大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌的体外抑制作用的研究方法与流程

本发明涉及大千生技术领域，尤其涉及大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌的体外抑制作用的研究方法。

背景技术：

大千生是茄科植物假酸浆属的一年生直立草本植物，又称假酸浆，天珠等，在我国南北均有作药用或欣赏栽培，大千生植物中的根、茎、花和种子，全草味甘、淡、微苦、性平，它的功效是镇静、祛痰和清热解毒等，对发热、热淋、疮痈肿痛、风湿关节炎等疾病有很大的治疗效果，而且大千生中总黄酮对大肠杆菌有抑制作用，但是现有技术中无法得知大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌抑制的功效，为此我们提出大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌的体外抑制作用的研究方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌的体外抑制作用的研究方法，以解决上述背景技术中提出的问题

本发明提供如下技术方案：大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌的体外抑制作用的研究方法，包括如下步骤：

(1)制备大千生醇提取液：分别将40g的种子、茎和根的粉末加入到1000ml的锥形瓶中，然后在锥形瓶内加入800ml40％的乙醇，在功率150w、60℃超声波进行提取40min后取出，用抽滤机对其溶液进行除杂，再用旋转蒸发仪对其溶液进行浓缩，浓缩至70ml的提取液放入1000ml的锥形瓶中，对其提取液进行除糖，除糖后进行旋转蒸发仪再次浓缩，浓缩至4ml后取出放置在具塞试管中，所得提取液就为各个部位的10g/ml的提取液；

(2)制作培养基：准备牛肉膏7.5g，蛋白胨10g，nacl7.5g，琼脂粉20g，水1000ml，将其药品加热混匀于1000ml的水中，调ph7.4-7.6，放入1000ml锥形瓶中，放进高压蒸汽灭菌锅内，于0.1mpa121℃高压灭菌20min，待压强为零，打开排气阀，取出，在超净工作台上进行培养基制备，放凉后放进冰箱中备用；

(3)培养大肠杆菌：在超净工作台上，向牛肉膏蛋白胨培养基中划线接种大肠杆菌，至于37℃电热恒温培养箱中培养24h；

(4)抑菌程度实验：将大肠杆菌分别放入到10g/ml、51g/ml、2.5g/ml、1.25g/ml和0.625g/ml的提取液内；

(5)实验结果：在10g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子；在5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在2.5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在1.25g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在0.625g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子。

优选的，所述步骤(3)中在超净工作台上，向试管中加入生理盐水，在生理盐水中加入复苏的大肠杆菌，制成大肠杆菌混悬液，用紫外分光光度计在0d625值的条件下，测其值在0.08-0.13(0.5麦氏浊度)之内。

优选的，所述步骤(3)中在超净工作台上，用移液枪一次性取0.1ml的大肠杆菌混悬液均匀布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，用涂布器均匀涂布在牛肉膏蛋白胨培养基上。

本发明提供了大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌的体外抑制作用的研究方法，通过制备大千生不同部位的提取液，而且将大肠杆菌加入到不同含量的提取液内，对大肠杆菌的抑制作用进行对比，在10g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在2.5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在1.25g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在0.625g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子，由此可见，根所产生的总黄酮对大肠杆菌抑制最好，解决了但是现有技术中无法得知大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌抑制的功效。

附图说明

图1为本发明提出的大千生种子总黄酮对大肠杆菌的抑菌程度数据图；

图2为本发明提出的大千生茎总黄酮对大肠杆菌的抑菌程度数据图；

图3为本发明提出的大千生根总黄酮对大肠杆菌的抑菌程度数据图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供一种技术方案：大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌的体外抑制作用的研究方法，包括如下步骤：

(1)制备大千生醇提取液：分别将40g的种子、茎和根的粉末加入到1000ml的锥形瓶中，然后在锥形瓶内加入800ml40％的乙醇，在功率150w、60℃超声波进行提取40min后取出，用抽滤机对其溶液进行除杂，再用旋转蒸发仪对其溶液进行浓缩，浓缩至70ml的提取液放入1000ml的锥形瓶中，对其提取液进行除糖，除糖后进行旋转蒸发仪再次浓缩，浓缩至4ml后取出放置在具塞试管中，所得提取液就为各个部位的10g/ml的提取液；

(2)制作培养基：准备牛肉膏7.5g，蛋白胨10g，nacl7.5g，琼脂粉20g，水1000ml，将其药品加热混匀于1000ml的水中，调ph7.4-7.6，放入1000ml锥形瓶中，放进高压蒸汽灭菌锅内，于0.1mpa121℃高压灭菌20min，待压强为零，打开排气阀，取出，在超净工作台上进行培养基制备，放凉后放进冰箱中备用；

(3)培养大肠杆菌：在超净工作台上，向牛肉膏蛋白胨培养基中划线接种大肠杆菌，至于37℃电热恒温培养箱中培养24h；

(4)抑菌程度实验：将大肠杆菌分别放入到10g/ml、51g/ml、2.5g/ml、1.25g/ml和0.625g/ml的提取液内；

(5)实验结果：在10g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子；在5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在2.5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在1.25g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在0.625g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子。

