一种新型核酸等温扩增反应组件的制作方法

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种新型核酸等温扩增反应组件，以及包含新型核酸等温扩增反应组件的核酸扩增反应试剂盒，用于dna或rna的检测。

背景技术：

生物遗传物质核酸序列的体外等温扩增技术，如环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplification，lamp)，具有60～65℃恒温扩增，30～60min即可实现10⁹～10¹⁰倍dna序列扩增的突出优势，且需要的设备简单，已被应用于病原菌的分子诊断，食品和化妆品的安全检测，及其进出口快速筛查等领域。

lamp反应中的dna聚合酶具有链置换活性，如bstdnapolymerase。然而，与传统的聚合酶链式反应(polymerasechainreaction，pcr)中的dna聚合酶相比，现有商品化的bstdnapolymerase价格较高，是前者的4～6倍。另外，lamp结果的判定基于肉眼观察或浊度仪检测反应液中副产物-焦磷酸镁沉淀的浊度，或基于在紫外光或可见光下肉眼观察结合于双链dna的荧光染料判定扩增与否。因此，为便于观测结果，lamp反应通常在200μl的pcr反应管内进行，反应体系为25μl。最近，有研究者采用玻璃毛细管作为反应载体，使得lamp反应体系减少至1～5μl，可以有效降低样品的检测成本。然而，毛细管进样及其体积不易操控；除了lamp反应液，毛细管内还需要注入空气层、水体层；毛细管两端口要用特殊胶封口；毛细管还易断裂，不便于大量样品的检测操作等。

技术实现要素：

为克服现有技术的上述缺陷，本发明的目的在于提供一种新型核酸等温扩增反应组件，以及包含新型核酸等温扩增反应组件的核酸扩增反应试剂盒。

本发明的上述目的通过以下技术方案实现：

第一方面，一种新型核酸等温扩增反应组件，包括：反应管、适配架和暖贴，其中，所述反应管自开口处起依次分为：密封区、加样区和反应区；所述反应管还包括管盖，且与所述密封区的密封口适配。

优选的，所述反应管为薄壁型，材质为塑料。

优选的，所述加样区大小规格与1～20μl微量移液吸头适配。

优选的，所述反应区为针形，且容积为5～15μl。

优选的，所述适配架为多孔道双层开放式孔槽结构，包括上层大孔和下层小孔，所述上层大孔为反应管插入和加样区固定孔，所述下层小孔为反应管底部插入和固定孔。

更优选的，所述适配架的材质为塑料。

优选的，所述适配架的大小规格与所述暖贴适配。

优选的，所述暖贴为可折叠长方形，大小规格与所述反应管、所述适配架及其支撑脚相适配。

第二方面，一种核酸扩增反应试剂盒，包括上述新型核酸等温扩增反应组件。

第三方面，上述核酸扩增反应试剂盒用于dna或rna的检测。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

本发明提供一种新型核酸等温扩增反应组件，其中，反应管设置反应管盖使得核酸等温扩增反应在封闭条件下完成；设置加样区使得微量液体的加样操作简便；设置针形反应区减少反应液体积，降低检测成本。多孔道双层开放式孔槽结构的适配架使得核酸等温扩增反应和检测在适配架上同时实现，整体结构简单，制造成本低廉、易于平行化集成，实现高通量快速检测，适合推广使用。

附图说明

图1是反应管示意图；1表示密封区；2表示加样区；3表示反应区。

图2是适配架示意图；

图3是适配架俯视图；

图4是暖帖示意图；

图5是暖帖俯视图；

图6暖帖左视图；

图7暖帖右视图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明作进一步详细说明。

参见附图1，新型核酸等温扩增反应组件中的反应管自开口处起依次分为：密封区1、加样区2和反应区3；其中，反应管为薄壁型塑料，反应管还包括管盖，且与密封区1的密封口适配，密封区1高度为5mm，反应管盖直径为7mm，确保核酸等温扩增反应在封闭条件下完成；加样区2大小规格与微量移液吸头适配；加样区2高度为8mm，上端直径为4.5mm，下端直径为3.5mm，适合使用1～20μl移液吸头加样操作；反应区3高度为35mm，设置为针形，上端直径为3.3mm，适用于5～15μl的核酸等温扩增反应体系。

参见附图2和3，新型核酸等温扩增反应组件中的适配架为多孔道双层开放式孔槽结构，包括上层大孔和下层小孔，上层大孔为反应管插入和加样区固定孔，下层小孔为反应管底部插入和固定孔，适配架的材质为塑料。具体为：长度为133mm、高度为42mm，上层大孔为反应管插入和加样区固定孔，外径为7mm，内径为5mm，孔间距为3mm；下层小孔为反应管底部插入和固定孔，外径为3.5mm，内径为1.5mm，孔间距为6.5mm；固定孔均设置为开放式孔槽结构，有利于与暖帖接触。

参见附图4、5、6和7，为反应组件中的暖贴，可折叠长方形，长度为147mm、宽度为2×55mm；封口边宽度为7mm；折叠区长度为122mm、宽度为7.5mm。

将上述新型核酸等温扩增反应组件用作制备核酸扩增反应试剂盒，用于dna或rna的检测，去除暖帖，在可见光下或在紫外光下通过肉眼观察反应管中显色情况或荧光有无，判断检测结果，简单、快速且直接。

上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而非对实施方式的限定。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷尽。而由此所引申的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围内。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种新型核酸等温扩增反应组件，包括反应管、适配架和暖贴，反应管自开口处起依次分为：密封区、加样区和反应区；反应管还包括管盖，且与密封区的密封口适配；加样区大小规格与1～20μL的微量移液吸头适配；反应区为针形，且容积为5～15μL；适配架为多孔道双层开放式孔槽结构，与暖贴适配；包含上述新型核酸等温扩增反应组件的核酸扩增反应试剂盒可以同时进行核酸等温扩增反应和检测，整体结构简单，制造成本低廉、易于平行化集成，实现高通量快速检测，适合推广使用。

技术研发人员：陈兰明;苏晨丽
受保护的技术使用者：上海海洋大学
技术研发日：2018.08.16
技术公布日：2018.12.07