔗糖溶液)。术语“蔗糖当量值”或“sev”是在相同的食品、饮料或溶液中提供给定百分比的蔗糖的甜味所需的非蔗糖甜味剂的量。反化％是将500ppm样品评分成比1000ppm样品甜的评定人员的百分比。这表示是在效能曲线的平台期附近和高浓度的苦味或其他掩蔽甜味的异味。反化％的值较低时是最优的，伴随着高sev和高喜好值。还期望与糖的分数的差值较低、sev的标准偏差较低和异味的分数也较低。表6.味道数据表明所有的糖基化样品在除sev以外的所有矩阵上表现均优于瑞鲍迪甙a。在1000ppm时，可认为几种样品在甜味上与瑞鲍迪甙a对等，但在评级中的标准偏差较小。这意味着消费者中的一般人群会相对于瑞鲍迪甙a对这些产物作为消费品如食品和饮品中的成分有更为一致的体验，从而为配制这些产品提供有利条件。在所测试的组合物中，sg95g-b在500ppm下特别有效。因此，该组合物具有所测试的组合物中最低的甜味阈值是理所当然。该属性在使用这样的组合物作为低含量的风味增强剂时是有利的。与steviten相比，该组合物的效力优势是最明显的。由于糖基化的sg95类产物(如sg95g-b所示)主要由瑞鲍迪甙a、甜菊甙以及它们的糖基化产物组成，因此它们的味道性能在糖基化瑞鲍迪甙a和糖基化甜菊甙的味道性能之间是理所当然的。然而，令人惊讶地，发现sg95g-b比上述产物两者中任何一个都甜。同样地，sg95b-g主要由瑞鲍迪甙b，甜菊双糖甙和糖基化产物组成。假定据报告显示，甜菊双糖甙相对于瑞鲍迪甙a、瑞鲍迪甙b或甜菊甙是不甜的且味质较差，则也是令人惊讶地，该产物(sg95b-g)表现得更新糖基化瑞鲍迪甙b。实施例4在本实施例中，测试以下糖基化甜菊醇糖苷样品。sg95g-b＝糖基化sg95甜菊醇糖苷混合物(来源于sweetgreenfields公司，含有约60中重量％的瑞鲍迪甙a和约25重量％的甜菊甙)，其在ph约8.5、糊精与甜菊醇糖苷的重量比＝2:1下进行糖基化。具有4％rebb的sg95g＝同上具有4％瑞鲍迪甙b的96％sg95g(干混)。具有15％sg95b-g的sg95g＝具有15％sg95b-g的85％sg95g(如实施例3中所述)。具有20％g-b的sg95g-b＝糖基化sg95甜菊醇糖苷混合物(来源于sweetgreenfields公司，含有约60中重量％的瑞鲍迪甙a和约25重量％的甜菊甙)，其在ph约8.5、糊精与甜菊醇糖苷的重量比＝2：1下进行糖基化，其中在糖基化后对20％的物料进行碱处理。通过使起始甜菊醇糖苷组合物和糊精在50℃下与cgt酶接触长达24小时来制备sg95g样品。然后，通过在30℃下用淀粉酶处理24小时，从而使该产物的链缩短。在灭酶步骤(加热30分钟使温度达到95℃)之后，通过离子交换树脂、碳过滤和吸附树脂对产物进行纯化。然后，对样品进行喷雾干燥。通过使起始甜菊醇糖苷组合物和糊精在80℃下与cgt酶接触长达18小时来制备具有20％g-b的sg95g样品。然后，在50℃下用淀粉酶对该产物缩链2小时。在灭酶步骤(加热30分钟使温度达到95℃)之后，除去残留的糖类。然后，在80℃对20％的溶液进行碱处理。中和后，将物料与原始溶液重组并用离子交换树脂和碳过滤进行处理。然后，采用冻干法对样品进行干燥。如实施例3所述以另外的经评估包括1500ppm的浓度来测试样品。所得结果概括在表7中。表7.组合物浓度,ppmsev喜好异味sg95g10008.53.22.4sg95g15008.42.53.3具有4％rebb的sg95g10008.13.82.2具有4％rebb的sg95g15008.73.02.9具有15％sg95b-g的sg95g10007.54.41.8具有15％sg95的b-gsg95g15008.73.62.8具有20％g-b的sg95g10007.93.82.0具有20％g-b的sg95g15009.03.42.3如表7所示，sg95g(在非常甜时)与本实验中所测试的其他产物相比，具有较高的异味和较低的喜好分数。发现包含4％的瑞鲍迪甙b改善了sg95g的喜好和异味分数。发现包含碱处理的糖基化甜菊甙(在糖基化之前或之后进行碱处理)通过减少异味和/或提升喜好进一步改善了甜味剂的味道性能。此外，由于相对于1500ppmsg95g溶液减少了异味，可能会获得较高的甜化水平。当前第1页12当前第1页12