实施例一：

首先分别将40g的种子、茎和根的粉末加入到1000ml的锥形瓶中，然后在锥形瓶内加入800ml40％的乙醇，在功率150w、60℃超声波进行提取40min后取出，用抽滤机对其溶液进行除杂，再用旋转蒸发仪对其溶液进行浓缩，浓缩至70ml的提取液放入1000ml的锥形瓶中，对其提取液进行除糖，除糖后进行旋转蒸发仪再次浓缩，浓缩至4ml后取出放置在具塞试管中，所得提取液就为各个部位的10g/ml的提取液，然后准备牛肉膏7.5g，蛋白胨10g，nacl7.5g，琼脂粉20g，水1000ml，将其药品加热混匀于1000ml的水中，调ph7.4-7.6，放入1000ml锥形瓶中，放进高压蒸汽灭菌锅内，于0.1mpa121℃高压灭菌20min，待压强为零，打开排气阀，取出，在超净工作台上进行培养基制备，放凉后放进冰箱中备用，然后在超净工作台上，向牛肉膏蛋白胨培养基中划线接种大肠杆菌，至于37℃电热恒温培养箱中培养24h，然后将大肠杆菌分别放入到10g/ml、51g/ml、2.5g/ml、1.25g/ml和0.625g/ml的提取液内，最后在10g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子；在5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在2.5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在1.25g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在0.625g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子。

实施例二：

在实施例一中，再加入下述步骤：

步骤(3)中在超净工作台上，向试管中加入生理盐水，在生理盐水中加入复苏的大肠杆菌，制成大肠杆菌混悬液，用紫外分光光度计在od625值的条件下，测其值在0.08-0.13(0.5麦氏浊度)之内。

首先分别将40g的种子、茎和根的粉末加入到1000ml的锥形瓶中，然后在锥形瓶内加入800ml40％的乙醇，在功率150w、60℃超声波进行提取40min后取出，用抽滤机对其溶液进行除杂，再用旋转蒸发仪对其溶液进行浓缩，浓缩至70ml的提取液放入1000ml的锥形瓶中，对其提取液进行除糖，除糖后进行旋转蒸发仪再次浓缩，浓缩至4ml后取出放置在具塞试管中，所得提取液就为各个部位的10g/ml的提取液，然后准备牛肉膏7.5g，蛋白胨10g，nacl7.5g，琼脂粉20g，水1000ml，将其药品加热混匀于1000ml的水中，调ph7.4-7.6，放入1000ml锥形瓶中，放进高压蒸汽灭菌锅内，于0.1mpa121℃高压灭菌20min，待压强为零，打开排气阀，取出，在超净工作台上进行培养基制备，放凉后放进冰箱中备用，然后在超净工作台上，向牛肉膏蛋白胨培养基中划线接种大肠杆菌，至于37℃电热恒温培养箱中培养24h，在超净工作台上，向试管中加入生理盐水，在生理盐水中加入复苏的大肠杆菌，制成大肠杆菌混悬液，用紫外分光光度计在od625值的条件下，测其值在0.08-0.13(0.5麦氏浊度)之内，然后将大肠杆菌分别放入到10g/ml、51g/ml、2.5g/ml、1.25g/ml和0.625g/ml的提取液内，最后在10g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子；在5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在2.5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在1.25g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在0.625g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子。

实施例三：

在实施例二中，再加入下述步骤：

步骤(3)中在超净工作台上，用移液枪一次性取0.1ml的大肠杆菌混悬液均匀布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，用涂布器均匀涂布在牛肉膏蛋白胨培养基上。

首先分别将40g的种子、茎和根的粉末加入到1000ml的锥形瓶中，然后在锥形瓶内加入800ml40％的乙醇，在功率150w、60℃超声波进行提取40min后取出，用抽滤机对其溶液进行除杂，再用旋转蒸发仪对其溶液进行浓缩，浓缩至70ml的提取液放入1000ml的锥形瓶中，对其提取液进行除糖，除糖后进行旋转蒸发仪再次浓缩，浓缩至4ml后取出放置在具塞试管中，所得提取液就为各个部位的10g/ml的提取液，然后准备牛肉膏7.5g，蛋白胨10g，nacl7.5g，琼脂粉20g，水1000ml，将其药品加热混匀于1000ml的水中，调ph7.4-7.6，放入1000ml锥形瓶中，放进高压蒸汽灭菌锅内，于0.1mpal21℃高压灭菌20min，待压强为零，打开排气阀，取出，在超净工作台上进行培养基制备，放凉后放进冰箱中备用，然后在超净工作台上，向牛肉膏蛋白胨培养基中划线接种大肠杆菌，至于37℃电热恒温培养箱中培养24h，在超净工作台上，向试管中加入生理盐水，在生理盐水中加入复苏的大肠杆菌，制成大肠杆菌混悬液，用紫外分光光度计在od625值的条件下，测其值在0.08-0.13(0.5麦氏浊度)之内，在超净工作台上，用移液枪一次性取0.1ml的大肠杆菌混悬液均匀布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，用涂布器均匀涂布在牛肉膏蛋白胨培养基上，然后将大肠杆菌分别放入到10g/ml、51g/ml、2.5g/ml、1.25g/ml和0.625g/ml的提取液内，最后在10g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子；在5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在2.5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在1.25g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在0.625g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子。

请参阅图1-3，大千生的种子、茎、根的总黄酮在不同浓度下，对大肠杆菌均产生抑制作用不同，其中大千生的根抑菌效果极为显著，种子和茎的抑菌效果相对于根次之，对于大肠杆菌的抑菌程度随着浓度的降低随之减小，说明大千生不同部位不同浓度的总黄酮对大肠杆菌的抑菌效果程度不同。

本发明中，通过制备大千生不同部位的提取液，而且将大肠杆菌加入到不同含量的提取液内，对大肠杆菌的抑制作用进行对比，在10g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在2.5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在1.25g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在0.625g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子，由此可见，根所产生的总黄酮对大肠杆菌抑制最好，解决了但是现有技术中无法得知大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌抑制的功效。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。