一株不动杆菌及其制备方法、应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一株不动杆菌及其制备方法、应用，尤其是在降解废水中的对苯二甲酸的应用，属于微生物应用技术领域。
【背景技术】
[0002]碱减量废水产生于涤纶织物的碱减量加工工艺，碱减量废水的主要成分为对二甲酸(PTA)、乙二醇(EG)、聚酯低聚物及少量的助剂(如季铵盐阳离子面活性剂、耐碱渗透剂和N，N-聚氧乙烯基烷基胺)等，其中，PTA占COD总荷的63%?71%，是碱减量废水的特征性污染物[I]。在碱减量废水中，PTA以“三废”形式进入环境，某些废水(如PTA生产废水与聚酯生产废水)中，PTA的浓度高达数千毫克每升[2]。PTA对鱼类有刺激毒害性[3]，对水中微生物的再生有抑制的作用，对某些动物有致畸和致突变作用[4-5]。有效地处理碱减量废水中的PTA，一直是人们关注的问题。
[0003]目前处理PTA废水的主要方法为:活性炭吸附、臭氧或二氧化氯氧化的物化处理法及用好氧、厌氧或厌氧-好氧的生化处理法等.近年来PTA的生物降解处理技术受到更广泛的关注，国内外学者对如何利用微生物处理PTA生产废水进行了大量的研宄[6-10]。众多研宄表明PTA可以被多种微生物分解而且可以作为微生物惟一的碳源而被降解.降解PTA的微生物广泛存在于土壤、河流、污水处理厂的活性污泥与堆肥中.单一菌株、混合菌和活性污泥都可以在有氧与厌氧条件下降解PTA，好氧降解速度比厌氧降解速度要快得多。目前已有的文献报道中，有人筛选到能降解PTA的菌包括革兰氏阴性和阳性杆菌、八叠球菌、丝菌和酵母菌。陈鹏等人发现一种假丝酵母，能够在72小时内对1400mg/L的PTA降解80%以上，降解效率较好，但是降解速率较慢。
[0004]因此，为解决上述技术问题，确有必要提供一种新的一株不动杆菌及其降解对苯二甲酸的应用，以克服现有技术中的所述缺陷。
【发明内容】
[0005]为解决上述技术问题，本发明的第一目的在于提供一种易于获得、降解对苯二甲酸效果好且对印染废水适应性好的一株不动杆菌。
[0006]本发明的第二目的在于提供一株不动杆菌的应用。
[0007]本发明的第三目的在于提供一株不动杆菌的制备方法。
[0008]为实现上述第一目的，本发明采取的技术方案为:一株不动杆菌，其此株菌分类名为不动杆菌Tl (Acinetobacter sp.Tl)，已于2014年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为 CCTCC N0.M 2014558。
[0009]为实现上述第二目的，本发明采取的技术方案为:一株不动杆菌的应用，其用于高效率降解印染废水中的对苯二甲酸。
[0010]本发明的一株不动杆菌的应用进一步为:其接种量为1%，温度为20-40°C，pH为6-8，印染废水(对苯二甲酸浓度为100-1000mg/L)，摇床转速为150_200r/min，24h后检测其降解效率。
[0011]为实现上述第三目的，本发明采取的技术方案为:一株不动杆菌的制备方法，其包括如下工艺步骤:
1)，富集:取曝气池水，并加入富集培养基中，在180r/min的速度下搅拌，30°C培养I天，I天后取富集液，并加入富集培养基中，如此重复2次；
2)，筛选:取富集液进行稀释涂平板，并在筛选培养基上以30°C培养1-2天，直至平板上长出菌落；
3)，分离纯化和分子鉴定:将平板上长出的菌落在牛肉膏蛋白胨平板上进行划线纯化，30°C培养24 - 48h，挑长出的单菌落重复划线3次；单菌落培养成菌液制成甘油管保存；
4)，复筛:配制降解培养基，接种纯化的菌株，接种量为1%，培养24小时候检测降解培养基中对苯二甲酸的浓度，挑选出对苯二甲酸浓度下降较多菌株，制成甘油管保存。
