钾4g、磷酸二氢钾0. 5g硫酸镁lg、氯化钠 lg、硝酸按2g、原油lmL，用 蒸馈水定容lOOOmL，pH自然，121°C灭菌20min。
[0024] 原油液体培养基的配方为硫酸铜0. 5mg、硫酸亚铁5mg、氯化锌5mg、硫酸猛5mg、氯 化隹? 20mg、磷酸氢二钾4g、磷酸二氢钾0. 5g硫酸镁lg、氯化钠 lg、硝酸按2g、原油5mL，用 蒸馈水定容lOOOmL，pH自然，121°C灭菌20min。
【发明内容】
[0025] 之二·提供所述肠杆菌（Enterobacter sp. )，CGMCC No. 10233发酵制备 的胞外酶。所述菌株胞外酶是一组复合酶，其中包括脂肪酶、果胶酶、蛋白酶、凝乳酶等。
[0026] 在一个具体实施方案中，所述的肠杆菌发酵液还包括：该菌培养基质及该菌代谢 产物。
[0027] 本发明第二个发明目的是肠杆菌在原油污染地区中用于快速清洁的用途。
[0028] 其中所述的用途包括：用肠杆菌发酵剂（固态制剂）喷洒原油污染土壤的处理工 -H- 〇
[0029] 在一个具体实施方案中，使用上述的肠杆菌发酵剂（固体粉剂）适量无菌水稀释 喷雾原油污染土壤的处理工艺，可快速处理原油污染问题，与传统清洁工艺比较，可以缩短 清洁处理时间，同时减少了污染机会，提高原油污染后的清洁度。
[0030] 其中，用肠杆菌发酵液拌料（原油污染土壤）发酵工艺：采用肠杆菌（固体粉剂）， 每克含微生物数量IXlO iciCfu以上，先用无菌水将粉剂稀释，喷雾接种在原油污染土壤上， 接种后进行发酵清洁。采用肠杆菌固态粉剂利用一定无菌水调成接种液（液体制剂），每毫 升含微生物数量IXlO 7Cfu以上，将发酵液接种在原油污染土壤上，进行发酵。用量是每亩 污染土壤用肠杆菌0. 5kg~1.0 kg/亩。
[0031] 另外，直接使用肠杆菌发酵液，缩短了清洁原油污染土壤周期10-15天，减少原油 污染风险。
【附图说明】
[0032] 图1 :筛选得到的具有降解原油作用的主要微生物菌株。左1为对照；左2-9为不 同的菌株在含有原油的无机盐培养基中培养，左2为0DB01菌株。
[0033] 图2 :肠杆菌（Enterobacter sp. )0DB01的药敏性试验结果图。1-11分别代表氯 霉素、阿米卡星、新霉素、链霉素、多黏霉素 B、萘啶酸、氨苄西林、红霉素、青霉素、新生霉素 和四环素等抗生素处理的结果图。
[0034] 技术效果
[0035] (1)本发明提供的菌株主要产脂类，对疏水性有机物具有明显的乳化和增溶作用， 而且作用持久。
[0036] (2)本发明提供的菌株25°C、pH值为7,转速为150rpm的条件下5d可将原油从 50g/L降至约20g/L左右，石油总去除率为达80 %以上，其中该菌株对原油的降解率在60 % 以上。
【具体实施方式】
[0037] 下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任一 个或类似实例。
[0038] 实施例1 :肠杆菌ODBOl菌株分离
[0039] 首先将原油污染的水和土壤等样品混合物样品稀释至KT5涂布于固体分离培养 平板上，30°C恒温培养，分离得到单菌落共453个，挑取单菌落于盛有3mL液体分离培养基 的IOmL的试管中，30°C恒温摇床培养12h后，转接至含有5mL原油液体培养基的试管中， 30°C，150rpm条件下进行培养，实时观察培养液中原油的变化情况，从中筛选出49株具有 原油降解能力的菌株，通过多次重复筛选确定109菌株（即为肠杆菌0DB01)为这些菌株中 原油降解能力最强的菌株，进一步采用重量法得知109菌株在150rpm，30°C摇床培养7后 对原油的降解率达到45%。
[0040] 实施例2 :菌株鉴定
[0041] 一、形态和生化鉴定
[0042] 1、形态为肠杆菌，根据细菌鉴定手册对其进行生理生化鉴定，结果如下：
[0043]
【主权项】
1. 本发明提供一种包含肠杆菌（Enterobactersp.)的分离筛选鉴定，其中所述菌株 已于2014年12月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号： CGMCCNo. 10233。
2. 根据权利要求1的方法，肠杆菌还包括：该菌培养基质及该菌代谢产物。
3. 根据权利要求1的方法，肠杆菌在原油污染地区中用于快速清洁的用途。
4. 根据权利要求3的方法，其中所述肠杆菌用途包括：用肠杆菌固态发酵剂喷洒原油 污染土壤的处理工艺。
5. 根据权利要求4的方法，其中所述肠杆菌应用包括：微生物扩大培养机制；镉污染修 复土壤管理；产品开发管理及质量控制。
6. 根据权利要求5的方法，其中所述肠杆菌发酵剂（固体粉剂）适量无菌水稀释喷雾 原油污染土壤的处理工艺。
7. 根据权利要求6的方法，其中所述用肠杆菌发酵液拌原油污染土壤发酵工艺：采用 肠杆菌固态粉剂利用一定无菌水调成接种液，每毫升含微生物数量IXIO7Cfu以上，将发酵 液接种在原油污染土壤上，进行发酵。用量是每亩污染土壤用肠杆菌〇. 5kg~I.Okg/亩。
【专利摘要】本发明涉及一种原油降解菌及其应用，并提供了一种利用原油降解菌快速降解原油的方法，属于环境污染技术领域。该菌株能快速分解原油，在适宜条件下能将原油从50g/L降至约20g/L左右，石油总去除率为达80％以上，其中该菌株对原油的降解率在60％以上。CGMCC No.1023320141223
【IPC分类】B09C1-10, C12R1-01, C12N1-20
【公开号】CN104726370
【申请号】CN201510084360
【发明人】田云, 卢向阳, 蓝慧, 杨辉, 王翀, 李培旺, 周辉
【申请人】湖南农业大学
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2015年2月16日