一种诱导制备胸苷磷酸化酶的方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物工程领域，具体设及一种诱导制备胸巧磯酸化酶的方法及应用。
【背景技术】
[0002] 胸巧磯酸化酶（TPase)广泛存在于原核W及真核生物的细胞中。Wase可特异性 作用于0-胸巧（0-TR)，催化0-TR可逆磯酸化反应，由0-TR生成脱氧核糖-1-磯酸W 及胸腺喀晚（T)，亦可由脱氧核糖-1-磯酸和T生成0 -TR(①）若与其他核巧磯酸化酶共 同作用，可生成一系列其他核巧和磯酸基团（Pi)(②）：
【主权项】
1. 一种诱导胸苷磷酸化酶的方法，包括：将具有胸苷磷酸化酶的微生物在固体培养基 上培养，再接入液体培养基摇瓶培养，即得，其特征是：固体培养基中加入了诱导物，所述诱 导物是胸苷类的嘧啶核苷。
2. 权利要求1的方法，其中诱导物为β-胸苷或双脱氧胸苷。
3. 权利要求1的方法，其中诱导物在固体培养基中浓度为5-80mmol/L。
4. 权利要求1的方法，包括：将具有胸苷磷酸化酶的乙酰短杆菌菌种接入加入了胸苷 类的嘧啶核苷作为诱导物的固体培养基中，28-36°C培养20-28h，诱导提高其TPase活性， 然后将提高了 TPase活性的菌接入液体培养基中28-36°C、150-250rpm，培养20-28h，离心 后获得菌体用pH7. O的磷酸缓冲液洗涤，即得。
5. 权利要求4的方法，包括：将具有胸苷磷酸化酶的大肠杆菌菌种接入加入了胸苷类 的嘧啶核苷作为诱导物的固体培养基中，32°C培养24h，诱导提高其TPase活性，然后将提 高了 TPase活性的菌接入液体培养基中28-36°C、150-250rpm、培养20-28h，离心后获得菌 体用pH7. O的磷酸缓冲液洗涤，即得。
6. 权利要求1至4中任一项的方法，其中固体培养基每100mL含牛肉膏1.0 克、蛋白胨 I. 0克、酵母浸粉0. 5克、氯化钠0. 5克和琼脂粉2. 0克，pH至7. 0 ;液体培养基每100mL含 酵母浸膏4. 0克、葡萄糖0. 4克和氯化钠0. 3, pH为7. 0。
7. 权利要求1的方法，其中胸苷磷酸化酶来源于乙酰短杆菌或大肠杆菌。
8. -种制备2' -脱氧腺苷的方法，包括：先将乙酰短杆菌菌体用权利要求1的方法诱 导，诱导后的菌体再与β -胸苷和腺嘌呤在磷酸缓冲溶液中反应，即得。
9. 一种制备阿糖腺苷的方法，包括：先将乙酰短杆菌菌体用权利要求1的方法诱导，诱 导后的菌体再与阿糖尿苷和腺嘌呤在磷酸缓冲溶液中反应，即得。
10. -种制备2' -脱氧氟尿苷的方法，包括：先将乙酰短杆菌菌体用权利要求1的方法 诱导，诱导后的菌体再与β -胸苷和5-氟尿嘧啶在磷酸缓冲液中反应，即得。
【专利摘要】本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种诱导制备胸苷磷酸化酶的方法及应用。其特征是：将作为TPase酶源的微生物在加入了诱导物的固体培养基上培养，然后再接入液体培养基摇瓶培养，即得，所述的诱导物胸苷类的嘧啶核苷，胸苷类嘧啶核苷能使TPase的酶活性得到显著提高。
【IPC分类】C12P19-32, C12P19-38, C12P19-40, C12N9-12
【公开号】CN104630173
【申请号】CN201510096101
【发明人】邱蔚然, 杜卫群, 邱志云, 马志娟, 冯璐, 周长林, 易凤炎, 王欢
【申请人】南通秋之友生物科技有限公司, 中国药科大学
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年3月4日