[0012]本发明的一株不动杆菌的制备方法进一步为:步骤I)中，富集培养基中包含如下成分(单位为g/L):酵母浸出粉5.0，蛋白胨10.0，NaCll0.0，用lmol/L NaOH调pH至7.0。
[0013]本发明的一株不动杆菌的制备方法进一步为:步骤I)中，水和富集培养基的量为1:100 ;富集液和富集培养基的量为1:100。
[0014]本发明的一株不动杆菌的制备方法进一步为:步骤2)中，筛选培养基中包含如下成分(单位为 g/L): NH4Cll.0，ΚΗ2Ρ043.0, Na2HP047.0，NaCl0.5，MgSO4.7Η200.25，PTA (对苯二甲酸)1.0，琼脂 15，用 lmol/L NaOH 调 pH 至 7.5。
[0015]本发明的一株不动杆菌的制备方法还可为:步骤4)中，降解培养基中包含如下成分(单位为 g/L):NH4Cl1.0，ΚΗ2Ρ043.0, Na2HP047.0，NaCl0.5，MgSO4.7Η200.25，PTA (对苯二甲酸)1.0，琼脂 15，用 lmol/L NaOH 调 pH 至 7.5。
[0016]与现有技术相比，本发明具有如下有益效果:
1.本发明的一株不动杆菌降解对苯二甲酸效果好，所需时间短；能降解较高浓度的对苯二甲酸，应用范围更广。
[0017]2.本发明的一株不动杆菌筛选自处理印染污水的曝气池活性污泥中，对印染污水有更好的适应性，更有应用价值。
【具体实施方式】
[0018]本发明为一株不动杆菌，此株菌分类名为不动杆菌Tl (Acinetobacter sp.Tl)，已于2014年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC N0.M2014558，保藏地址:中国，武汉，武汉大学。
[0019]上述不动杆菌具有如下特征:菌落为白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，湿润。显微镜下观察为杆状，无芽孢，无鞭毛，革兰氏阴性。
[0020]上述一株不动杆菌可用于降解印染废水中特定污染物对苯二甲酸，其中一种降解方法为:其接种量为1%，温度为20-40°C，pH为6-8，印染废水(对苯二甲酸浓度为100-1000mg/L)，摇床转速为150_200r/min，24h后检测其降解效率。
[0021]上述一株不动杆菌可采用如下方法制得:
1)，富集:曝气池中取曝气池水，并加入富集培养基中，在180r/min的速度下搅拌，30°C培养I天，I天后取富集液，并加入富集培养基中，如此重复2次；其中，富集培养基中包含如下成分(单位为g/L):酵母浸出粉5.0，蛋白胨10.0，NaC110.0，用lmol/L NaOH调pH至7.0 ;水和富集培养基的量为1:100 ;富集液和富集培养基的量为1:100 ；
2)，筛选:取富集液进行稀释涂平板，并在筛选培养基上以30°C培养1-2天，直至平板上长出菌落；其中，筛选培养基中包含如下成分(单位为g/L): NH4ClLO,ΚΗ2Ρ043.0, Na2HP047.0，NaC10.5，MgSO4.7Η200.25，PTA (对苯二甲酸)1.0，琼脂 15，用 Imol/L NaOH 调 pH 至 7.5 ;
3)，分离纯化和分子鉴定:将平板上长出的菌落在牛肉膏蛋白胨平板上进行划线纯化，30°C培养24 - 48h，挑长出的单菌落重复划线3次；单菌落培养成菌液制成甘油管保存；
4)，复筛:配制降解培养基，接种纯化的菌株，接种量为1%，培养24小时候检测降解培养基中对苯二甲酸的浓度，挑选出对苯二甲酸浓度下降较多菌株，制成甘油管保存；其中，降解培养基中包含如下成分(单位为g/L):NH4Cl1.0，ΚΗ2Ρ043.0, Na2HP047.0，NaCl0.5，MgSO4.7Η200.25，PTA (对苯二甲酸)1.0，琼脂 15，用 lmol/L NaOH 调 pH 至 7.5。
