一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法与流程

文档序号:24335786发布日期:2021-03-19 12:16阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法,其特征在于:包括以下步骤:

步骤1:人类排出粪便后,立即进行采集工作,通过对人们的粪便进行取样,然后将粪便样品放置在取样品中,3-8个取样瓶分别进行取样工作,然后将取样瓶放置在温度为20-50℃的环境中;

步骤2:所述粪便中放置保持液,保持液的成分为:0.23-0.57m的edta,1.2-3.25的nacl,0.15-0.8m的tris;

步骤3:粪便运输至实验室时,通过针管吸取350μl-600μl的粪便放置在离心管中,然后通过人工继续摇匀,然后通过无菌均质过滤袋中进行过滤工作;离心管上方通过橡胶密封盖密封;

步骤4:然后放入离心设备中;离心3-8次,然后将其置于温度为2-6℃低温离心分离洗涤2-5次,其离心分离洗涤时,弃去离心管中清澈透明,在显微镜下管观察没视野极少细菌的上清液和下层固体杂质,而将呈白色且稀释7倍后显微镜下观察没视野细菌多至无法计算的中间层菌层保留,获得中间菌液层,即得到肠道菌群液。

2.根据权利要求1所述的一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法,其特征在于:所述每个取样品内部均装有10-20ml的粪便,且取样瓶采用人工均匀摇动4-10min,每个取样瓶上方采用密封塞密封,取样瓶采用光滑的透明的玻璃管。

3.根据权利要求1所述的一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法,其特征在于:将装有粪便样本的离心管在4000-13000rpm条件下离心3-7min,保留沉淀,去除上清液。

4.根据权利要求1所述的一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法,其特征在于:所述均质过滤袋内部设有滤膜夹层,滤膜夹层上的滤膜孔孔径范围在0.095mm-0.35mm之间。

5.根据权利要求1所述的一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法,其特征在于:将均质过滤液用稀释液稀释,稀释液采用无菌水或者生理盐水,最后采用拍打式均质器均质,样品均质过滤后,制得均质过滤液。

6.根据权利要求1所述的一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法,其特征在于:所述离心分离洗涤操作前,采用分级过滤器进行,分级过滤器中过滤网的孔径从大到小在0.15-0.5范围内设置。


技术总结
本发明涉及酒精性骨重构技术领域,尤其为一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法,人类排出粪便后,立即进行采集工作,通过对人们的粪便进行取样,然后将粪便样品放置在取样品中,8个取样瓶分别进行取样工作,然后将取样瓶放置在温度为45℃的环境中,通过针管吸取350μL‑600μL的粪便放置在离心管中,然后通过人工继续摇匀,然后通过无菌均质过滤袋中进行过滤工作;离心管上方通过橡胶密封盖密封;然后放入离心设备中;离心8次,然后将其置于温度为6℃低温离心分离洗涤4次,获得中间菌液层,即得到肠道菌群液;本发明中,然后通过研究肠道菌群可以鉴定是否是酒精诱导骨组织细胞异常代谢而导致骨稳态失衡。

技术研发人员:不公告发明人
受保护的技术使用者:黑龙江中医药大学
技术研发日:2020.12.08
技术公布日:2021.03.19
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