1.重组人notch1蛋白在制备神经干细胞中的应用。
2.如权利要求1所述的的应用,其特征在于,所述神经干细胞为能够分化为具有产生动作电位功能的皮层神经元的神经干细胞。
3.如权利要求1所述的应用,其特征在于,具体涉及所述神经干细胞的制备方法,包括如下步骤:
(1)当人源ipscs细胞汇合度达到100%以上时开始利用神经干细胞诱导培养基进行神经干细胞诱导分化培养4-6天,停止诱导,然后进行消化,收集细胞;
(2)步骤(1)中收集的细胞,用神经干细胞维持培养基重悬细胞继续培养4-7天后进行消化传代;获得神经干细胞,所述神经干细胞维持培养基组分中包括重组人notch1蛋白。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(1)中神经干细胞诱导培养基为:neurobasal培养基+1×n2+1×b27+1×glutamax-i+500ng/ml人重组noggin+20μmsb431542+4ng/mlfgf-2;
优选的,步骤(1)中的诱导分化培养过程中,每3天进行半量换液;
优选的,步骤(1)中用胰酶进行消化,收集细胞;
优选的,步骤(1)中用0.25%trpsin-edta进行消化。
5.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(2)中神经干细胞维持培养基组分中重组人notch1蛋白的质量浓度为90-110ng/ml;
优先的,步骤(2)中神经干细胞维持培养基为:neurobasal培养基+1×n2+1×b27+10ng/mlegf+10ng/mlfgf-2+20ng/mlbdnf+100ng/ml重组人notch1蛋白;
优选的,步骤(2)中继续培养过程中,每3天进行半量换液;
优选的,步骤(2)中继续培养4-7天,进行消化传代;
优选的,步骤(2)中继续培养4天,进行消化传代;
优选的,步骤(2)中将步骤(1)收集细胞,按105/cm2接种于神经干细胞维持培养基;
优选的,步骤(2)中消化传代的方法为将神经球培养物收集于离心管中,1000rpm离心2分钟,弃上清液,加入无钙镁磷酸缓冲盐溶液(pbs)重悬神经球,1000rpm离心2分钟,弃上清,在离心管中加入0.25%trpsin-edta,放入体积浓度为5%co2的37℃恒温细胞培养箱中消化至神经球为单细胞时,终止消化,1000rpm离心5分钟,弃上清,用上述神经干细胞维持培养基重悬细胞按105/cm2接种于6孔板中,放入体积浓度为5%co2的37℃恒温细胞培养箱中培养,每3天半量换液;
优选的,步骤(2)中消化传代2-3次可获得纯化的神经干细胞;
优选的,消化传代8-10次获得神经干细胞;
优选的,消化传代12-30次获得神经干细胞。
6.一种神经干细胞维持培养基,其特征在于,包括如下组分:neurobasal培养基+1×n2+1×b27+10ng/mlegf+10ng/mlfgf-2+20ng/mlbdnf+90-110ng/ml重组人notch1蛋白。
7.利用权利要求1制备的神经干细胞在分化为具有产生动作电位功能的皮层神经元中的应用。
8.如权利要求1-5任一项所述的应用,其特征在于,所述的神经干细胞用于神经保护药物的筛选。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,所述的神经干细胞用于诱导分化制备具有产生动作电位功能的皮层神经元。
10.如权利要求9所述的应用,其特征在于,所述的皮层神经元用于神经保护药物的筛选。