[0022]以上的【具体实施方式】仅为本创作的较佳实施例，并不用以限制本创作，凡在本创作的精神及原则之内所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本创作的保护范围之内。
【主权项】
1.一株不动杆菌，其特征在于:此株菌分类名为不动杆菌Tl (Acinetobacter sp.Tl)，已于2014年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC N0.M2014558。
2.如权利要求1所述的一株不动杆菌的应用，其特征在于:用于高效率降解印染废水中的对苯二甲酸。
3.如权利要求2所述的一株不动杆菌的应用，其特征在于:其接种量为1%，温度为20-40°C, pH为6-8，印染废水(对苯二甲酸浓度为100-1000mg/L)，摇床转速为150_200r/min, 24h后检测其降解效率。
4.一株不动杆菌的制备方法，其特征在于:包括如下工艺步骤: 1)，富集:取曝气池水，并加入富集培养基中，在180r/min的速度下搅拌，30°C培养I天，I天后取富集液，并加入富集培养基中，如此重复2次； 2)，筛选:取富集液进行稀释涂平板，并在筛选培养基上以30°C培养1-2天，直至平板上长出菌落； 3)，分离纯化和分子鉴定:将平板上长出的菌落在牛肉膏蛋白胨平板上进行划线纯化，30°C培养24 - 48h，挑长出的单菌落重复划线3次；单菌落培养成菌液制成甘油管保存； 4)，复筛:配制降解培养基，接种纯化的菌株，接种量为1%，培养24小时候检测降解培养基中对苯二甲酸的浓度，挑选出对苯二甲酸浓度下降幅度较大的菌株，制成甘油管保存。
5.如权利要求4所述的一株不动杆菌的制备方法，其特征在于:步骤I)中，富集培养基中包含如下成分(单位为g/L):酵母浸出粉5.0，蛋白胨10.0，NaCll0.0，用lmol/L NaOH调pH至7.0o
6.如权利要求4所述的一株不动杆菌的制备方法，其特征在于:步骤I)中，水和富集培养基的量为1:100 ;富集液和富集培养基的量为1:100。
7.如权利要求4所述的一株不动杆菌的制备方法，其特征在于:步骤2)中，筛选培养基中包含如下成分(单位为 g/L): NH4ClLO, KH2P043.0, Na2HP047.0, NaCl0.5，MgSO4.7Η200.25，PTA (对苯二甲酸)1.0，琼脂 15，用 lmol/L NaOH 调 pH 至 7.5。
8.如权利要求4所述的一株不动杆菌的制备方法，其特征在于:步骤4)中，降解培养基中包含如下成分(单位为 g/L)-NH4Cll.0，ΚΗ2Ρ043.0, Na2HP047.0，NaC10.5，MgSO4.7Η200.25，PTA (对苯二甲酸)1.0，用 lmol/L NaOH 调 pH 至 7.5。
【专利摘要】本发明涉及一株不动杆菌，此株菌分类名为不动杆菌T1（Acinetobacter sp.T1），已于2014年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏号为CCTCC NO.M2014558。该一株不动杆菌在印染废水中降解对苯二甲酸的应用。本发明的一株不动杆菌对印染废水中的对苯二甲酸具有更好降解性能，更有应用价值；降解效率高，所需时间短；在好氧条件下具有更好的降解效果，应用范围更广。CCTCC NO.M201455820141109
【IPC分类】C02F101-34, C02F3-34, C12R1-01, C12N1-20
【公开号】CN104630112
【申请号】CN201510067447
【发明人】张翼, 任烨, 王海云
【申请人】绍兴柯桥江滨水处理有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月10日