一株耐酸胆固醇清除率高的副干酪乳杆菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一株耐酸胆固醇清除率高的副干酪乳杆菌。本发明还涉及所述副干酪 乳杆菌的制备方法和应用方法。
【背景技术】
[0002] 人体血液中正常胆固醇含量为2. 9?6.Ommol/L，胆固醇含量过高或过低都会影 响人体健康。尤其随着人们生活水平的提高，人体血清中胆固醇含量往往偏高。医学理论 和实践证明，血清中胆固醇水平过高会引起一系列疾病，例如高血压、冠心病、动脉硬化等 心脑血管疾病。有人发现，非洲Masai人和美国人大量饮用由乳杆菌发酵的乳制品，其体内 血清胆固醇含量普遍较低。这些结果引起了国内外研宄学者的普遍关注。迄今为止人体及 动物实验也证明了乳酸菌的降胆固醇作用，已报道有降胆固醇作用的乳酸菌有副干酪乳杆 菌、干酪乳杆菌、双歧杆菌、植物乳杆菌等乳杆菌，其中副干酪乳杆菌的菌株类型最丰富。目 前一些益生菌制剂，在欧洲等地区被广泛利用，但我国对其研宄甚少。
[0003] 由于人体肠道内是含有胆盐的酸性环境，所以益生菌必须具有对酸和胆盐的耐受 性，不同菌株对其耐受性是不同的。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在提供一株副干酪乳杆菌，其具有较好的耐酸性能，并且胆固醇清除率 较高，本发明还提供所述副干酪乳杆菌的制备方法和应用方法。
[0005] 本发明的技术方案如下： 一株副干酷乳杆菌（Lactobacillus paracasei)ZPY01，保藏编号CGMCCNo.10059。
[0006] 所述的副干酪乳杆菌，用做制备益生菌乳饮料的菌种。
[0007] 所述的副干酪乳杆菌，用于制备降低人体胆固醇的药物或者保健品或者功能食 品。
[0008] 所述的副干酪乳杆菌的培养方法，其特征在于按照以下步骤进行： (1) 、制备脱脂乳培养基：l〇〇〇ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉，溶解后分装到试管中， 121°C条件下灭菌15min，备用； (2) 、菌种的活化：将菌种接种至脱脂乳培养基中，37°C恒温培养；反复接种培养，直至 活化到凝乳时间为4~5h。
[0009] 本发明的积极效果在于：模拟人体胃肠环境的体外实验证明，本发明菌株具有较 强的耐酸性，对PH2. 5的酸性保持4h有较强的抵抗能力；对胆汁盐的抗性也比较明显，能耐 受0. 40%牛胆酸钠。进一步实验显示：其体外胆固醇清除率达43. 2%。是一株耐酸、耐胆汁 盐、胆固醇清除性能良好的菌株。
【附图说明】
[0010] 图1是本发明菌株Lp-ZPY01和对照菌株La-CK经低pH处理后的生长曲线。
[0011] 图2是胆盐对本发明菌株Lp-ZPY01和对照菌株La-CK生长的影响曲线。
【具体实施方式】
[0012] 下面结合附图和具体实施例进一步说明本发明。
[0013] 本发明的副干酪乳杆菌ZPY01，来自臧牧民自制牦牛酸奶中。该菌株于2014年11 月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区 北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研宄所，保藏编号CGMCCNo.10059。
[0014] 本发明副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei) ZPY01具有以下特性： (1) 、菌落边缘整齐、表面光滑、扁平，呈乳白色，为圆形，直径大多1. 〇mm以上； (2) 、镜检为无芽孢的长杆菌，单个或成对出现； (3) 、在pH2. 5处理4小时之后的存活率为61% ; (4) 、对胆汁盐的抗性比较明显，能耐受0. 40%牛胆酸钠； (5) 、其体外胆固醇清除率达43. 2%。
[0015] 一、实验材料与方法 (一)、材料 1、菌种 菌种来自臧牧民自制牦牛酸奶中，对其进行筛选分离后，参照伯杰氏细菌鉴定手册(第 八版）和《乳酸菌一一生物学基础及应用》，对其进行生理生化鉴定。形态观察和生理生化 鉴定结果表明：分离菌为副干酪乳杆菌，命名为副干酪乳杆菌ZPY01，实验编号为：Lp- ZPY01;对照菌株Lactobacillus paracasei是一种公知菌种，来自鲁东大学生命科学学院 发酵室，实验编号为：Lp-CK。
[0016]2、培养基 MRS培养基；胆固醇培养基：在MRS培养基中添加0. 3mg/ml的胆固醇；脱脂乳培养基： 新西兰恒天然脱脂奶粉，121°C灭菌lOmin。
[0017] 3、试剂 牛胆酸钠；胆固醇。
[0018] 4、仪器与设备 722光栅分光光度计，恒温水浴锅、电热蒸汽灭菌锅、生化培养箱、pH计、超净工作台 等。
[0019] (二)、方法 1、脱脂乳培养基 10%脱脂乳培养基：l〇〇〇ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉，溶解后分装到试管中，每支分 装10ml，121°C、15min灭菌后备用。
[0020] 2、菌种的活化 将菌种接种至l〇ml已灭菌的脱脂牛奶中，37°C恒温培养。反复接种培养，直至活化到 凝乳时间为4~5h。
[0021]3、菌株抗酸性测定 用1. 0m〇l/L的HC1将MRS培养基调至pH3. 5、pH2. 5。将活化好的菌液以1. 0%的接种 量分别接种于MRS液体培养基中，37°C恒温培养4.Oh后，重新接入新鲜培养基中（接种量 1.0%)，每隔7h取样测定在波长600nm处的吸光度。绘制菌株的生长曲线，检测菌株对酸的 耐受性，实验重复3次，取其平均值。
[0022] 4、菌株抗胆盐测定 在MRS培养基中分别加入牛胆酸钠，使胆盐浓度分别为0. 3%和0. 4%。将活化好的菌以 1. 〇%的接种量分别接种于MRS液体培养基中，每隔7h取样测定在波长600nm处的吸光度。 绘制菌株的生长曲线，比较菌株生长与胆盐含量的关系，实验重复3次，取其平均值。
[0023] 5、胆固醇测定方法的建立 将活化好的菌液以1. 〇%的接种量分别接种于胆固醇培养基中，37°C恒温培养72h，以 未接菌的培养基为空白对照。胆固醇含量的测定参照GB/T15206-1994食品中胆固醇的测 定方法：直接离心铁矾比色法。用可见分光光度计在波长560nm处测定其光密度。胆固醇 清除率按下式计算：
【主权项】
1. 一株副干酷乳杆菌（Lactobacillus paracasei)ZPY01，保藏编号 CGMCC No. 10059。
2. 如权利要求1所述的副干酪乳杆菌，用做制备益生菌乳饮料的菌种。
3. 如权利要求1所述的副干酪乳杆菌，用于制备降低人体胆固醇的药物或者保健品或 Bn〇
4. 权利要求1或2或3所述的副干酪乳杆菌的培养方法，其特征在于按照以下步骤进 行： (1) 、制备脱脂乳培养基：l〇〇〇ml蒸馏水中加入100g脱脂奶粉，溶解后分装到试管中， 121°C条件下灭菌15min，备用； (2) 、菌种的活化：将菌种接种至脱脂乳培养基中，37°C恒温培养；反复接种培养，直至 活化到凝乳时间为4~5h。
【专利摘要】本发明是一株副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）ZPY01，保藏编号CGMCC No.10059。模拟人体胃肠环境的体外实验证明，本发明菌株具有较强的耐酸性，对pH2.5的酸性保持4h有较强的抵抗能力；对胆汁盐的抗性也比较明显，能耐受0.40%牛胆酸钠。进一步实验显示：其体外胆固醇清除率达43.2%。是一株耐酸、耐胆汁盐、胆固醇清除性能良好的菌株。CGMCC.1005920141126
【IPC分类】A61P3-06, C12N1-20, A23C9-123, A61K35-747, A23L1-29, C12R1-225
【公开号】CN104531567
【申请号】CN201410760798
【发明人】张鹏宴, 衣华鹏
【申请人】张鹏宴
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月13日